花青素復(fù)合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明的主題是一種由花青素和甲基化的β環(huán)糊精構(gòu)成的復(fù)合物，該復(fù)合物能夠配制為含水溶液以及配制為固體，以及本發(fā)明的主題是一種用于制備這種復(fù)合物的方法。根據(jù)本發(fā)明的復(fù)合物是倉儲穩(wěn)定的并且能良好地配制成含水溶液。
【專利說明】
花青素復(fù)合物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種由花青素和甲基化的環(huán)糊精構(gòu)成的復(fù)合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 花青素是細(xì)胞色素的染料，染料在通常較高的有胚植物中存在?；ㄇ嗨厥菬o糖的 (糖苷配基)并且與含糖的花色素苷緊密相關(guān)?；ㄇ嗨厥侨玖喜⑶揖哂锌寡趸奶匦?。
[0003] 從W0 2013/144297 A1中已經(jīng)已知：花青素與磺基烷基醚e環(huán)糊精復(fù)合。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明基于以下目的：提供可良好操作的、可配置的并且倉儲穩(wěn)定且相對濃縮形 式的花青素。
[0005] 目的通過一種由花青素和甲基化的0環(huán)糊精構(gòu)成的復(fù)合物實現(xiàn)。
[0006] 首先闡述在本發(fā)明的范圍中應(yīng)用的術(shù)語。
[0007] 花青素具有如下描述的基本結(jié)構(gòu)。
[0009] 該式中的取代基選自：氫、羥基基團和甲氧基基團。
[0010] 環(huán)糊精是由a-l，4糖苷結(jié)合的葡萄糖分子構(gòu)成的環(huán)形的低聚糖。0環(huán)糊精具有七個 葡萄糖單元。在甲基化的13環(huán)糊精中，葡萄糖單元的羥基基團設(shè)有甲基基團。根據(jù)本發(fā)明，通 常僅將0環(huán)糊精的21個羥基基團中的一部分甲基化。
[0011] 甲基化的0環(huán)糊精的制備對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是常見的，相應(yīng)的產(chǎn)品例如從 Wacker Chemie以名稱Cavasol?獲得。
[0012] 本發(fā)明認(rèn)識到：花青素、如飛燕草素令人驚訝地以遠(yuǎn)高于現(xiàn)有技術(shù)中與其他的環(huán) 糊精復(fù)合的濃度而與甲基化的0環(huán)糊精復(fù)合。因此這尤其是令人驚訝的，因為例如在W0 2013/144297 A1中執(zhí)行與一系列的環(huán)糊精的復(fù)合實驗，在復(fù)合實驗中，具有花青素的復(fù)合 物的濃度或者加荷以數(shù)量級的形式降低。
[0013] 因此，本發(fā)明實現(xiàn)：以高的濃度進而高的摻雜優(yōu)選以含水的或水溶的形式提供花 青素，進而以簡單的方式使得能夠進行活體內(nèi)施用、例如體內(nèi)施用。此外，本發(fā)明的特別的 優(yōu)點是：甲基化的環(huán)糊精、尤其RAMEB以其所使用的濃度不是或者最多或是輕微毒性的，尤 其在活體內(nèi)不觸發(fā)或最多觸發(fā)輕微的且不令人擔(dān)心的溶血作用。
[0014] 優(yōu)選地，e環(huán)糊精以甲基基團取代的取代度為10至15、優(yōu)選為11至14、更優(yōu)選為12 至13〇
[0015] 尤其優(yōu)選地，將RAMEB (隨機甲基化環(huán)糊精）用作為甲基化的0環(huán)糊精。其是取代 度為大約每個糖單元1.8個甲基基團或每個環(huán)糊精環(huán)12.5個甲基基團（取代度DS為大約 12 ? 5)的統(tǒng)計甲基化的、環(huán)糊精。RAMEB是例如由Wacker Chemi e以名稱Cavasol? W7M Pharma市售的。
[0016] 根據(jù)本發(fā)明的復(fù)合的花青素優(yōu)選選自以橙苷色素、矢車菊色素、飛燕草色素、歐天 芥菜色素、木樨黃定、天竺葵色素、錦葵色素、芍藥色素、矮牽牛色素和玫瑰色素構(gòu)成的組。 [0017]符合上面描述的式I的化學(xué)結(jié)構(gòu)具有下面取代模式。
[0020] 在本發(fā)明的范圍內(nèi)，尤其優(yōu)選的是具有飛燕草色素的復(fù)合物。
[0021] 此外，本發(fā)明的主題是根據(jù)本發(fā)明的復(fù)合物的含水溶液。
[0022] 本發(fā)明的另一主題是一種用于制備根據(jù)本發(fā)明的復(fù)合物以及相應(yīng)的含水溶液的 方法，方法具有如下步驟：
[0023] a.制備甲基化的0環(huán)糊精的含水溶液，
[0024] b.添加花青素并且混合，以制備復(fù)合物。
[0025]在步驟a)中，優(yōu)選制備含水溶液，其包含10至60重量百分比的、優(yōu)選20至50重量百 分比的、更優(yōu)選30至50重量百分比的所使用的環(huán)糊精。
[0026]在本發(fā)明的范圍中尤其優(yōu)選的是:含水溶液的pH值在添加花青素、優(yōu)選飛燕草色 素期間或之后、然而優(yōu)選在添加其之前調(diào)節(jié)到7或更低的pH值、優(yōu)選6至7的pH值。證實:在該 pH值的情況下，能夠在含水溶液中設(shè)定復(fù)合物的高濃度。
[0027]尤其優(yōu)選的是，花青素的濃度優(yōu)選以氯化物計算為至少10mg/ml、更優(yōu)選至少 20mg/ml、更優(yōu)選至少50mg/ml、更優(yōu)選至少80mg/ml。能夠無問題地達(dá)到例如100mg/ml的濃 度。
[0028] 同樣地，本發(fā)明的主題是一種固體，其包含由花青素和甲基化的0環(huán)糊精構(gòu)成的復(fù) 合物，固體通過從含水溶液中去除溶劑來獲得。從含水溶液中去除溶劑能夠通過對于本領(lǐng) 域技術(shù)人員常用的方法、例如升華干燥(冷凍干燥)來進行。該根據(jù)本發(fā)明的固體是長期倉 儲穩(wěn)定的，并且能夠無問題地再次與水混合成含水的進而可在活體內(nèi)施用的溶液。根據(jù)本 發(fā)明的含水溶液和固體具有高的倉儲穩(wěn)定性。
[0029] 在根據(jù)本發(fā)明的制造期間，通過攪拌混合含水溶液的組成部分，對于混合的優(yōu)選 的時間段為2至20h。優(yōu)選地，在暗室中工作，以便避免光引發(fā)的氧化。
【具體實施方式】
[0030] 下面闡述本發(fā)明的實施例。
[0031] 1.所使用的材料
[0032] 從Wacker Chemie獲得RAMEB并且從Extrasynthese公司獲得氯化飛燕草色素。
[0033] 2.確定飛燕草色素含量
[0034]為了確定含飛燕草色素的組分中的氯化飛燕草色素的含量使用反相HPLC方法。在 此，使用如下試劑：
[0035]清潔的水
[0036]用于色層分析法的甲醇
[0037]甲酸，分析用(p.a.)
[0038] 1M鹽酸作為當(dāng)量標(biāo)準(zhǔn)的溶液。
[0039] 將Waters X Bridge? C18? 335ul，150mm x 4.6mm用作為柱。
[0040] 移動相如下：
[0041 ]通道A:水950ml、甲醇50ml、甲酸10ml
[0042]通道B:水50ml、甲醇950ml、甲酸10ml [0043]應(yīng)用如下的梯度程度：
[0045] 停止時間：35分鐘
[0046] 再運行時間（延后時間）：8分鐘
[0047] 流速：lml/min
[0048] 注射體積:20yl
[0049] 柱溫度:30°C+/-2°C
[0050] 紫外可見吸收光譜檢測器:用于化驗的為530mi，用于檢測雜質(zhì)的為275mi
[0051] 能量計:面積
[0052]溶液和試樣準(zhǔn)備
[0053] 稀釋溶液1:由100ml甲醇和2.6ml 1M HCL構(gòu)成的混合物
[0054] 稀釋溶液2:由100ml百分之四十的甲醇和2.6ml 1M HCL構(gòu)成的混合物
[0055]標(biāo)定溶液:通過稱重10mg氯化飛燕草色素裝入10ml燒瓶中并且溶液在稀釋溶液1 中來制備飛燕草色素的基準(zhǔn)溶液。在溶解之后，借助稀釋溶液2稀釋大約10倍以制備大約 0? lmg/ml的濃度。
[0056]以簡單的方式和方法制備檢驗標(biāo)定溶液。標(biāo)定溶液立即借助于HPLC來分析，因為 氯化飛燕草色素在溶液中是不穩(wěn)定的。
[0057]制備測試溶液：
[0058]為了確定根據(jù)本發(fā)明制備的固體(制備參見下文)的飛燕草色素含量，將大約50mg 該組分稱重裝入l〇ml燒瓶中。隨后，溶液在稀釋溶液2中并且借助相同的稀釋溶液2進一步 稀釋至調(diào)節(jié)出大約〇. lmg/ml的飛燕草色素濃度。
[0059]試樣中的飛燕草色素含量的確定借助Agilent ChemStation軟件利用借助上面描 述的外部標(biāo)準(zhǔn)進行標(biāo)定來計算。
[0060]實例 1
[0061 ] 飛燕草色素與RAMEB復(fù)合
[0062] 在水中制備40重量百分比的RAMEB的溶液。
[0063]將lml含水的環(huán)糊精溶液填入到玻璃燒瓶中。隨后，添加250mg氯化飛燕草色素。 [0064]將懸浮液在30°C的情況中在暗室中攪拌4小時。隨后，通過具有0.8wii孔大小的膜 片過濾器進行過濾。
[0065] 實例2
[0066] 根據(jù)本發(fā)明的固體的制備
[0067]根據(jù)實例1的溶液被冷凍并且隨后在-48 °C的情況中和大約10.3Pa (77mT〇rr)的壓 力下升華干燥。獲得〇.36g的固體，其具有31.1重量百分比的飛燕草色素含量。
[0068]該固體以高的濃度以倉儲時間更長且能夠容易地在活體內(nèi)施用的形式提供飛燕 草色素。復(fù)合物占飛燕草色素的含量遠(yuǎn)高于在現(xiàn)有技術(shù)中的情況。
【主權(quán)項】
1. 一種由花青素和甲基化的β環(huán)糊精構(gòu)成的復(fù)合物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)合物，其特征在于，所述?3環(huán)糊精以甲基基團取代的取代 度為10至15、優(yōu)選為11至14、更優(yōu)選為12至13。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)合物，其特征在于，甲基化的所述β環(huán)糊精是RAMEB。4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的復(fù)合物，其特征在于，所述花青素選自以橙苷色 素、矢車菊色素、飛燕草色素、歐天芥菜色素、木樨黃定、天竺葵色素、錦葵色素、芍藥色素、 矮牽牛色素和玫瑰色素構(gòu)成的組。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的復(fù)合物，其特征在于，所述花青素是飛燕草色素。6. -種根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的復(fù)合物的含水溶液。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的含水溶液，其特征在于，所述花青素的濃度以氯化物計算為至 少10mg/ml、更優(yōu)選至少20mg/ml、更優(yōu)選至少50mg/ml、更優(yōu)選至少80mg/ml。8. -種固體，包含由花青素和甲基化的β環(huán)糊精構(gòu)成的復(fù)合物，所述固體通過從根據(jù)權(quán) 利要求6或7中任一項所述的含水溶液中去除溶劑來獲得。9. 一種用于制備花青素和甲基化的β環(huán)糊精構(gòu)成的復(fù)合物的方法，所述方法具有如下 步驟： a. 制備甲基化的β環(huán)糊精的含水溶液， b. 添加花青素并且混合，以制備所述復(fù)合物。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，在步驟a)中制備的溶液包含10至60重量 百分比的、優(yōu)選20至50重量百分比的、更優(yōu)選30至50重量百分比的甲基化的所述β環(huán)糊精。11. 根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的方法，其特征在于，在步驟b)中的混合以2至20h的時間 段進行。
【文檔編號】C09B61/00GK106029789SQ201580010394
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2015年2月26日
【發(fā)明人】諾伯特·勒韋爾, 延斯·布羅沙伊特
【申請人】賽博爾泰克股份公司