本發(fā)明涉及酶制品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鮮豬血中超氧化物歧化酶的提取方法。
背景技術(shù)：
超氧化物歧化酶(sod)是一種在體內(nèi)以超氧化陰離子自由基為底物的金屬酶，能清除超氧陰離子自由基等中間物的毒性，有效地預(yù)防活性氧對(duì)生物體的毒害作用，sod應(yīng)用于臨床治療，具有抗老化，抗輻射，抗炎癥等效果，甚至對(duì)自身免疫病都有一定的療效，也被用于高級(jí)化妝品、食品、飲料等領(lǐng)域。
超氧化物歧化酶廣泛存在于自然界各種生物體內(nèi)，而且目前動(dòng)物血液是生產(chǎn)超氧化物歧化酶的主要原料，而豬血來源豐富且價(jià)格低廉，用于提取超氧化物歧化酶具有很好的市場(chǎng)前景。目前，從豬血中提取氧化物歧化酶大多用傳統(tǒng)工藝：乙醇氯仿提取，熱變性、硫酸銨鹽析和丙酮沉淀等方法獲得sod，工藝流程復(fù)雜，生產(chǎn)成本高，酶活性損失大，并且使用了大量有毒有機(jī)溶劑，對(duì)環(huán)境有一定的影響。因此有必要對(duì)鮮豬血中超氧化物歧化酶提取工藝進(jìn)行改造，為企業(yè)規(guī)?；a(chǎn)降低成本，提高市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供一種種鮮豬血中超氧化物歧化酶的提取方法，采用先進(jìn)分離純化技術(shù)，達(dá)到工藝簡(jiǎn)單，提取效率高，酶活損失小，對(duì)環(huán)境無污染的目的。
為解決上述問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：以鮮豬血為材料，經(jīng)離心分離，收集豬血球，加入2-3倍飽和nacl溶液，高速攪拌30min，然后浸泡10-16h，離心分離，棄沉淀，取上清液，加入上清液體積比0.3％的2％鞣酸，用hcl溶液調(diào)劑ph6-7，在50-60rpm下，絮凝沉淀1-2h，離心分離，去沉淀，取上清液；在清液中加入一定量醋酸鈉，用醋酸調(diào)節(jié)ph至3.0-6.0，在2℃下靜置30min，5000rpm離心10min，去除沉淀，取上清液，然后超濾濃縮，冷凍干燥，即得sod成品。
具體步驟：
步驟一：鮮豬血中加入一定抗凝血?jiǎng)?，充分?jǐn)嚢韬笠?000rpm離心20-30min，收集血球；
步驟二：將豬血球與飽和nacl溶液按體積比1：1～3比例混合，高速攪拌30min，室溫靜置10-16h，然后5000rpm離心分離，收集上清液；
步驟三：將上述上清液與2％鞣酸按1000：3比例混合，在50-60rpm下，絮凝沉淀1-2h，離心分離，去沉淀，收集上清液；
步驟四：上述上清液中加入飽和醋酸鈉溶液至終濃度為30％，用醋酸調(diào)節(jié)ph至3.0-6.0，在2℃下靜置30min，8000rpm離心10min，去除沉淀，取上清液；
步驟五：超濾器將上述上清液濃縮，然后冷凍干燥，即得sod產(chǎn)品。
綜上所述，由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果是：
本發(fā)明采用飽和nacl溶液提取，鞣酸絮凝沉淀與醋酸鈉沉淀結(jié)合，再結(jié)合超濾濃縮純化，不需要任何有機(jī)溶劑，安全環(huán)保，并且工藝路線簡(jiǎn)單，成本低，所得sod產(chǎn)品提取率高，酶活性損失小?？捎糜谄髽I(yè)大規(guī)模化生產(chǎn)，提高市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。
本發(fā)明采用飽和nacl溶液提取，并且采用高速攪拌，使得豬血球破膜，釋放出血紅蛋白，經(jīng)離心分離除去血紅蛋白，此技術(shù)避免了使用有機(jī)溶劑，并且除去了血紅蛋白，且酶活性不損失；采用鞣酸絮凝沉淀與醋酸鈉沉淀相結(jié)合的方法，使得sod酶活性損失小，且方法簡(jiǎn)單操作；最后在結(jié)合超濾濃縮，保證了產(chǎn)品的高純度，使得純度能達(dá)到96％。
具體實(shí)施方式
為了更好的對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行理解，下面通過具體的實(shí)施例進(jìn)行闡述和說明。
實(shí)施例1
步驟一：鮮豬血中加入一定抗凝血?jiǎng)浞謹(jǐn)嚢韬笠?000rpm離心20-30min，收集血球；
步驟二：將豬血球與飽和nacl溶液按體積比1：1比例混合，高速攪拌30min，室溫靜置10-16h，然后5000rpm離心分離，收集上清液；
步驟三：將上述上清液與2％鞣酸按1000：3比例混合，在50-60rpm下絮凝沉淀1-2h，離心分離，去沉淀，收集上清液；
步驟四：上述上清液中加入飽和醋酸鈉溶液至終濃度為30％，用醋酸調(diào)節(jié)ph至3.0，在2℃下靜置30min，8000rpm離心10min，去除沉淀，取上清液；
步驟五：用超濾器將上述上清液濃縮至原來的1/3，然后冷凍干燥，即得sod產(chǎn)品。
實(shí)施例2
步驟一：鮮豬血中加入一定抗凝血?jiǎng)浞謹(jǐn)嚢韬笠?000rpm離心20-30min，收集血球；
步驟二：將豬血球與飽和nacl溶液按體積比1：3比例混合，高速攪拌30min，室溫靜置10-16h，然后5000rpm離心分離，收集上清液；
步驟三：將上述上清液與2％鞣酸按1000：3比例混合，在50-60rpm下絮凝沉淀1-2h，離心分離，去沉淀，收集上清液；
步驟四：上述上清液中加入飽和醋酸鈉溶液至終濃度為30％，用醋酸調(diào)節(jié)ph至6.0，在2℃下靜置30min，8000rpm離心10min，去除沉淀，取上清液；
步驟五：用超濾器將上述上清液濃縮至原來的1/3，然后冷凍干燥，即得sod產(chǎn)品。
實(shí)施例3
步驟一：鮮豬血中加入一定抗凝血?jiǎng)?，充分?jǐn)嚢韬笠?000rpm離心20-30min，收集血球；
步驟二：將豬血球與飽和nacl溶液按體積比1：2比例混合，高速攪拌30min，室溫靜置10-16h，然后5000rpm離心分離，收集上清液；
步驟三：將上述上清液與2％鞣酸按1000：3比例混合，在50-60rpm下絮凝沉淀1-2h，離心分離，去沉淀，收集上清液；
步驟四：上述上清液中加入飽和醋酸鈉溶液至終濃度為30％，用醋酸調(diào)節(jié)ph至4.5，在2℃下靜置30min，8000rpm離心10min，去除沉淀，取上清液；
步驟五：用超濾器將上述上清液濃縮至原來的1/3，然后冷凍干燥，即得sod產(chǎn)品。
盡管這里參照本發(fā)明的解釋性實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，上述實(shí)施例僅為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，本發(fā)明的實(shí)施并不受上述實(shí)施例的限制，應(yīng)該理解，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以設(shè)計(jì)出很多其他的修改和實(shí)施方式，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。