本發(fā)明涉及天然物提取技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種從桑葉中提取1-脫氧野尻霉素的方法。
背景技術(shù)：
桑葉味苦、甘、性寒，具有滋陰補(bǔ)血，疏風(fēng)散熱，益肝通氣，降壓利尿的功效。目前大部分地區(qū)將桑作為飼用栽培，每年入冬后隨著冬蠶飼養(yǎng)減少，大量桑葉都被廢棄。桑葉味苦甘，性寒，歸肺、肝經(jīng)，具有疏風(fēng)清熱、平肝明目的功效；在藥理上具有抗炎、降血糖、降血脂、利尿等作用，這些藥理活性歸功于桑葉中的1-脫氧野尻霉素(dnj)、白黎蘆醇等成分，因而研究桑葉中的這兩種成分的提取技術(shù)具有重要意義。1-脫氧野尻霉素是人體小腸絨毛上的一種ɑ-糖苷酶抑制劑，能阻止淀粉分解成為葡萄糖，競爭性地阻斷小腸粘膜刷狀緣內(nèi)的麥芽糖酶和蔗糖酶等雙糖水解酶，使攝食的多糖、寡糖和雙糖消化成葡萄糖、果糖等單糖的吸收過程受到阻礙，繼而降低血糖濃度，對治療糖尿病及其并發(fā)癥具有一定作用。此外，1-脫氧野尻霉素還能預(yù)防癌細(xì)胞生成，提高人體免疫力，具有抗病毒、抑制腫瘤等功能。目前，1-脫氧野尻霉素的市場價格昂貴(98％純度1-脫氧野尻霉素約20萬元/克)，如果其生產(chǎn)成本降低，其應(yīng)用領(lǐng)域還將進(jìn)一步擴(kuò)大。
現(xiàn)有的桑葉1-脫氧野尻霉素提取方法如cn102190618a的方法是將桑葉粉碎，在40-60℃溫度下，通過酶解酶解得到酶解原料50%-80%的堿性親水溶劑加熱回流提取1-3次，每次110-130min，冷卻過濾，之后進(jìn)行低壓濃縮，靜置8-12小時，收集沉淀，加入酸溶液，攪拌，使其充分溶解后，過濾，將濾液通過超濾膜，將超濾液通過陽離子樹脂后，用氨醇溶液進(jìn)行洗脫，收集并濃縮洗脫液，然后通過大孔吸附樹脂，用醇液洗脫，收集洗脫液；在進(jìn)行使用甲醇-飽和氨水混合溶劑結(jié)晶與重結(jié)晶。此方法工藝較長，操作較為繁瑣，溶劑耗損較大，效率較低工業(yè)化生產(chǎn)成本較高。
通過本發(fā)明的研究，從桑葉中提取1-脫氧野尻霉素的制備工藝步驟少、操作簡單，使用的溶劑均可回收再利用，也可進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)，能在減少環(huán)境污染的同時，最大程度上制備出純度較高的1-脫氧野尻霉素。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種更為簡單合理地從桑葉中提取1-脫氧野尻霉素的方法，能在減少環(huán)境污染的同時，最大程度上制備出純度較高的1-脫氧野尻霉素。本發(fā)明的提取物制備方法包括以下步驟實現(xiàn)：
(1)原料處理：取桑葉，去除雜質(zhì)后，洗凈，瀝干，粉碎；
(2)提?。荷Ｈ~質(zhì)量8-12倍量的酸性乙醇提取桑葉加熱提取2~3次，提取的溫度在50~100℃，過濾得到1-脫氧野尻霉素提取液；
(3)純化：將步驟（2）得到的提取液濃縮至原提取液體積的1/5-1/10,然后通過堿性氧化鋁柱，用4-8倍柱體積的稀醇洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥得到粉末；
(4)重結(jié)晶：將步驟（3）得到的粉末重量的8-10倍溶于丙酮，采用丙酮進(jìn)行重結(jié)晶，得到純品。
步驟(1)中，將桑葉粉碎至150～250目。
步驟(2)中，酸性乙醇用鹽酸或冰醋酸溶解在乙醇中，ph值在1~3。
步驟(3)中，稀醇的乙醇濃度為10%~30%，最優(yōu)濃度為20%；氧化鋁采用100~200目；氧化鋁在130℃活化12h。
步驟(4)中，析晶溫度-5℃-10℃，析晶次數(shù)為2-3次。
本發(fā)明制備出純度較高的1-脫氧野尻霉素具有如下優(yōu)點:
(1)在提取過程中進(jìn)行酸化處理，后冷卻除去雜質(zhì)的步驟具有重要作用，由于不需要加入絮凝劑，在降低成本、提高含量的同時保證了后處理過程中沒有外源性的物質(zhì)帶入。
(2)使用的溶劑均可以通過回收再利用，極大地降低了資源的損耗，對環(huán)境污染極小，且最大程度上制備出純度較高的1-脫氧野尻霉素。
(3)本發(fā)明方法設(shè)計合理，工藝步驟少，操作簡便，無需特殊設(shè)備，非常適合工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施方式
用高效液相法檢測dnj含量，檢測設(shè)備為agilent1100高效液相色譜儀色譜柱為hypersilods(250mm×4.6mm，5μ)，dnj經(jīng)衍生試劑進(jìn)行衍生后的液相色譜檢測條件：流動相為乙腈與0.1％醋酸體積比11：16、檢測波長為254nm、流速為1ml/min、進(jìn)樣量為20μl。
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進(jìn)一步描述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍絕不局限于下列實施方式。
實施例1
（1）原料前處理：將300g干燥桑葉粉碎，80%以上過200目；
（2）提?。簆h為2的酸性乙醇3000ml提取桑葉加熱提取3次，提取的溫度在75℃，過濾得到1-脫氧野尻霉素提取液；
（3）純化：將步驟(2)得到的提取液濃縮至原提取液體積的1/10,然后通過堿性氧化鋁柱，用8倍柱體積的20%稀醇洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥得到粉末；
（4）重結(jié)晶：將步驟(3)取20ml丙酮使粉末溶解其中，降溫至0℃，結(jié)晶后低溫過濾，反復(fù)析晶三次,得到純度92.6%的1-脫氧野尻霉素。
實施例2
（1）原料前處理：將300g干燥桑葉粉碎，80%以上過200目；
（2）提取：ph為2的酸性乙醇3000ml提取桑葉加熱提取3次，提取的溫度在75℃，過濾得到1-脫氧野尻霉素提取液；
（3）純化：將步驟(2)得到的提取液濃縮至原提取液體積的1/10,然后通過堿性氧化鋁柱，用8倍柱體積的20%稀醇洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥得到粉末；
（4）重結(jié)晶：將步驟（3）取20ml丙酮使粉末溶解其中，降溫至5℃，結(jié)晶后低溫過濾，反復(fù)析晶三次,得到純度87.2%的1-脫氧野尻霉素。
實施例3
（1）原料前處理：將300g干燥桑葉粉碎，80%以上過200目；
（2）提?。簆h為2的酸性乙醇3000ml提取桑葉加熱提取3次，提取的溫度在100℃，過濾得到1-脫氧野尻霉素提取液；
（3）純化：將步驟（2）得到的提取液濃縮至原提取液體積的1/10,然后通過堿性氧化鋁柱，用8倍柱體積的20%稀醇洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥得到粉末；
（4）重結(jié)晶：將步驟（3）取20ml丙酮使粉末溶解其中，降溫至0℃，結(jié)晶后低溫過濾，反復(fù)析晶三次,得到純度87.8%的1-脫氧野尻霉素。
實施例4
（1）原料前處理：將300g干燥桑葉粉碎，80%以上過200目；
（2）提取：ph為3的酸性乙醇提取桑葉加熱提取3次，提取的溫度在75℃，過濾得到1-脫氧野尻霉素提取液；
（3）純化：將步驟（2）得到的提取液濃縮至原提取液體積的1/10,然后通過堿性氧化鋁柱，用8倍柱體積的10%稀醇洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥得到粉末；
（4）重結(jié)晶：將步驟（3）取20ml丙酮使粉末溶解其中，降溫至10℃，結(jié)晶后低溫過濾，反復(fù)析晶三次，得到純度84.8%的1-脫氧野尻霉素。。
實施例5
（1）原料前處理：將300g干燥桑葉粉碎，80%以上過200目；
（2）提?。簆h為2的酸性乙醇提取桑葉加熱提取3次，提取的溫度在100℃，過濾得到1-脫氧野尻霉素提取液；
（3）純化：將步驟（2）得到的提取液濃縮至原提取液體積的1/10,然后通過堿性氧化鋁柱，用10倍柱體積的20%稀醇洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥得到粉末；
（4）重結(jié)晶：將步驟（3）取20ml丙酮使粉末溶解其中，降溫至0℃，結(jié)晶后低溫過濾，反復(fù)析晶三次，得到純度87.1%的1-脫氧野尻霉素。
實施例6
（1）原料前處理：將300g干燥桑葉粉碎，80%以上過200目；
（2）提取：ph為2的酸性乙醇4l提取桑葉加熱提取3次，提取的溫度在75℃，過濾得到1-脫氧野尻霉素提取液；
（3）純化：將步驟（2）得到的提取液濃縮至原提取液體積的1/10,然后通過堿性氧化鋁柱，用8倍柱體積的20%稀醇洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥得到粉末；
（4）重結(jié)晶：將步驟（3）取20ml丙酮使粉末溶解其中，降溫至0℃，結(jié)晶后低溫過濾，反復(fù)析晶三次，得到純度88.2%的1-脫氧野尻霉素。。
實施例7
（1）原料前處理：將300g干燥桑葉粉碎，80%以上過200目；
（2）提?。簆h為2的酸性乙醇3l提取桑葉加熱提取3次，提取的溫度在75℃，過濾得到1-脫氧野尻霉素提取液；
（3）純化：將步驟（2）得到的提取液濃縮至原提取液體積的1/10,然后通過堿性氧化鋁柱，用8倍柱體積的30%稀醇洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥得到粉末；
（4）重結(jié)晶：將步驟（3）取20ml丙酮使粉末溶解其中，降溫至-5℃，結(jié)晶后低溫過濾，反復(fù)析晶三次，得到純度86.7%的1-脫氧野尻霉素。。
實施例8
（1）原料前處理：將300g干燥桑葉粉碎，80%以上過200目；
（2）提?。簆h為3的酸性乙醇3l提取桑葉加熱提取3次，提取的溫度在75℃，過濾得到1-脫氧野尻霉素提取液；
（3）純化：將步驟（2）得到的提取液濃縮至原提取液體積的1/5,然后通過堿性氧化鋁柱，用10倍柱體積的20%稀醇洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥得到粉末；
（4）重結(jié)晶：將步驟（3）取20ml丙酮使粉末溶解其中，降溫至0℃，結(jié)晶后低溫過濾，反復(fù)析晶三次，得到純度87.2%的1-脫氧野尻霉素。
實施例9
（1）原料前處理：將300g干燥桑葉粉碎，80%以上過200目；
（2）提?。簆h為1的酸性乙醇3000ml提取桑葉加熱提取3次，提取的溫度在75℃，過濾得到1-脫氧野尻霉素提取液；
（3）純化：將步驟（2）得到的提取液濃縮至原提取液體積的1/10,然后通過堿性氧化鋁柱，用8倍柱體積的30%稀醇洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥得到粉末；
（4）重結(jié)晶：將步驟（3）取20ml丙酮使粉末溶解其中，降溫至0℃，結(jié)晶后低溫過濾，反復(fù)析晶三次,得到純度88.2%的1-脫氧野尻霉素。
實施例10
（1）原料前處理：將300g干燥桑葉粉碎，80%以上過150目；
（2）提?。簆h為2的酸性乙醇3000ml提取桑葉加熱提取2次，提取的溫度在100℃，過濾得到1-脫氧野尻霉素提取液；
（3）純化：將步驟（2）得到的提取液濃縮至原提取液體積的1/10,然后通過堿性氧化鋁柱，用8倍柱體積的20%稀醇洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥得到粉末；
（4）重結(jié)晶：將步驟（3）取20ml丙酮使粉末溶解其中，降溫至0℃，結(jié)晶后低溫過濾，反復(fù)析晶三次,得到純度86.6%的1-脫氧野尻霉素。
實施例11
（1）原料前處理：將300g干燥桑葉粉碎，80%以上過250目；
（2）提?。簆h為2的酸性乙醇3000ml提取桑葉加熱提取3次，提取的溫度在100℃，過濾得到1-脫氧野尻霉素提取液；
（3）純化：將步驟（2）得到的提取液濃縮至原提取液體積的1/10,然后通過堿性氧化鋁柱，用8倍柱體積的20%稀醇洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥得到粉末；
（4）重結(jié)晶：將步驟（3）取20ml丙酮使粉末溶解其中，降溫至0℃，結(jié)晶后低溫過濾，反復(fù)析晶三次,得到純度90.3%的1-脫氧野尻霉素。
實施例12
（1）原料前處理：將300g干燥桑葉粉碎，80%以上過200目；
（2）提取：ph為2的酸性乙醇3000ml提取桑葉加熱提取3次，提取的溫度在50℃，過濾得到1-脫氧野尻霉素提取液；
（3）純化：將步驟（2）得到的提取液濃縮至原提取液體積的1/10,然后通過堿性氧化鋁柱，用8倍柱體積的20%稀醇洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥得到粉末；
（4）重結(jié)晶：將步驟（3）取20ml丙酮使粉末溶解其中，降溫至0℃，結(jié)晶后低溫過濾，得到純度86.5%的1-脫氧野尻霉素。