一種能改善卷煙抽吸效果的異黃酮類化合物及其制備方法與應(yīng)用與流程

本發(fā)明屬于植物化學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種從中藥材葛根中首次提取得到的異黃酮類化合物及其制備方法和應(yīng)用。該化合物可作為卷煙嘴棒添加劑用于改善卷煙抽吸效果中。
背景技術(shù)：
：葛根為豆科植物野葛的干燥根，習(xí)稱野葛。秋、冬二季采挖，趁鮮切成厚片或小塊；干燥。甘、辛，涼。有解肌退熱，透疹，生津止渴，升陽止瀉之功。常用于表證發(fā)熱，項背強痛，麻疹不透，熱病口渴，陰虛消渴，熱瀉熱痢，脾虛泄瀉。同時葛根也是一種重要的保健食品，其藥用價值極高，素有“亞洲人參”之美譽，葛粉稱之為“長壽粉”，在日本被譽為“皇室特供食品”。葛根中的主要化學(xué)成分為黃酮和異黃酮類化合物(大豆素、大豆甙、葛根素、葛根素-7-木糖甙等)，也含有萜類、內(nèi)酯、甾醇等其它結(jié)構(gòu)類型的化合物。異黃酮是黃酮類化合物中的一種，它是植物苯丙氨酸代謝過程中，由肉桂酰輔酶a側(cè)鏈延長后環(huán)化形成以苯色酮環(huán)為基礎(chǔ)的酚類化合物，其3-苯基衍生物即為異黃酮類化合物。異黃酮類化合物突出的生理活性引起了科技工作者的廣泛關(guān)注。研究表明葛根異黃酮具有補充女性雌激素、收縮平滑肌、增加冠血流量、抑制血小板凝集、降血糖等作用；異黃酮還具有抗氧化、抗腫瘤、預(yù)防動脈硬化、改善骨質(zhì)疏松等其他多種功效。此外，異黃酮類化合物還有改善人味覺效果的功能，在食品工業(yè)中也有廣泛的應(yīng)用。本發(fā)明從葛根中分離得到了一種異黃酮類化合物，該化合物添加到卷煙過濾嘴中，能顯著降低卷煙抽吸喉部刺激性，具有明顯的潤喉功效。本發(fā)明化合物添加到卷煙濾嘴中，能明顯改善卷煙抽吸舒適性。和對照相比較，卷煙抽吸的潤感有提升、生津作用明顯，抽吸的喉部舒適性得到明顯改善，目前尚未發(fā)現(xiàn)相關(guān)報道。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的第一目的在于提供一種異黃酮類化合物；第二目的在于提供所述異黃酮類化合物的制備方法；第三目的在于提供所述異黃酮類化合物作為改善卷煙抽吸舒適性添加劑的應(yīng)用，添加本發(fā)明化合物后，卷煙抽吸的潤感有提升、生津作用明顯，抽吸喉部舒適性得到明顯改善。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：本發(fā)明的第一目的是這樣實現(xiàn)的，所述的異黃酮類化合物是從傳統(tǒng)中藥材葛根中分離得到，其分子式為c19h16o5，其結(jié)構(gòu)式如式(i)所示：該化合物為淺黃色膠狀物，命名為：7-乙酰基-4′,6-二甲氧基-異黃酮，英文名為：7-acetyl-4′,6-dimethoxy-isoflavone。本發(fā)明的第二目的是這樣實現(xiàn)的，所述異黃酮類化合物的制備方法，以葛根為原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶劑萃取、mci脫色、硅膠柱層析和高效液相色譜分離步驟制得，具體為：a、浸膏提?。簩⒏鸶鬯榈?0～40目，用溶劑超聲提取2～5次，每次所用提取溶劑的質(zhì)量為葛根質(zhì)量的2～4倍，每次30～60分鐘，合并提取液并過濾，濾液減壓濃縮至肉眼觀察到剛有沉淀析出，靜置3～5h，濾除沉淀物，之后將所得濾液濃縮成浸膏a；b、有機溶劑萃?。合蚪郺中加入重量是浸膏a重量1～2倍的水，然后用有機溶劑萃取3～5次，每次所用有機溶劑的體積與水體積的相同，合并有機溶劑萃取相，之后將合并得到的有機溶劑萃取相減壓濃縮成浸膏b；c、mci脫色：向浸膏b中加入是浸膏b重量3～5倍的純甲醇，待浸膏b完全溶解后，上mci柱，用體積濃度為90～95％甲醇水溶液進(jìn)行洗脫，合并洗脫液，之后將合并后的洗脫液減壓濃縮成浸膏c；d、硅膠柱層析：將浸膏c上硅膠柱層析，裝柱硅膠為160～200目，所用硅膠的重量為浸膏c重量6～10倍量；以體積比為1:0～0:1的氯仿和丙酮混合有機溶劑梯度洗脫，收集各梯度的梯度洗脫液并濃縮，經(jīng)tlc監(jiān)測，合并相同的部分；每個梯度洗脫到tlc點板無點后(即該梯度洗脫不出物質(zhì)后)，更換下一梯度洗脫；e、高效液相色譜分離：將采用體積比為7:3的氯仿-丙酮混合有機溶劑洗脫得到部分采用高效液相色譜分離純化，即得所述的異黃酮類化合物。進(jìn)一步，優(yōu)選的是，所述a步驟的溶劑為體積濃度為70～100％的丙酮水溶液、體積濃度為90～100％的乙醇水溶液或體積濃度為90～100％的甲醇水溶液。進(jìn)一步，優(yōu)選的是，所述b步驟的有機溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚或石油醚。進(jìn)一步，優(yōu)選的是，所述d步驟中浸膏c在經(jīng)硅膠柱層析前，先用重量是浸膏c1.5～3倍的丙酮或者甲醇溶解，然后用重量是浸膏c0.8～1.2倍的80～100目硅膠拌樣，之后上樣。進(jìn)一步，優(yōu)選的是，所述d步驟中，梯度洗脫時，所使用的氯仿和丙酮混合有機溶劑的體積比依次為20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1；每個梯度洗脫到tlc點板無點后，更換下一梯度洗脫。進(jìn)一步，優(yōu)選的是，所述e步驟的高效液相色譜分離純化是以體積濃度為50％的甲醇水溶液為流動相，流速15～25ml/min，以21.2×250mm，5μm的zorbaxprephtgf反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為358nm，每次進(jìn)樣10～100μl，收集39.2min的色譜峰，多次累加后蒸干。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該知曉本技術(shù)方案只是一個優(yōu)選技術(shù)方案，高效液相色譜分離純化采用的流動相不限于此。以上述方法制備得到的異黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)通過以下方法進(jìn)行測定：本發(fā)明化合物為黃色膠狀物；hresi-ms顯示其準(zhǔn)分子離子峰為347.0890[m+na]+(計算值347.0895)，結(jié)合1hnmr和dept譜確定其分子式為c19h16o5，不飽和度為12。紅外光譜中顯示了羰基(1715和1656cm-1)和芳環(huán)(1610、1519和1436cm-1)的共振吸收峰。而紫外光譜在210、256、312和358nm有最大吸收也說明了化合物中可能存在芳環(huán)結(jié)構(gòu)。化合物的1h和13cnmr譜(如表1、圖1和圖2)顯示其含有19個碳和16個氫，包括1個異黃酮骨架(c-1～c-10和c-1′～c-6′，h-5、h-8、h-2′,6′和h-2′,6′)，二個甲氧基(δc55.9q和56.3q，δh3.82s和3.85s)和一個乙?；?δc198.6s和29.7q，δh2.53s)?；衔锏漠慄S酮骨架可進(jìn)一步由h-5和c-4、c-6、c-7、c-9、c-10，h-8和c-1″、c-6、c-7、c-9、c-10，h-2和c-1′、c-3、c-4、c-9，以及h-2′,6′和c-3的hmbc相關(guān)得到確認(rèn)。進(jìn)一步分析其hmbc相關(guān)譜(如圖3)，根據(jù)兩個甲氧基氫(δh3.82，3.85)與c-6(δc155.0)和c-4′(δc160.3)的hmbc相關(guān)可推測兩個甲氧基取代在異黃酮母核的c-6和c-4′位。乙?；〈赾-7位可由h-2″(δh2.53)與c-7(δc125.9)，以及h-8(δh7.48)與c-1″(δc198.6)的hmbc相關(guān)得到確定。苯環(huán)上典型的質(zhì)子信號h-5(δh7.32)、h-8(δh7.48)、h-2,6[δh7.88(d,j＝8.8)]和h-3,5[(δh6.81(d,j＝8.8)]也支持異黃酮母核上的上述取代基模式。至此，化合物的結(jié)構(gòu)得到確定，并命名為化合物命名為：7-乙酰基-4′,6-二甲氧基-異黃酮?；衔锏募t外、紫外和質(zhì)譜數(shù)據(jù)：uv(甲醇)，λmax(logε)358(3.62)、312(3.09)、256(3.97)、210(4.32)nm；ir(溴化鉀壓片)：νmax3087、2926、1715、1656、1610、1562、1519、1436、1368、1269、1142、1065、908、820cm-1；1h和13cnmr數(shù)據(jù)(500和125mhz，(c5d5n)，見表1；正離子模式esimsm/z347[m+na]+；正離子模式hresimsm/z347.0890[m+na]+(計算值c19h16o5，347.0895)。表1.本發(fā)明化合物的1hnmr和13cnmr數(shù)據(jù)(c5d5n)no.δcδhno.δcδh2152.7d7.83s1′124.2s3122.5s2′6′129.3d7.88(d)8.84175.8s3′5′115.1d6.81(d)8.85115.1d7.32s4′160.3s6155.0s1″198.6s7125.9s2″29.7q2.53s8118.1d7.48some-4′55.9q3.82s9151.0some-656.3q3.85s10130.2s本發(fā)明的第三目的是這樣實現(xiàn)的：所述的異黃酮類化合物作為制備卷煙濾嘴添加劑的應(yīng)用?？紤]到三醋酸甘油酯為卷煙濾嘴成型最常用的增塑劑，而且本發(fā)明化合物溶于三醋酸甘油酯，在卷煙濾嘴成型過程中，本發(fā)明化合物通過三醋酸甘油酯添加到過濾嘴中。用三醋酸甘油酯將上述異黃酮化合物用配成0.1mg/ml的溶液。按濾嘴絲束重量的8％均勻的噴灑到濾嘴絲束上，制成濾棒，然后將該濾棒通過常規(guī)的卷煙卷接制成卷煙。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果為：本發(fā)明異黃酮類化合物是首次被分離出來的，通過核磁共振和質(zhì)譜測定方法確定為異黃酮類化合物，并表征了其結(jié)構(gòu)。本發(fā)明化合物通過三醋酸甘油酯添加到卷煙過濾嘴中，以未添加該化合物的相同卷煙作為對照，進(jìn)行感官評析。評析結(jié)果表明：和對照相比較，添加本發(fā)明化合物能降低卷煙抽吸喉部刺激性，具有明顯改善卷煙抽吸品質(zhì)效果。本發(fā)明化合物添加到卷煙濾嘴中，工藝上容易實現(xiàn)，不增加生產(chǎn)過程中的額外步驟，可明顯提升卷煙抽吸品質(zhì)。而且本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)簡單，從天然植物中容易提取，通過人工合成在工藝上也容易實現(xiàn)，生產(chǎn)成本低，卷煙添加效果好，具有良好的應(yīng)用前景。附圖說明圖1為本發(fā)明異黃酮類化合物的核磁共振碳譜(13cnmr)；圖2為本發(fā)明異黃酮類化合物的核磁共振氫譜(1hnmr)；圖3本發(fā)明異黃酮類化合物的關(guān)鍵hmbc相關(guān)圖。具體實施方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。本發(fā)明所采用的葛根全部是普通市購干制品。本發(fā)明所述的異黃酮類化合物，是從傳統(tǒng)中藥材葛根中分離得到，其分子式為c19h16o5，其結(jié)構(gòu)式如式(i)所示：命名為：化合物命名為：7-乙?；?4′,6-二甲氧基-異黃酮，英文名為：7-acetyl-4′,6-dimethoxy-isoflavone。本發(fā)明所述異黃酮類化合物的制備方法，以葛根為原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶劑萃取、mci脫色、硅膠柱層析和高效液相色譜分離步驟制得，具體為：a、浸膏提?。簩⒏鸶鬯榈?0～40目，用溶劑超聲提取2～5次，每次所用提取溶劑的質(zhì)量為葛根質(zhì)量的2～4倍，每次30～60分鐘，合并提取液并過濾，濾液減壓濃縮至肉眼觀察到剛有沉淀析出，靜置3～5h，濾除沉淀物，之后將所得濾液濃縮成浸膏a；b、有機溶劑萃取：向浸膏a中加入重量是浸膏a重量1～2倍的水，然后用有機溶劑萃取3～5次，每次所用有機溶劑的體積與水體積的相同，合并有機溶劑萃取相，之后將合并得到的有機溶劑萃取相減壓濃縮成浸膏b；c、mci脫色：向浸膏b中加入是浸膏b重量3～5倍的純甲醇，待浸膏b完全溶解后，上mci柱，用體積濃度為90～95％甲醇水溶液進(jìn)行洗脫，合并洗脫液，之后將合并后的洗脫液減壓濃縮成浸膏c；d、硅膠柱層析：將浸膏c上硅膠柱層析，裝柱硅膠為160～200目，所用硅膠的重量為浸膏c重量6～10倍量；以體積比為1:0～0:1的氯仿和丙酮混合有機溶劑梯度洗脫，收集各梯度的梯度洗脫液并濃縮，經(jīng)tlc監(jiān)測，合并相同的部分；每個梯度洗脫到tlc點板無點后(即該梯度洗脫不出物質(zhì)后)，更換下一梯度洗脫；e、高效液相色譜分離：將采用體積比為7:3的氯仿-丙酮混合有機溶劑洗脫得到部分采用高效液相色譜分離純化，即得所述的異黃酮類化合物。所述a步驟的溶劑為體積濃度為70～100％的丙酮水溶液、體積濃度為90～100％的乙醇水溶液或體積濃度為90～100％的甲醇水溶液。所述b步驟的有機溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚或石油醚。所述d步驟中浸膏c在經(jīng)硅膠柱層析前，先用重量是浸膏c1.5～3倍的丙酮或者甲醇溶解，然后用重量是浸膏c0.8～1.2倍的80～100目硅膠拌樣，之后上樣。所述d步驟中，梯度洗脫時，所使用的氯仿和丙酮混合有機溶劑的體積比依次為20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1；每個梯度洗脫到tlc點板無點后，更換下一梯度洗脫。所述e步驟的高效液相色譜分離純化是以體積濃度為50％的甲醇水溶液為流動相，流速15～25ml/min，以21.2×250mm，5μm的zorbaxprephtgf反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為358nm，每次進(jìn)樣10～100μl，收集39.2min的色譜峰，多次累加后蒸干。實施例1a、浸膏提?。簩⒏鸶鬯榈?0目，用溶劑超聲提取2次，每次所用提取溶劑的質(zhì)量為葛根質(zhì)量的2倍，每次30分鐘，合并提取液并過濾，濾液減壓濃縮至肉眼觀察到剛有沉淀析出，靜置3h，濾除沉淀物，之后將所得濾液濃縮成浸膏a；b、有機溶劑萃?。合蚪郺中加入重量是浸膏a重量1倍的水，然后用有機溶劑萃取3次，每次所用有機溶劑的體積與水體積的相同，合并有機溶劑萃取相，之后將合并得到的有機溶劑萃取相減壓濃縮成浸膏b；c、mci脫色：向浸膏b中加入是浸膏b重量3倍的純甲醇，待浸膏b完全溶解后，上mci柱，用體積濃度為90％甲醇水溶液進(jìn)行洗脫，合并洗脫液，之后將合并后的洗脫液減壓濃縮成浸膏c；d、硅膠柱層析：浸膏c先用重量是浸膏c1.5倍的丙酮溶解，然后用重量是浸膏c0.8倍的80目硅膠拌樣，之后上樣進(jìn)行柱層析，其中，裝柱硅膠為160目，所用硅膠的重量為浸膏c重量6倍量；以體積比依次為20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1的氯仿和丙酮混合有機溶劑梯度洗脫，收集各梯度的梯度洗脫液并濃縮，經(jīng)tlc監(jiān)測，合并相同的部分；每個梯度洗脫到tlc點板無點后(即該梯度洗脫不出物質(zhì)后)，更換下一梯度洗脫；e、高效液相色譜分離：將采用體積比為7:3的氯仿-丙酮混合有機溶劑洗脫得到部分采用高效液相色譜分離純化，高效液相色譜分離純化的具體方法是：以體積濃度為50％的甲醇水溶液為流動相，流速15ml/min，以21.2×250mm，5μm的zorbaxprephtgf反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為358nm，每次進(jìn)樣10μl，收集39.2min的色譜峰，多次累加后蒸干，即得所述的異黃酮類化合物。其中，所述a步驟的溶劑為體積濃度為80％的丙酮水溶液。所述b步驟的有機溶劑為二氯甲烷。實施例2a、浸膏提?。簩⒏鸶鬯榈?0目，用溶劑超聲提取5次，每次所用提取溶劑的質(zhì)量為葛根質(zhì)量的4倍，每次60分鐘，合并提取液并過濾，濾液減壓濃縮至肉眼觀察到剛有沉淀析出，靜置5h，濾除沉淀物，之后將所得濾液濃縮成浸膏a；b、有機溶劑萃?。合蚪郺中加入重量是浸膏a重量2倍的水，然后用有機溶劑萃取5次，每次所用有機溶劑的體積與水體積的相同，合并有機溶劑萃取相，之后將合并得到的有機溶劑萃取相減壓濃縮成浸膏b；c、mci脫色：向浸膏b中加入是浸膏b重量5倍的純甲醇，待浸膏b完全溶解后，上mci柱，用體積濃度為95％甲醇水溶液進(jìn)行洗脫，合并洗脫液，之后將合并后的洗脫液減壓濃縮成浸膏c；d、硅膠柱層析：浸膏c先用重量是浸膏c3倍的甲醇溶解，然后用重量是浸膏c.2倍的100目硅膠拌樣，之后上樣進(jìn)行柱層析，其中，裝柱硅膠為200目，所用硅膠的重量為浸膏c重量10倍量；以體積比依次為20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1的氯仿和丙酮混合有機溶劑梯度洗脫，收集各梯度的梯度洗脫液并濃縮，經(jīng)tlc監(jiān)測，合并相同的部分；每個梯度洗脫到tlc點板無點后(即該梯度洗脫不出物質(zhì)后)，更換下一梯度洗脫；e、高效液相色譜分離：將采用體積比為7:3的氯仿-丙酮混合有機溶劑洗脫得到部分采用高效液相色譜分離純化，高效液相色譜分離純化的具體方法是：以體積濃度為50％的甲醇水溶液為流動相，流速125ml/min，以21.2×250mm，5μm的zorbaxprephtgf反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為358nm，每次進(jìn)樣100μl，收集39.2min的色譜峰，多次累加后蒸干，即得所述的異黃酮類化合物。其中，所述a步驟的溶劑為丙酮。所述b步驟的有機溶劑為乙醚。實施例3a、浸膏提?。簩⒏鸶鬯榈?0目，用溶劑超聲提取3次，每次所用提取溶劑的質(zhì)量為葛根質(zhì)量的3倍，每次40分鐘，合并提取液并過濾，濾液減壓濃縮至肉眼觀察到剛有沉淀析出，靜置4h，濾除沉淀物，之后將所得濾液濃縮成浸膏a；b、有機溶劑萃取：向浸膏a中加入重量是浸膏a重量1.5倍的水，然后用有機溶劑萃取4次，每次所用有機溶劑的體積與水體積的相同，合并有機溶劑萃取相，之后將合并得到的有機溶劑萃取相減壓濃縮成浸膏b；c、mci脫色：向浸膏b中加入是浸膏b重量4倍的純甲醇，待浸膏b完全溶解后，上mci柱，用體積濃度為92％甲醇水溶液進(jìn)行洗脫，合并洗脫液，之后將合并后的洗脫液減壓濃縮成浸膏c；d、硅膠柱層析：浸膏c先用重量是浸膏c2倍的丙酮溶解，然后用重量是浸膏c1倍的90目硅膠拌樣，之后上樣進(jìn)行柱層析，其中，裝柱硅膠為180目，所用硅膠的重量為浸膏c重量8倍量；以體積比依次為20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1的氯仿和丙酮混合有機溶劑梯度洗脫，收集各梯度的梯度洗脫液并濃縮，經(jīng)tlc監(jiān)測，合并相同的部分；每個梯度洗脫到tlc點板無點后(即該梯度洗脫不出物質(zhì)后)，更換下一梯度洗脫；e、高效液相色譜分離：將采用體積比為7:3的氯仿-丙酮混合有機溶劑洗脫得到部分采用高效液相色譜分離純化，高效液相色譜分離純化的具體方法是：以體積濃度為50％的甲醇水溶液為流動相，流速22ml/min，以21.2×250mm，5μm的zorbaxprephtgf反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為358nm，每次進(jìn)樣60μl，收集39.2min的色譜峰，多次累加后蒸干，即得所述的異黃酮類化合物。其中，體積濃度為90％的乙醇水溶液；所述b步驟的有機溶劑為石油醚。實施例4a、浸膏提取：將4.4kg葛根粉碎到30目，用溶劑超聲提取4次，每次所用提取溶劑的質(zhì)量為葛根質(zhì)量的3倍，每次60分鐘，合并提取液并過濾，濾液減壓濃縮至肉眼觀察到剛有沉淀析出，靜置4h，濾除沉淀物，之后將所得濾液濃縮成浸膏a，浸膏a重量為120g；b、有機溶劑萃?。合蚪郺中加入重量是浸膏a重量2倍的水，然后用有機溶劑萃取5次，每次所用有機溶劑的體積與水體積的相同，合并有機溶劑萃取相，之后將合并得到的有機溶劑萃取相減壓濃縮成浸膏b，浸膏b重量為80g；c、mci脫色：向浸膏b中加入是浸膏b重量3倍的純甲醇，待浸膏b完全溶解后，上mci柱，用體積濃度為90％甲醇水溶液進(jìn)行洗脫，合并洗脫液，之后將合并后的洗脫液減壓濃縮成浸膏c，浸膏c重量為62g；d、硅膠柱層析：浸膏c先用重量120g的丙酮溶解，然后用重量為62g的100目硅膠拌樣，之后上樣進(jìn)行柱層析，其中，裝柱硅膠為200目，所用硅膠的重量為400g；以體積比依次為20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1的氯仿和丙酮混合有機溶劑梯度洗脫，收集各梯度的梯度洗脫液并濃縮，經(jīng)tlc監(jiān)測，合并相同的部分，得到6個部分a-f；每個梯度洗脫到tlc點板無點后(即該梯度洗脫不出物質(zhì)后)，更換下一梯度洗脫；e、高效液相色譜分離：將采用體積比為7:3的氯仿-丙酮混合有機溶劑洗脫得到部分(d部分12g)采用高效液相色譜分離純化，高效液相色譜分離純化的具體方法是：以體積濃度為50％的甲醇水溶液為流動相，流速20ml/min，以21.2×250mm，5μm的zorbaxprephtgf反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為358nm，每次進(jìn)樣50μl，收集39.2min的色譜峰，多次累加后蒸干，即得所述的異黃酮類化合物。其中，所述a步驟的溶劑為體積濃度為70％的丙酮水溶液。所述b步驟的有機溶劑為氯仿。實施例5a、浸膏提?。簩?0kg葛根粉碎到40目，用溶劑超聲提取4次，每次所用提取溶劑的質(zhì)量為葛根質(zhì)量的2.5倍，每次48分鐘，合并提取液并過濾，濾液減壓濃縮至肉眼觀察到剛有沉淀析出，靜置4.5h，濾除沉淀物，之后將所得濾液濃縮成浸膏a，浸膏a重量為300g；b、有機溶劑萃?。合蚪郺中加入重量為350g的水，然后用有機溶劑萃取5次，每次所用有機溶劑的體積與水體積的相同，合并有機溶劑萃取相，之后將合并得到的有機溶劑萃取相減壓濃縮成浸膏b，浸膏b重量為210g；c、mci脫色：向浸膏b中加入是浸膏b重量3.5倍的純甲醇，待浸膏b完全溶解后，上mci柱，用體積濃度為90％甲醇水溶液15l進(jìn)行洗脫，合并洗脫液，之后將合并后的洗脫液減壓濃縮成浸膏c，浸膏c重量為150g；d、硅膠柱層析：浸膏c先用重量是浸膏c2倍的丙酮溶解，然后用重量是浸膏c1倍的100目硅膠拌樣，之后上樣進(jìn)行柱層析，其中，裝柱硅膠為200目，所用硅膠的重量為浸1000g；以體積比依次為20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1的氯仿和丙酮混合有機溶劑梯度洗脫，收集各梯度的梯度洗脫液并濃縮，經(jīng)tlc監(jiān)測，合并相同的部分，得到6個部分a-f；每個梯度洗脫到tlc點板無點后(即該梯度洗脫不出物質(zhì)后)，更換下一梯度洗脫；e、高效液相色譜分離：將采用體積比為7:3的氯仿-丙酮混合有機溶劑洗脫得到部分(d部分32g)采用高效液相色譜分離純化，高效液相色譜分離純化的具體方法是：以體積濃度為50％的甲醇水溶液為流動相，流速20ml/min，以21.2×250mm，5μm的zorbaxprephtgf反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為358nm，每次進(jìn)樣80μl，收集39.2min的色譜峰，多次累加后蒸干，即得所述的異黃酮類化合物。所述a步驟的溶劑為甲醇。所述b步驟的有機溶劑為乙酸乙酯。實施例6將實施例1制備得到的異黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)通過以下方法進(jìn)行測定：本發(fā)明化合物為黃色膠狀物；hresi-ms顯示其準(zhǔn)分子離子峰為347.0890[m+na]+(計算值347.0895)，結(jié)合1hnmr和dept譜確定其分子式為c19h16o5，不飽和度為12。紅外光譜中顯示了羰基(1715和1656cm-1)和芳環(huán)(1610、1519和1436cm-1)的共振吸收峰。而紫外光譜在210、256、312和358nm有最大吸收也說明了化合物中可能存在芳環(huán)結(jié)構(gòu)。化合物的1h和13cnmr譜(如表1、圖1和圖2)顯示其含有19個碳和16個氫，包括1個異黃酮骨架(c-1～c-10和c-1′～c-6′，h-5、h-8、h-2′,6′和h-2′,6′)，二個甲氧基(δc55.9q和56.3q，δh3.82s和3.85s)和一個乙酰基(δc198.6s和29.7q，δh2.53s)。化合物的異黃酮骨架可進(jìn)一步由h-5和c-4、c-6、c-7、c-9、c-10，h-8和c-1″、c-6、c-7、c-9、c-10，h-2和c-1′、c-3、c-4、c-9，以及h-2′,6′和c-3的hmbc相關(guān)得到確認(rèn)。進(jìn)一步分析其hmbc相關(guān)譜(如圖3)，根據(jù)兩個甲氧基氫(δh3.82，3.85)與c-6(δc155.0)和c-4′(δc160.3)的hmbc相關(guān)可推測兩個甲氧基取代在異黃酮母核的c-6和c-4′位。乙?；〈赾-7位可由h-2″(δh2.53)與c-7(δc125.9)，以及h-8(δh7.48)與c-1″(δc198.6)的hmbc相關(guān)得到確定。苯環(huán)上典型的質(zhì)子信號h-5(δh7.32)、h-8(δh7.48)、h-2,6[δh7.88(d,j＝8.8)]和h-3,5[(δh6.81(d,j＝8.8)]也支持異黃酮母核上的上述取代基模式。至此，化合物的結(jié)構(gòu)得到確定，并命名為化合物命名為：7-乙酰基-4′,6-二甲氧基-異黃酮。實施例7取實施例2-5制備的化合物，為黃色膠狀物。測定方法與實施例6相同，確認(rèn)實施例2-5制備的化合物為所述異黃酮類化合物——7-乙?；?4′,6-二甲氧基-異黃酮。實施例8取實施例1-5中任一制備的異黃酮化合物進(jìn)行卷煙濾嘴的添加效果試驗，試驗情況如下：供添加用卷煙為紅云紅河集團(tuán)的卷煙“紫云”，用三醋酸甘油酯將上述異黃酮化合物用配成0.1mg/ml的溶液。按濾嘴絲束重量的8％均勻的噴灑到濾嘴絲束上，制成濾棒，然后將該濾棒通過常規(guī)的卷煙卷接制成卷煙，進(jìn)行感官評析，并以未添加該化合物的相同卷煙作為對照。評析結(jié)果表明：和對照相比較，卷煙抽吸的潤感有提升、生津作用明顯，卷煙抽吸舒適性得到明顯改善，結(jié)果見表2。實施例9取實施例1-5中任一制備的異黃酮化合物進(jìn)行卷煙濾嘴的添加效果試驗，供添加用卷煙為紅云紅河集團(tuán)的卷煙“紫云”，用三醋酸甘油酯將上述異黃酮化合物用配成0.2mg/ml的溶液。按濾嘴絲束重量的5％均勻的噴灑到濾嘴絲束上，制成濾棒，然后將該濾棒通過常規(guī)的卷煙卷接制成卷煙，進(jìn)行感官評析，并以未添加該化合物的相同卷煙作為對照。評析結(jié)果表明：和對照相比較，卷煙抽吸的潤感有提升、生津作用明顯，卷煙抽吸喉部舒適性得到明顯改善，結(jié)果見表2。表2卷煙感官舒適度評價注：分?jǐn)?shù)越高，產(chǎn)品感官質(zhì)量越好。本發(fā)明化合物應(yīng)用方法不限于此，還可添加至內(nèi)襯紙上等。以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其等效物界定。當(dāng)前第1頁12