一類(lèi)新芳香聚酮化合物的制備方法及其抗菌用圖
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一類(lèi)新芳香聚酮化合物及其制備方法，本發(fā)明還披露了該類(lèi)聚酮化合物的抗菌用途。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一類(lèi)新芳香聚酮化合物的制備方法及其抗菌用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于藥學(xué)領(lǐng)域，本發(fā)明披露了一類(lèi)新的芳香聚酮化合物及其制備方法，本 發(fā)明還涉及所述化合物及其組合物的抗菌用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 細(xì)菌感染是致病菌或條件致病菌侵入血循環(huán)中生長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生毒素和其他代謝產(chǎn) 物所引起的急性全身性感染，能引發(fā)高熱、傷寒及肺結(jié)核等多種病理癥狀，嚴(yán)重影向人類(lèi)身 體健康，危害人類(lèi)生命安全。十九世紀(jì)以前，細(xì)菌感染引發(fā)的疾病曾奪去無(wú)數(shù)人的生命。青 霉素的發(fā)明和使用，使得細(xì)菌感染得到了有效控制。而后，隨著第二代、第三代等新一代抗 生素的不斷問(wèn)世，各類(lèi)細(xì)菌感染性疾病獲得了更為有效的治療。但由于抗生素、免疫制劑藥 物的廣泛使用，致病菌種也有所變異，耐藥菌株大量涌現(xiàn)，導(dǎo)致抗菌藥物的耐藥性問(wèn)題日益 嚴(yán)重。傳統(tǒng)的抗生素如青霉素對(duì)耐甲氧西林的金葡球菌（MRSA)等耐藥菌引起感染的治療 效果已大大降低，導(dǎo)致臨床并發(fā)癥和死亡數(shù)增加。因此，具有全新作用機(jī)制和靶點(diǎn)的新穎結(jié) 構(gòu)抗生素的研發(fā)工作近年來(lái)發(fā)展迅速，成為解決耐藥性問(wèn)題的熱點(diǎn)和重點(diǎn)領(lǐng)域，有望在一 定程度上解決細(xì)菌多藥耐藥等問(wèn)題。
[0003] 本專(zhuān)利
【發(fā)明人】在研究一株深海來(lái)源真菌Spiromastix sp.化學(xué)成分的過(guò)程中，結(jié) 合化學(xué)轉(zhuǎn)化方法，制備并鑒定了一類(lèi)結(jié)構(gòu)新穎的芳香聚酮化合物（式I~式VI)。體外抗菌 活性篩選表明，該類(lèi)化合物具有顯著的抗革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌活性。式I化合物活性更是強(qiáng)于 陽(yáng)性對(duì)照藥氯霉素，具有進(jìn)一步新型抗生素開(kāi)發(fā)潛力。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明的目的在于揭示一類(lèi)新芳香聚酮化合物在治療細(xì)菌感染疾病中的用途。
[0005] 本發(fā)明的另一目的在于提供一類(lèi)新的芳香聚酮化合物。
[0006] 本發(fā)明的另一目的在于提供該類(lèi)芳香聚酮化合物的制備方法。
[0007] 在本發(fā)明第一方面，在于提供式I~式VI所示芳香聚酮化合物，其藥學(xué)上可接受 的鹽或它們的混合物的用途，用于制備藥物，所述藥物用于治療細(xì)菌感染疾病。
[0008]
[0009] 本發(fā)明第二方面提供上述式I~式VI芳香聚酮化合物的制備方法，包括如下步 驟：
[0010] 1)以深海來(lái)源真菌Spiromastix sp.為菌種，利用液體或固體發(fā)酵培養(yǎng)，獲得含 上述式I~式VI化合物的發(fā)酵物；
[0011] 2)將發(fā)酵物通過(guò)硅膠、凝膠、0DS等色譜手段分離與純化，在同一發(fā)酵物中制備上 述式I~式VI化合物；
[0012] 通過(guò)體外抗菌實(shí)驗(yàn)證明了本發(fā)明中的化合物抗革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌效果顯著，具有進(jìn) 一步開(kāi)發(fā)成新型廣譜抗生素的潛力。
【附圖說(shuō)明】
[0013] 圖1 :式I化合物的1H NMR譜；
[0014] 圖2 :式I化合物的APT譜；
[0015] 圖3 :式I化合物的HMBC譜；
[0016] 圖4 :式I化合物的HSQC譜；
[0017] 圖5 :式I化合物的COSY譜；
[0018] 圖6 :式I化合物的高分辨質(zhì)譜；
[0019] 圖7 :式I化合物的紅外光譜；
[0020] 圖8 :式II化合物的1H NMR譜；
[0021] 圖9 :式II化合物的APT譜；
[0022] 圖10 :式III化合物的1H NMR譜；
[0023] 圖11 :式III化合物的APT譜；
[0024] 圖12 :式IV化合物的1H NMR譜；
[0025] 圖13 :式IV化合物的APT譜；
[0026] 圖14 :式V化合物的1H NMR譜；
[0027] 圖15 :式V化合物的APT譜；
[0028] 圖16 :式VI化合物的1H NMR譜；
[0029] 圖17 :式VI化合物的APT譜； 具體實(shí)施方案：
[0030] 根據(jù)本發(fā)明所公開(kāi)的技術(shù)內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員將很清楚本發(fā)明的其他實(shí)施方 案，下述實(shí)施方案僅作示例。
[0031] 實(shí)例1 :深海真菌Spiromastix sp.的固體發(fā)酵培養(yǎng)
[0032] 1.菌株背景
[0033] Spiromastix sp.分離自南大西洋水下2869米海底沉積物（西經(jīng)13. 7501°，南 煒15. 1668° )，菌種保藏于中國(guó)海洋微生物菌種保藏管理中心（MCCC :3A00308，GeneBank : KJ010057)。
[0034] 2.固體培養(yǎng)基的制備
[0035] 將100mL人工海水與100g大米加入500mL三角瓶中，靜置12h，后于121°C高壓濕 熱滅菌30min，放涼待用。
[0036] 3.菌株發(fā)酵
[0037] 在PDA(馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂）培養(yǎng)皿上挑取長(zhǎng)有新鮮Spiromastix sp.的瓊脂 片（1~2cm2)，接種于大米培養(yǎng)基上，25°C下避光恒溫培養(yǎng)30d，得到發(fā)酵產(chǎn)物。
[0038] 實(shí)例2 :式I~式VI化合物的制備
[0039] 發(fā)酵產(chǎn)物搗碎后用乙酸乙酯超聲萃取3次，每次1.5h，減壓濃縮得粗浸膏 (52. 4g)。浸膏用等比例硅膠（160~200目）扮樣，利用減壓硅膠柱色譜以石油醚/丙酮 為流動(dòng)相梯度洗脫。石油醚/丙酮（10 : l，v/V)洗脫組分（4.8g)用0DS柱色譜以甲醇/ 水為流動(dòng)相（20%~100%，v/v)梯度洗脫，60%洗脫組分用半制備高效液相色譜以68%甲 醇/水為流動(dòng)相等度洗脫，純化得到式I化合物（12. 3mg)，式II化合物（17. 8mg)和式IV 化合物（22. 6mg) ;0DS柱色譜80%洗脫組分用半制備高效液相色譜以78%甲醇/水為流 動(dòng)相等度洗脫，純化得到式III化合物（32. 8mg)。硅膠柱色譜石油醚/丙酮（5 : l，v/v) 洗脫組分（7. lg)用0DS柱色譜以甲醇/水為流動(dòng)相（20%~100%，v/v)梯度洗脫，50% 洗脫組分用半制備高效液相色譜以52%甲醇/水為流動(dòng)相等度洗脫，純化得到式V化合物 (8. 4mg)和式 VI 化合物（6. 2mg)。
[0040] 實(shí)例3 :式I~式VI化合物的抗菌活性實(shí)驗(yàn)：
[0041 ] 采用微量肉湯稀釋法測(cè)試了式I~式VI對(duì)七種指示菌，Staphylococcus aureus (金黃色葡萄球菌，ATCC 25923)，Bacillus thuringensis (蘇云金芽抱桿菌，ATCC 10792)，Bacillus subtilis (枯草芽抱桿菌，ATCC 63501)，Ralstonia solanacearum(前 科雷爾氏菌，ATCC 11696)，Xanthomonas vesicatoria(辣椒瘡癡病菌，ATCC 11633)， Agrobacterium tumefaciens(根癌土壤桿菌，ATCC 11158)，以及 Pseudomonas lachrymans (甜瓜細(xì)菌性葉斑病菌，ATCC 11921)的最低抑菌濃度（MIC)，結(jié)果見(jiàn)表1。
[0042] 具體實(shí)驗(yàn)方法如下：
[0043] 1.培養(yǎng)基
[0044] 使用 Mueller-Hinton(MH)肉湯培養(yǎng)基，pH 7. 2 ~7. 4。
[0045] 2. MIC 板制備
[0046] 無(wú)菌情況下，將倍比稀釋后不同濃度的抗菌藥物溶液分別加到滅菌的96孔聚苯 乙烯板中，第1至11孔加藥液，每孔10 yL，第12孔不加藥作為生長(zhǎng)對(duì)照，冰凍干燥后密 封，-20°C以下保存?zhèn)溆谩?br>[0047] 3.接種物制備
[0048] 將用生長(zhǎng)法制備的濃度相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)的菌懸液，經(jīng)MH肉湯1 : 1000 稀釋后，向每孔中加入100 μ L，密封后置35°C普通空氣孵箱中孵育24h。此時(shí)，第1孔至第 11 孔藥物濃度分別為 128、64、32、16、8、4、2、1、0· 5、0· 25、0· 125yg/mL。
[0049] 4.結(jié)果判斷
[0050] 以在小孔內(nèi)完全抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度為MIC。當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照孔（即不含抗 生素）內(nèi)細(xì)菌明顯生長(zhǎng)時(shí)認(rèn)定實(shí)驗(yàn)可行。當(dāng)在微量肉湯稀釋法出現(xiàn)單一的跳空時(shí)，記錄抑 制細(xì)菌生長(zhǎng)的最高藥物濃度。如出現(xiàn)多出跳孔，結(jié)果不可信，重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
[0051] 本實(shí)驗(yàn)中抗菌活性結(jié)果表明，式I~式VI化合物能夠顯著抗菌活性。
[0052] 表1.式I~式VI的抗菌MIC值
[0053]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種式I~式VI化合物2. 權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法，包括下述步驟： 1. W深海來(lái)源真菌Spiromastix SP.為菌種，利用液體或固體發(fā)酵培養(yǎng)，獲得含上述 聚酬化合物的發(fā)酵物； 2) 將發(fā)酵物通過(guò)硅膠、凝膠、0DS等色譜手段分離與純化，在同一發(fā)酵物中制備上述式 I~式VI化合物。3. 式I~式VI所示聚酬化合物，其藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物的用途，用于制 備藥物，所述藥物用于治療細(xì)菌疾病和感染。
【文檔編號(hào)】C07D311/76GK105837413SQ201510057950
【公開(kāi)日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2015年2月3日
【發(fā)明人】林文翰, 邵宗澤, 牛四文, 劉 東
【申請(qǐng)人】北京大學(xué), 中國(guó)大洋礦產(chǎn)資源研究開(kāi)發(fā)協(xié)會(huì)