本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取領(lǐng)域，具體涉及從牛大力中提取提純高麗槐素的方法。
背景技術(shù)：
牛大力，別名豬腳笠、金鐘根、山蓮藕、倒吊金鐘、大力薯。為豆科豆科崖豆藤屬植物，美麗崖豆藤millettiaspecisoachamp.。牛大力以根入藥，主要成份為蛋白質(zhì)、淀粉質(zhì)及生物堿等。牛大力具有很高的藥用價值，早在《生草藥性備要》中記載有“壯筋活絡(luò)，補虛潤肺，治腰腿痛，風(fēng)濕痹痛，慢性肝炎，肺結(jié)核”?！蛾懘ū静荨芬灿涊d其：“清肺止咳，清涼解毒。治咳血、痢疾，溫病身熱口渴，頭暈”?，F(xiàn)有的藥理研究表明，牛大力具有免疫調(diào)節(jié)、降血糖、抗氧化和清除自由基等功效，牛大力塊根中含有三萜、黃酮、酚類、木質(zhì)素等化學(xué)組分，將牛大力中的有效化學(xué)組分分離提純，對于研究牛大力的藥理及養(yǎng)分，具有重要意義。
高麗槐素又稱朝鮮槐英、山槐素，天然存在于植物高麗槐、廣豆根等植物中，高麗槐素具有很強的抗真菌作用，同時具有較強的抗過敏活性，對芳烴羥化酶具有顯著抑制作用，可用于參與對高發(fā)病肺癌的治療；對誘導(dǎo)白血病細胞凋亡具有促進作用，對治療白血病也有一定的輔佐作用。
近年來，隨著牛大力種植面積的不斷擴大、產(chǎn)量的不斷增長，牛大力作為一種藥食同源的中藥材，針對其藥性的理論研究越來越多。如論文《牛大力石油醚部位化學(xué)成分研究》是對牛大力的95％乙醇浸膏進行分離純化后，通過光譜方法鑒定出不同化合物的結(jié)構(gòu)，證實了牛大力中含有高麗槐素、咖啡酸雨扇豆醇酯、二肽金色酰胺醇酯等；發(fā)明專利申請文獻《一種牛大力提取物復(fù)合茶及其制備方法》則公開了一種由牛大力提取物、羅漢果提取物等組成的復(fù)合茶，其中公開了牛大力的提取方法，包括連續(xù)逆流超聲提取、離心、酶解、超濾等步驟制備而成的牛大力提取物。但是，現(xiàn)有的文獻中，鮮有針對牛大力中的其它成分，尤其是黃酮類組分提取的研究記載。
以上背景技術(shù)內(nèi)容的公開僅用于輔助理解本發(fā)明的發(fā)明構(gòu)思及技術(shù)方案，其并不必然屬于本專利申請的現(xiàn)有技術(shù)，在沒有明確的證據(jù)表明上述內(nèi)容在本專利申請的申請日已經(jīng)公開的情況下，上述背景技術(shù)不應(yīng)當(dāng)用于評價本申請的新穎性和創(chuàng)造性。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種從牛大力提取提純高麗槐素工藝，以實現(xiàn)從牛大力規(guī)?；?、工業(yè)化提取高麗槐素成分，可控性強，效率高。
為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
從牛大力提取提純高麗槐素工藝，其特征在于，包括以下步驟：
a1：前處理：將鮮牛大力經(jīng)清洗外層雜質(zhì)后，切成厚度為0.5～1.0cm的切片，平攤放置于功率為500～800w紅外燈下晾曬1～2h，再置于熱風(fēng)干燥箱中干燥；
a2：粗提?。簩⒉襟Ea1所得牛大力經(jīng)粉碎至50～80目后，置于75％乙醇溶液中，加熱至65～80℃浸提，過濾，濾渣再重復(fù)提取2次，合并提取液；
a3：濃縮干燥：將步驟a2所得溶提取液經(jīng)減壓蒸餾，回收溶劑，得粗提取物；
a4：萃取：將步驟a3所得粗提取物用去離子水溶解，用甲醇常溫萃取2次，合并萃取物；
a5：柱層析分離提?。簩⒉襟Ea4所得溶液過極性硅膠柱，使用70％異丙醇和30％乙醇混合液洗脫，得洗脫液，減壓蒸餾除去溶劑；
a6：樹脂提取：將步驟a4所得提取物用75％乙醇按質(zhì)量比1:1攪拌溶解，溶液經(jīng)ab-8型大孔吸附樹脂吸附2次；
a7：洗脫：采用濃度為10％～95％的乙醇溶液，由低濃度到高濃度地對步驟a6所述樹脂梯度洗脫，得到洗脫液；
a8：過濾：將步驟a7所得洗脫液經(jīng)截留分子量為600的超濾膜，收集濾液；
a9：濃縮：將步驟a5所得超濾液減壓蒸去溶劑；
a10：干燥：將步驟a7所得物置于真空干燥箱中，在65～85℃下干燥1.5～3h。
優(yōu)選地，所述的從牛大力提取提純高麗槐素工藝，步驟a1中干燥至水分含量為8～15％；
優(yōu)選地，所述的從牛大力提取提純高麗槐素工藝，步驟a2中所述粉碎方式為錘片粉碎機、流能磨、球磨機的一種；
優(yōu)選地，所述的從牛大力提取提純高麗槐素工藝，步驟a2中所述加熱浸提方式為索式提取法、回流提取中的一種；
優(yōu)選地，所述的從牛大力提取提純高麗槐素工藝，步驟a3中減壓蒸餾的蒸餾溫度為70～85℃，蒸餾壓力為50～100pa。
優(yōu)選地，所述的從牛大力提取提純高麗槐素工藝，步驟a5中層析柱所使用的硅膠為200～300目。
優(yōu)選地，所述的從牛大力提取提純高麗槐素工藝，步驟a6中所述的大孔徑樹脂為40～80nm孔徑、25％～40％孔度的ab-8型大孔吸附樹脂。
優(yōu)選地，所述的從牛大力提取提純高麗槐素工藝，步驟a6中，樹脂吸附過程保持溶液溫度為25～35℃，吸附流速為2.5～3.5bv/h。
優(yōu)選地，所述的從牛大力提取提純高麗槐素工藝，步驟a8中所述超濾膜材質(zhì)為聚丙烯腈、聚醚砜、聚偏氟乙烯。
更優(yōu)選地，所述的從牛大力提取提純高麗槐素工藝，步驟a8中過濾壓力為0.15～0.20mpa。
本發(fā)明具有以下有益效果：
(1)本發(fā)明所述的高麗槐素的提取工藝中，牛大力鮮品先經(jīng)紅外干燥脫水，有效滅殺細菌、霉菌；
(2)本發(fā)明所述的高麗槐素的提取工藝中，牛大力分別經(jīng)柱層析、大孔吸附樹脂、超濾膜提取，牛大力所含的多糖及其他主要雜質(zhì)分離效果好；
(3)采用本發(fā)明所述工藝進行高麗槐素的提取，所產(chǎn)出的高麗槐素回收率高，純度好，有利于牛大力中高麗槐素含量及性質(zhì)的進一步研究。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明作進一步詳細說明。應(yīng)該強調(diào)的是，下述說明僅僅是示例性的，而不是為了限制本發(fā)明的范圍及其應(yīng)用。
實施例1：
從牛大力提取提純高麗槐素工藝，其特征在于，包括以下步驟：
a1：前處理：將鮮牛大力經(jīng)清洗外層雜質(zhì)后，切成厚度為0.5cm的切片，平攤放置于功率為500w紅外燈下晾曬2h，再置于熱風(fēng)干燥箱中干燥至水分含量為8％；
a2：粗提?。簩⒉襟Ea1所得牛大力經(jīng)錘片粉碎機粉碎至50目后，置于75％乙醇溶液中，加熱至65℃采用索式提取法浸提，過濾，濾渣再重復(fù)提取2次，合并提取液；
a3：濃縮干燥：將步驟a2所得溶提取液經(jīng)蒸餾溫度為70℃，蒸餾壓力為100pa減壓蒸餾，回收溶劑，得粗提取物；
a4：萃取：將步驟a3所得粗提取物用去離子水溶解，用甲醇常溫萃取2次，合并萃取物；
a5：柱層析分離提?。簩⒉襟Ea4所得溶液過200目極性硅膠柱，使用70％異丙醇和30％乙醇混合液洗脫，得洗脫液，減壓蒸餾除去溶劑；
a6：樹脂提?。簩⒉襟Ea4所得提取物用75％乙醇按質(zhì)量比1:1攪拌溶解，溶液經(jīng)40nm孔徑、25％孔度ab-8型大孔吸附樹脂吸附2次，吸附過程中溶液溫度為25℃，吸附流速為2.5bv/h；
a7：洗脫：采用濃度為10％～95％的乙醇溶液，由低濃度到高濃度地對步驟a6所述樹脂梯度洗脫，得到洗脫液；
a8：過濾：將步驟a7所得洗脫液經(jīng)截留分子量為600的聚丙烯腈超濾膜，過濾壓力為0.15mpa，收集濾液；
a9：濃縮：將步驟a5所得超濾液減壓蒸去溶劑；
a10：干燥：將步驟a7所得物置于真空干燥箱中，在65℃下干燥3h。
實施例2
從牛大力提取提純高麗槐素工藝，其特征在于，包括以下步驟：
a1：前處理：將鮮牛大力經(jīng)清洗外層雜質(zhì)后，切成厚度為1.0cm的切片，平攤放置于功率為800w紅外燈下晾曬1h，再置于熱風(fēng)干燥箱中干燥至水分含量為15％；
a2：粗提?。簩⒉襟Ea1所得牛大力經(jīng)流能磨粉碎至80目后，置于75％乙醇溶液中，加熱至80℃回流提取，過濾，濾渣再重復(fù)提取2次，合并提取液；
a3：濃縮干燥：將步驟a2所得溶提取液在蒸餾溫度為85℃，蒸餾壓力為100pa下減壓蒸餾，回收溶劑，得粗提取物；
a4：萃?。簩⒉襟Ea3所得粗提取物用去離子水溶解，用甲醇常溫萃取2次，合并萃取物；
a5：柱層析分離提?。簩⒉襟Ea4所得溶液過300目極性硅膠柱，使用70％異丙醇和30％乙醇混合液洗脫，得洗脫液，減壓蒸餾除去溶劑；
a6：樹脂提取：將步驟a4所得提取物用75％乙醇按質(zhì)量比1:1攪拌溶解，溶液經(jīng)80nm孔徑、40％孔度的ab-8型大孔吸附樹脂吸附2次，保持溶液溫度為35℃，吸附流速為3.5bv/h；
a7：洗脫：采用濃度為10％～95％的乙醇溶液，由低濃度到高濃度地對步驟a6所述樹脂梯度洗脫，得到洗脫液；
a8：過濾：將步驟a7所得洗脫液經(jīng)截留分子量為600的聚偏氟乙烯超濾膜，過濾壓力為0.20mpa，收集濾液；
a9：濃縮：將步驟a5所得超濾液減壓蒸去溶劑；
a10：干燥：將步驟a7所得物置于真空干燥箱中，在85℃下干燥1.5h。
實施例3
從牛大力提取提純高麗槐素工藝，其特征在于，包括以下步驟：
a1：前處理：將鮮牛大力經(jīng)清洗外層雜質(zhì)后，切成厚度為0.8cm的切片，平攤放置于功率為700w紅外燈下晾曬1.5h，再置于熱風(fēng)干燥箱中干燥至水分含量為10％；
a2：粗提?。簩⒉襟Ea1所得牛大力經(jīng)球磨機粉碎至60目后，置于75％乙醇溶液中，加熱至75℃索式提取法回流浸提，過濾，濾渣再重復(fù)提取2次，合并提取液；
a3：濃縮干燥：將步驟a2所得溶提取液經(jīng)蒸餾溫度為75℃，蒸餾壓力為80pa減壓蒸餾，回收溶劑，得粗提取物；
a4：萃?。簩⒉襟Ea3所得粗提取物用去離子水溶解，用甲醇常溫萃取2次，合并萃取物；
a5：柱層析分離提?。簩⒉襟Ea4所得溶液過250目極性硅膠柱，使用70％異丙醇和30％乙醇混合液洗脫，得洗脫液，減壓蒸餾除去溶劑；
a6：樹脂提?。簩⒉襟Ea4所得提取物用75％乙醇按質(zhì)量比1:1攪拌溶解，溶液經(jīng)60nm孔徑、35％孔度的ab-8型大孔吸附樹脂吸附2次，保持溶液溫度為30℃，吸附流速為3bv/h；
a7：洗脫：采用濃度為10％～95％的乙醇溶液，由低濃度到高濃度地對步驟a6所述樹脂梯度洗脫，得到洗脫液；
a8：過濾：將步驟a7所得洗脫液經(jīng)截留分子量為600的聚偏氟乙烯超濾膜，過濾壓力為0.18mpa，收集濾液；
a9：濃縮：將步驟a5所得超濾液減壓蒸去溶劑；
a10：干燥：將步驟a7所得物置于真空干燥箱中，在75℃下干燥2h。
,為詳細說明本發(fā)明的有益效果，進一步提供了實驗結(jié)果。
將等量的、同產(chǎn)地鮮牛大力分為等量4組，每組500g，分別經(jīng)對照組的實驗方法與本發(fā)明3個實施例所述方法進行高麗槐素的提取，用分析天平稱量提取物質(zhì)量，用液相色譜法檢測提取物中高麗槐素的含量。具體實驗條件及結(jié)果如下所示。
對照組牛大力提取高麗槐素方法：將牛大力鮮品經(jīng)120℃熱風(fēng)干燥至水分含量≤15％、粉碎成≤50目顆粒、用75％甲醇浸泡36h后，加熱回流提取3次，合并提取液，減壓蒸餾得到乙醇浸膏，用異丙醇萃取3次，合并萃取液，使用乙酸乙酯-氯仿按7:1至1:1梯度洗脫，對洗脫液過極性硅膠柱，收集主要成分，減壓蒸餾，經(jīng)真空干燥箱干燥。
高麗槐素含量檢測方法：稱取高麗槐素對照品(hplc≥98％)0.020g溶于20ml氯仿中，配成0.0010g/ml高麗槐素標(biāo)準溶液，用0.45μm濾膜過濾，備用。選擇紫菀末端吸收檢測波長為310nm。選用symmetryc18(150mm×4.6mm，5μm)作為色譜柱，柱溫30℃，流動相為v(乙腈):v(0.1％冰醋酸水溶液)＝30:70，流速1.0ml/min，用高效液相色譜儀檢測標(biāo)準品，并記錄其峰形面積。再采用相同的檢查方法檢測4組提取物的也想色譜峰，以4組提取物的液相峰面積計算其含量。
由實驗結(jié)果可見，相比對照組的常規(guī)提取方法，采用本發(fā)明所述方法對牛大力進行高麗槐素的提取，具有提取物質(zhì)量多、高麗槐素含量高的優(yōu)勢。
以上內(nèi)容不能認定本發(fā)明的具體實施只局限于這些說明，對于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明由所提交的權(quán)利要求書確定的專利保護范圍。