專利名稱：用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠及其制備方法，屬于pH值傳感材料技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
pH值檢測(cè)在生物、醫(yī)學(xué)等多種領(lǐng)域中都占有十分重要的地位。在用于pH值檢測(cè)的多種材料中，水凝膠由于具有很高的穩(wěn)定性、生物親和性以及受激反應(yīng)性(體積隨外部刺激發(fā)生變化)而備受關(guān)注。目前多種納米水凝膠已經(jīng)被研制，并用于探測(cè)各種分析物。但是由于目前的納米水凝膠的探測(cè)機(jī)制多是基于體積變化，因此必須集成或依附于微型裝置上以適應(yīng)光學(xué)或者電學(xué)方法測(cè)量，結(jié)果只能于宏觀領(lǐng)域中進(jìn)行探測(cè)。最近有研究報(bào)導(dǎo)了通過(guò)改變納米水凝膠體積與熒光強(qiáng)度的關(guān)系而制備了熒光納米水凝膠，并利用此種納米水凝膠實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞水平上的探測(cè)。眾所周知，單一熒光強(qiáng)度的探測(cè)靈敏性會(huì)因?yàn)樘结樀姆植?、濃度以及光電子系統(tǒng)的隨機(jī)漂移而受到削弱?；跓晒鈮勖臏y(cè)量方法雖然可以避開(kāi)上述缺點(diǎn)，但對(duì)于較短的衰減壽命(如納米量級(jí))，則對(duì)探測(cè)儀器的復(fù)雜性大大增加，這為實(shí)際應(yīng)用帶來(lái)了不便。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服單一熒光強(qiáng)度的探測(cè)靈敏性會(huì)因?yàn)樘结樀姆植肌舛纫约肮怆娮酉到y(tǒng)的隨機(jī)漂移而受到削弱這一缺陷，提供一種用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠及其制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案 本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠這是一種多摻雜型納米水凝膠，非熒光型的pH值指示劑和幾種熒光分子鑲嵌于粒徑為納米級(jí)別的水凝膠顆粒當(dāng)中。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案 用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠含有溴百里酚蘭作為pH值指示劑；香豆素6和尼羅紅作為熒光分子構(gòu)成共振能量傳遞體系；將以上三種成分均勻地分散在具有生物體相容性的聚亞安酯水凝膠基質(zhì)當(dāng)中。
一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠各組分的質(zhì)量百分比聚亞安酯∶溴百里酚蘭∶香豆素6∶尼羅紅為1∶0.05∶0.05∶0.005。
本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供一種用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的制備方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案 一種用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的制備方法，步驟如下 步驟一，按質(zhì)量百分比1∶0.05∶0.05∶0.005稱取聚亞安酯，溴百里酚蘭，香豆素6，尼羅紅； 步驟二，將步驟一稱取的聚亞安酯，在磁力攪拌中，加入到9/1的體積比的乙醇/水混合溶液中，配制成聚亞安酯濃度為500ppm的溶液； 步驟三，將步驟一稱取的溴百里酚蘭、香豆素6、尼羅紅三種物質(zhì)共溶于步驟二制成溶液中，攪拌一個(gè)小時(shí)； 步驟四，將步驟三制備的混合溶液，在二次蒸餾水中進(jìn)行透析24小時(shí)，其間每隔4小時(shí)換一次二次蒸餾水，得到水凝膠的懸濁液； 步驟五，將步驟四制備的懸濁液，通過(guò)一個(gè)孔徑為0.2微米的過(guò)濾膜進(jìn)行過(guò)濾，除掉較大的團(tuán)聚物，得到最終的用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠。
本發(fā)明的有益效果 在本發(fā)明提出了一種用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠，應(yīng)用于生理范圍的pH值傳感。它可以通過(guò)單一波長(zhǎng)激發(fā)同時(shí)產(chǎn)生兩個(gè)信號(hào)，然后根據(jù)兩個(gè)信號(hào)的比率來(lái)探測(cè)待分析物。這種內(nèi)在校準(zhǔn)機(jī)制使得傳感信號(hào)更加穩(wěn)定可靠，實(shí)際應(yīng)用起來(lái)也更方便。該用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠由非響應(yīng)性的聚合物作為基質(zhì)，其pH敏感性來(lái)源于凝膠中所裝載的有機(jī)分子。因此，該用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠具有恒定體積，從而在生物活體探測(cè)時(shí)不會(huì)因擾亂細(xì)胞活動(dòng)而產(chǎn)生虛假信號(hào)。
圖1是用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的橫截面示意圖以及主要成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)式。
圖2是溴百里酚蘭在不同pH值(pH值5、7和9)水溶液中的吸收光譜(灰色陰影所示)，以及香豆素6(C6)和尼羅紅(NR)在乙醇溶液中各自的吸收(虛線)和發(fā)射(實(shí)線)光譜。
圖3是用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠在干燥狀態(tài)下的透射電鏡照片。
圖4是用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠在不同pH值下的熒光發(fā)射光譜，其中500nm和620nm的發(fā)射峰分別歸屬于熒光分子香豆素6和尼羅紅。從酸性到堿性環(huán)境pH值分別為4.92，5.29，5.91，6.24，6.47，6.64，6.81，6.98，7.38，7.73，8.04，8.34，8.67，9.18。
圖5是用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠中尼羅紅和香豆素6的發(fā)射強(qiáng)度比率(IF(620)/IF(500))與pH值的關(guān)系。
圖6是新制備的用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠在水相中的粒徑分布(室溫下測(cè)量)。
圖7是陳置一個(gè)月后的用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠在水相中的粒徑分布(室溫下測(cè)量)。
圖8是新鮮的(實(shí)線)以及陳置一個(gè)月后的(虛線)用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠懸濁液的熒光光譜曲線(均以450nm光激發(fā))。
圖9是另一批用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠中尼羅紅和香豆素6的發(fā)射強(qiáng)度比率(IF(620)/IF(500))與pH值的關(guān)系。
具體實(shí)施例方式 下面通過(guò)附圖和具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。
本發(fā)明中提出的用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠，是一種多摻雜型納米水凝膠，其中各組分的質(zhì)量百分比聚亞安酯∶溴百里酚蘭∶香豆素6∶尼羅紅為1∶0.05∶0.05∶0.005。
用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的制備方法，步驟如下 步驟一，按質(zhì)量百分比1∶0.05∶0.05∶0.005分別稱取10mg聚亞安酯、0.5mg溴百里酚蘭、0.5mg香豆素6和0.05mg尼羅紅； 步驟二，將22.23ml乙醇和2.47ml水混合后得到9/1體積比的乙醇/水混合溶液，將步驟一中稱取的10mg聚亞安酯，在磁力攪拌中，加入上述乙醇/水混合溶液中，配制成聚亞安酯濃度為500ppm的溶液； 步驟三，將步驟一稱取的0.5mg溴百里酚蘭、0.5mg香豆素6和0.05mg尼羅紅三種物質(zhì)共溶于步驟二制成的溶液中，攪拌一個(gè)小時(shí)； 步驟四，將步驟三制備的混合溶液，在二次蒸餾水中進(jìn)行透析24小時(shí)，其間每隔4小時(shí)換一次二次蒸餾水，得到水凝膠的懸濁液； 步驟五，將步驟四制備的懸濁液，通過(guò)一個(gè)孔徑為0.2微米的過(guò)濾膜進(jìn)行過(guò)濾，除掉較大的團(tuán)聚物，得到最終的的用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠。
所用材料聚亞安酯購(gòu)自美國(guó)Cardiotech公司(威爾明頓，美國(guó))，溴百里酚蘭、香豆素6和尼羅紅購(gòu)自Sigma Aldrich公司。所有的藥品、試劑都沒(méi)有經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的提純。
所用設(shè)備吸收光譜和熒光光譜分別在Lambda 14 p UV-vis分光光度計(jì)(美國(guó)Perkin Elmer公司)和Aminco AB 2型熒光分光光度計(jì)(美國(guó)Thermo公司)上測(cè)量。透射電鏡和動(dòng)態(tài)光散射分別在LEO912AB型電鏡(德國(guó)Zeiss公司)和Zetasizer 3000(德國(guó)Malvern公司)儀器上進(jìn)行。
用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的流體動(dòng)力學(xué)尺寸表征 將新鮮的用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠懸濁液進(jìn)行動(dòng)態(tài)光散射和熒光光譜表征，然后將樣本陳置一個(gè)月后再進(jìn)行一次動(dòng)態(tài)光散射和熒光光譜表征。兩次表征得到樣本的平均流體動(dòng)力學(xué)直徑分別為136nm和125nm，這表明幾乎沒(méi)有團(tuán)聚情況的發(fā)生。(見(jiàn)圖6，7) 用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的熒光光譜 從圖8中可以觀察到，隨著新鮮樣本的陳置，在620nm處的發(fā)射逐漸減弱，而500nm處的發(fā)射逐漸增強(qiáng)。假定這雙重發(fā)射是由香豆素6和尼羅紅之間的共振能量傳遞效應(yīng)引起的，這種變化可以解釋為染料滲漏。即使浸出量相同，供體的熒光可能會(huì)增強(qiáng)，其代價(jià)是受體發(fā)射強(qiáng)度的減弱。根據(jù)熒光強(qiáng)度的減弱，染料滲漏的量可粗略計(jì)算出低于8％ 用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠pH值傳感功能的重復(fù)性研究 為了研究用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠pH值傳感功能的重復(fù)性，以相同的方法再次制備了另一批用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠。圖9為該批用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的pH值校準(zhǔn)曲線，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)由該批用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠在620nm與500nm處發(fā)光強(qiáng)度的比值計(jì)算而來(lái)。
本發(fā)明提出的用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的截面示意圖如圖1所示作為pH值探針?lè)肿拥匿灏倮锓犹m，作為熒光分子的香豆素6和尼羅紅，均勻地分散在具有生物體相容性的聚亞安酯(一種非刺激響應(yīng)型親水性聚合物)水凝膠基質(zhì)當(dāng)中。
在制備過(guò)程中，聚亞安酯、溴百里酚蘭、香豆素6以及尼羅紅是以自由分子的狀態(tài)存在于乙醇/水(體積比9/1)的混合溶液當(dāng)中的。在步驟四的透析過(guò)程中，隨著乙醇分子逐漸滲出透析膜，有機(jī)分子周圍局域環(huán)境的極性逐漸增強(qiáng)。在疏水作用下，聚亞安酯聚合物的長(zhǎng)鏈會(huì)發(fā)生交叉連接和坍塌而最終形成一種三維的穩(wěn)定納米結(jié)構(gòu)，同時(shí)溴百里酚蘭、香豆素6和尼羅紅這些疏水性分子也被固定于水凝膠顆粒內(nèi)部聚亞安酯水凝膠，作為該用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的基質(zhì)；作為非熒光型pH值指示劑的溴百里酚蘭，其依賴于pH值的顯著吸收特性幾乎覆蓋了整個(gè)可見(jiàn)光的波長(zhǎng)范圍(圖2)，因而被選定作為摻雜材料用來(lái)激活非響應(yīng)型納米水凝膠對(duì)pH值的敏感性；香豆素6和尼羅紅的光譜是部分重疊的，因而被選取用來(lái)傳輸雙重的熒光信號(hào)(圖2)，而光譜部分重疊也確保了這兩種熒光分子之間能夠產(chǎn)生高效的共振能量傳遞效應(yīng)。
所制備的用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠對(duì)pH值的感應(yīng)能力源于以下兩個(gè)特點(diǎn)。第一，pH探針?lè)肿愉灏倮锓犹m的吸收光譜與熒光分子香豆素6和尼羅紅的發(fā)射光譜均有交疊，如圖2所示。從圖中可以看出，溴百里酚蘭的吸收光譜隨pH值的變化而變化。在酸性條件下(pH＜7)，溴百里酚蘭的吸收峰與香豆素6的發(fā)射峰有交疊；而在堿性環(huán)境下(pH＞7)，其吸收峰值又與尼羅紅的發(fā)射峰交疊。第二，在熒光分子香豆素6與尼羅紅之間可以發(fā)生有效的共振能量傳遞。由圖2可以看到，香豆素6的發(fā)射峰與尼羅紅的吸收峰存在著很好的交疊。在溶液中，二者由于處于自由狀態(tài)，達(dá)不到臨界距離(＜10nm)而不會(huì)發(fā)生共振能量傳遞。而在本發(fā)明提出的用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠中，大量的香豆素6和尼羅紅分子被固定于直徑為130-140nm的水凝膠顆粒當(dāng)中，這足以保證大部分香豆素6和尼羅紅可滿足臨界距離(＜10nm)的條件而發(fā)生共振能量傳遞。下面依據(jù)圖2來(lái)具體闡述用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的pH值感應(yīng)機(jī)理。用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的pH值敏感性由其中的溴百里酚蘭分子賦予。在450nm光激發(fā)下，用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠中的熒光分子香豆素6發(fā)出綠色熒光(峰值在520nm)，其中的一部分能量通過(guò)共振能量傳遞傳遞給尼羅紅分子發(fā)出620nm紅光。在酸性條件下(pH＜6)，用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠中香豆素6未進(jìn)行能量傳遞的綠色熒光大部分被溴百里酚蘭吸收，而尼羅紅的紅色熒光得以保留，從而主要發(fā)出紅色熒光。在堿性條件下(pH＞8)，用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠中尼羅紅的大部分紅色熒光被溴百里酚蘭吸收，而香豆素6的綠色熒光得以保留，這時(shí)用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠主要發(fā)出綠色熒光。
用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠中有機(jī)分子的摻雜比例是考慮以下兩方面因素，根據(jù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化而得到的(一)溴百里酚蘭、香豆素6和尼羅紅的摻雜量不宜過(guò)多而損害了聚合物長(zhǎng)鏈的交叉連接和坍塌，以至于影響用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的形成；(二)溴百里酚蘭、香豆素6和尼羅紅三者間的比例以產(chǎn)生適宜的發(fā)射強(qiáng)度比為最佳。
用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠pH值熒光響應(yīng)性的理論推導(dǎo) 溴百里酚蘭的離解平衡式可以表示為
由上面的平衡式可相應(yīng)得到如下的表達(dá)式 這里Ka為溴百里酚蘭的解離常數(shù)，[HA]和[A-]分別為達(dá)到平衡時(shí)酸性和堿性溴百里酚蘭的濃度，[H+]是溶液中的H+濃度。假定用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠中熒光分子(香豆素6、尼羅紅)的熒光強(qiáng)度服從Beer-Lambert定律。
I＝I010-εlc 這里I0為用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠中溴百里酚蘭分子不存在時(shí)的熒光強(qiáng)度，l為用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的顆粒半徑，ε和c分別是酸性(或堿性)溴百里酚蘭分子的摩爾吸收率和濃度。這樣用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的熒光強(qiáng)度比率尼羅紅(620nm)/香豆素6(500nm)可以寫(xiě)為 通過(guò)設(shè)定 k1＝I0NR/I0C6， 上述表達(dá)式可以簡(jiǎn)化如下式 利用透射電鏡對(duì)干燥狀態(tài)下的用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠進(jìn)行了表征，發(fā)現(xiàn)其具有較規(guī)則的球狀形貌，直徑為20-30nm，粒度分布均勻(圖3)。由于水凝膠具有高度親水性，用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠在水溶液中的流體動(dòng)力學(xué)尺寸要大于其干燥狀態(tài)下的粒徑。根據(jù)動(dòng)態(tài)光散射法分析，水溶液中的用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠直徑為130-140nm(圖6)。該用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠在水相中相當(dāng)穩(wěn)定，樣本在靜置一個(gè)月后其尺寸基本不發(fā)生改變(圖7)。
圖4是用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠在不同pH值下的熒光發(fā)射光譜，其中500nm和620nm的發(fā)射峰可分別歸屬到熒光分子香豆素6和尼羅紅。從圖中可清晰看出，用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的雙重發(fā)射強(qiáng)度隨pH值的變化呈現(xiàn)出不同的趨勢(shì)。隨著pH值的增加，香豆素6的熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，而尼羅紅的熒光卻逐漸減弱。用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠所展現(xiàn)出的這種pH值依賴特性與設(shè)計(jì)思想完全一致。這種用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠，可以通過(guò)測(cè)量其不同pH值的雙重發(fā)射強(qiáng)度，建立熒光強(qiáng)度比率與pH值的關(guān)系。圖5是用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠中尼羅紅和香豆素6的發(fā)射強(qiáng)度比率(IF(620)/IF(500))與pH值的關(guān)系。在pH值5到9范圍內(nèi)，用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的熒光比率變化了接近9倍(由3.5減小到0.4)?？紤]到熒光分子尼羅紅和香豆素6的發(fā)射與溴百里酚蘭吸收光譜的重疊，可以假設(shè)IF(620)and IF(500)分別依賴于酸性溴百里酚蘭和堿性溴百里酚蘭的濃度，從而得到用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的熒光比率與pH值的理論表達(dá)式 通過(guò)與實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的擬合，得到用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠中溴百里酚蘭的pKa為7.64。顯然，所制備的用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠非常適宜探測(cè)人體生理范圍的pH值。另外，由于用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠尺寸小并具備高度的親水性，其pH值響應(yīng)時(shí)間為數(shù)秒鐘。
綜上所述，本發(fā)明提出了一種用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠。隨著溴百里酚蘭(作為pH值指示劑)以及香豆素6和尼羅紅(由共振能量傳遞效應(yīng)所關(guān)聯(lián)的兩種熒光分子)的引入，最初非響應(yīng)和非熒光型的聚亞安酯水凝膠被賦予了依賴于pH值的比率型熒光——該方法也可以應(yīng)用于構(gòu)造其他的用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠以取代以往的染料。由于靈敏度高、親水性好、穩(wěn)定性好、響應(yīng)定量以及pH值檢測(cè)范圍涵蓋了生理pH值范圍(pH值6-8)等優(yōu)點(diǎn)，該用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠作為細(xì)胞內(nèi)pH值探測(cè)材料是很有前景的。
權(quán)利要求
1.一種的用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠，其特征在于，這是一種多摻雜型納米水凝膠，其中含有溴百里酚蘭，作為pH值指示劑；香豆素6和尼羅紅，作為熒光分子構(gòu)成共振能量傳遞體系；以上三種成分隨機(jī)地分散在作為基質(zhì)的聚亞安酯水凝膠當(dāng)中；
該比率熒光納米水凝膠各組分的質(zhì)量百分比為聚亞安酯∶溴百里酚蘭∶香豆素6∶尼羅紅為1∶0.05∶0.05∶0.005。
2.權(quán)利要求1所述的的用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠的制備方法，包括如下步驟
步驟一，按權(quán)利要求1組分的質(zhì)量百分比1∶0.05∶0.05∶0.005稱取聚亞安酯，溴百里酚蘭，香豆素6，尼羅紅；
步驟二，將步驟一稱取的聚亞安酯，在磁力攪拌中，加入到9/1的體積比的乙醇/水混合溶液中，配制成聚亞安酯濃度為500ppm的溶液；
步驟三，將步驟一稱取的溴百里酚蘭、香豆素6、尼羅紅三種物質(zhì)共溶于步驟二制成溶液中，攪拌一個(gè)小時(shí)；
步驟四，將步驟三制備的混合溶液，在二次蒸餾水中進(jìn)行透析24小時(shí)，其間每隔4小時(shí)換一次二次蒸餾水，得到水凝膠的懸濁液；
步驟五，將步驟四制備的懸濁液，通過(guò)一個(gè)孔徑為0.2微米的過(guò)濾膜進(jìn)行過(guò)濾，除掉較大的團(tuán)聚物，得到最終的的用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠。
全文摘要
用于pH值傳感的比率熒光納米水凝膠及其制備方法，屬于pH值傳感材料領(lǐng)域。該方法包括按質(zhì)量百分比1∶0.05∶0.05∶0.005稱取聚亞安酯，溴百里酚蘭，香豆素6，尼羅紅；將稱取的聚亞安酯加入到9/1的體積比的乙醇/水混合溶液中，配制濃度成500ppm的溶液；將溴百里酚蘭、香豆素6、尼羅紅三種物質(zhì)共溶于上述溶液中攪拌1h；然后在二次蒸餾水中透析24h，隔4h換一次水，得到水凝膠懸濁液；將制備的懸濁液進(jìn)行過(guò)濾，得到產(chǎn)物。本發(fā)明克服了單一熒光強(qiáng)度的探測(cè)靈敏性會(huì)因?yàn)樘结樀姆植肌舛纫约肮怆娮酉到y(tǒng)的隨機(jī)漂移而受到削弱這一缺陷，適合于作為細(xì)胞內(nèi)pH值探測(cè)材料。
文檔編號(hào)C09K11/06GK101762572SQ20101010332
公開(kāi)日2010年6月30日 申請(qǐng)日期2010年1月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月28日
發(fā)明者彭洪尚, 謝蒂旎, 黃世華 申請(qǐng)人:北京交通大學(xué)