本發(fā)明涉及制藥領(lǐng)域，更具體地，涉及低氧激活o6-芐基-2-硝基嘌呤衍生物及制法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
o6-烷基鳥嘌呤-dna烷基轉(zhuǎn)移酶(agt)是重要的dna修復(fù)酶，它能夠修復(fù)烷化劑類抗癌藥物引起的dna鳥嘌呤o6位烷化損傷，使腫瘤細(xì)胞對化療藥物產(chǎn)生耐藥性。為了降低agt介導(dǎo)的耐藥性，設(shè)計(jì)開發(fā)有效的agt抑制劑并將其與烷化劑類抗癌藥物聯(lián)合應(yīng)用于腫瘤化療，是增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性、提高化療效果的重要途徑。
目前已有多種合成的agt抑制劑，如o6-甲基鳥嘌呤、o6-芐基鳥嘌呤和o6-(4-溴噻吩基)鳥嘌呤，均表現(xiàn)出了良好的agt抑制活性；體外、體內(nèi)和臨床研究表明，這些agt抑制劑與亞硝基脲聯(lián)合用藥均顯著提高了亞硝基脲的抗腫瘤效果。dolan等將濃度為2.5μm的o6-芐基鳥嘌呤處理人結(jié)腸癌ht29細(xì)胞中的agt蛋白，結(jié)果表明，反應(yīng)10min后o6-芐基鳥嘌呤可導(dǎo)致90％以上的agt失活；如cn1861078a公開了一種人類agt蛋白小分子抑制劑，具體涉及一種o6-對氨甲基芐基鳥嘌呤，該抑制劑對人類agt蛋白的親和性、生物可獲得性、水溶性都比o6-芐基鳥嘌呤高，尤其生物活性高五倍，且在體液中存在時間較長，能不可逆地使人類agt蛋白失去活性。
臨床實(shí)驗(yàn)表明，o6-芐基鳥嘌呤能夠明顯增強(qiáng)1,3-二(2-氯乙基)-1-亞硝基脲對人腦膠質(zhì)瘤的抑制效果。然而，由于o6-芐基鳥嘌呤等現(xiàn)有的agt抑制劑均不具有腫瘤細(xì)胞靶向性，在與亞硝基脲的聯(lián)合用藥中，這些非靶向性的agt抑制劑也導(dǎo)致了亞硝基脲對正常細(xì)胞的毒性作用增強(qiáng)。研究表明，o6-芐基鳥嘌呤在抑制腫瘤細(xì)胞agt活性的同時，也大大降低了正常細(xì)胞中agt的活性，從而使得化療藥物的骨髓抑制毒性增強(qiáng)，最終導(dǎo)致化療失敗。由此可見，設(shè)計(jì)開發(fā)具有腫瘤細(xì)胞靶向性的新型agt抑制劑具有重要意義。
利用腫瘤組織中存在低氧區(qū)域的特征，設(shè)計(jì)開發(fā)具有低氧選擇性性的前體藥物，可使其特異性地在腫瘤低氧微環(huán)境下激活生成活性藥物，從而靶向性地發(fā)揮抗腫瘤作用。目前，腫瘤低氧前藥的應(yīng)用已成為實(shí)現(xiàn)腫瘤靶向治療、提高化療效果的重要途徑之一。因此，設(shè)計(jì)開發(fā)低氧激活的新型agt抑制劑，使其能夠特異性地作用于低氧環(huán)境下的腫瘤細(xì)胞并發(fā)揮agt抑制活性，對于提高腫瘤細(xì)胞對烷化劑類化療藥物的敏感性、保護(hù)正常細(xì)胞不受化療藥物損傷、實(shí)現(xiàn)高效低毒的化療策略具有重要意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了解決上述技術(shù)問題或者至少部分地解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種具有如通式(i)結(jié)構(gòu)所示的低氧激活agt蛋白抑制劑：
其中，r為含有伯胺、腫胺或季胺的取代基。
含有上述結(jié)構(gòu)的低氧激活agt蛋白抑制劑，也是一種低氧激活o6-芐基-2-硝基嘌呤衍生物，即低氧激活o6-芐基-2-硝基嘌呤衍生物，可以在低氧環(huán)境下靶向性地抑制實(shí)體瘤中agt的活性，提高腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性。其中，低氧環(huán)境可以為氧濃度為1～5μmol/l下。
在本發(fā)明一個優(yōu)選實(shí)施方式中，r＝nh2，或r＝(ch2)nnh2，或r＝nhcoch3，或r＝(ch2)nnhcoch3，或r＝n(ch3)2，或r＝(ch2)nn(ch3)2，其中，n為正整數(shù)，優(yōu)選地，n為1、2或3。
進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明的低氧激活agt蛋白抑制劑選自如下結(jié)構(gòu)化合物中的一種：
本發(fā)明的另一個方面，還提供了制備上述低氧激活agt蛋白抑制劑的方法，該方法的反應(yīng)歷程如下：
其中，r2＝boc或ch2coco(ch3)3。
制備方法具體包括以下步驟：
1)將化合物c溶于n,n-二甲基甲酰胺中，向反應(yīng)液中加入1-甲基吡咯烷，攪拌反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，加入乙醚重結(jié)晶，得到化合物d；
2)將化合物b溶于n,n-二甲基甲酰胺中，依次加入叔丁醇鉀和步驟1)得到的化合物d，惰性氣體保護(hù)攪拌反應(yīng)，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，加入乙酸中止反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，加入乙酸乙酯和飽和氯化銨按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析法分離純化，得到化合物e；
3)將步驟2)得到的化合物e溶于溶劑中，加入保護(hù)劑攪拌反應(yīng)，薄層色譜監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾，得到粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析法分離純化，得到化合物f，其中，所述保護(hù)劑為二碳酸二叔丁酯或特戊酸氯甲酯；
4)將步驟3)得到的化合物f溶于二氯甲烷中，加入四丁基硝酸銨，冰浴條件下逐滴加入三氟乙酸酐，薄層色譜監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，加入乙醚和飽和碳酸氫鈉按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，加入冰甲醇重結(jié)晶，得到化合物g；
5)將步驟4)得到的化合物g溶于溶劑中，加入去保護(hù)劑反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾，純化，得到所述低氧激活agt蛋白抑制劑；所述去保護(hù)劑為哌啶或碳酸鉀。
在本發(fā)明一個優(yōu)選實(shí)施方式中，當(dāng)r為＝nh2，或r＝(ch2)nnh2(其中，n為正整數(shù)，優(yōu)選為1、2或3)時，為了使制備工藝更易實(shí)現(xiàn)，化合物b、e、f、g的結(jié)構(gòu)式分別如下：
其中，化合物b的合成反應(yīng)歷程如下：
化合物b的具體合成步驟如下：
將化合物a溶于溶劑中，向反應(yīng)液中加入三乙胺，冰浴條件下逐滴加入保護(hù)劑，攪拌反應(yīng)，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，加入乙酸中止反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，加入乙酸乙酯和飽和氯化銨按照體積比為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析法分離純化，得到化合物b。
在化合物b的合成步驟中：
當(dāng)保護(hù)劑為三氟乙酸酐時，溶劑為n,n-二甲基甲酰胺：
所述三乙胺、三氟乙酸酐和化合物a的摩爾比為1:1:1-1:1:3，優(yōu)先1:1:1-1:1:2；
反應(yīng)時間為2-6h，優(yōu)選3-5h
反應(yīng)溫度控制在0-35℃，優(yōu)選20-35℃；
減壓蒸餾溫度為30-50℃，優(yōu)選30-40℃；
硅膠柱層析所用的洗脫劑為石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脫，石油醚/乙酸乙酯體積比為1:1-1:2。
當(dāng)保護(hù)劑為三氟乙酸乙酯時，溶劑為無水甲醇：
所述三乙胺、三氟乙酸乙酯和化合物a1或化合物a2的摩爾比為1:1:1-1:1:2，優(yōu)選1:1:1-2:2:3；
反應(yīng)時間為2-4h，優(yōu)選2-3h；
反應(yīng)溫度控制在25-35℃，優(yōu)選30-35℃
減壓蒸餾溫度為25-40℃，優(yōu)選30-40℃；
硅膠柱層析所用的洗脫劑為石油醚和乙酸乙酯，采用等度洗脫，石油醚/乙酸乙酯體積比為1:1。
在本發(fā)明一個優(yōu)選實(shí)施方式中，步驟1)中：
化合物c、1-甲基吡咯烷的摩爾比為1:1-1:4，優(yōu)先1:1-1:3；
反應(yīng)時間為16-20h，優(yōu)選18-19h
反應(yīng)溫度控制在20-35℃，優(yōu)選25-35℃。
在本發(fā)明一個優(yōu)選實(shí)施方式中，步驟2)中：
化合物b、化合物d、叔丁醇鉀的摩爾比為2:1:3-3:1:6，優(yōu)選2:1:3-3:1:5；
所選惰性保護(hù)氣體為氮?dú)饣驓鍤?，?yōu)選氬氣；
反應(yīng)時間為2-8h，優(yōu)選4-6h；
減壓蒸餾溫度為30-40℃，優(yōu)選35-40℃；
硅膠柱層析所用的洗脫劑為甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脫，甲醇/二氯甲烷體積比為1:50-1:10。
在本發(fā)明一個優(yōu)選實(shí)施方式中，步驟3)中：
當(dāng)保護(hù)劑為二碳酸二叔丁酯時，溶劑為二氯甲烷，且在加入保護(hù)劑后再向反應(yīng)體系中加入4-二甲氨基吡啶，攪拌反應(yīng)：
所述化合物e、4-二甲氨基吡啶、二碳酸二叔丁酯的摩爾比為10:1:12-13:1:17，優(yōu)選10:1:13-12:1:16；
反應(yīng)時間為10-18h，優(yōu)選14-18h；
減壓蒸餾溫度為25-40℃，優(yōu)選30-40℃；
硅膠柱層析所用的洗脫劑為石油醚和乙酸乙酯，采用等度洗脫，石油醚/乙酸乙酯體積比為1:1。
當(dāng)保護(hù)劑為特戊酸氯甲酯時，溶劑為n,n-二甲基甲酰胺，且在冰浴條件下先加入氫化鈉反應(yīng)，再加入保護(hù)劑：
所述化合物e、氫化鈉和特戊酸氯甲酯的摩爾比為1:1:2-1:3:3，優(yōu)選1:1-2:2-3；
反應(yīng)時間為1-3h，優(yōu)選1-2h；
反應(yīng)溫度控制在0-35℃，優(yōu)選0-30℃。
減壓蒸餾溫度為30-40℃，優(yōu)選35-40℃；
硅膠柱層析所用的洗脫劑為石油醚和乙酸乙酯，采用等度洗脫，石油醚/乙酸乙酯體積比為1:1。
在本發(fā)明一個優(yōu)選實(shí)施方式中，步驟4)中：
化合物f、四丁基硝酸銨和三氟乙酸酐的摩爾比為1:1:1-1:3:3，優(yōu)選1:1-2:1-2；
反應(yīng)時間為1-3h，優(yōu)選1-2h；
反應(yīng)溫度控制在0-5℃；
減壓蒸餾溫度為25-29℃，優(yōu)選26-28℃。
在本發(fā)明一個優(yōu)選實(shí)施方式中，步驟5)中：
當(dāng)去保護(hù)劑為哌啶時，溶劑為二氯甲烷，使用乙酸乙酯重結(jié)晶來純化：
化合物g和哌啶的摩爾比為1:1-1:5，優(yōu)選1:1-1:2；
反應(yīng)時間為12-19h，優(yōu)選16-18h；
反應(yīng)溫度控制在25-40℃，優(yōu)選35-40℃。
當(dāng)去保護(hù)劑為碳酸鉀時，溶劑為甲醇與水，使用硅膠柱層析法分離純化：
化合物g、碳酸鉀的摩爾比為1:3-6，優(yōu)選1:4-6；
反應(yīng)時間為2-4h，優(yōu)選2-3h；
反應(yīng)溫度控制在60-80℃，優(yōu)選65-70℃；
減壓蒸餾溫度為35-50℃，優(yōu)選35-40℃；
硅膠柱層析所用的洗脫劑為甲醇、二氯甲烷和三乙胺，采用等度洗脫，甲醇/二氯甲烷/三乙胺的體積為1:5:0.05。
當(dāng)化合物為6種最優(yōu)選化合物時，其反應(yīng)歷程優(yōu)選如下：
化合物1-6的具體合成步驟如下：
化合物b1或b2的反應(yīng)歷程如下：
化合物b1或b2的制備方法為：
將化合物a1或化合物a2溶于n,n-二甲基甲酰胺中，向反應(yīng)液中加入三乙胺，冰浴條件下逐滴加入三氟乙酸酐?；蛘邔⒒衔颽1或化合物a2溶于無水甲醇中，向反應(yīng)液中加入三乙胺，冰浴條件下逐滴加入三氟乙酸乙酯，攪拌反應(yīng)，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，加入乙酸中止反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙酸乙酯和飽和氯化銨按照體積比為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析法分離純化，得到化合物b1或化合物b2；
1)將化合物c溶于n,n-二甲基甲酰胺中，向反應(yīng)液中加入1-甲基吡咯烷，攪拌過夜反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙醚重結(jié)晶，得到化合物d；
2)將化合物b1、b2、b3、b4、b5或b6溶于n,n-二甲基甲酰胺中，依次加入叔丁醇鉀和步驟1)所得的化合物d，惰性氣體保護(hù)攪拌反應(yīng)，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，加入乙酸中止反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙酸乙酯和飽和氯化銨按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析法分離純化，得到化合物e1、e2、e3、e4、e5或e6；
3)將步驟2)所得的化合物e1、e2、e3、e4、e5或e6溶于二氯甲烷中，依次加入二碳酸二叔丁酯和4-二甲氨基吡啶攪拌反應(yīng)?；蛘邔⒉襟E3)所得的化合物e1、e2、e3、e4、e5或e6溶于n,n-二甲基甲酰胺中，冰浴條件下加入氫化鈉反應(yīng)一段時間，隨后加入特戊酸氯甲酯攪拌反應(yīng)，薄層色譜監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾，得到粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析法分離純化，得到化合物f1、f2、f3、f4、f5或f6；
4)將步驟3)所得的化合物f1、f2、f3、f4、f5或f6溶于二氯甲烷中，加入四丁基硝酸銨，冰浴條件下逐滴加入三氟乙酸酐，薄層色譜監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，加入乙醚和飽和碳酸氫鈉按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，加入冰甲醇重結(jié)晶，得到化合物g1、g2、g3、g4、g5或g6；
5)將步驟4)所得的化合物g1、g2、g3、g4、g5或g6溶于二氯甲烷中，加入哌啶，攪拌反應(yīng)過夜，薄層色譜監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾，加入乙酸乙酯重結(jié)晶，得到化合物1、2、3、4、5或6?；蛘邔⒉襟E5)所得的化合物g1、g2、g3、g4、g5或g6溶于無水甲醇與水中，加入碳酸鉀，攪拌反應(yīng)，薄層色譜監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾，得到粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析法分離純化，得到化合物1、2、3、4、5或6。
本發(fā)明的另一方面，還提供了一種藥物組合物，包括：a)烷化劑類腫瘤化合物和b)含上述低氧激活agt蛋白抑制劑。
將本發(fā)明的低氧激活agt蛋白抑制劑與烷化劑類抗癌藥物聯(lián)合使用時，可明顯提高腫瘤細(xì)胞對抗癌藥物的敏感性。
其中，烷化劑類抗癌藥物優(yōu)選為ccnu洛莫司汀。
本發(fā)明還提供了上述低氧激活agt蛋白抑制劑或上述藥物組合物在制備制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
其中，腫瘤優(yōu)選為乳腺癌、腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)癌、結(jié)腸癌或肺癌。相關(guān)的腫瘤細(xì)胞優(yōu)選為小鼠乳腺癌細(xì)胞emt6、人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞u251、人神經(jīng)癌細(xì)胞sf268、人結(jié)腸癌細(xì)胞ht29、人乳腺癌細(xì)胞mcf-7或人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞nci-h460。
本發(fā)明提供的具有靶向且低氧激活的agt抑制劑具有以下優(yōu)點(diǎn)：
(一)本發(fā)明提供的式(i)化合物能夠選擇性的在低氧環(huán)境下被實(shí)體瘤細(xì)胞中的還原酶激活，該化合物中鳥嘌呤n2-位的硝基被還原為氨基，還原后的化合物為o6-芐基鳥嘌呤衍生物從而靶向性地抑制實(shí)體瘤中agt的活性，提高腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性；
(二)與現(xiàn)有的agt蛋白抑制劑相比，本發(fā)明提供的式(i)化合物具有較高的靶向性，并且式(i)化合物經(jīng)低氧還原的產(chǎn)物具有更高的agt抑制活性和水溶性；
(三)本發(fā)明中式(i)中的化合物進(jìn)行的體外抗腫瘤篩選試驗(yàn)表明，在低氧條件下式(i)中的化合物與ccnu聯(lián)合用藥作用于小鼠乳腺癌細(xì)胞emt6、人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞u251、人神經(jīng)癌細(xì)胞sf268、人結(jié)腸癌細(xì)胞ht29、人乳腺癌細(xì)胞mcf-7、人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞nci-h460等多種實(shí)體瘤細(xì)胞系均顯示出明顯的抑制作用；而在有氧條件下，式(i)中的化合物對上述腫瘤細(xì)胞的抑制作用并不明顯。因此，式(i)中的化合物具有良好的低氧激活特性和腫瘤細(xì)胞靶向性，與烷化劑類抗癌藥物聯(lián)合使用時，可明顯提高腫瘤細(xì)胞對抗癌藥物的敏感性，可用于惡性腫瘤的靶向聯(lián)合化療。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步詳細(xì)描述。以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)技術(shù)手段。若未特別指明，實(shí)施例中所用的試劑為市售。
以下實(shí)施例中涉及的化合物1、化合物2、化合物3、化合物4、化合物5、化合物6的結(jié)構(gòu)式參見發(fā)明內(nèi)容中相應(yīng)內(nèi)容。
實(shí)施例1：o6-(3-氨基芐基)-2-硝基嘌呤(化合物1)的合成
1)2,2,2-三氟-n-(3-(羥甲基)苯基)乙酰胺的合成
稱取3-氨基苯甲醇(369mg,3mmol)加入到25ml圓底燒瓶中，加入5ml四氫呋喃，向反應(yīng)液中加入三乙胺(484μl,3.5mmol)，于冰浴條件下逐滴滴入三氟乙酸酐(493μl,3.5mmol)，滴加應(yīng)持續(xù)30分鐘左右，滴加完畢后反應(yīng)體系緩慢升溫至室溫，攪拌反應(yīng)，用時約3小時。反應(yīng)結(jié)束后，加入按照乙酸乙酯和水體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)飽和氯化銨溶液洗滌后，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，30℃減壓蒸餾。得到粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脫，石油醚/乙酸乙酯的體積比從1:1逐漸增加到1:2，得到2,2,2-三氟-n-(3-(羥甲基)苯基)乙酰胺(483mg,2.21mmol)，產(chǎn)率74％。
uvλ:226,283nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3473(n-h)；3263(o-h)；1699(c＝o)；1622(c＝c)；1560(c-o)；1162(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:3.65(t,1h,-oh)；4.61(d,2h,-ch2oh；7.13-7.32(m,4h,ar)；7.23(broads,1h,-nh-co-)。
esi-ms:m/z220(m+h)+。
2)1-(9-氫-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物的合成
稱取6-氯嘌呤(908.6mg,5.9mmol)于100ml圓底燒瓶中，加入40ml無水n,n-二甲基甲酰胺溶液使其溶解，向溶液中加入1-甲基吡咯烷(1.4ml,13.2mmol)，25℃反應(yīng)19h后，經(jīng)乙醚重結(jié)晶得到白色固體1-(9-氫-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物(1.041g,4.1mmol)，產(chǎn)率70％。
uvλ:263,290nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3437(n-h)；2998(-ch2-)；1612.9(c＝o)；1462.3(c＝n)；1323(c-n)
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ：1.73(broads,2h,-ch2-)；2.90(s,3h,ch3)；3.24(t,2h,-ch2n-)；8.57(s,1h,-ch-)；9.38(s,1h,-ch-)；11.0(s,1h,-nh-)。
esi-ms:m/z240(m+h)+。
3)n-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺的合成
稱取2,2,2-三氟-n-(3-(羥甲基)苯基)乙酰胺固體(556.39mg，2.54mmol)于50ml的圓底燒瓶中，加入15mln,n-二甲基甲酰胺溶液使其溶解，依次加入叔丁醇鉀(599mg,5.33mmol)、1-(9-氫-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物固體(300mg,1.18mmol)，全部溶解后于氬氣保護(hù)下在室溫環(huán)境攪拌反應(yīng)，攪拌反應(yīng)4h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙酸乙酯和飽和氯化銨按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，37℃減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脫，甲醇/二氯甲烷的體積比從1:50逐漸增加到1:10，37℃真空干燥得到n-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺(676.22mg,2.01mmol)，產(chǎn)率79％。
uvλ:228,279nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3474.2(n-h)；2935.1(-ch2-)；1699.3(c＝o)；1465.6(c＝n)；1162(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ：5.16(s,1h,-ch2o-)；7.23(s,1h,-nh-)；7.23(s,1h,-nh-)；7.21-7.86(m,4h,ar)；8.68(s,1h,-ch-)；8.76(s,1h,-ch-)，11.0(s,1h,-nh-)。
esi-ms：m/z619(m+h)+。
4)6-((3-(2,2,2-三氟乙酰氨基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-羧酸叔丁酯的合成
稱取n-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺(341.64mg,0.72mmol)于50ml的圓底燒瓶中，加入10ml的二氯甲烷使其溶解，再加入二碳酸二叔丁酯(224.23mg,1.03mmol)、二甲氨基吡啶(9.5mg,0.07mmol)，25℃攪拌反應(yīng)16h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。待反應(yīng)無原料點(diǎn)后，37℃減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為乙酸乙酯和石油醚，采用等度洗脫，乙酸乙酯/石油醚的體積比為1:1，37℃真空干燥得到6-((3-(2,2,2-三氟乙酰氨基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-羧酸叔丁酯(244.7mg,0.56mmol)，產(chǎn)率78％。
uvλ:239,280nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3474(n-h)；2935(-ch2-)；1700(c＝o)；1464(c＝n)；1160(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:1.63(s,9h,ch3)；5.16(s,1h,-ch2o-)；7.23(s,1h,-nh-)；7.21-7.86(m,4h,ar)；8.76(s,1h,-ch-)。
esi-ms:m/z438(m+h)+。
5)2-硝基-6-((3-(2,2,2-三氟乙酰氨基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-羧酸叔丁酯的合成
稱取6-((3-(2,2,2-三氟乙酰氨基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-羧酸叔丁酯(437mg,1.0mmol)于50ml的圓底燒瓶中，加入15ml的二氯甲烷使其溶解，再加入四丁基硝酸銨(428.4mg,1.4mmol)于冰浴條件下逐滴加入三氟乙酸酐(0.188ml,1.3mmol)，冰浴條件下攪拌反應(yīng)1h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙醚和飽和碳酸氫鈉按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，27℃減壓蒸餾除去溶劑，加入3ml的冰甲醇得到2-硝基-6-((3-(2,2,2-三氟乙酰氨基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-羧酸叔丁酯(363.7mg,0.75mmol)，產(chǎn)率75％。
uvλ:254,288nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3474.2(n-h)；2934.5(-ch2-)；1701.1(c＝o)；1520.5(n＝o)；1464.2(c＝n)；1159.8(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:1.67(s,9h,ch3)；5.16(s,1h,-ch2o-)；7.23(s,1h,-nh-)；7.21-7.86(m,4h,ar)；8.68(s,1h,-ch-)。
esi-ms:m/z483(m+h)+。
6)o6-(3-氨基芐基)-2-硝基嘌呤的合成
稱取2-硝基-6-((3-(2,2,2-三氟乙酰氨基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-羧酸叔丁酯(482mg,1.0mmol)于50ml的圓底燒瓶中，加入15ml的二氯甲烷使其溶解，再加入哌啶(98μl,1.0mmol)，25℃攪拌反應(yīng)18h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。待反應(yīng)無原料點(diǎn)后，37℃減壓蒸餾除去溶劑，加入乙酸乙酯重結(jié)晶得到o6-(3-氨基芐基)-2-硝基嘌呤(200.2mg,0.7mmol)，產(chǎn)率70％。
uvλ:220,281nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3400.6(n-h)；2924.9(-ch2-)；1529.5(n＝o)；1403.2(c＝n)；1141.8(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:5.16(s,1h,-ch2o-)；6.27(s,2h,-nh2)；6.68-7.16(m,4h,ar)；8.58(s,1h,-ch-)；11.0(s,1h,-nh-)。
esi-ms:m/z287(m+h)+。
實(shí)施例2：o6-(3-氨基芐基)-2-硝基嘌呤(化合物1)的合成
1)2,2,2-三氟-n-(3-(羥甲基)苯基)乙酰胺的合成
將3-氨基苯甲醇(184.5mg,1.5mmol)溶于3ml甲醇中，向反應(yīng)液中加入三乙胺(242μl,1.75mmol)，于冰浴條件下下逐滴加入三氟乙酸乙酯(246.5μl,1.75mmol)，30分鐘左右滴加完畢，反應(yīng)體系緩慢升至室溫，攪拌反應(yīng)，用時3小時。反應(yīng)結(jié)束后，用乙酸乙酯和水體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)飽和氯化銨溶液洗滌后，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，35℃減壓蒸餾。得到粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脫，石油醚/乙酸乙酯的體積比從1:1逐漸增加到1:2，38℃真空干燥得到2,2,2-三氟-n-(3-(羥甲基)苯基)乙酰胺(245.28mg,1.12mmol)，產(chǎn)率75％。
uvλ:226,283nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3473(n-h)；3263(o-h)；1699(c＝o)；1622(c＝c)；1560(c-o)；1162(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:3.65(t,1h,-oh)；4.61(d,2h,-ch2oh；7.13-7.32(m,4h,ar)；7.23(broads,1h,-nh-co-)。
esi-ms:m/z220(m+h)+。
2)1-(9-氫-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物的合成
將6-氯嘌呤(461.2mg,3mmol)溶于20ml無水n,n-二甲基甲酰胺溶液使其溶解，向溶液中加入1-甲基吡咯烷(710μl,6.69mmol)，30℃反應(yīng)18h后，經(jīng)乙醚重結(jié)晶得到白色固體1-(9-氫-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物(537.8mg,2.25mmol)，產(chǎn)率75％。
uvλ:263,290nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3437(n-h)；2998(-ch2-)；1612.9(c＝o)；1462.3(c＝n)；1323(c-n)cm-1
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ：1.73(broads,2h,-ch2-)；2.90(s,3h,ch3)；3.24(t,2h,-ch2n-)；8.57(s,1h,-ch-)；9,38(s,1h,-ch-)；11.0(s,1h,-nh-)。
esi-ms:m/z240(m+h)+。
3)n-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺的合成
將2,2,2-三氟-n-(3-(羥甲基)苯基)乙酰胺固體(438.1mg，2mmol)溶于10mln,n-二甲基甲酰胺溶液中，依次加入叔丁醇鉀(471.65mg,4.2mmol)、1-(9-氫-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物固體(236.2mg,0.92mmol)，全部溶解后于氬氣保護(hù)下在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)5h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙酸乙酯和飽和氯化銨按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，39℃減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脫，甲醇/二氯甲烷的體積比從1:50逐漸增加到1:10，37℃真空干燥得到n-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺(539.2mg,1.6mmol)，產(chǎn)率80％。
uvλ:228,279nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3474.2(n-h)；2935.1(-ch2-)；1699.3(c＝o)；1465.6(c＝n)；1162(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ：5.16(s,1h,-ch2o-)；7.23(s,1h,-nh-)；7.23(s,1h,-nh-)；7.21-7.86(m,4h,ar)；8.68(s,1h,-ch-)；8.76(s,1h,-ch-)，11.0(s,1h,-nh-)。
esi-ms：m/z619(m+h)+。
4)6-((3-(2,2,2-三氟乙酰氨基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-特戊酸甲酯的合成
將n-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺(710.6mg,1.5mmol)溶于12mln,n-二甲基甲酰胺中，加入氫化鈉(43.2mg,1.8mmol)于0℃攪拌反應(yīng)30min；然后向反應(yīng)液中加入特戊酸氯甲酯(0.432ml,3mmol)于32℃下攪拌反應(yīng)1h，加入0.25ml乙酸調(diào)整ph至7.0中止反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙酸乙酯和水按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)飽和氯化銨溶液洗滌后，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，38℃減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為乙酸乙酯和石油醚，采用等度洗脫，乙酸乙酯/石油醚的體積比為1:1，37℃真空干燥得到6-((3-(2,2,2-三氟乙酰氨基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-特戊酸甲酯(540mg,1.2mmol)，產(chǎn)率80％。
uvλ:239,280nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3474(n-h)；2935(-ch2-)；1700(c＝o)；1464(c＝n)；1160(c-n)
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:1.28(s,9h,ch3)；5.16(s,1h,-ch2o-)；6.52(s,2h,-ch2o-)；7.23(s,1h,-nh-)；7.21-7.86(m,4h,ar)；8.05(s,1h,-ch-)；8.76(s,1h,-ch-)。
esi-ms:m/z451(m+h)+。
5)2-硝基-6-((3-(2,2,2-三氟乙酰氨基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-特戊酸甲酯的合成
將6-((3-(2,2,2-三氟乙酰氨基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-特戊酸甲酯(676.5mg,1.5mmol)溶于20ml的二氯甲烷中，再加入四丁基硝酸銨(685.4mg,2.24mmol)，冰浴條件下逐滴加入三氟乙酸酐(0.289ml,2.0mmol)攪拌反應(yīng)2h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙醚和飽和碳酸氫鈉按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，27℃減壓蒸餾除去溶劑，加入4.5ml的冰甲醇得到2-硝基-6-((3-(2,2,2-三氟乙酰氨基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-特戊酸甲酯(549.48mg,1.14mmol)，產(chǎn)率76％。
uvλ:254,288nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3474.2(n-h)；2934.5(-ch2-)；1701.1(c＝o)；1520.5(-no)；1464.2(c＝n)；1159.8(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:1.28(s,9h,ch3)；5.16(s,1h,-ch2o-)；6.52(s,2h,-ch2o-)；7.23(s,1h,-nh-)；7.21-7.86(m,4h,ar)；8.05(s,1h,-ch-)。
esi-ms:m/z483(m+h)+。
6)o6-(3-氨基芐基)-2-硝基嘌呤的合成
將2-硝基-6-((3-(2,2,2-三氟乙酰氨基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-特務(wù)酸甲酯(723mg,1.5mmol)溶于34ml的甲醇和2ml的去離子水中使其溶解，再加入無水碳酸鉀(1.105g,8mmol)，68℃下回流反應(yīng)2h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為甲醇、二氯甲烷和三乙胺，采用等度洗脫，甲醇/二氯甲烷/三乙胺的體積為1:5:0.05，38℃真空干燥得到o6-(3-氨基芐基)-2-硝基嘌呤(321.75mg,1.12mmol)，產(chǎn)率75％。
uvλ:220,281nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3400.6(n-h)；2924.9(-ch2-)；1529.5(n＝o)；1403.2(c＝n)；1141.8(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:5.16(s,1h,-ch2o-)；6.27(s,2h,-nh2)；6.68-7.16(m,4h,ar)；8.58(s,1h,-ch-)；11.0(s,1h,-nh-)。
esi-ms:m/z287(m+h)+。
實(shí)施例3：o6-(3-氨甲基芐基)-2-硝基嘌呤(化合物2)
1)2,2,2-三氟-n-(3-(羥甲基)芐基)乙酰胺的合成
稱取3-氨甲基苯甲醇(1.12g,8.2mmol)加入到100ml圓底燒瓶中，加入10ml四氫呋喃，向反應(yīng)液中加入三乙胺(0.873ml,6.2mmol)，冰浴條件下逐滴加入三氟乙酸酐(0.897ml,6.2mmol)，滴加過程持續(xù)30min左右，滴加完畢后升至室溫?cái)嚢璺磻?yīng)3.5h，用tlc檢測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，加入乙酸乙酯和水按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)飽和氯化銨溶液洗滌后，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，37℃減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為乙酸乙酯和石油醚，采用梯度洗脫，乙酸乙酯/石油醚的體積比從1:1逐漸增加到1:2，37℃真空干燥得到2,2,2-三氟-n-(3-(羥甲基)芐基)乙酰胺(1.54g,6.56mmol)，產(chǎn)率80％。
使用上述同樣的方法，不同的是：將3-氨甲基苯甲醇(430mg,3.1mmol)溶于6ml無水甲醇中，加入三乙胺(0.559ml,4.1mmol)，然后向反應(yīng)液中逐滴加入三氟乙酸乙酯(0.5ml,4.1mmol)室溫?cái)嚢璺磻?yīng)3h，用tlc檢測反應(yīng)進(jìn)程；同時使用洗脫劑采用等度洗脫，乙酸乙酯/石油醚的體積比為1:1，38℃真空干燥得到2,2,2-三氟-n-(3-(羥甲基)芐基)乙酰胺(591.82mg,2.54mmol)，產(chǎn)率82％。
uvλ:232,280nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3285(o-h)；2935(c-h)；1636(c＝c)；1558(c-o)；1178(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:4.38(d,2h,-ch2-nh-)；4.49(s,2h,-ch2oh)；5.21(s,1h,-oh)；7.13-7.32(m,4h,ar)；10.00(broads,1h,-nh-co-)。
esi-ms:m/z234(m+h)+。
2)n-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)芐基)-2,2,2-三氟乙酰胺的合成
稱取2,2,2-三氟-n-(3-(羥甲基)芐基)乙酰胺固體(585mg,2.5mmol)于50ml的三角燒瓶中，加入15mln,n-二甲基甲酰胺溶液使其溶解，依次加入叔丁醇鉀(600mg,5.4mmol)、1-(9-氫-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物固體(300mg,1.2mmol)，全部溶解后于氬氣保護(hù)下在室溫環(huán)境攪拌反應(yīng)，攪拌反應(yīng)4.5h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙酸乙酯和飽和氯化銨按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，37℃減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脫，甲醇/二氯甲烷的體積比從1:50逐漸增加到1:10，37℃真空干燥得到n-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)芐基)-2,2,2-三氟乙酰胺(658.2mg,1.87mmol)，產(chǎn)率75％。
uvλ:236,279nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3418(n-h)；2935(c-h)；1715(c＝o)；1635(c＝c)；1508(c-o)；1403(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ：4.42(d,2h,-ch2-nh-)；5.49(s,2h,-o-ch2-)；7.27-7.44(m,4h,ar)；7.87(s,1h,-ch-)；10.02(broads,1h,-nh-co-)。
esi-ms：m/z352(m+h)+。
3)6-((3-((2,2,2-三氟乙酰氨基)甲基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-羧酸叔丁酯的合成
稱取n-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)芐基)-2,2,2-三氟乙酰胺(351mg,1mmol)加入到50ml圓底燒瓶中，加入10ml的二氯甲烷使其溶解，再加入二碳酸二叔丁酯(305.2mg,1.4mmol)，二甲氨基吡啶(12.2mg,0.09mmol)，25℃下攪拌反應(yīng)16h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。待反應(yīng)無原料點(diǎn)后，37℃減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為乙酸乙酯和石油醚，采用等度洗脫，乙酸乙酯/石油醚的體積比為1:1，37℃真空干燥得到6-((3-(2,2,2-三氟乙酰氨基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-羧酸叔丁酯(306.68mg,0.68mmol)，產(chǎn)率68％。
uvλ:228,289nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3433(n-h)；3220(c＝c-h)；2997(c-h)；1638(c＝c)；1517(c-o)；1405(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ：1.63(s,9h,ch3)；4.24(d,2h,-ch2-nh-)；5.16(s,2h,-o-ch2-)；7.28-7.48(m,4h,ar)；7.85(s,1h,-ch-)；8.03(s,1h,-nh-co-)；8.76(s,1h,-ch-)。
esi-ms:m/z451(m+h)+。
4)(2-硝基-6-((3-((2,2,2-三氟乙酰氨基)甲基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-)羧酸叔丁酯的合成
稱取6-((3-((2,2,2-三氟乙酰氨基)甲基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-羧酸叔丁酯(450mg,1.0mmol)于50ml的圓底燒瓶中，加入15ml的二氯甲烷使其溶解，再加入四丁基硝酸銨(428.4mg,1.4mmol)，冰浴條件下逐滴加入三氟乙酸酐(0.188ml,1.3mmol)，冰浴條件下攪拌反應(yīng)1h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙醚和飽和碳酸氫鈉按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，27℃減壓蒸餾除去溶劑，加入3ml的冰甲醇得到(2-硝基-6-((3-((2,2,2-三氟乙酰氨基)甲基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-)羧酸叔丁酯(361.35mg,0.73mmol)，產(chǎn)率73％。
uvλ:246,279nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3434(n-h)；2891(c-c)；1635(c＝c)；1513(c-o)；1525(-no)；1408(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ：1.63(s,9h,ch3)；4.24(d,2h,-ch2-nh-)；5.16(s,2h,-o-ch2-)；7.28-7.48(m,4h,ar)；7.85(s,1h,-ch-)；8.03(s,1h,-nh-co-)。
esi-ms:m/z496(m+h)+。
5)o6-(3-氨甲基芐基)-2-硝基嘌呤的合成
稱取(2-硝基-6-((3-((2,2,2-三氟乙酰氨基)甲基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-)羧酸叔丁酯(495mg,1.0mmol)于50ml的圓底燒瓶中，加入15ml的二氯甲烷使其溶解，再加入哌啶(108μl,1.1mmol)，25℃攪拌反應(yīng)17h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。待反應(yīng)無原料點(diǎn)后，37℃減壓蒸餾除去溶劑，加入乙酸乙酯重結(jié)晶得到o6-(3-氨甲基芐基)-2-硝基嘌呤(225mg,0.75mmol)，產(chǎn)率75％。
uvλ:238,288nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3435(n-h)；1635(c＝c)；1525(-no)；1508(c-o)；1400(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:4.37(t,2h,-ch2-nh2)；5.49(s,2h,-o-ch2-)；7.25-7.55(m,4h,ar)；8.57(s,1h,-ch-)；8.68(d,2h,-nh2)；11.0(s,1h,-nh-)。
esi-ms:m/z301(m+h)+。
實(shí)施例4：o6-(3-((n-乙?；?氨基)芐基)-2-硝基嘌呤的合成(化合物3)
1)n-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)苯基)乙酰胺的合成
稱取n-(3-(羥甲基)苯基)乙酰胺固體(412.5mg,2.5mmol)于50ml的圓底燒瓶中，加入15mln,n-二甲基甲酰胺溶液使其溶解，依次加入叔丁醇鉀(527.4mg,4.7mmol)、1-(9-氫-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物固體(239mg,1mmol)，全部溶解后于氬氣保護(hù)下在室溫環(huán)境攪拌反應(yīng)，攪拌反應(yīng)4.5h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙酸乙酯和飽和氯化銨按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，37℃減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脫，甲醇/二氯甲烷的體積比從1:50逐漸增加到1:10，37℃真空干燥得到n-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)苯基)乙酰胺(529.2mg,1.87mmol)，產(chǎn)率75％。
uvλ:238,275nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3405(n-h)；2927(-ch2-)；1789(c＝o)；1415(c＝n)；1130(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ：2.04(s,3h,-ch3)；5.16(s,1h,-ch2-o-)；7.21-7.87(m,4h,ar)；8.57-8.76(s,h,-ch-)；11.0(s,h,-nh)。
esi-ms：m/z284(m+h)+。
2)6-((3-乙酰氨基芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-羧酸叔丁酯的合成
稱取n-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺(325.45mg,1.15mmol)于50ml的圓底燒瓶中，加入10ml的二氯甲烷使其溶解，再加入二碳酸二叔丁酯(305.2mg,1.4mmol)、二甲氨基吡啶(12.2mg,0.1mmol)，25℃，攪拌反應(yīng)17h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。待反應(yīng)無原料點(diǎn)后，37℃減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為乙酸乙酯和石油醚，采用等度洗脫，乙酸乙酯/石油醚的體積比為1:1，37℃真空干燥得到6-((3-乙酰氨基芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-羧酸叔丁酯(308.31mg,0.81mmol)，產(chǎn)率70％。
uvλ:240,280nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3404(n-h)；2928(-ch2-)；1780(c＝o)；1420(c＝n)；1141(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:1.38(s,9h,ch3)；2.04(s,3h,-ch3)，5.17(s,2h,-ch2o)；7.21-7.89(m,4h,ar)；8.68(s,1h,-ch-)，8.76(s,h,-nh-)。
esi-ms:m/z384(m+h)+。
3)6-((3-乙酰氨基芐基)氧基)-2-硝基-9-氫-嘌呤-9-羧酸叔丁酯的合成
稱取6-((3-乙酰氨基芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-羧酸叔丁酯(383mg,1.0mmol)于50ml的圓底燒瓶中，加入15ml的二氯甲烷使其溶解，再加入四丁基硝酸銨(367.2mg,1.2mmol)，冰浴條件下逐滴加入三氟乙酸酐(0.188ml,1.3mmol)，冰浴條件下攪拌反應(yīng)1h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙醚和飽和碳酸氫鈉按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，27℃減壓蒸餾除去溶劑，加入3ml的冰甲醇得到6-((3-乙酰氨基芐基)氧基)-2-硝基-9-氫-嘌呤-9-羧酸叔丁酯(333.84mg,0.78mmol)，產(chǎn)率78％。
uvλ:230,289nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3404(n-h)；2928(-ch2-)；1780(c＝o)；1522.2(n＝o)；1417(c＝n)；1137(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.05(s,3h,ch3)；5.60(s,2h,-ch2o-)；7.20-7.87(m,4h,ar)；8.68(s,1h,-ch-)，1.63(s,9h,ch3)。
esi-ms:m/z429(m+h)+。
4)o6-(3-((n-乙?；?氨基)芐基)-2-硝基嘌呤的合成
稱取6-((3-乙酰氨基芐基)氧基)-2-硝基-9-氫-嘌呤-9-羧酸叔丁酯(428mg,1.0mmol)于50ml的圓底燒瓶中，加入10ml的二氯甲烷使其溶解，再加入哌啶(118μl,1.2mmol)，26℃攪拌反應(yīng)18h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。待反應(yīng)無原料點(diǎn)后，37℃減壓蒸餾除去溶劑，加入乙酸乙酯重結(jié)晶得到o6-(3-((n-乙?；?氨基)芐基)-2-硝基嘌呤(229.6mg,0.7mmol)，產(chǎn)率70％。
uvλ:227,287nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3404.6(n-h)；2930.7(-ch2-)；1531.5(n＝o)；1405.5(c＝n)；1146.8(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.41(s,3h,-ch3)；5.76(s,1h,-ch2o-)；7.16-7.87(m,4h,ar)；8.57(s,h,-ch)；11.0(s,h,-nh)。
esi-ms:m/z329(m+h)+。
實(shí)施例5：o6-(3-((n-乙?；?氨基)芐基)-2-硝基嘌呤的合成(化合物3)
1)n-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)苯基)乙酰胺的合成
將n-(3-(羥甲基)苯基)乙酰胺固體(279.4mg,1.7mmol)溶于10mln,n-二甲基甲酰胺溶液中，依次加入叔丁醇鉀(404.7mg,3.6mmol)、1-(9-氫-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物固體(200mg,0.78mmol)，全部溶解后于氬氣保護(hù)下在室溫環(huán)境攪拌反應(yīng)，攪拌反應(yīng)4h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙酸乙酯和飽和氯化銨按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，37℃減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脫，甲醇/二氯甲烷的體積比從1:50逐漸增加到1:10，37℃真空干燥得到n-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)苯基)乙酰胺(365.6mg,1.29mmol)，產(chǎn)率76％。
uvλ:238,275nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3405(n-h)；2927(-ch2-)；1789(c＝o)；1415(c＝n)；1130(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ：2.04(s,3h,-ch3)；5.16(s,1h,-ch2-o-)；7.21-7.87(m,4h,ar)；8.57-8.76(s,h,-ch-)；11.0(s,h,-nh)。
esi-ms：m/z284(m+h)+。
2)6-((3-乙酰氨基芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-特戊酸甲酯的合成
將n-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺(428.3mg,1.5mmol)溶于12mln,n-二甲基甲酰胺中，加入氫化鈉(54mg,2.25mmol)于0℃攪拌反應(yīng)30min；然后向反應(yīng)液中加入特戊酸氯甲酯(0.461ml,3.2mmol)于32℃下攪拌反應(yīng)1.5h，加入0.25ml乙酸調(diào)整ph至7.0中止反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙酸乙酯和水按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)飽和氯化銨溶液洗滌后，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，38℃減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為乙酸乙酯和石油醚，采用等度洗脫，乙酸乙酯/石油醚的體積比為1:1，37℃真空干燥得到6-((3-乙酰氨基芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-特戊酸甲酯(428.76mg,1.08mmol)，產(chǎn)率72％。
uvλ:240,280nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3404(n-h)；2928(-ch2-)；1780(c＝o)；1420(c＝n)；1141(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:1.28(s,9h,ch3)；2.04(s,3h,-ch3)，5.16(s,2h,-ch2o)；6.52(s,2h,-ch2o-)；7.21-7.86(m,4h,ar)；8.05(s,1h,-ch-)，8.76(s,h,-nh-)。
esi-ms:m/z398(m+h)+。
3)6-((3-乙酰氨基芐基)氧基)-2-硝基-9-氫-嘌呤-9-特戊酸甲酯的合成
將6-((3-乙酰氨基芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-特戊酸甲酯(595.5mg,1.5mmol)溶于15ml的二氯甲烷使其溶解，再加入四丁基硝酸銨(826.2mg,2.7mmol)冰浴條件下逐滴加入三氟乙酸酐(0.376ml,2mmol)攪拌反應(yīng)1h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙醚和飽和碳酸氫鈉按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，28℃減壓蒸餾除去溶劑，加入5ml的冰甲醇得到6-((3-乙酰氨基芐基)氧基)-2-硝基-9-氫-嘌呤-9-特戊酸甲酯(499.46mg,1.13mmol)，產(chǎn)率75％。
uvλ:230,289nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3404(n-h)；2928(-ch2-)；1780(c＝o)；1522.2(-no)；1417(c＝n)；1137(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.05(s,3h,ch3)；5.60(s,2h,-ch2o-)；7.20-7.87(m,4h,ar)；8.68(s,1h,-ch-)；1.63(s,9h,ch3)。
esi-ms:m/z443(m+h)+。
4)o6-(3-((n-乙?；?氨基)芐基)-2-硝基嘌呤的合成
稱取6-((3-乙酰氨基芐基)氧基)-2-硝基-9-氫-嘌呤-9-特戊酸甲酯(428mg,1.0mmol)溶于34ml的甲醇和2ml的去離子水中使其溶解，再加入無水碳酸鉀(800.4mg,5.8mmol)，67℃下回流反應(yīng)2h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為甲醇、二氯甲烷和三乙胺，采用等度洗脫，甲醇/二氯甲烷/三乙胺的體積為1:5:0.05，38℃真空干燥得到o6-(3-((n-乙?；?氨基)芐基)-2-硝基嘌呤(229.6mg,0.7mmol)，產(chǎn)率70％。
uvλ:227,287nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3404.6(n-h)；2930.7(-ch2-)；1531.5(-no)；1405.5(c＝n)；1146.8(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.41(s,3h,-ch3)；5.76(s,1h,-ch2o-)；7.16-7.87(m,4h,ar)；8.57(s,h,-ch)；11.0(s,h,-nh)。
esi-ms:m/z329(m+h)+。
實(shí)施例6：o6-(3-((n-乙?；?氨基)芐基)-2-硝基嘌呤(化合物4)
1)n-3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)芐基)乙酰胺的合成
稱取n-(3-(羥甲基)芐基)乙酰胺固體(494.04mg,2.76mmol)于50ml的三角燒瓶中，加入12mln,n-二甲基甲酰胺溶液使其溶解，依次加入叔丁醇鉀(483.84mg,4.32mmol)、1-(9-氫-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物固體(286.8mg,1.2mmol)，全部溶解后于氬氣保護(hù)下在室溫環(huán)境攪拌反應(yīng)，攪拌反應(yīng)4h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙酸乙酯和飽和氯化銨按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，37℃減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脫，甲醇/二氯甲烷的體積比從1:50逐漸增加到1:10，37℃真空干燥得到n-3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)芐基)乙酰胺(614.8mg,2.07mmol)，產(chǎn)率75％。
uvλ:248,276nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3468(n-h)；1636(c＝c)；1509(c＝o)；1402(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:1.81(s,3h,-coch3)；4.26(d,2h,-ch2nh-)；5.17(s,2h,-ch2o-)；7.23-7.48(m,4h,ar)；8.03(t,1h,-nhch2-)；8.57(s,1h,-ch-)；8.76(s,1h,-ch-)；11.0(s,1h,-nh-)。
esi-ms：m/z298(m+h)+。
2)(6-((3-(乙酰氨基甲基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-)羧酸叔丁酯的合成
稱取n-3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)芐基)乙酰胺(297mg,1mmol)加入到50ml圓底燒瓶中，加入10ml的二氯甲烷使其溶解，再加入二碳酸二叔丁酯(311.43mg,1.43mmol)，二甲氨基吡啶(12.2mg,0.1mmol)，25℃下攪拌反應(yīng)16.5h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。待反應(yīng)無原料點(diǎn)后，37℃減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為乙酸乙酯和石油醚，采用等度洗脫，乙酸乙酯/石油醚的體積比為1:1，37℃真空干燥得到6-((3-(乙酰氨基甲基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-)羧酸叔丁酯(258.05mg,0.65mmol)，產(chǎn)率65％。
uvλ:253,285nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3461(n-h)；2901(c-c)；1637(c＝c)；1514(c＝o)；1405(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:1.63(s,9h,ch3)；1.84(s,3h,-ch3)；4.24(s,2h,-ch2nh-)；7.16-7.48(m,4h,ar)；8.68(s,1h,-ch-)；8.76(s,1h,-ch-)。
esi-ms:m/z398(m+h)+。
3)(6-((3-(乙酰氨基甲基)芐基)氧基)-2-硝基-9-氫-嘌呤-9-)羧酸叔丁酯的合成
稱取6-((3-(乙酰氨基甲基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-)羧酸叔丁酯(397mg,1.0mmol)于50ml的圓底燒瓶中，加入15ml的二氯甲烷使其溶解，再加入四丁基硝酸銨(336.6mg,1.1mmol)，冰浴條件下逐滴加入三氟乙酸酐(0.174ml,1.2mmol)，冰浴條件下攪拌反應(yīng)1h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙醚和飽和碳酸氫鈉按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，27℃減壓蒸餾除去溶劑，加入3ml的冰甲醇得到(6-((3-(乙酰氨基甲基)芐基)氧基)-2-硝基-9-氫-嘌呤-9-)羧酸叔丁酯(342mg,0.75mmol)，產(chǎn)率75％。
uvλ:254,281nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3462(n-h)；2890(c-c)；1637(c＝c)；1519(c＝o)；1528(-no)；1406(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:1.60(s,9h,ch3)；1.84(s,3h,-ch3)；4.24(s,2h,-ch2nh-)；4.67(s,2h,-nch2-)；7.16-7.48(m,4h,ar)；8.03(t,1h,-nh-)；8.68(s,1h,-ch-)。
esi-ms:m/z457(m+h)+。
4)o6-(3-((n-乙?；?氨基)芐基)-2-硝基嘌呤的合成
稱取(6-((3-(乙酰氨基甲基)芐基)氧基)-2-硝基-9-氫-嘌呤-9-)羧酸叔丁酯(1.003g,2.2mmol)于100ml的圓底燒瓶中，加入15ml的二氯甲烷使其溶解，再加入哌啶(326μl,3.3mmol)，28℃下攪拌反應(yīng)18h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。待反應(yīng)無原料點(diǎn)后，37℃減壓蒸餾除去溶劑，加入乙酸乙酯重結(jié)晶得到o6-(3-((n-乙?；?氨基)芐基)-2-硝基嘌呤(564.3mg,1.65mmol)，產(chǎn)率75％。
uvλ:260,281nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3447(n-h)；1638(c＝c)；1527(-no)；1675(c＝o)；1510(c-o)；1401(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:1.84(s,3h,-ch3)；4.24(d,2h,-ch2nh-)；7.16-7.48(m,4h,ar)；8.03(t,1h,-nh-)；8.57(s,1h,-ch-)；11.0(s,1h,-nh-)。
esi-ms:m/z343(m+h)+。
實(shí)施例7：o6-(3-((n,n-二甲基)氨基)芐基)-2-硝基嘌呤(化合物5)
1)3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)-n,n-二甲基苯胺的合成
將(3-(二甲基氨基)苯基)甲醇固體(226.95mg,1.5mmol)溶于8mln,n-二甲基甲酰胺溶液中，依次加入叔丁醇鉀(354.44mg,3.15mmol)、1-(9-氫-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物固體(177.51mg,0.70mmol)，全部溶解后于氬氣保護(hù)下在室溫環(huán)境攪拌反應(yīng)，攪拌反應(yīng)5h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙酸乙酯和飽和氯化銨按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，38℃減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脫，甲醇/二氯甲烷的體積比從1:50逐漸增加到1:10，39℃真空干燥得到3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)-n,n-二甲基苯胺(293.21mg,1.09mmol)，產(chǎn)率73％。
uvλ:228,265nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:2927(-ch2-)；1650(c＝o)；1415(c＝n)；1130(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ：3.06(s,6h,ch3)；5.16(s,2h,-ch2o-)；6.81-7.25(m,4h,ar)；8.57(s,h,-ch)；8.76(s,h,-ch)；11.0(s,1h,-nh)。
esi-ms：m/z270(m+h)+。
2)6-((3-(二甲基氨基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-特戊酸甲酯的合成
將3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)-n,n-二甲基苯胺(403.5mg,1.5mmol)溶于12mln,n-二甲基甲酰胺中，加入氫化鈉(48mg,2mmol)于0℃攪拌反應(yīng)30min；然后向反應(yīng)液中加入特戊酸氯甲酯(0.432ml,3mmol)于32℃下攪拌反應(yīng)1.5h，加入0.25ml乙酸調(diào)整ph至7.0中止反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙酸乙酯和水按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)飽和氯化銨溶液洗滌后，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，38℃減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為乙酸乙酯和石油醚，采用等度洗脫，乙酸乙酯/石油醚的體積比為1:1，37℃真空干燥得到6-((3-(二甲基氨基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-特戊酸甲酯(413.64mg,1.08mmol)，產(chǎn)率72％。
uvλ:260,288nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:2918(-ch2-)；1780(c＝o)；1420(c＝n)；1141(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:1.28(s,9h,-ch3)；3.06(s,6h,-ch3)；5.16(s,2h,-ch2o-)；6.52(s,2h,-ch2o-)；6.68-7.21(m,4h,ar)；5.40(s,2h,-ch2-)；8.05(s,1h,-ch-)；8.76(s,1h,-ch-)。
esi-ms:m/z384(m+h)+。
3)6-((3-(二甲基氨基)芐基)氧基)-2-硝基-9-氫-嘌呤-9-特戊酸甲酯的合成
將6-((3-(二甲基氨基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-特戊酸甲酯(574.5mg,1.5mmol)溶于50ml的圓底燒瓶中，加入15ml的二氯甲烷使其溶解，再加入四丁基硝酸銨(642.6mg,2.1mmol)，隨后在冰浴條件下逐滴加入三氟乙酸酐(0.282ml,1.95mmol)攪拌反應(yīng)1h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙醚和飽和碳酸氫鈉按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，28℃減壓蒸餾除去溶劑，加入3ml的冰甲醇得到6-((3-(二甲基氨基)芐基)氧基)-2-硝基-9-氫-嘌呤-9-特戊酸甲酯(475.08mg,1.11mmol)，產(chǎn)率74％。
uvλ:254,290nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3408(n-h)；2908(-ch2-)；1775(c＝o)；1520(-no)；1413(c＝n)；1130(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:1.28(s,9h,-ch3)；3.06(s,6h,-ch3)；5.16(s,2h,-ch2o-)；6.52(s,2h,-ch2o-)；6.68-7.21(m,4h,ar)；5.40(s,2h,-ch2-)；8.05(s,1h,-ch-)。
esi-ms:m/z429(m+h)+。
4)o6-(3-((n,n-二甲基)氨基)芐基)-2-硝基嘌呤的合成
將6-((3-(二甲基氨基)芐基)氧基)-2-硝基-9-氫-嘌呤-9-特戊酸甲酯(643.5mg,1.5mmol)溶于34ml的甲醇和2ml的去離子水中使其溶解，再加入無水碳酸鉀(1.2g,8.7mmol)，65℃下回流反應(yīng)3h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為甲醇、二氯甲烷和三乙胺，采用等度洗脫，甲醇/二氯甲烷/三乙胺的體積為1:5:0.05，38℃真空干燥得到o6-(3-((n,n-二甲基)氨基)芐基)-2-硝基嘌呤(338.04mg,1.08mmol)，產(chǎn)率72％。
uvλ:238,284nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:3410(n-h)；2939(-ch2-)，1540(-no)；1410(c＝n)；1148(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:3.06(s,6h,ch3)；5.16(s,2h,-ch2o-)；6.80-7.21(m,4h,ar)；8.57(s,1h,-ch-)；11.0(s,1h,-nh-)。
esi-ms:m/z314(m+h)+。
實(shí)施例8：o6-(3-((n,n-二甲基)氨甲基)芐基)-2-硝基嘌呤(化合物6)
1)1-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)苯基)-n,n-二甲基甲胺的合成
稱取(3-((二甲基氨基)甲基)苯基)甲醇固體(419.1mg,2.54mmol)于50ml的三角燒瓶中，加入15mln,n-二甲基甲酰胺溶液使其溶解，依次加入叔丁醇鉀(599mg,5.33mmol)、1-(9-氫-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物固體(300mg,1.18mmol)，全部溶解后于氬氣保護(hù)下在室溫環(huán)境攪拌反應(yīng)，攪拌反應(yīng)4h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙酸乙酯和飽和氯化銨按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，37℃減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脫，甲醇/二氯甲烷的體積比從1:50逐漸增加到1:10，37℃真空干燥得到1-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)苯基)-n,n-二甲基甲胺(539.6mg,1.90mmol)，產(chǎn)率75％。
uvλ:228,265nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:2968.1(c-h)；1685.2(c＝c)；1087.3(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.16(s,6h,-ch3-)；3.66(s,-ch2-)；5.16(s,2h,-ch2o-)；7.17-7.48(m,4h,ar)；8.57(s,1h,-ch-)；8.75(s,1h,-ch-)；11.0(s,1h,-nh-)。
esi-ms：m/z284(m+h)+。
2)(6-((3-((二甲基氨基)甲基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-)羧酸叔丁酯的合成
稱取1-(3-(((9-氫-嘌呤-6-)氧基)甲基)苯基)-n,n-二甲基甲胺(283mg,1mmol)加入到50ml圓底燒瓶中，加入10ml的二氯甲烷使其溶解，再加入二碳酸二叔丁酯(311.43mg,1.43mmol)，二甲氨基吡啶(12.2mg,0.09mmol)，25℃下攪拌反應(yīng)16h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。待反應(yīng)無原料點(diǎn)后，37℃減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱層析法分離純化，洗脫劑為乙酸乙酯和石油醚，采用等度洗脫，乙酸乙酯/石油醚的體積比為1:1，37℃真空干燥得到(6-((3-((二甲基氨基)甲基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-)羧酸叔丁酯(138.95mg,0.35mmol)，產(chǎn)率62％。
uvλ:246,283nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:2968.1(c-h)；1685.2(c＝c)；1087.3(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:1.63(s,9h,ch3)；2.16(s,6h,-ch3-)；3.66(s,-ch2-)；5.16(s,2h,-ch2o-)；7.16-7.48(m,4h,ar)；8.68(s,1h,-ch-)；8.76(s,1h,-ch-)。
esi-ms:m/z384(m+h)+。
3)(6-((3-((二甲基氨基)甲基)芐基)氧基)-2-硝基-9-氫-嘌呤-9-)羧酸叔丁酯的合成
稱取(6-((3-((二甲基氨基)甲基)芐基)氧基)-9-氫-嘌呤-9-)羧酸叔丁酯(383mg,1.0mmol)于50ml的圓底燒瓶中，加入15ml的二氯甲烷使其溶解，再加入四丁基硝酸銨(428.4mg,1.4mmol)，冰浴條件下逐滴加入三氟乙酸酐(0.188ml,1.3mmol)，冰浴條件下攪拌反應(yīng)1h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，加入乙醚和飽和碳酸氫鈉按照體積為1:1組成的混合液進(jìn)行萃取，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，27℃減壓蒸餾除去溶劑，加入3ml的冰甲醇得到(6-((3-((二甲基氨基)甲基)芐基)氧基)-2-硝基-9-氫-嘌呤-9-)羧酸叔丁酯(345.54mg,0.78mmol)，產(chǎn)率78％。
uvλ:256,281nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:2980(c-h)；2890(c-c)；1637(c＝c)；1518(-no)；1406(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:1.63(s,9h,ch3)；2.16(s,6h,-ch3-)；3.66(s,-ch2-)；4.69(s,-nch2-)；5.16(s,2h,-ch2o-)；7.16-7.48(m,4h,ar)；8.68(s,1h,-ch-)。
esi-ms:m/z429(m+h)+。
4)o6-(3-((n,n-二甲基)氨基)芐基)-2-硝基嘌呤的合成
稱取(6-((3-((二甲基氨基)甲基)芐基)氧基)-2-硝基-9-氫-嘌呤-9-)羧酸叔丁酯(941.6mg,2.2mmol)于100ml的圓底燒瓶中，加入15ml的二氯甲烷使其溶解，再加入哌啶(227.3μl,2.3mmol)，28℃下攪拌反應(yīng)17.5h，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。待反應(yīng)無原料點(diǎn)后，37℃減壓蒸餾除去溶劑，加入乙酸乙酯重結(jié)晶得到o6-(3-((n,n-二甲基)氨基)芐基)-2-硝基嘌呤(541.2mg,1.65mmol)，產(chǎn)率75％。
uvλ:240,287nm。
ir(kbr壓片)v/cm-1:2987(c-h)；1638(c＝c)；1517(-no)；1510(c-o)；1401(c-n)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.16(s,6h,-ch3-)；3.62(s,-ch2-)；5.16(s,2h,-ch2o-)；7.16-7.48(m,4h,ar)；8.58(s,1h,-ch-)；11.0(s,1h,-nh-)。
esi-ms:m/z329(m+h)+。
實(shí)施例9：腫瘤細(xì)胞agt蛋白抑制劑活性評價
1、實(shí)驗(yàn)材料與儀器
供試化合物：上述制備實(shí)施例中制得的化合物1-6；
細(xì)胞系：小鼠乳腺癌細(xì)胞emt6、人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞u251、人神經(jīng)癌細(xì)胞sf268、人結(jié)腸癌細(xì)胞ht29、人乳腺癌細(xì)胞mcf-7、人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞nci-h460。
2、實(shí)驗(yàn)方法
分別在常氧和低氧條件下，設(shè)置洛莫司汀(ccnu)組(陽性對照組)、ccnu+化合物1、ccnu+化合物2、ccnu+化合物3、ccnu+化合物4、ccnu+化合物5和ccnu+化合物6(實(shí)驗(yàn)組)，同時設(shè)置空白對照組。
六種腫瘤細(xì)胞分別以1000/孔接種96孔板，在37℃，5％co2培養(yǎng)24小時后，對照組以系列濃度(0.05mm、0.1mm、0.2mm、0.4mm、0.6mm、0.8mm、1.0mm、1.2mm)的ccnu處理細(xì)胞24h；實(shí)驗(yàn)組分別經(jīng)化合物1、2、3、4、5和6處理細(xì)胞3h后，換一系列濃度的ccnu處理細(xì)胞24h(常氧條件下氧氣含量約為21％，低氧條件下氧氣含量約為1％)。然后，向每孔中加10μl含有cck-8的培養(yǎng)基，作用4小時。最后，在450nm處測定吸光度值，按以下公式計(jì)算細(xì)胞活性，并通過回歸分析計(jì)算半數(shù)抑制率ic50。
細(xì)胞存活率(％)＝(a實(shí)驗(yàn)組–a空白組)/(a對照組–a空白組)×100
a實(shí)驗(yàn)組為具有腫瘤細(xì)胞、cck-8和藥物(ccnu+化合物1/2/3/4/5/6)的孔的吸光度；
a空白組為只有培養(yǎng)基和cck-8，沒有腫瘤細(xì)胞和藥物的孔的吸光度；
a對照組為具有腫瘤細(xì)胞和cck-8，沒有藥物的孔的吸光度。
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：見表1
表1腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制率(ic50,μm)
表1結(jié)果顯示，在常氧環(huán)境下，與對照組ccnu組相比，實(shí)驗(yàn)組中化合物1-6與ccnu聯(lián)合用藥對六種腫瘤細(xì)胞的ic50值相近，表明在常氧條件下，化合物1-6與ccnu聯(lián)合用藥對六種腫瘤細(xì)胞中agt活性的抑制作用很弱。
然而在氧濃度為1～5μmol/l低氧環(huán)境下，與對照組ccnu組相比，實(shí)驗(yàn)組中化合物1-6與ccnu聯(lián)合用藥對六種腫瘤細(xì)胞的ic50值顯著降低，表明化合物1、2、3、4、5和6在低氧環(huán)境下能夠特異性地被還原成o6-芐基鳥嘌呤衍生物作為agt抑制劑，降低了腫瘤細(xì)胞中agt的活性，從而有效增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞對ccnu的敏感性，提高了藥物對腫瘤細(xì)胞的抑制活性。
對比常氧和低氧條件下化合物1、2、3、4、5和6的ic50值，可以看出低氧條件比常氧條件下六種化合物對六種腫瘤細(xì)胞的agt抑制活性顯著提高，表明化合物1、2、3、4、5和6能夠特異性地在低氧條件下被激活，且這六種化合物被還原后生成的o6-芐基鳥嘌呤衍生物是一種活性較高的agt抑制劑。因此，化合物1、2、3、4、5和6能夠靶向作用于處于低氧狀態(tài)下的腫瘤細(xì)胞，避免了影響正常細(xì)胞中的agt活性，從而達(dá)到化療藥物靶向作用于腫瘤細(xì)胞的目的。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的化合物在低氧條件下具有agt抑制活性，在常氧條件下無明顯抑制作用。與現(xiàn)有的agt抑制劑o6-芐基鳥嘌呤相比，化合物1、2、3、4、5和6具有顯著的低氧靶向性，以及更好的水溶性和agt抑制活性。因此，本發(fā)明提供的化合物可用于作為烷化劑類化療藥物的輔藥，靶向性地作用于腫瘤細(xì)胞，從而提高了腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性，增強(qiáng)了烷化劑類藥物的化療效果。
雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。