專利名稱：一株降解多環(huán)芳烴的菌株及其與表面活性劑協(xié)同在土壤修復(fù)中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于環(huán)境工程和微生物工程技術(shù)領(lǐng)域。尤其涉及一株降解多環(huán)芳烴的解脂耶氏酵母菌Upolytica ) tzyx3及其與表面活性劑協(xié)同在土壤修復(fù)中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
多環(huán)芳烴(PAHs)是一類持久性有機(jī)污染物(POPs)。PAHs污染源主要來自于廢舊機(jī)器油、電器產(chǎn)品的潤滑油和來自廢舊金屬拆解中的木材、有機(jī)高分子化合物、紙張等含碳?xì)浠衔锏奈镔|(zhì)經(jīng)不完全燃燒或在還原性氣氛中經(jīng)熱分解而生成的。由于多環(huán)芳烴及其衍生物具有致癌性、致突變性和致畸性，以及急性毒性和亞致死作用，目前已引起人們的極大 關(guān)注。多環(huán)芳烴(PAHs)污染土壤修復(fù)是當(dāng)前環(huán)境修復(fù)中研究的熱點(diǎn)。生物降解是對PAHs污染土壤進(jìn)行修復(fù)的重要途徑之一。對于多環(huán)芳烴污染，國內(nèi)外進(jìn)行了大量多環(huán)芳烴降解微生物的篩選工作。到目前為止，已分離出多個具有多環(huán)芳烴降解能力的菌株，如假單胞菌屬、分枝桿菌屬、芽孢桿菌屬等，并沒有隱球酵母科用于多環(huán)芳烴修復(fù)的報(bào)道。但是土壤中的PAHs的生物利用率一般較低，通常認(rèn)為，溶解于液相中的PAHs或其他的底物可被微生物利用，反之若被吸附于土壤上，則較難被微生物利用。有研究表明，表面活性劑能促進(jìn)PAHs從土壤中釋放，使PAHs分配到表面活性劑膠束中或吸附到表面活性劑單體上，提高其生物有效性。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中單微生物修復(fù)存在的不足之處、針對多環(huán)芳烴吸附于土壤中難降解的特點(diǎn)，提供一種降解多環(huán)芳烴菌株、該菌株與表面活性劑發(fā)揮協(xié)同作用，在治理多環(huán)芳烴污染土壤中可以應(yīng)用。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的
一株降解多環(huán)芳烴的菌株，其特征在于，該菌株為解脂耶氏酵母菌(ferroWatzyx3，在中國典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號為CCTCC NO M 2012241，具備降解多環(huán)芳烴的能力。所述菌株具有以多環(huán)芳烴為唯一碳源和能源進(jìn)行生長的能力。所述菌株在多環(huán)芳烴土壤中具有良好的降解多環(huán)芳烴的能力。所述菌株的ITS序列如SEQ NO.1所示。根據(jù)所述降解多環(huán)芳烴的菌株，其特征在于所述多環(huán)芳烴選自萘、菲、熒蒽、芘、苯并蒽、苯并芘的的一種或多種的混合物。所述降解多環(huán)芳烴的菌株在多環(huán)芳烴污染的土壤的生物修復(fù)中的應(yīng)用。所述降解多環(huán)芳烴的菌株與表面活性劑協(xié)同作用在快速降解土壤中多環(huán)芳烴中的應(yīng)用。
利用所述降解多環(huán)芳烴的菌株進(jìn)行土壤生物修復(fù)的方法，其特征在于該方法由以下步驟組成選取多環(huán)芳烴污染土壤100g，tzyX3按質(zhì)量百分比2. 0%用量與土壤混合均勻，表面活性劑加入量為污染土壤的干重的O. 1%，加水使土壤含水率保持在15%，放入恒溫振蕩器中，控制培養(yǎng)溫度在25°C的恒溫條件下，振蕩培養(yǎng)修復(fù)15天。所述表面活性劑選自腐植酸、鼠李糖脂、Triton X-100、Tween80、β_環(huán)糊精中的一種。·
本發(fā)明提供的解脂耶氏酵母菌(/arroffia Iipolytica),命名為tzyx3,于2012年6月24日保藏于“中國典型培養(yǎng)物保藏中心”，其保藏號CCTCC NO M 2012241。地址中國武漢武漢大學(xué)。tzyx3是從浙江省臺州市固體廢棄物拆解場某污染土壤中分離并篩選得到。菌株可在15 35 °C，pH值6. O 8. 5培養(yǎng)條件下較好生長；菌株在YETO平板上培養(yǎng)三天菌落特征為圓形，白色奶油狀，表面光滑，邊緣整齊；細(xì)胞卵圓形，進(jìn)行出芽生殖，培養(yǎng)七天后出現(xiàn)不太發(fā)達(dá)的有隔假菌絲。作為優(yōu)選，本發(fā)明所述菌株能以多環(huán)芳烴為唯一碳源和能源生長。作為優(yōu)選，本發(fā)明菌株與表面活性劑聯(lián)用具有快速降解土壤中多環(huán)芳烴的能力。上述與表面活性劑發(fā)揮協(xié)同作用修復(fù)土壤的多環(huán)芳烴降解菌的篩選方法，可按如下步驟依次實(shí)施
(1)從固廢拆解場采集距地表下5 20cm處表層土壤樣品，作為菌源進(jìn)行自然富集培養(yǎng)；所述富集培養(yǎng)基含有胰蛋白胨、葡萄糖及酵母膏；
(2)取(I)中所述富集培養(yǎng)液接種于無機(jī)鹽選擇培養(yǎng)基中進(jìn)行選擇培養(yǎng)，所無機(jī)鹽選擇培養(yǎng)基含有K2HP04、MgS04 ·7Η20、(NH4) 2S04、萘、菲、熒蒽、芘、苯并蒽、苯并芘等多環(huán)芳烴(多環(huán)芳烴萘、菲、突蒽、花、苯并蒽、苯并花的濃度均為150mg/L 250mg/L)；
(3)取(2)中所述選擇培養(yǎng)物稀釋涂布于固體無機(jī)鹽選擇培養(yǎng)基上，進(jìn)行分離進(jìn)行分離即得到多環(huán)芳烴降解菌tzyx3。上述多環(huán)芳烴降解菌tzyx3可用于多環(huán)芳烴土壤污染的生物修復(fù)。具體地，本發(fā)明可采用降解多環(huán)芳烴菌株與表面活性劑聯(lián)合對多環(huán)芳烴污染土壤進(jìn)行修復(fù)。本發(fā)明tzyx3可在15 35 °C，pH值6. O 8. 5培養(yǎng)條件下較好生長；菌株在YEH)平板上培養(yǎng)三天菌落特征為圓形，白色奶油狀，表面光滑，邊緣整齊；細(xì)胞卵圓形，進(jìn)行出芽生殖，培養(yǎng)七天后出現(xiàn)不太發(fā)達(dá)的有隔假菌絲。tzyx3在YETO (葡萄糖2. 0% ;胰蛋白胨2. 0% ;酵母粉1. 0%)培養(yǎng)基上培養(yǎng)三天菌落特征為圓形，白色奶油狀，表面光滑，邊緣整齊；細(xì)胞卵圓形，進(jìn)行出芽生殖，培養(yǎng)七天后出現(xiàn)不太發(fā)達(dá)的有隔假菌絲。tzyx3的生理生化特征,見表1.
表I Tzyx3的生理生化特征
權(quán)利要求
1.一株降解多環(huán)芳烴的菌株，其特征在于，該菌株為解脂耶氏酵母菌(ferroffia 7i/7o7_Fiica) tzyx3，在中國典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號為CCTCC NO M 2012241，具備降解多環(huán)芳烴的能力。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述降解多環(huán)芳烴的菌株，其特征在于所述菌株具有以多環(huán)芳烴為唯一碳源和能源進(jìn)行生長的能力。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述降解多環(huán)芳烴菌株，其特征在于所述菌株在多環(huán)芳烴土壤中具有良好的降解多環(huán)芳烴的能力。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述降解多環(huán)芳烴的菌株，其特征在于所述菌株的ITS序列如SEQ NO.1所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述降解多環(huán)芳烴的菌株，其特征在于所述多環(huán)芳烴選自萘、菲、熒蒽、芘、苯并蒽、苯并芘的的一種或多種的混合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述降解多環(huán)芳烴的菌株在多環(huán)芳烴污染的土壤的生物修復(fù)中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述降解多環(huán)芳烴的菌株與表面活性劑協(xié)同作用在快速降解土壤中多環(huán)芳烴中的應(yīng)用。
8.利用權(quán)利要求1所述降解多環(huán)芳烴的菌株進(jìn)行土壤生物修復(fù)的方法，其特征在于該方法由以下步驟組成選取多環(huán)芳烴污染土壤100g，tzyx3按質(zhì)量百分比2. 0%用量與土壤混合均勻，表面活性劑加入量為污染土壤的干重的O. 1%，加水使土壤含水率保持在15%，放入恒溫振蕩器中，控制培養(yǎng)溫度在25°C的恒溫條件下，振蕩培養(yǎng)修復(fù)15天。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述降解多環(huán)芳烴的菌株進(jìn)行土壤生物修復(fù)的方法，其特征在于所述表面活性劑選自腐植酸、鼠李糖脂、Triton X-100、Tween80、β-環(huán)糊精中的一種。
全文摘要
本發(fā)明屬于環(huán)境工程和微生物工程技術(shù)領(lǐng)域。尤其涉及一株降解多環(huán)芳烴的解脂耶氏酵母菌(Yarrowia lipolytica)tzyx3及其與表面活性劑協(xié)同在土壤修復(fù)中的應(yīng)用。該菌株為解脂耶氏酵母菌(Yarrowia lipolytica)tzyx3，在中國典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號為CCTCC NOM 2012241，具備降解多環(huán)芳烴的能力。該菌株與表面活性劑發(fā)揮協(xié)同作用，在治理多環(huán)芳烴污染土壤中可以應(yīng)用。
文檔編號B09C1/10GK102994404SQ20121038716
公開日2013年3月27日 申請日期2012年10月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月12日
發(fā)明者張昕欣, 于紅艷, 奚立民 申請人:臺州職業(yè)技術(shù)學(xué)院