一種枸杞多糖精制的方法與流程

本發(fā)明屬于枸杞多糖分離純化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種枸杞多糖精制的方法。

背景技術(shù)：

枸杞屬茄科，主要分布于我國西北地區(qū)，已用作傳統(tǒng)中藥超過2000多年，目前在東亞、歐洲、北美和國內(nèi)廣泛作為功能性食品，市場(chǎng)份額大。研究表明，枸杞子富含多種活性成分，其中包括18種氨基酸(8種人體必須氨基酸)、21種微量元素、黃酮、蛋白、多糖、類胡蘿卜素等。

枸杞多糖是枸杞子最主要的活性成分之一，具有多種生物活性如降血糖、降血脂、抗氧化、抗衰老、抗疲勞等，同時(shí)還具有免疫調(diào)節(jié)活性，如促進(jìn)t細(xì)胞、b細(xì)胞增值，能夠促進(jìn)no等細(xì)胞因子產(chǎn)生。自然界中的活性多糖大多屬于鼠李糖半乳聚糖型、阿拉伯聚糖型、阿拉伯半乳聚糖型和果膠類多糖等類型。多糖的理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)決定了其生物活性，而理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)受其提取和分離純化方法的影響，因此枸杞多糖的提取分離純化工藝對(duì)枸杞多糖的生物活性尤為重要。

現(xiàn)有技術(shù)中，枸杞多糖主要是通過水提醇沉透析冷凍干燥得枸杞粗多糖，枸杞粗多糖經(jīng)陰離子交換柱層析，凝膠過濾柱層析等復(fù)雜過程才能得到純度較高的枸杞多糖，收率低，且易丟失活性多糖組分，難以全面評(píng)價(jià)枸杞多糖的功能。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供的一種枸杞多糖精制的方法，解決了現(xiàn)有技術(shù)的枸杞多糖分離純化方法操作復(fù)雜，得率低，容易丟失活性組分，難以全面評(píng)價(jià)枸杞多糖的功能的問題。

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種枸杞多糖精制的方法，包括以下步驟：

步驟1，枸杞多糖的提取

步驟1.1，將枸杞子粉碎后，室溫浸泡于相當(dāng)于枸杞子重量3倍體積的蒸餾水中，浸泡24h，離心，收集上清液，濃縮，向濃縮液中加入無水乙醇沉淀，離心，收集沉淀物；

步驟1.2，向所述沉淀物中加入蒸餾水，得到復(fù)溶液；然后向復(fù)溶液中加入相當(dāng)于復(fù)溶液1/5體積的sevage試劑，300r/min攪拌15min，離心，收集上清液；

步驟1.3，重復(fù)步驟1.2的操作數(shù)次直至無沉淀，將最后一次上清液用玻璃紙透析，收集袋內(nèi)溶液，冷凍干燥，得到枸杞粗多糖；

步驟1.4，將枸杞粗多糖用蒸餾水復(fù)溶后，再用截留分子量為8-14kda的透析袋透析，收集透析袋內(nèi)透析液，離心，收集上清液冷凍干燥，得到大分子枸杞多糖；收集透析袋外溶液，濃縮冷凍干燥，得到小分子枸杞多糖；

步驟2，大分子枸杞多糖的精制

將大分子枸杞多糖配成水溶液，加入無水乙醇，使乙醇的體積分?jǐn)?shù)為30％，沉淀12h，離心收集第一次多糖上清液和第一次多糖沉淀，向第一次多糖沉淀中加蒸餾水復(fù)溶，離心，收集的上清液經(jīng)冷凍干燥，得到初級(jí)純化的第一個(gè)枸杞多糖組分；

接著向第一次多糖上清液中加入無水乙醇，使乙醇的體積分?jǐn)?shù)為50％，沉淀12h，離心收集第二次多糖上清液和第二次多糖沉淀，向第一次多糖沉淀中加蒸餾水復(fù)溶，離心，收集的上清液經(jīng)冷凍干燥，得到初級(jí)純化的第二個(gè)枸杞多糖組分；

繼續(xù)向第二次多糖上清液中加入無水乙醇，使乙醇的體積分?jǐn)?shù)為70％，沉淀12h，離心收集第三次多糖沉淀，向第三次多糖沉淀中加蒸餾水復(fù)溶，離心，收集的上清液經(jīng)冷凍干燥，得到初級(jí)純化的第三個(gè)枸杞多糖組分；

將初級(jí)純化的第一、二、三個(gè)枸杞多糖組分分別經(jīng)sephadexg-100柱層析分離純化，分別得到第一、二、三個(gè)高純度枸杞多糖。

優(yōu)選的，上述的枸杞多糖精制的方法，步驟1.1、步驟1.2、步驟1.4和步驟2中離心條件均為8000r/min離心10min。

優(yōu)選的，上述的枸杞多糖精制的方法，步驟1.1的具體操作為：將枸杞子粉碎后，加入相當(dāng)于枸杞子重量3倍體積的蒸餾水，混勻，用1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)ph至7.0，浸泡24h，8000r/min離心10min，收集第一次上清液和第一次沉淀；向第一次沉淀中加入相當(dāng)于枸杞子重量1.5倍體積的蒸餾水，浸泡6h，8000r/min離心10min，收集第二次上清液；合并第一次上清液和第二次上清液，并將其濃縮；然后向濃縮液中加入相當(dāng)于濃縮液4倍體積的無水乙醇，沉淀12h后，8000r/min離心10min，收集沉淀物。

優(yōu)選的，上述的枸杞多糖精制的方法，所述sevage試劑由二氯甲烷與正丁醇按照4:1的體積比例混合而成。

優(yōu)選的，上述的枸杞多糖精制的方法，步驟1.4的具體操作為：將枸杞粗多糖用蒸餾水復(fù)溶后，再用截留分子量為8-14kda的透析袋透析72h，收集透析袋內(nèi)透析液；8000r/min離心10min，收集上清液冷凍干燥，冷凍干燥的條件為溫度-50℃、真空度5-10pa，得到大分子枸杞多糖；收集透析袋外的溶液，濃縮，冷凍干燥，冷凍干燥的條件為溫度-50℃、真空度5-10pa，得到小分子枸杞多糖。

優(yōu)選的，上述的枸杞多糖精制的方法，步驟2的具體步驟為：將大分子枸杞多糖配成1g/100ml濃度的水溶液，加入無水乙醇，使溶液中乙醇的體積分?jǐn)?shù)為30％，沉淀12h，8000r/min離心10min，收集第一次多糖上清液和第一次多糖沉淀，向第一次多糖沉淀中加蒸餾水復(fù)溶，8000r/min離心10min，收集的上清液經(jīng)冷凍干燥，冷凍干燥的條件為溫度-50℃、真空度5-10pa，得到初級(jí)純化的第一個(gè)枸杞多糖組分；

接著向第一次多糖上清液中加入無水乙醇，使乙醇的體積分?jǐn)?shù)為50％，沉淀12h，8000r/min離心10min，收集第二次多糖上清液和第二次多糖沉淀，向第二次多糖沉淀中加蒸餾水復(fù)溶，8000r/min離心10min，收集的上清液經(jīng)冷凍干燥，冷凍干燥的條件為溫度-50℃、真空度5-10pa，得到初級(jí)純化的第二個(gè)枸杞多糖組分；

繼續(xù)向第二次多糖上清液中加入無水乙醇，使乙醇的體積分?jǐn)?shù)為70％，沉淀12h，8000r/min離心10min，收集第三次多糖沉淀，向第三次多糖沉淀中加50ml蒸餾水復(fù)溶，8000r/min離心10min，收集的上清液經(jīng)冷凍干燥，冷凍干燥的條件為溫度-50℃、真空度5-10pa，得到初級(jí)純化的第三個(gè)枸杞多糖組分；

將初級(jí)純化的第一、二、三個(gè)枸杞多糖組分分別經(jīng)sephadexg-100柱層析分離純化，分別得到第一、二、三個(gè)高純度枸杞多糖。

優(yōu)選的，上述的枸杞多糖精制的方法，sephadexg-100柱層析分離純化的條件為：洗脫劑采用0.1mol/lnacl溶液，流速為0.3ml/min。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的枸杞多糖精制的方法，具有以下有益效果：

(1)本發(fā)明所述的枸杞多糖精制的方法，通過水提醇沉透析冷凍干燥得枸杞粗多糖，枸杞粗多糖經(jīng)截留分子量為8-14kda的透析袋透析，得到大分子枸杞多糖和小分子枸杞多糖，大分子枸杞多糖經(jīng)不同濃度的乙醇分級(jí)沉淀分離純化，避免使用陰離子交換柱層析分離純化得到相對(duì)較純的多糖，再經(jīng)sephadexg-100凝膠柱層析分離純化得到高純度枸杞多糖。整個(gè)操作步驟簡單，成本低，得率高，且能得到結(jié)構(gòu)組成不同的枸杞多糖組分，操作簡單，可以全面評(píng)價(jià)枸杞多糖的功能。

(2)本發(fā)明的方法得到的高純度多糖，得率高于傳統(tǒng)方法；得到的高純度枸杞多糖均能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力、酸性磷酸化酶活力和no釋放量；且均能表現(xiàn)出強(qiáng)的自由基清除能力和還原力。

附圖說明

圖1是lbp-i-1、lbp-i-2和lbp-i-3過凝膠柱層析sephadexg-100分離純化圖；

其中，圖1a是lbp-i-1的分離純化圖，圖1b是lbp-i-2的分離純化圖，圖1c是lbp-i-3的分離純化圖；

圖2是lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2和lbgp-i-3對(duì)巨噬細(xì)胞活力的影響；

其中，lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2和lbgp-i-3各自對(duì)應(yīng)的柱形圖中從左至右濃度依次為50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml；

圖3是lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3和lps對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響；

圖4是lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3和lps對(duì)巨噬細(xì)胞no釋放量的影響；

圖3-4中，lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3各自對(duì)應(yīng)的柱形圖中從左至右濃度依次為12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml，lps的濃度是1μg/ml；

圖5是lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3和lps對(duì)巨噬細(xì)胞酸性磷酸化酶活力的影響；

其中，lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3各自對(duì)應(yīng)的柱形圖中從左至右濃度依次為12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml，lps的濃度是10μg/ml；

圖6是lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3的抗氧化活性的影響；

其中，圖6a是lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3對(duì)dpph自由基清除的能力，圖6b是lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3對(duì)超氧陰離子清除的能力，圖6c是lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3對(duì)羥自由基清除的能力，圖6d是lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3的還原力分析。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明，但不應(yīng)理解為本發(fā)明的限制。下面實(shí)例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，均按照本領(lǐng)域的常規(guī)方法和條件進(jìn)行。

實(shí)施例1

一種枸杞多糖精制的方法，包括以下步驟：

步驟1，枸杞多糖的提取

步驟1.1，取500g的枸杞，用組織搗碎機(jī)(金壇新航j(luò)j-2組織搗碎勻漿機(jī))將其破碎，浸泡于1500ml蒸餾水中，用1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph至7.0，浸泡24h，8000r/min離心10min，收集第一次上清液和第一次沉淀；向第一次沉淀中加入750ml蒸餾水，浸泡6h，8000r/min離心10min，收集第二次上清液；合并第一次上清液和第二次上清液，將得到的混合液(約2250ml)置于40℃條件以下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至400ml；然后向濃縮液中加入1600ml的無水乙醇，沉淀12h后，8000r/min離心10min，收集沉淀物；

步驟1.2，向所述沉淀物中加入400ml蒸餾水，使沉淀物復(fù)溶即可，得到復(fù)溶液；然后向復(fù)溶液中加入80ml的sevage試劑(二氯甲烷與正丁醇按照4:1的體積比例混合而成)，將溶液轉(zhuǎn)入圓底燒瓶中，封口，300r/min攪拌15min，8000r/min離心10min，收集上清液；sevage試劑用以除去復(fù)溶液中的游離蛋白質(zhì)；

步驟1.3，重復(fù)步驟1.2的操作6-7次，直至游離蛋白除干凈，即溶液中無沉淀為止，最后一次上清液經(jīng)截留分子量為3kda的玻璃紙透析72h，收集袋內(nèi)溶液，濃縮，冷凍干燥，得到枸杞粗多糖(lbp)，冷凍干燥的條件為溫度-50℃、真空度5-10pa；

步驟1.4，將枸杞粗多糖溶液用截留分子量為8-14kda的透析袋透析72h，收集透析袋內(nèi)透析液；8000r/min離心10min，收集上清液冷凍干燥，冷凍干燥的條件為溫度-50℃、真空度5-10pa，得到大分子枸杞多糖(lbp-i)；另外，收集透析袋外的溶液，冷凍干燥，冷凍干燥的條件為溫度-50℃、真空度5-10pa，得到小分子多糖(lbp-o)。

步驟2，大分子枸杞多糖的精制

將大分子枸杞多糖配成1g/100ml濃度的水溶液(溶劑為蒸餾水)，取70ml，緩慢加入30ml無水乙醇，使溶液中乙醇的體積分?jǐn)?shù)為30％，沉淀12h，8000r/min離心10min，收集第一次多糖上清液和第一次多糖沉淀，向第一次多糖沉淀中加50ml蒸餾水復(fù)溶，8000r/min離心10min，收集的上清液經(jīng)冷凍干燥，冷凍干燥的條件為溫度-50℃、真空度5-10pa，得到初級(jí)純化的第一個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-1)；

將初級(jí)純化的第一個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-1)經(jīng)sephadexg-100層析柱進(jìn)一步分離純化得到第一個(gè)高純度枸杞多糖(lbgp-i-1)；

接著向第一次多糖上清液中緩慢加入40ml無水乙醇，使乙醇的體積分?jǐn)?shù)為50％，沉淀12h，8000r/min離心10min，收集第二次多糖上清液和第二次多糖沉淀，向第二次多糖沉淀中加50ml蒸餾水復(fù)溶，8000r/min離心10min，收集的上清液經(jīng)冷凍干燥，冷凍干燥的條件為溫度-50℃、真空度5-10pa，得到初級(jí)純化的第二個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-2)；

將初級(jí)純化的第二個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-2)經(jīng)sephadexg-100層析柱進(jìn)一步分離純化得到第二個(gè)高純度枸杞多糖(lbgp-i-2)；

繼續(xù)向第二次多糖上清液中緩慢加入93.3ml無水乙醇，使乙醇的體積分?jǐn)?shù)為70％，沉淀12h，8000r/min離心10min，收集第三次多糖沉淀，向第三次多糖沉淀中加50ml蒸餾水復(fù)溶，8000r/min離心10min，收集的上清液經(jīng)冷凍干燥，冷凍干燥的條件為溫度-50℃、真空度5-10pa，得到初級(jí)純化的第三個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-3)；

將初級(jí)純化的第三個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-3)經(jīng)sephadexg-100層析柱進(jìn)一步分離純化得到第三個(gè)高純度枸杞多糖(lbgp-i-3)；

其中，步驟2中sephadexg-100層析柱(直徑1.8cm×長度80cm)的分離純化條件均為：洗脫劑采用0.1mol/lnacl溶液，流速為0.3ml/min。

實(shí)施例2

一種枸杞多糖精制的方法，包括以下步驟：

步驟1，枸杞多糖的提取

同實(shí)施例1的步驟1；

步驟2，大分子枸杞多糖的精制

將大分子枸杞多糖配成1g/100ml濃度的水溶液(溶劑為蒸餾水)，取140ml，緩慢加入60ml無水乙醇，使溶液中乙醇的體積分?jǐn)?shù)為30％，沉淀12h，8000r/min離心10min，收集第一次多糖上清液和第一次多糖沉淀，向第一次多糖沉淀中加80ml蒸餾水復(fù)溶，8000r/min離心10min，收集的上清液經(jīng)冷凍干燥，冷凍干燥的條件為溫度-50℃、真空度5-10pa，得到初級(jí)純化的第一個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-1)；

將初級(jí)純化的第一個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-1)經(jīng)sephadexg-100層析柱進(jìn)一步分離純化得到第一個(gè)高純度枸杞多糖(lbgp-i-1)；

接著向第一次多糖上清液中緩慢加入80ml無水乙醇，使乙醇的體積分?jǐn)?shù)為50％，沉淀12h，8000r/min離心10min，收集第二次多糖上清液和第二次多糖沉淀，向第二次多糖沉淀中加60ml蒸餾水復(fù)溶，8000r/min離心10min，收集的上清液經(jīng)冷凍干燥，冷凍干燥的條件為溫度-50℃、真空度5-10pa，得到初級(jí)純化的第二個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-2)；

將初級(jí)純化的第二個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-2)經(jīng)sephadexg-100層析柱進(jìn)一步分離純化得到第二個(gè)高純度枸杞多糖(lbgp-i-2)；

繼續(xù)向第二次多糖上清液中緩慢加入186.6ml乙醇，使乙醇的體積分?jǐn)?shù)為70％，沉淀12h，8000r/min離心10min，收集第三次多糖沉淀，向第三次多糖沉淀中加60ml蒸餾水復(fù)溶，8000r/min離心10min，收集的上清液經(jīng)冷凍干燥，冷凍干燥的條件為溫度-50℃、真空度5-10pa，得到初級(jí)純化的第三個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-3)；

將初級(jí)純化的第三個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-3)經(jīng)sephadexg-100層析柱進(jìn)一步分離純化得到第三個(gè)高純度枸杞多糖(lbgp-i-3)；

其中，步驟2中sephadexg-100層析柱(直徑1.8cm×長度80cm)的分離純化條件均為：洗脫劑采用0.1mol/lnacl溶液，流速為0.3ml/min。

實(shí)施例3

一種枸杞多糖精制的方法，包括以下步驟：

步驟1，枸杞多糖的提取

同實(shí)施例1的步驟1；

步驟2，大分子枸杞多糖的精制

將大分子枸杞多糖配成1g/100ml濃度的水溶液(溶劑為蒸餾水)，取35ml，緩慢加入15ml無水乙醇，使溶液中乙醇的體積分?jǐn)?shù)為30％，沉淀12h，8000r/min離心10min，收集第一次多糖上清液和第一次多糖沉淀，向第一次多糖沉淀中加30ml蒸餾水復(fù)溶，8000r/min離心10min，收集的上清液經(jīng)冷凍干燥，冷凍干燥的條件為溫度-50℃、真空度5-10pa，得到初級(jí)純化的第一個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-1)；

將初級(jí)純化的第一個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-1)經(jīng)sephadexg-100層析柱進(jìn)一步分離純化得到第一個(gè)高純度枸杞多糖(lbgp-i-1)；

接著向第一次多糖上清液中緩慢加入20ml無水乙醇，使乙醇的體積分?jǐn)?shù)為50％，沉淀12h，8000r/min離心10min，收集第二次多糖上清液和第二次多糖沉淀，向第二次多糖沉淀中加30ml蒸餾水復(fù)溶，8000r/min離心10min，收集的上清液經(jīng)冷凍干燥，冷凍干燥的條件為溫度-50℃、真空度5-10pa，得到初級(jí)純化的第二個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-2)；

將初級(jí)純化的第二個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-2)經(jīng)sephadexg-100層析柱進(jìn)一步分離純化得到第二個(gè)高純度枸杞多糖(lbgp-i-2)；

繼續(xù)向第二次多糖上清液中緩慢加入46.6ml乙醇，使乙醇的體積分?jǐn)?shù)為70％，沉淀12h，8000r/min離心10min，收集第三次多糖沉淀，向第三次多糖沉淀中加50ml蒸餾水復(fù)溶，8000r/min離心10min，收集的上清液經(jīng)冷凍干燥，冷凍干燥的條件為溫度-50℃、真空度5-10pa，得到初級(jí)純化的第三個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-3)；

將初級(jí)純化的第三個(gè)枸杞多糖組分(lbp-i-3)經(jīng)sephadexg-100層析柱進(jìn)一步分離純化得到第三個(gè)高純度枸杞多糖(lbgp-i-3)；

其中，步驟2中sephadexg-100層析柱(直徑1.8cm×長度80cm)的分離純化條件均為：洗脫劑采用0.1mol/lnacl溶液，流速為0.3ml/min。

目前，提取出的枸杞多糖濃縮液經(jīng)兩種方法處理，一種為醇沉，savage試劑除蛋白，透析后冷凍干燥，得到的多糖含有約占40％分子量低于8kda的低分子多糖；另一種為醇沉后直接冷凍干燥，所得多糖的單糖組成主要為葡萄糖。

為了證明本發(fā)明方法的分離純化效果，我們利用實(shí)施例1提取的高純度枸杞多糖為樣品，實(shí)施例1中得到的lbp-i-1、lbp-i-2、lbp-i-3三個(gè)組分，結(jié)果參見圖1，得率分別為0.07％、0.04％、0.23％；lbp-i-1、lbp-i-2、lbp-i-3三個(gè)組分分別經(jīng)sephadexg-100柱層析進(jìn)一步分離純化得到高純度枸杞多糖分別為lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3，其得率分別為0.05％、0.03％、0.19％，其得率高于傳統(tǒng)方法。

對(duì)lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3進(jìn)行理化性質(zhì)分析、體外免疫活性分析、抗氧化活性分析、枸杞多糖單糖組成分析，結(jié)果如表1所示，表1的結(jié)果表明：lbgp-i-1單糖組成以葡萄糖為主，lbgp-i-2單糖組成以阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖為主，lbgp-i-1和lbgp-i-2單糖組成與傳統(tǒng)的方法不同；lbgp-i-3單糖組成以為阿拉伯糖和半乳糖為主，其單糖組成與離子交換柱層析分離純化的結(jié)果一致。

表1枸杞多糖單糖組成相對(duì)摩爾比

其中“-”表示未檢出。

根據(jù)苯酚硫酸法測(cè)得lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3中糖含量分別為36.23％、55.52％和81.42％。根據(jù)考馬斯亮藍(lán)法測(cè)得lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3中蛋白含量分別為60.54％,40.10％和18.50％。

我們還研究了高純度枸杞多糖對(duì)巨噬細(xì)胞活力、巨噬細(xì)胞吞噬能力、巨噬細(xì)胞no釋放量和巨噬細(xì)胞酸性磷酸化酶活力的影響，以deme培養(yǎng)基作為空白對(duì)照control，lps作為陽性對(duì)照，結(jié)果如圖2-5所示。圖2是lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2和lbgp-i-3對(duì)巨噬細(xì)胞活力的影響；其中，lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2和lbgp-i-3各自對(duì)應(yīng)的柱形圖中從左至右濃度依次為50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml；圖3是lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3和lps對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響；圖4是lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3和lps對(duì)巨噬細(xì)胞no釋放量的影響；圖3-4中，lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3各自對(duì)應(yīng)的柱形圖中從左至右濃度依次為12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml，lps的濃度是1μg/ml；圖5是lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3和lps對(duì)巨噬細(xì)胞酸性磷酸化酶活力的影響；其中，lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3各自對(duì)應(yīng)的柱形圖中從左至右濃度依次為12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml，lps的濃度是10μg/ml；圖2-5中，*表示與control相比p<0.05,**表示與control相比p<0.01,***表示與control相比p<0.001。

結(jié)果表明，lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2和lbgp-i-3均能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的活力和吞噬能力、酸性磷酸化酶活力和no釋放量，其中l(wèi)bgp-i-3最為顯著。

我們還研究了高純度枸杞多糖的抗氧化活性，結(jié)果如圖6所示，圖6a是lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3對(duì)dpph自由基清除的能力，圖6b是lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3對(duì)超氧陰離子清除的能力，圖6c是lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3對(duì)羥自由基清除的能力，圖6d是lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2、lbgp-i-3的還原力分析，其中vc作為對(duì)照，結(jié)果顯示，lbp-o、lbp、lbp-i、lbgp-i-1、lbgp-i-2和lbgp-i-3均能表現(xiàn)出強(qiáng)的自由基清除能力和還原力。

需要說明的是，本發(fā)明權(quán)利要求書中涉及數(shù)值范圍時(shí)，應(yīng)理解為每個(gè)數(shù)值范圍的兩個(gè)端點(diǎn)以及兩個(gè)端點(diǎn)之間任何一個(gè)數(shù)值均可選用，由于采用的步驟方法與實(shí)施例相同，為了防止贅述，本發(fā)明的描述了優(yōu)選的實(shí)施例1-3，盡管已描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，但本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員一旦得知了基本創(chuàng)造性概念，則可對(duì)這些實(shí)施例作出另外的變更和修改。所以，所附權(quán)利要求意欲解釋為包括優(yōu)選實(shí)施例以及落入本發(fā)明范圍的所有變更和修改。

顯然，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種改動(dòng)和變型而不脫離本發(fā)明的精神和范圍。這樣，倘若本發(fā)明的這些修改和變型屬于本發(fā)明權(quán)利要求及其等同技術(shù)的范圍之內(nèi)，則本發(fā)明也意圖包含這些改動(dòng)和變型在內(nèi)。