基于免疫磁珠的微生物檢測前廣譜富集方法及免疫磁珠試劑與流程

本發(fā)明屬于微生物檢測，具體涉及一種基于生物免疫磁珠的微生物檢測前廣譜富集方法及免疫磁珠試劑。

背景技術(shù)：

1、在微生物學(xué)研究和應(yīng)用中，從復(fù)雜樣本中高效、特異地分離富集目標(biāo)微生物是至關(guān)重要的步驟。

2、在現(xiàn)有技術(shù)中，臨床對樣本中的微生物培養(yǎng)檢測耗時長，微生物檢驗?zāi)芰εc臨床快速的需求相沖突，并且細(xì)菌一般在樣本中分散分布，這使得微生物培養(yǎng)檢測就會存在將陽性樣本檢出為陰性結(jié)果，假陰性不僅會影響檢測結(jié)果更會耽誤患者的治療時間。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，本發(fā)明提供了一種基于生物免疫磁珠的微生物檢測前廣譜富集方法及免疫磁珠試劑。本發(fā)明要解決的技術(shù)問題通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

2、配置若干不同種類的樣本免疫磁珠，并使得每個樣本免疫磁珠表面修飾相應(yīng)于每個菌屬的抗體或配體，其中，所述樣本免疫磁珠的菌屬包括厭氧菌屬或/和需氧菌屬；

3、按照不同配比將不同種類的樣本免疫磁珠進(jìn)行混合得到若干混合免疫磁珠試劑；

4、將每個所述混合免疫磁珠試劑與含有抗原的生物樣本混合后分別孵育并使免疫磁珠與抗原結(jié)合，所述免疫磁珠與抗原結(jié)合包括特異性吸附結(jié)合和細(xì)菌同源性結(jié)合；

5、將結(jié)合了抗原的免疫磁珠從樣本中分離后，記錄每種配比下的抗原捕獲率以確定最佳磁珠配比，其中，所述最佳磁珠配比包括待富集樣本與磁珠試劑的配比以及磁珠試劑中每種菌屬的含量配比；

6、根據(jù)所述最佳磁珠配比配置磁珠試劑以對細(xì)菌進(jìn)行廣譜富集。

7、在一個具體實施方式中，待富集樣本與磁珠試劑的配比關(guān)系為：每1ml待富集樣本配置50-500μg磁珠試劑。

8、在一個具體實施方式中，所述需氧菌屬包括埃希菌屬、葡萄球菌屬、克雷伯菌屬、不動桿菌屬、鏈球菌屬、假單胞菌屬、腸球菌屬、變形桿菌屬中的一種或多種。

9、在一個具體實施方式中，當(dāng)所述需氧菌屬包括多種時，所述埃希菌屬的質(zhì)量百分比為5％～50％、葡萄球菌屬的質(zhì)量百分比為5％～25％、克雷伯菌屬的質(zhì)量百分比為3％～15％、不動桿菌屬的質(zhì)量百分比為3％～20％、鏈球菌屬的質(zhì)量百分比為5％～25％、假單胞菌屬的質(zhì)量百分比為5％～25％、腸球菌屬的質(zhì)量百分比為5％～25％、變形桿菌屬的質(zhì)量百分比為5％～25％。

10、在一個具體實施方式中，所述厭氧菌屬包括普雷沃菌屬、嗜胨菌屬、消化鏈球菌屬、韋榮氏球菌屬、雙歧桿菌屬、梭菌屬、擬桿菌屬、乳桿菌屬中的一種或多種。

11、在一個具體實施方式中，當(dāng)所述厭氧菌屬包括多種時，普雷沃菌屬的質(zhì)量百分比為5％～30％，嗜胨菌屬的質(zhì)量百分比為5％～25％、消化鏈球菌屬的質(zhì)量百分比為5％～30％、韋榮氏球菌屬的質(zhì)量百分比為5％～25％、雙歧桿菌屬的質(zhì)量百分比為5％～30％、梭菌屬的質(zhì)量百分比為5％～30％、擬桿菌屬的質(zhì)量百分比為5％～30％、乳桿菌屬的質(zhì)量百分比為5％～30％。

12、本發(fā)明同時提供一種免疫磁珠試劑，包括：質(zhì)量百分比為5％～50％的埃希菌屬、質(zhì)量百分比為5％～25％的葡萄球菌屬、質(zhì)量百分比為3％～15％的克雷伯菌屬、質(zhì)量百分比為3％～20％的不動桿菌屬、質(zhì)量百分比為5％～25％的鏈球菌屬、質(zhì)量百分比為5％～25％的假單胞菌屬、質(zhì)量百分比為5％～25％的腸球菌屬、質(zhì)量百分比為5％～25％的變形桿菌屬。

13、本發(fā)明同時提供另一種免疫磁珠試劑，包括：質(zhì)量百分比為5％～30％的普雷沃菌屬、質(zhì)量百分比為5％～25％的嗜胨菌屬、質(zhì)量百分比為5％～30％的消化鏈球菌屬、質(zhì)量百分比為5％～25％的韋榮氏球菌屬、質(zhì)量百分比為5％～30％的雙歧桿菌屬、質(zhì)量百分比為5％～30％的梭菌屬、質(zhì)量百分比為5％～30％的擬桿菌屬、質(zhì)量百分比為5％～30％的乳桿菌屬。

14、本發(fā)明的有益效果：

15、本發(fā)明的基于生物免疫磁珠的微生物檢測前廣譜富集方法通過精細(xì)調(diào)控不同特異性免疫磁珠的配比，該方法不僅提高了細(xì)菌的捕獲效率與純度，還實現(xiàn)了對多種細(xì)菌的廣譜富集。

16、以下將結(jié)合附圖及實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。

技術(shù)特征：

1.一種基于免疫磁珠的微生物檢測前廣譜富集方法，其特征在于，包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于生物免疫磁珠的微生物檢測前廣譜富集方法，其特征在于，待富集樣本與磁珠試劑的配比關(guān)系為：每1ml待富集樣本配置50-500μg磁珠試劑。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于免疫磁珠的微生物檢測前廣譜富集方法，其特征在于，所述需氧菌屬包括埃希菌屬、葡萄球菌屬、克雷伯菌屬、不動桿菌屬、鏈球菌屬、假單胞菌屬、腸球菌屬、變形桿菌屬中的一種或多種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于免疫磁珠的微生物檢測前廣譜富集方法，其特征在于，當(dāng)所述需氧菌屬包括多種時，所述埃希菌屬的質(zhì)量百分比為5％～50％、葡萄球菌屬的質(zhì)量百分比為5％～25％、克雷伯菌屬的質(zhì)量百分比為3％～15％、不動桿菌屬的質(zhì)量百分比為3％～20％、鏈球菌屬的質(zhì)量百分比為5％～25％、假單胞菌屬的質(zhì)量百分比為5％～25％、腸球菌屬的質(zhì)量百分比為5％～25％、變形桿菌屬的質(zhì)量百分比為5％～25％。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于免疫磁珠的微生物檢測前廣譜富集方法，其特征在于，所述厭氧菌屬包括普雷沃菌屬、嗜胨菌屬、消化鏈球菌屬、韋榮氏球菌屬、雙歧桿菌屬、梭菌屬、擬桿菌屬、乳桿菌屬中的一種或多種。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于免疫磁珠的微生物檢測前廣譜富集方法，其特征在于，當(dāng)所述厭氧菌屬包括多種時，普雷沃菌屬的質(zhì)量百分比為5％～30％，嗜胨菌屬的質(zhì)量百分比為5％～25％、消化鏈球菌屬的質(zhì)量百分比為5％～30％、韋榮氏球菌屬的質(zhì)量百分比為5％～25％、雙歧桿菌屬的質(zhì)量百分比為5％～30％、梭菌屬的質(zhì)量百分比為5％～30％、擬桿菌屬的質(zhì)量百分比為5％～30％、乳桿菌屬的質(zhì)量百分比為5％～30％。

7.一種免疫磁珠試劑，其特征在于，包括：質(zhì)量百分比為5％～50％的埃希菌屬、質(zhì)量百分比為5％～25％的葡萄球菌屬、質(zhì)量百分比為3％～15％的克雷伯菌屬、質(zhì)量百分比為3％～20％的不動桿菌屬、質(zhì)量百分比為5％～25％的鏈球菌屬、質(zhì)量百分比為5％～25％的假單胞菌屬、質(zhì)量百分比為5％～25％的腸球菌屬、質(zhì)量百分比為5％～25％的變形桿菌屬。

8.一種免疫磁珠試劑，其特征在于，包括：質(zhì)量百分比為5％～30％的普雷沃菌屬、質(zhì)量百分比為5％～25％的嗜胨菌屬、質(zhì)量百分比為5％～30％的消化鏈球菌屬、質(zhì)量百分比為5％～25％的韋榮氏球菌屬、質(zhì)量百分比為5％～30％的雙歧桿菌屬、質(zhì)量百分比為5％～30％的梭菌屬、質(zhì)量百分比為5％～30％的擬桿菌屬、質(zhì)量百分比為5％～30％的乳桿菌屬。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種基于生物免疫磁珠的微生物檢測前廣譜富集方法，包括：配置若干不同種類的樣本免疫磁珠，并使得每個樣本免疫磁珠表面修飾相應(yīng)于每個菌屬的抗體或配體；按照不同配比將不同種類的樣本免疫磁珠進(jìn)行混合得到若干混合免疫磁珠試劑；將每個所述混合免疫磁珠試劑與含有抗原的生物樣本混合后分別孵育并使免疫磁珠與抗原結(jié)合；將結(jié)合了抗原的免疫磁珠從樣本中分離后，記錄每種配比下的抗原捕獲率以確定最佳磁珠配比；根據(jù)所述最佳磁珠配比配置磁珠試劑以對細(xì)菌進(jìn)行廣譜富集。本發(fā)明的基于生物免疫磁珠的微生物檢測前廣譜富集方法通過精細(xì)調(diào)控不同特異性免疫磁珠的配比，該方法不僅提高了細(xì)菌的捕獲效率與純度，還實現(xiàn)了對多種細(xì)菌的廣譜富集。

技術(shù)研發(fā)人員：車露美,朱鵬,張園,朱錦鴿,張妍格,楊雪玲
受保護(hù)的技術(shù)使用者：西安方合圓光檢科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9