診斷甲狀腺癌的分析標(biāo)志物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，設(shè)及診斷甲狀腺癌的分析標(biāo)志物及其應(yīng)用，具體地設(shè) 及MPP6作為診斷甲狀腺癌的分析標(biāo)志物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 甲狀腺是人體內(nèi)重要的內(nèi)分泌器官，分泌控制屯、率、血壓、體溫和體重等與代謝相 關(guān)的激素。甲狀腺癌是由甲狀腺濾泡細(xì)胞發(fā)展而成的一種常見(jiàn)的頭頸部惡性?xún)?nèi)分泌系統(tǒng)腫 瘤，約占全身惡性腫瘤發(fā)病總數(shù)的3%，占頭頸部惡性腫瘤發(fā)病的首位，多發(fā)于青壯年，常見(jiàn) 于45-54歲的人群中，45歲W上高發(fā)，女性多見(jiàn)，男女發(fā)病比例約1:3。近年來(lái)甲狀腺癌的發(fā) 病呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，2012年，美國(guó)約有四萬(wàn)多名女性和一萬(wàn)多名男性確診為甲狀腺癌，甲狀 腺癌的發(fā)病率上升至惡性腫瘤發(fā)病率從的第5位;在中國(guó)，甲狀腺癌發(fā)病亦呈現(xiàn)出逐年增加 的趨勢(shì)，且為近20年來(lái)中國(guó)癌癥譜中女性惡性腫瘤上升速度最快的腫瘤。甲狀腺癌在各地 均具有較高的發(fā)病率，其已經(jīng)成為最常見(jiàn)并且發(fā)病率快速上升的惡性腫瘤之一。
[0003] 甲狀腺癌的臨床體征W結(jié)節(jié)堅(jiān)硬不平整為主要表現(xiàn)，同時(shí)伴有頸部淋己結(jié)腫大， 患者常感頸部壓迫癥狀，甲狀腺癌早期臨床癥狀不明顯，病程進(jìn)展緩慢，患者多無(wú)自覺(jué)癥 狀，疾病晚期可出現(xiàn)多種癥狀，包括聲音嘶啞、吞咽困難W及耳、頸、肩等處疼痛的表現(xiàn)。甲 狀腺癌按照組織類(lèi)型分為甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺濾泡狀癌、甲狀腺髓樣癌和甲狀腺未分 化癌。其中，甲狀腺乳頭狀癌是最常見(jiàn)的，如早期診斷，預(yù)后良好，五年生存率可達(dá)到 97.8%。
[0004] 甲狀腺癌的診斷包括術(shù)前實(shí)驗(yàn)室檢查，超聲檢查、CT檢查、MRI檢查、核素顯像等影 像學(xué)檢查W及細(xì)針穿刺活檢，術(shù)中活檢，術(shù)后石蠟病理確診等。
[0005] 隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，對(duì)腫瘤發(fā)病機(jī)理的研究也取得了一定的進(jìn)展?；蚪Y(jié)構(gòu) 的差異、基因功能的改變W及基因產(chǎn)物的表達(dá)異常與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展存在密切的聯(lián)系。 自1965年癌胚抗原應(yīng)用于臨床W來(lái)，腫瘤標(biāo)志物在惡性腫瘤的輔助診斷、療效監(jiān)測(cè)及診斷 預(yù)后等方面起到了重要作用，長(zhǎng)久W來(lái)人們一直希望能夠找到一種能夠特異而顯著的腫瘤 標(biāo)志物。腫瘤標(biāo)志物能夠提供腫瘤發(fā)展進(jìn)程、細(xì)胞病理性增殖及分化類(lèi)型，對(duì)腫瘤的診斷、 分類(lèi)、預(yù)后判斷W及治療發(fā)揮指導(dǎo)作用。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006] 為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種診斷甲狀腺癌的分析標(biāo)志 物-MPP6基因。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[000引本發(fā)明提供了 MPP6基因及其表達(dá)產(chǎn)物在制備診斷甲狀腺癌的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0009] 進(jìn)一步，所述產(chǎn)品包括:通過(guò)RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫檢測(cè)、原位雜交或忍片檢 測(cè)MPP6基因的表達(dá)水平W診斷甲狀腺癌的產(chǎn)品。
[0010] 進(jìn)一步，所述用RT-PCR診斷甲狀腺癌的產(chǎn)品至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增MPP6基因的引 物;所述用實(shí)時(shí)定量PCR診斷甲狀腺癌的產(chǎn)品至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增MPP6基因的引物;所述 用免疫檢測(cè)診斷甲狀腺癌的產(chǎn)品包括:與MPP6蛋白特異性結(jié)合的抗體;所述用原位雜交診 斷甲狀腺癌的產(chǎn)品包括:與MPP6基因的核酸序列雜交的探針;所述用忍片診斷甲狀腺癌的 產(chǎn)品包括：蛋白忍片和基因忍片；其中，蛋白忍片包括與MPP6蛋白特異性結(jié)合的抗體，基因 忍片包括與MPP6基因的核酸序列雜交的探針。
[0011] 進(jìn)一步，所述基因忍片可用于檢測(cè)包括MPP6基因在內(nèi)的多個(gè)基因（例如，與甲狀腺 癌相關(guān)的多個(gè)基因）的表達(dá)水平。所述蛋白質(zhì)忍片可用于檢測(cè)包括MPP6蛋白在內(nèi)的多個(gè)蛋 白質(zhì)(例如與甲狀腺癌相關(guān)的多個(gè)蛋白質(zhì)）的表達(dá)水平。通過(guò)將多個(gè)與甲狀腺癌的標(biāo)志物同 時(shí)檢測(cè)，可大大提高甲狀腺癌診斷的準(zhǔn)確率。
[0012] 本發(fā)明提供了一種診斷甲狀腺癌的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品能夠通過(guò)檢測(cè)甲狀腺組織中 MPP6基因的表達(dá)水平來(lái)診斷甲狀腺癌。
[0013] 進(jìn)一步，所述產(chǎn)品包括忍片、或試劑盒；其中，所述忍片包括基因忍片、蛋白質(zhì)忍 片;所述試劑盒包括基因檢測(cè)試劑盒、蛋白免疫檢測(cè)試劑盒。所述基因忍片包括固相載體W 及固定在固相載體的寡核巧酸探針，所述寡核巧酸探針包括用于檢測(cè)MPP6基因轉(zhuǎn)錄水平的 針對(duì)MPP6基因的寡核巧酸探針;所述蛋白質(zhì)忍片包括固相載體W及固定在固相載體的MPP6 蛋白的特異性抗體;所述基因檢測(cè)試劑盒包括用于檢測(cè)MPP6基因轉(zhuǎn)錄水平的試劑;所述蛋 白免疫檢測(cè)試劑盒包括MPP6蛋白的特異性抗體。
[0014] 進(jìn)一步，所述基因檢測(cè)試劑盒可用于檢測(cè)包括MPP6基因在內(nèi)的多個(gè)基因（例如，與 甲狀腺癌相關(guān)的多個(gè)基因）的表達(dá)水平。所述蛋白免疫檢測(cè)試劑盒可用于檢測(cè)包括MPP6蛋 白在內(nèi)的多個(gè)蛋白質(zhì)(例如與甲狀腺癌相關(guān)的多個(gè)蛋白質(zhì)）的表達(dá)水平。將甲狀腺癌的多個(gè) 標(biāo)志物同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，可大大提高甲狀腺癌診斷的準(zhǔn)確率。
[0015] 本發(fā)明提供了 MPP6基因及其表達(dá)產(chǎn)物在制備治療甲狀腺癌的藥物組合物中的應(yīng) 用。
[0016] 進(jìn)一步，所述藥物組合物包括增加 MPP6基因表達(dá)、增強(qiáng)MPP6表達(dá)功能、和/或增強(qiáng) MPP6表達(dá)產(chǎn)物活性的試劑。
[0017] 進(jìn)一步，所述試劑包括:含有能編碼功能性MPP6蛋白的核酸的試劑、MPP6蛋白的激 活劑、含有MPP6蛋白質(zhì)的試劑。
[0018] 其中，所述含有能編碼功能性MPP6蛋白的核酸的試劑可W是在有利條件下翻譯成 活性形式的MPP6蛋白的單鏈核酸(如mRNA)或雙鏈核酸(如DNA)，所述的核酸可W連接在表 達(dá)載體上或重組到宿主細(xì)胞里，只要能編碼成活性MPP6蛋白，任何一種MPP6基因的攜帶方 式均可。所述的MPP6蛋白激活劑是指刺激MPP6蛋白活性、增加 MPP6蛋白活性、促進(jìn)MPP6蛋白 活性、增強(qiáng)MPP6蛋白激活、使MPP6蛋白活性敏感化或上調(diào)MPP6蛋白活性的試劑，如去甲基化 試劑、MPP6啟動(dòng)子和/或增強(qiáng)子特異性的轉(zhuǎn)錄激活劑、MPP6蛋白的激動(dòng)劑(如激活抗體)等。
[0019] 進(jìn)一步，上述藥物組合物還包括藥學(xué)上可接受的載體，所述載體可W是一種也可 W是多種，所述載體包括但不限于稀釋劑如乳糖、氯化鋼、葡萄糖、尿素、淀粉、水等;粘合劑 如淀粉、預(yù)膠化淀粉、糊精、麥芽糖糊精、薦糖、阿拉伯膠、明膠、甲基纖維素、簇甲基纖維素、 乙基纖維素、聚乙締醇、聚乙二醇、聚乙締比咯燒酬、海藻酸及海藻酸鹽、黃原膠、徑丙基纖 維素和徑丙基甲基纖維素等;表面活性劑如聚氧化乙締山梨聚糖脂肪酸醋、十二烷基硫酸 鋼、硬脂酸單甘油醋、十六燒醇等;致濕劑如甘油、淀粉等;吸附載體如淀粉、乳糖、斑脫±、 硅膠、高嶺±和皂粘±等；潤(rùn)滑劑如硬脂酸鋒、單硬脂酸甘油醋、聚乙二醇、滑石粉、硬脂酸 巧和儀、聚乙二醇、棚酸粉末、氨化植物油、硬脂富馬酸鋼、聚氧乙締單硬脂酸醋、單月桂薦 糖酸醋、月桂醇硫酸鋼、月桂醇硫酸儀、十二烷基硫酸儀等;填充劑如甘露醇(粒狀或粉狀）、 木糖醇、山梨醇、麥芽糖、赤薛糖、微晶纖維素、聚合糖、偶合糖、葡萄糖、乳糖、薦糖、糊精、淀 粉、海藻酸鋼、海帶多糖粉末、瓊脂粉末、碳酸巧和碳酸氨鋼等；崩解劑如交聯(lián)乙締化咯燒 酬、簇甲基淀粉鋼、低取代徑丙基甲基、交聯(lián)簇甲基纖維素鋼、大豆多糖等。
[0020] 所述的藥物組合物可W使用不同的添加劑進(jìn)行制備，例如穩(wěn)定劑、殺菌劑、緩沖 劑、等滲劑、馨合劑、pH控制劑及表面活性劑。
[0021] 穩(wěn)定劑包括人類(lèi)血清蛋白、1^-氨基酸、糖及纖維素衍生物。心氨基酸還可W包括甘 氨酸、半脫氨酸及谷氨酸中的任意一個(gè)。糖類(lèi)包括單糖，例如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖 等;糖醇，例如甘露醇、纖維醇、木糖醇等;二糖，例如薦糖、麥芽糖、乳糖等;多聚糖，例如葡 聚糖、徑丙基淀粉、硫化軟骨素、透明質(zhì)酸等及它們的衍生物。纖維素衍生物包括甲基纖維 素、乙基纖維素、徑乙基纖維素、徑丙基纖維素、徑丙甲基纖維素及徑甲基纖維素鋼。
[0022] 添加劑緩沖劑可W包括棚酸、憐酸、乙酸、巧樣酸、谷氨酸及相應(yīng)的鹽(它們的堿金 屬或堿性稀±金屬鹽，例如鋼鹽、鐘鹽、巧鹽及儀鹽）。等滲劑包括氯化鐘、氯化鋼、糖及甘 油。馨合劑包括乙二胺四乙酸鋼及巧樣酸。
[0023] 表面活性劑包括離子或非