背景技術(shù)：
1、1.領(lǐng)域
2、本發(fā)明構(gòu)思涉及用于肝病，特別是代謝性肝病，包括但不限于非酒精性脂肪性肝病(nafld)和非酒精性脂肪性肝炎(nash)治療的組合物及其使用方法。
3、2.相關(guān)技術(shù)討論
4、nafld是一系列慢性肝紊亂，包括非酒精性脂肪性肝病(nafl)和非酒精性脂肪性肝炎(nash)。nash是慢性肝病的常見病因，其定義是至少有5％的肝臟脂肪變性和炎癥，伴有或不伴有纖維化。隨著時(shí)間的推移，如果不進(jìn)行治療，nash可能會(huì)發(fā)展為肝硬化，甚至肝細(xì)胞癌(hcc)。此外，nafld/nash與肥胖和ii型糖尿病密切相關(guān)，而肥胖和ii型糖尿病共同影響著50％以上的美國人口，造成了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。遺憾的是，nash的治療方案仍然有限，維生素e或奧貝膽酸治療僅能帶來輕微的益處。雖然nash是慢性肝病和肝硬化的主要病因，但目前還沒有臨床批準(zhǔn)的療法。因此，需要新的靶點(diǎn)、療法及其組合，以加快肝病治療的臨床進(jìn)展。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本公開部分基于一項(xiàng)新發(fā)現(xiàn)，即nash患者肝臟中體細(xì)胞突變的正向選擇可通過減少nash中的脂質(zhì)積累來提高細(xì)胞的適應(yīng)性和競爭力。體細(xì)胞突變篩選出的基因可通過逆轉(zhuǎn)脂毒性來提高克隆適應(yīng)性，并確定了gpam(甘油-3-磷酸酰基轉(zhuǎn)移酶，線粒體)。因此，本公開提供了調(diào)節(jié)gpam表達(dá)的新型組合物以及預(yù)防、減輕和/或治療肝病的方法。
2、在一些方面，本公開涉及一種組合物，該組合物包括下調(diào)gpam或其變體表達(dá)的核酸分子。在一些方面，核酸是sirna、成簇規(guī)律間隔短回文重復(fù)序列(crispr)相關(guān)核酸、單向?qū)na(sgrna)、crispr-rna(crrna)、反式激活crrna(tracrrna)、質(zhì)粒dna(pdna)或病毒載體。在一些方面，核酸是小干擾rna(sirna)分子或該核酸編碼sirna分子。在一些方面，組合物包括質(zhì)?；虿《据d體，其中質(zhì)粒或病毒載體包括編碼本文公開的sirna分子的核酸。在一些方面，sirna分子包括長度為2至30個(gè)核苷酸且與人類gpam?cdna序列中至少2至30個(gè)連續(xù)核苷酸至少80％同源的核苷酸序列，其中人類gpam?cdna序列為seq?id?no:1。在一些方面，sirna分子靶向gpam基因的開放閱讀框或5'或3'utr。在一些方面，sirna分子包括至少一個(gè)有義序列、至少一個(gè)反義序列、或至少一個(gè)有義序列和至少一個(gè)反義序列。在一些方面，sirna分子包括seq?id?no:2-165的核苷酸序列或其任何組合。在一些方面，至少一個(gè)有義序列包括seq?id?no:2-83的核苷酸序列。在一些方面，至少一個(gè)反義序列包括seq?id?no:84-165。
3、在一些方面，本公開還涉及一種組合物，該組合物包括下調(diào)gpam表達(dá)的核酸分子，其中核酸是sgrna或該核酸編碼sgrna。在一些方面，組合物包括質(zhì)?；虿《据d體，其中質(zhì)粒或病毒載體包括編碼本文公開的sgrna分子的第一核酸，并可選地包括編碼rna引導(dǎo)的核酸酶的第二核酸。在一些方面，sgrna的靶序列與seq?id?no:177-276中的任何一個(gè)至少約80％相同。在一些方面，rna引導(dǎo)的核酸酶是cas核酸內(nèi)切酶。
4、在一些方面，本文公開的sirna分子能特異性地下調(diào)gpam的至少一種變體的基因表達(dá)。在一些方面，本文公開的sgrna分子能特異性地下調(diào)gpam的至少一種變體的基因表達(dá)。在一些方面，gpam的至少一種變體與肝病有關(guān)。肝病的非限制性示例包括脂肪肝(fld)、酒精相關(guān)性肝病(arld)、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、任何病因引起的終末期肝病(肝硬化)、肝癌、或其任何組合。在一些方面，gpam的至少一種變體包括rs10787429c>t、rs7096937t>c、rs11446981t>ta、rs7898213t>c、rs2792759c>t、rs2297991t>c、rs1129555a>g、rs2254537t>a或其任何組合。
5、在一些方面，本文公開的核酸分子可與至少一種靶向配體綴合。在一些方面，至少一種靶向配體包括肝臟靶向配體。在一些方面，肝臟靶向配體包括至少一種n-乙酰半乳糖胺(galnac)綴合物。在一些方面，核酸分子與約一至約三種galnac綴合物綴合。在一些方面，核酸分子包含至少一種化學(xué)修飾。在一些方面，核酸分子包括對(duì)其核苷酸序列至少一個(gè)核糖部分的修飾。在一些方面，至少一個(gè)核糖部分被2?2′-o-甲基(2′ome)、2′-脫氧-2′-氟(2′f)、2′-脫氧、5-c-甲基、2′-o-(2-甲氧基乙基)(moe)、4′-硫代、2′-氨基、2′-c-烯丙基或其任何組合修飾。在一些方面，總核苷酸序列中少于約10％至約70％的核糖部分被修飾。
6、在一些方面，本公開還涉及一種藥物組合物，包含本文所公開的任何一種組合物和至少一種藥學(xué)上可接受的載體。在一些方面，藥物組合物還包括納米顆粒。在一些方面，藥物組合物還包括脂質(zhì)。
7、在一些方面，本公開還涉及一種治療有需要的受試者的方法，該方法包括施用治療有效量的本文所公開的組合物或本文所公開的藥物組合物。在一些方面，有需要的受試者是患有或疑似患有肝病的人類受試者。在一些方面，肝病包括脂肪肝(fld)、酒精相關(guān)性肝病(arld)、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、任何病因引起的終末期肝病(肝硬化)、肝癌、或其任何組合。在一些方面，施用方法包括腸胃外施用。在一些方面，與具有相同疾病狀況和預(yù)測結(jié)果的未經(jīng)治療的受試者相比，施用治療有效量的本文所公開的組合物或本文所公開的藥物組合物增加了受試者的預(yù)期壽命。在該方法的一些方面，與具有相同疾病狀況和預(yù)測結(jié)果的未經(jīng)治療的受試者相比，施用治療有效量的本文所公開的組合物或本文所公開的藥物組合物提高了受試者的肝功能。在該方法的某些方面，與具有相同疾病狀況和預(yù)測結(jié)果的未經(jīng)治療的受試者相比，施用治療有效量的本文所公開的組合物或本文所公開的藥物組合物減輕了受試者的肝纖維化。在某些方面，與具有相同疾病狀況和預(yù)測結(jié)果的未經(jīng)治療的受試者相比，施用治療有效量的本文所公開的組合物或本文所公開的藥物組合物防止了受試者出現(xiàn)額外的肝纖維化。
8、在一些方面，本公開還涉及一種試劑盒，其包括：盛放本文公開的組合物或本文公開的藥物組合物的容器、藥物施用工具；以及使用說明書。
1.一種組合物，包括下調(diào)gpam或其變體表達(dá)的核酸分子。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述核酸是sirna、成簇規(guī)律間隔短回文重復(fù)序列(crispr)相關(guān)核酸、單向?qū)na(sgrna)、crispr-rna(crrna)、反式激活crrna(tracrrna)、質(zhì)粒dna(pdna)、或病毒載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其中所述核酸是小干擾rna(sirna)分子或所述核酸編碼sirna分子。
4.一種包括質(zhì)?；虿《据d體的組合物，其中所述質(zhì)?；虿《据d體包含編碼權(quán)利要求3中所述sirna分子的核酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的組合物，其中所述sirna分子包括長度為2至30個(gè)核苷酸且與人類gpam?cdna序列中至少2至30個(gè)連續(xù)核苷酸至少80％同源的核苷酸序列。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述人類gpam?cdna序列為seq?id?no:1。
7.根據(jù)權(quán)利要求3或4中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述sirna分子靶向所述gpam基因的開放閱讀框或5'或3'utr。
8.根據(jù)權(quán)利要求3-7中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述sirna分子包括至少一個(gè)有義序列、至少一個(gè)反義序列、或至少一個(gè)有義序列和至少一個(gè)反義序列。
9.根據(jù)權(quán)利要求3-8中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述sirna分子包含seq?id?no:2-165中的核苷酸序列，或其任何組合。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述至少一個(gè)有義序列包括seq?id?no：2-83。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述至少一個(gè)反義序列包括seq?id?no:84-165。
12.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其中所述核酸是sgrna或所述核酸編碼sgrna。
13.一種包括質(zhì)?；虿《据d體的組合物，其中所述質(zhì)?；虿《据d體包含編碼權(quán)利要求12中所述sgrna分子的第一核酸，并可選地包含編碼rna引導(dǎo)的核酸酶的第二核酸。
14.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的組合物，其中sgrna靶序列與seq?id?no:177-276中任一個(gè)至少約80％相同。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組合物，其中所述rna引導(dǎo)的核酸酶是cas核酸內(nèi)切酶。
16.根據(jù)權(quán)利要求3-11中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述sirna分子特異性下調(diào)gpam的至少一種變體的基因表達(dá)。
17.根據(jù)權(quán)利要求12-14中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述sgrna分子特異性下調(diào)gpam的至少一種變體的基因表達(dá)。
18.根據(jù)權(quán)利要求16或17中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述gpam的至少一種變體與肝病有關(guān)。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的組合物，其中所述肝病包括脂肪肝(fld)、酒精相關(guān)性肝病(arld)、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、任何病因引起的終末期肝病(肝硬化)、肝癌、或其任何組合。
20.根據(jù)權(quán)利要求16-19中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述gpam的至少一種變體包括rs10787429c>t、rs7096937t>c、rs11446981t>ta、rs7898213t>c、rs2792759c>t、rs2297991t>c、rs1129555a>g、rs2254537t>a或其任何組合。
21.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述核酸分子與至少一種靶向配體綴合。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的組合物，其中所述至少一種靶向配體包括肝臟靶向配體。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的組合物，其中所述肝臟靶向配體包括至少一種n-乙酰半乳糖胺(galnac)綴合物。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的組合物，其中所述核酸分子與約一至約三種galnac綴合物綴合。
25.根據(jù)權(quán)利要求1-3或12中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述核酸分子包含至少一種化學(xué)修飾。
26.根據(jù)權(quán)利要求25中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述核酸分子包括對(duì)其核苷酸序列的至少一個(gè)核糖部分的修飾。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的組合物，其中所述至少一個(gè)核糖部分被2?2′-o-甲基(2′ome)、2′-脫氧-2′-氟(2′f)、2′-脫氧、5-c-甲基、2′-o-(2-甲氧基乙基)(moe)、4′-硫代、2′-氨基、2′-c-烯丙基、或其任何組合修飾。
28.根據(jù)權(quán)利要求26或27所述的組合物，其中總核苷酸序列中少于約10％至約70％的核糖部分被修飾。
29.一種藥物組合物，包括權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的組合物和至少一種藥學(xué)上可接受的載體。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的藥物組合物，還包括納米顆粒。
31.根據(jù)權(quán)利要求29或30所述的藥物組合物，還包括脂質(zhì)。
32.一種治療有需要的受試者的方法，包括施用治療有效量的權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的組合物或權(quán)利要求29-31中任一項(xiàng)所述的藥物組合物。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述有需要的受試者是患有或疑似患有肝病的人類受試者。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述肝病包括脂肪肝(fld)、酒精相關(guān)性肝病(arld)、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、任何病因引起的終末期肝病(肝硬化)、肝癌、或其任何組合。
35.根據(jù)權(quán)利要求32-34中任一項(xiàng)所述的方法，其中施用方法包括腸胃外施用。
36.根據(jù)權(quán)利要求31-34中任一項(xiàng)所述的方法，其中與具有相同疾病狀況和預(yù)測結(jié)果的未經(jīng)治療的受試者相比，施用治療有效量的權(quán)利要求1-27中任一項(xiàng)所述的組合物或權(quán)利要求28-30中任一項(xiàng)所述的藥物組合物增加受試者的預(yù)期壽命。
37.根據(jù)權(quán)利要求32-36中任一項(xiàng)所述的方法，其中與具有相同疾病狀況和預(yù)測結(jié)果的未經(jīng)治療的受試者相比，施用治療有效量的權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的組合物或權(quán)利要求29-31中任一項(xiàng)所述的藥物組合物提高受試者的肝功能。
38.根據(jù)權(quán)利要求32-37中任一項(xiàng)所述的方法，其中與具有相同疾病狀況和預(yù)測結(jié)果的未經(jīng)治療的受試者相比，施用治療有效量的權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的組合物或權(quán)利要求29-31中任一項(xiàng)所述的藥物組合物減輕受試者的肝纖維化。
39.根據(jù)權(quán)利要求32-38中任一項(xiàng)所述的方法，其中與具有相同疾病狀況和預(yù)測結(jié)果的未經(jīng)治療的受試者相比，施用治療有效量的權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的組合物或權(quán)利要求29-31中任一項(xiàng)所述的藥物組合物防止受試者出現(xiàn)額外的肝纖維化。
40.試劑盒，包括: