腫瘤抗原肽的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及可用作癌癥的預(yù)防和/或治療劑的來源于0R7C1的腫瘤抗原膚等。
【背景技術(shù)】
[0002] 生物體對腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞等的排斥中，細(xì)胞免疫、特別是細(xì)胞毒性T淋己 細(xì)胞(稱為CTL)起到重要的作用。腫瘤細(xì)胞排斥的情況下，CTL識別腫瘤細(xì)胞上的抗原膚(月中 瘤抗原膚）與MHC(主要組織相容性復(fù)合物，Major Histocompatibility Complex)的復(fù)合 物，對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行攻擊和破壞。即，腫瘤抗原膚是通過腫瘤特有的蛋白質(zhì)、即腫瘤抗原蛋 白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)合成后由蛋白酶在細(xì)胞內(nèi)分解而生成。生成的腫瘤抗原膚在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)與MHCI 類抗原化LAI類抗原）結(jié)合而形成復(fù)合物，并被運送至細(xì)胞表面進(jìn)行抗原遞呈。腫瘤特異性 CTL識別該設(shè)及抗原遞呈的復(fù)合物，通過細(xì)胞毒性作用和淋己因子的產(chǎn)生而顯示抗腫瘤效 果。隨著運一系列作用的掲示，不斷地開發(fā)出通過將腫瘤抗原蛋白質(zhì)或腫瘤抗原膚用作所 謂的癌癥免疫療法制劑(癌癥疫苗)來使癌癥患者體內(nèi)的癌癥特異性CTL增強的治療法。
[0003] 0R7C1(嗅覺受體家族7亞家族C成員UOlfactory rec邱tor,family 7,subfamily C,member 1))是屬于嗅覺受體家族的G蛋白質(zhì)偶聯(lián)受體(G-protein-coupled receptors， GPCR)。0R7C1已知是在作為人結(jié)腸癌細(xì)胞株的SW480細(xì)胞、HCT15細(xì)胞和HT29細(xì)胞、作為人肺 癌細(xì)胞株的LHK2細(xì)胞的SP(側(cè)群，Side Population)細(xì)胞中表達(dá)的基因（專利文獻(xiàn)1)dSP細(xì) 胞被認(rèn)為是含大量癌癥干細(xì)胞的組分，被報道具有高致腫瘤性。
[0004] 癌癥干細(xì)胞被認(rèn)為是癌癥的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的主要原因，近年來指出了癌癥治療中W 癌癥干細(xì)胞為祀來抑制其增殖、遷移的重要性。實際對SW480細(xì)胞株轉(zhuǎn)染針對0R7C1的siRNA 后，SP細(xì)胞組分的比例和致腫瘤性顯著減少，所W0R7C1被認(rèn)為在癌癥干細(xì)胞的機能中承擔(dān) 必不可少的角色。
[0005] 另外，0R7C1在正常組織中僅于睪丸內(nèi)表達(dá)，所W被分類為"癌睪丸抗原"。癌睪丸 抗原被廣泛認(rèn)為是有希望用于癌癥疫苗的祀分子。
[0006] 此外，0R7C1是有希望用于癌癥疫苗的祀分子，實際上來源于0R7C1的部分膚被報 道是HLA-A24結(jié)合性腫瘤抗原膚(專利文獻(xiàn)1)。
[0007] 另外，如上所述，與腫瘤免疫相關(guān)的CTL識別腫瘤細(xì)胞上的腫瘤抗原膚與HLAI類抗 原的復(fù)合物，對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行攻擊和破壞。已知腫瘤抗原膚的HLA-A02限制性或HLA-A24限 制性通常分別獨立，歐美人和日本人中化A-A02和化A-A24顯示不同的抗原特異性。對于 0R7C1，也已知可與HLA-A24結(jié)合的來源于0R7C1的腫瘤抗原膚（專利文獻(xiàn)1)，但是尚未發(fā)現(xiàn) 可與HLA-A02結(jié)合或者可與HLA-A02和HLA-A24兩者結(jié)合的來源于0R7C1的腫瘤抗原膚。
[000引現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0009] 專利文獻(xiàn)
[0010] 專利文獻(xiàn)1:國際公開第2010/050190號文本
[0011] 發(fā)明的概要
[0012] 發(fā)明所要解決的技術(shù)問題
[OOU]本發(fā)明的目的在于提供可與HLA-A02結(jié)合或者可與HLA-A02和HLA-A24兩者結(jié)合的 來源于OR7C1的腫瘤抗原膚W及含有該腫瘤抗原膚作為有效成分的可用于癌癥的預(yù)防和/ 或治療的醫(yī)藥組合物等。
[0014] 解決技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案
[0015] 本發(fā)明人反復(fù)進(jìn)行認(rèn)真研究后，發(fā)現(xiàn)了 WGenbank登錄號NP_945182登錄的作為 0R7C1 (嗅覺受體家族7亞家族C成員1)(序列編號2)的部分膚的可與HLA-A02和HLA-A24兩者 結(jié)合的腫瘤抗原膚。
[0016] 此外，本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)該腫瘤抗原膚在體內(nèi)或體外可用作癌癥特異性CTL的誘導(dǎo)劑、 即癌癥疫苗。該腫瘤抗原膚可用作結(jié)腸癌、肺癌、卵巢癌等癌癥(腫瘤)疾病的預(yù)防和/或治 療劑。此外，該腫瘤抗原膚可用作針對結(jié)腸癌、肺癌、卵巢癌等癌癥(腫瘤)的腫瘤標(biāo)記物。
[0017] 旨P，本發(fā)明為W下所示的發(fā)明。
[0018] [1]由W序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6和序列編號11中的任一個 表示的氨基酸序列形成的膚。
[0019] [2]由W序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6和序列編號11中的任一個 表示的氨基酸序列中，
[0020] (1)將C末端的氨基酸置換為疏水性氨基酸的氨基酸序列，或者
[0021] (2)在N末端和/或C末端添加有1個~數(shù)個氨基酸的氨基酸序列
[0022] 形成的膚。
[0023] [3巧日[2]的膚，其中，該膚由將W序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6和 序列編號11中的任一個表示的氨基酸序列的C末端的氨基酸置換為亮氨酸、鄉(xiāng)氨酸或異亮 氨酸的氨基酸序列形成。
[0024] [4巧日[2]的膚，其中，該膚由在W序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6和 序列編號11中的任一個表示的氨基酸序列的N末端或C末端添加了 1個氨基酸的氨基酸序列 形成。
[0025] [5]將多條表位膚連結(jié)而成的多表位膚，其中，作為該表位膚，包含至少1條[1]~ [4]的膚。
[0026] [6]含有[1]~[4]的膚或[引的多表位膚作為有效成分的醫(yī)藥組合物。
[0027] [7巧日[6]的醫(yī)藥組合物，其中，包含佐劑。
[0028] [引含有[1]~[4]的膚或[引的多表位膚作為有效成分的癌癥的預(yù)防和/或治療用 疫苗。
[0029] [9]含有[1]~[4]的膚或[5]的多表位膚作為有效成分的癌癥的預(yù)防和/或治療 劑。
[0030] [10]含有[1]~[4]的膚或[引的多表位膚作為有效成分的細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)的 誘導(dǎo)劑。
[0031] [11]編碼[1]~[4]的膚或[引的多表位膚中的至少1個的多聚核巧酸。
[0032] [12]含有[11]的多聚核巧酸的表達(dá)載體。
[0033] [13]包含[12]的表達(dá)載體的基因?qū)胗媒M合物。
[0034] [14]含有 W 下的(a)或(b):
[0035] (a) [11]的多聚核巧酸、
[0036] (b)[12]的表達(dá)載體
[0037] 中的任一個作為有效成分的用于癌癥的治療或預(yù)防的醫(yī)藥組合物。
[0038] [1引包括使W下的(a)或(b):
[0039] (a)[l]~[4]的膚或[引的多表位膚、
[0040] (b)編碼上述(a)記載的膚中的至少1個的多聚核巧酸、
[0041] 與具有抗原遞呈能力的細(xì)胞在體外接觸的抗原遞呈細(xì)胞的制造方法。
[0042] [16]包括使W下的(a)或(b):
[0043] (a) [1]~[4]的膚或[引的多表位膚、
[0044] (b)編碼上述(a)記載的膚中的至少1個的多聚核巧酸
[0045] 中的任一個與外周血淋己細(xì)胞在體外接觸的CTL的誘導(dǎo)方法。
[0046] [ 17 ]含有[1 ]~[4 ]的膚和HLA的HLA多聚體。
[0047] [18]含有[17]的HLA多聚體的診斷藥物。
[0048] [19]識別[1]~[4]的膚與HLA的復(fù)合物的TCR樣抗體。
[0049] [ 20 ]含有[19 ]的TCR樣抗體的腫瘤檢測劑。
[0050] [21]用于篩選可有效地適用[6]、[7]或[14]的醫(yī)藥組合物的患者的診斷藥物，其 中，包含[17]的HLA多聚體或[19]的TCR樣抗體。
[0051] 發(fā)明的效果
[0052] 通過本發(fā)明，能提供可用作CTL的誘導(dǎo)劑的腫瘤抗原膚、和含有該腫瘤抗原膚作為 有效成分的可用于癌癥的預(yù)防和/或治療的醫(yī)藥組合物等。
[0053] 附圖的簡單說明
[0054] 圖1是表示W(wǎng)序列編號3表示的膚的采用干擾素丫 ELISP0T測試的體外的CTL誘導(dǎo) 能力的評價結(jié)果的圖?？v軸表示每500000個接種細(xì)胞的斑點數(shù)。A表示利用HLA-A*02:01基 因?qū)胄∈蟮脑囼灲Y(jié)果，B表示利用HLA-A巧4:02基因?qū)胄∈蟮脑囼灲Y(jié)果。此外，黑柱（"w/ Peptide")和白柱（"w/o Peptide")分別表示將來源于給膚小鼠的脾細(xì)胞在存在給予膚的 條件下和不存在給予膚的條件下再次刺激培養(yǎng)的結(jié)果。即，黑柱和白柱的值的差表示通過 各膚的給予而在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的膚特異性CTL的數(shù)量。
[0055] 圖2是表示W(wǎng)序列編號4表示的膚的采用干擾素丫 ELISP0T測試的體外的CTL誘導(dǎo) 能力的評價結(jié)果的圖?？v軸表示每500000個接種細(xì)胞的斑點數(shù)。A表示利用HLA-A*02:01基 因?qū)胄∈蟮脑囼灲Y(jié)果，B表示利用HLA-A巧4:02基因?qū)胄∈蟮脑囼灲Y(jié)果。此外，黑柱（"w/ Peptide")和白柱（"w/o Peptide")分別表示將來源于給膚小鼠的脾細(xì)胞在存在給予膚的 條件下和不存在給予膚的條件下再次刺激培養(yǎng)的結(jié)果。即，黑柱和白柱的值的差表示通過 各膚的給予而在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的膚特異性CTL的數(shù)量。
[0056] 圖3是表示W(wǎng)序列編號5表示的膚的采用干擾素丫 ELISP0T測試的體外的CTL誘導(dǎo) 能力的評價結(jié)果的圖?？v軸表示每500000個接種細(xì)胞的斑點數(shù)。A表示利用HLA-A*02:01基 因?qū)胄∈蟮脑囼灲Y(jié)果，B表示利用HLA-A巧4:02基因?qū)胄∈蟮脑囼灲Y(jié)果。此外，黑柱（"w/ Peptide")和白柱（"w/o Peptide")分別表示將來源于給膚小鼠的脾細(xì)胞在存在給予膚的 條件下和不存在給予膚的條件下再次刺激培養(yǎng)的結(jié)果。即，黑柱和白柱的值的差表示通過 各膚的給予而在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的膚特異性CTL的數(shù)量。
[0057] 圖4是表示W(wǎng)序列編號6表示的膚的采用干擾素丫 ELISP0T測試的體外的CTL誘導(dǎo) 能力的評價結(jié)果的圖?？v軸表示每500000個接種細(xì)胞的斑點數(shù)。A表示利用HLA-A*02:01基 因?qū)胄∈蟮脑囼灲Y(jié)果，B表示利用HLA-A巧4:02基因?qū)胄∈蟮脑囼灲Y(jié)果。此外，黑柱（"w/ Peptide")和白柱（"w/o Peptide")分別表示將來源于給膚小鼠的脾細(xì)胞在存在給予膚的 條件下和不存在給予膚的條件下再次刺激培養(yǎng)的結(jié)果。即，黑柱和白柱的值的差表示通過 各膚的給予而在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的膚特異性CTL的數(shù)量。
[0058] 圖5是表示W(wǎng)序列編號3表示的膚的采用人外周血單核細(xì)胞的CTL誘導(dǎo)能力的評價 結(jié)果的圖。A表示利用來源于HLA-A*02:01陽性健康人的外周血單核細(xì)胞的試驗結(jié)果，B表示 利用來源于HLA-A巧4:02陽性健康人的外周血單核細(xì)胞的試驗結(jié)果。黑柱和白柱表示再刺 激和非再刺激的結(jié)果。即，黑柱和白柱的值的差表示通過膚的刺激培養(yǎng)而誘導(dǎo)的膚特異性 CTL的數(shù)量。縱軸表示各孔中確認(rèn)的斑點數(shù)，橫軸表示陽性的各孔。此外，黑柱表示在膚刺激 條件下檢測到的斑點數(shù)，白柱表示在膚非刺激條件下檢測到的斑點數(shù)(對照）。
[0059] 圖6是表示W(wǎng)序列編號5表示的膚的采用人外周血單核細(xì)胞的CTL誘導(dǎo)能力的評價 結(jié)果的圖。A表示利用來源于HLA-A*02:01陽性健康人的外周血單核細(xì)胞的試驗結(jié)果，B表示 利用來源于HLA-A巧4:02陽性健康人的外周血單核細(xì)胞的試驗結(jié)果。黑柱和白柱表示再刺 激和非再刺激的結(jié)果。即，黑柱和白柱的值的差表示通過膚的刺激培養(yǎng)而誘導(dǎo)的膚特異性 CTL的數(shù)量?？v軸表示各孔中確認(rèn)的斑點數(shù)，橫軸表示陽性的各孔。此外，黑柱表示在膚刺激 條件下檢測到的斑點數(shù)，白柱表示在膚非刺激條件下檢測到的斑點數(shù)(對照）。
[0060] 圖7是表示W(wǎng)序列編號6表示的膚的采用人外周血單核細(xì)胞的CTL誘導(dǎo)能力的評價 結(jié)果的圖。A表示利用來源于HLA-A*02:01陽性健康人的外周血單核細(xì)胞的試驗結(jié)果，B表示 利用來源于HLA-A巧4:02陽性健康人的外周血單核細(xì)胞的試驗結(jié)果。黑柱和白柱表示再刺 激和非再刺激的結(jié)果。即，黑柱和白柱的值的差表示通過膚的刺激培養(yǎng)而誘導(dǎo)的膚特異性 CTL的數(shù)量。縱軸表示各孔中確認(rèn)的斑點數(shù)，橫軸表示陽性的各孔。此外，黑柱表示在膚刺激 條件下檢測到的斑點數(shù)，白柱表示在膚非刺激條件下檢測到的斑點數(shù)(對