本發(fā)明屬于醫(yī)藥中間體的合成技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種具有抗細(xì)菌活性的新型速激肽拮抗劑的制備方法。
背景技術(shù)：
感覺神經(jīng)末梢受刺激可釋放速激肽，速激肽通過其受體在體內(nèi)發(fā)揮許多重要的生理和病理作用。近年來，隨著對(duì)其研究的深入，已證實(shí)速激肽與哮喘的關(guān)系密切，其受體拮抗劑的研究也取得較大的進(jìn)展，在哮喘防治方面展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。速激肽是一類含有10個(gè)或11個(gè)氨基酸的肽類物質(zhì)，存在于呼吸道的無髓感覺神經(jīng)纖維中，局部釋放后可激活特異性受體迅速產(chǎn)生收縮氣道平滑肌等生物效應(yīng)。常見的速激肽類物質(zhì)包括p物質(zhì)、神經(jīng)激肽a和神經(jīng)激肽b，這三種物質(zhì)都是作用強(qiáng)烈的內(nèi)源性氣道收縮劑，對(duì)動(dòng)物及人呼吸道平滑肌產(chǎn)生濃度依賴性收縮效應(yīng)。速激肽可強(qiáng)烈刺激離體的動(dòng)物和人氣道黏膜，使其分泌增強(qiáng)，哮喘時(shí)，呼吸道黏液分泌增多、氣道慢性炎癥的發(fā)生等病理反應(yīng)均與速激肽的作用直接相關(guān)。
速激肽受體拮抗劑的研究始于1965年。第一代拮抗劑主要是一些非選擇性多肽，對(duì)多種速激肽受體無選擇性。第二代拮抗劑在第一代拮抗劑的基礎(chǔ)上，通過縮短肽鏈并進(jìn)行相應(yīng)的化學(xué)修飾得到一些高親和力、選擇性的短肽和環(huán)肽拮抗劑，對(duì)多種速激肽受體有選擇性阻斷作用，神經(jīng)毒性也較小，但由于仍為肽類，在體內(nèi)易被肽酶分解，生物利用度低。第三代拮抗劑為一些非肽類化合物，具有高親和力和高選擇性優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明根據(jù)目前已有的第三代速激肽拮抗劑藥物分子，對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了優(yōu)化得到了一系列新型的第三代速激肽拮抗劑藥物分子，發(fā)現(xiàn)所合成的新型藥物分子還具有抗細(xì)菌活性，并對(duì)其進(jìn)行了大腸桿菌和金黃葡萄球菌活性測試。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供了一種合成方法簡單且分子結(jié)構(gòu)新穎的具有抗細(xì)菌活性的新型速激肽拮抗劑的制備方法。
本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題采用如下技術(shù)方案，具有抗細(xì)菌活性的速激肽拮抗劑的制備方法，其特征在于具體步驟為：
a、3,4-二氯苯甲醛和丙酮在固體酸性催化劑hzsm-5的作用下發(fā)生羥醛縮合反應(yīng)得到3-丁烯-(3,4-二氯苯基)-2-酮；
b、3-丁烯-(3,4-二氯苯基)-2-酮在加成定位催化劑碘化銀的作用下與氨氣發(fā)生加成反應(yīng)得到3-氨基丁烷-(3,4-二氯苯基)-2-酮；
c、3-氨基丁烷-(3,4-二氯苯基)-2-酮與(boc)2o反應(yīng)對(duì)氨基進(jìn)行保護(hù)得到3-boc-氨基丁烷-(3,4-二氯苯基)-2-酮；
d、3-boc-氨基丁烷-(3,4-二氯苯基)-2-酮與3,5-二(三氟甲基)苯甲醛在licl和dipea的作用下反應(yīng)得到1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羰基-4-烯-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷；
e、1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羰基-4-烯-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷在正丁基氫化錫的作用下進(jìn)行烯烴加氫反應(yīng)得到1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羰基-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷；
f、1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羰基-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷在羰基還原催化劑nabh(oac)3的作用下發(fā)生羰基還原加氫反應(yīng)得到1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羥基-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷；
g、1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羥基-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷在固體酸性催化劑so2-4/tio2/al2o3的作用下發(fā)生脫水反應(yīng)得到1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-烯-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷；
h、1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-烯-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷與tmsn3在催化劑cui的作用下發(fā)生click反應(yīng)得到1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3,4-(4,5-二氫-1,2,3-三氮唑)-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷；
i、1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3,4-(4,5-二氫-1,2,3-三氮唑)-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷脫去boc基團(tuán)得到1-(3,4-二氯苯基)-2-氨基-3,4-(4,5-二氫-1,2,3-三氮唑)-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷鹽酸鹽；
j、1-(3,4-二氯苯基)-2-氨基-3,4-(4,5-二氫-1,2,3-三氮唑)-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷鹽酸鹽與羧基化合物反應(yīng)得到1-(3,4-二氯苯基)-2-酰胺基-3,4-(4,5-二氫-1,2,3-三氮唑)-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷類化合物。
進(jìn)一步限定，步驟a的具體過程為：在反應(yīng)容器中將3,4-二氯苯甲醛加入到丙酮中，再加入固體酸性催化劑hzsm-5，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至回流，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，降至室溫，抽濾反應(yīng)液，在真空條件下蒸除未反應(yīng)完的丙酮得到3-丁烯-(3,4-二氯苯基)-2-酮。
進(jìn)一步限定，步驟b的具體過程為：將3-丁烯-(3,4-二氯苯基)-2-酮加入到高壓反應(yīng)釜中，再加入溶劑環(huán)己烷和加成定位催化劑碘化銀，然后向反應(yīng)釜中通入液氨，使反應(yīng)釜中的壓力達(dá)到0.2mpa，升溫至50℃進(jìn)行反應(yīng)，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，排出未反應(yīng)完的氨氣，真空蒸除溶劑，加入純凈水，用氯仿萃取反應(yīng)液多次，合并有機(jī)相后蒸除氯仿得到3-氨基丁烷-(3,4-二氯苯基)-2-酮。
進(jìn)一步限定，步驟c的具體過程為：在反應(yīng)容器中將3-氨基丁烷-(3,4-二氯苯基)-2-酮加入到水中，再加入naoh，反應(yīng)在室溫下進(jìn)行，然后滴加叔胺丁基醇，滴加完畢后加入(boc)2o，在室溫下攪拌過夜，反應(yīng)結(jié)束后，用二氯甲烷萃取反應(yīng)液，然后合并有機(jī)相，濃縮得到3-boc-氨基丁烷-(3,4-二氯苯基)-2-酮。
進(jìn)一步限定，步驟d的具體過程為：在反應(yīng)容器中將3-boc-氨基丁烷-(3,4-二氯苯基)-2-酮和真空干燥過的licl加入到乙腈中，然后加入n,n-二異丙基乙胺，反應(yīng)在室溫下進(jìn)行，然后加入溶解在四氫呋喃中的3,5-二(三氟甲基)苯甲醛，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全后加入水，然后用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相并用無水na2so4干燥，減壓濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱色譜分離得到1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羰基-4-烯-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷。
進(jìn)一步限定，步驟e的具體過程為：在反應(yīng)容器中將1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羰基-4-烯-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷溶解在甲苯中，然后加入正丁基氫化錫，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流反應(yīng)，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全后加入水，然后用氯仿萃取，合并有機(jī)相并用無水na2so4干燥，反應(yīng)液濃縮，經(jīng)硅膠柱色譜分離得到1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羰基-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷。
進(jìn)一步限定，步驟f的具體過程為：在反應(yīng)容器中將1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羰基-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷加入到甲醇中，再加入羰基還原催化劑nabh(oac)3，氮?dú)獗Ｗo(hù)反應(yīng)體系，加熱至回流反應(yīng)，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全后蒸除甲醇，加入二氯甲烷，用碳酸氫鈉飽和溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)液的ph為中性，分出有機(jī)相，蒸除溶劑后得到1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羥基-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷。
進(jìn)一步限定，步驟g的具體過程為：在反應(yīng)容器中將1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羥基-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷、固體酸性催化劑so2-4/tio2/al2o3和沸石加入到甲苯中，升溫至回流反應(yīng)，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完后蒸除反應(yīng)溶劑甲苯，再加入飽和nacl溶液，用氯仿萃取反應(yīng)液多次，合并有機(jī)相，用無水氯化鈣干燥，蒸除氯仿后得到1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-烯-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷。
進(jìn)一步限定，步驟h的具體過程為：在反應(yīng)容器中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下將1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-烯-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷、tmsn3和cui加入到體積比為4:1的dmf/meoh混合溶液中，反應(yīng)液加熱至80℃反應(yīng)，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，蒸除反應(yīng)溶劑后經(jīng)過硅膠柱層析分離提純得到1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3,4-(4,5-二氫-1,2,3-三氮唑)-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷。
進(jìn)一步限定，步驟i的具體過程為：在反應(yīng)容器中將1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3,4-(4,5-二氫-1,2,3-三氮唑)-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷溶解在hcl/ch3oh混合溶液中，在室溫下攪拌反應(yīng)2h，減壓濃縮除去溶劑得到褐色固體1-(3,4-二氯苯基)-2-氨基-3,4-(4,5-二氫-1,2,3-三氮唑)-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷鹽酸鹽。
進(jìn)一步限定，步驟j的具體過程為：在反應(yīng)容器中將1-(3,4-二氯苯基)-2-氨基-3,4-(4,5-二氫-1,2,3-三氮唑)-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷鹽酸鹽加入到二氯甲烷中，再加入tea和tbtu，在室溫下攪拌1h后滴加溶有羧基化合物的二氯甲烷溶液，繼續(xù)室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全后向反應(yīng)液中加入飽和氯化鈉溶液洗滌反應(yīng)液，用二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，再用飽和氯化鈉溶液洗滌有機(jī)相，蒸除有機(jī)相中的溶劑得到1-(3,4-二氯苯基)-2-酰胺基-3,4-(1,2,3-三氮唑)-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷類化合物粗品，粗品用體積比為3:1的甲醇與水的混合液重結(jié)晶得到1-(3,4-二氯苯基)-2-酰胺基-3,4-(4,5-二氫-1,2,3-三氮唑)-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷類化合物純品。
本發(fā)明所述的具有抗細(xì)菌活性的新型速激肽拮抗劑的制備方法，其特征在于制備過程中的具體合成路線為：
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：(1)該反應(yīng)所得的藥物分子化合物化合物均是文獻(xiàn)尚未報(bào)道過的新產(chǎn)物；(2)所得產(chǎn)物通過活性測定，具有顯著的抗細(xì)菌活性，對(duì)金黃色葡萄球菌(革蘭氏陽性菌)和大腸桿菌(革蘭氏陰性菌)有良好的抑制作用；(3)起始原料、催化劑和溶劑均為已工業(yè)化的化學(xué)品，價(jià)廉易得；(4)制備過程工藝簡單，易于控制，目標(biāo)產(chǎn)物收率高且重復(fù)性好。
具體實(shí)施方式
以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容做進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不應(yīng)該將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1
在反應(yīng)瓶中，把3,4-二氯苯甲醛17g加入到丙酮200ml中，再加入固體酸性催化劑hzsm-55g，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，加熱至回流反應(yīng)一段時(shí)間，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，降至室溫，抽濾反應(yīng)液，在真空條件下蒸除未反應(yīng)完的丙酮得到產(chǎn)物3-丁烯-(3,4-二氯苯基)-2-酮15g，固體酸性催化劑hzsm-5可以回收套用；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.93(d,j＝12.0hz,1h),7.66(d,j＝8.0hz,1h),7.34(s,1h),7.29(s,1h),6.68(s,1h),2.86(s,3h)。
實(shí)施例2
把3-丁烯-(3,4-二氯苯基)-2-酮20g加入到高壓反應(yīng)釜中，再加入環(huán)己烷300ml和加成定位催化劑碘化銀4g，反應(yīng)釜中通入液氨，使反應(yīng)釜中的壓力達(dá)到0.2mpa，升溫至50℃反應(yīng)一段時(shí)間，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，緩慢排出未反應(yīng)完的氨氣，真空蒸除溶劑，加入一定量的純凈水，用氯仿萃取反應(yīng)液多次，合并有機(jī)相后蒸除氯仿得到3-氨基丁烷-(3,4-二氯苯基)-2-酮17g；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:7.71(d,j＝4.0hz,1h),7.42(d,j＝4.0hz,1h),7.11(s,1h),5.18(s,2h),3.89(s,1h),3.21-3.17(m,2h),2.23(s,3h)。
實(shí)施例3
在反應(yīng)瓶中，把3-氨基丁烷-(3,4-二氯苯基)-2-酮23g加入到水300ml中，然后加入naoh10g，反應(yīng)在室溫下反應(yīng)一段時(shí)間，然后滴加叔胺丁基醇10ml，滴加完畢后加入(boc)2o20g，在室溫下過夜攪拌。反應(yīng)結(jié)束后，用二氯甲烷100ml萃取反應(yīng)液三次，然后合并有機(jī)相，濃縮得到3-boc-氨基丁烷-(3,4-二氯苯基)-2-酮21g；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:7.71(d,j＝4.0hz,1h),7.42(d,j＝4.0hz,1h),7.11(s,1h),5.18(s,2h),3.89(s,1h),3.21-3.17(m,2h),2.23(s,3h)。
實(shí)施例4
在反應(yīng)瓶中，把3-boc-氨基丁烷-(3,4-二氯苯基)-2-酮33g和真空干燥過的licl5g加入到乙腈300ml中，然后加入n,n-二異丙基乙胺50ml，反應(yīng)在室溫下攪拌1h后加入溶解在四氫呋喃中的3,5-二(三氟甲基)苯甲醛30g，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全后加入一定量的水，然后用乙酸乙酯200ml萃取三次，合并有機(jī)相并用無水na2so4干燥，減壓濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱色譜(體積比石油醚/乙酸乙酯＝20/1～10/1)分離得到1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羰基-4-烯-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷49g；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:8.13(s,1h),7.81-7.76(m,2h),7.43(d,j＝4.0hz,1h),5.18(s,2h),4.62(s,1h),3.21-3.17(m,2h),2.17(s,3h),1.39(s,9h)。
實(shí)施例5
在反應(yīng)瓶中，把1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羰基-4-烯-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷10g溶解在甲苯20ml中，然后加入正丁基氫化錫7g，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流反應(yīng)，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全后加入一定量的水，然后用氯仿100ml萃取兩次，合并有機(jī)相并用無水na2so4干燥，反應(yīng)液濃縮，經(jīng)硅膠柱色譜(體積比石油醚/乙酸乙酯＝20/1～10/1)得到1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羰基-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷6g；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:8.11(s,1h),7.81-7.76(m,2h),7.62(s,1h),7.57(d,j＝4.0hz,1h),7.51-7.47(m,3h),6.88(s,1h),3.21-3.18(m,1h),2.83-2.78(m,4h),1.37(s,9h)。
實(shí)施例6
在反應(yīng)瓶中，把1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羰基-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷55g加入到甲醇300ml中，再加入羰基還原催化劑nabh(oac)320g，氮?dú)獗Ｗo(hù)反應(yīng)體系，加熱至回流反應(yīng)，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全后蒸除甲醇，加入二氯甲烷200ml，用碳酸氫鈉飽和溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)液的ph為中性，分出有機(jī)相，蒸除溶劑后得到1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羥基-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷43g；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:8.07(s,1h),7.83-7.76(m,2h),7.61-7.58(m,3h),7.14(s,1h),4.21(s,1h),3.81(m,1h),2.92(s,2h),2.67-2.65(m,4h),2.55-2.53(m,2h),1.77(s,2h),1.29(s,9h)。
實(shí)施例7
在反應(yīng)瓶中，把1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-羥基-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷50g、固體酸性催化劑so2-4/tio2/al2o35g和沸石10g加入到甲苯200ml中，緩慢升溫至回流反應(yīng)，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完后蒸除反應(yīng)溶劑甲苯，再加入一定量的飽和nacl溶液，用氯仿100ml萃取反應(yīng)液三次，合并有機(jī)相，用無水氯化鈣干燥，蒸除氯仿后得到1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-烯-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷42g；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:8.07(s,1h),7.83-7.76(m,2h),7.61-7.58(m,3h),7.14(s,1h),5.54(d,j＝12.0hz,1h),4.66(d,j＝12.0hz,1h),3.81(m,1h),3.43(s,2h),2.55-2.53(m,2h),1.29(s,9h)。
實(shí)施例8
在反應(yīng)瓶中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，把1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3-烯-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷55g、tmsn312g和cui5g加入到dmf/meoh(體積比4/1)的混合溶液300ml中，反應(yīng)液加熱到80℃，攪拌反應(yīng)一段時(shí)間后tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，蒸除反應(yīng)溶劑后經(jīng)過硅膠柱層析分離提純得到化合物1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3,4-(4,5-二氫-1,2,3-三氮唑)-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷46g；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:8.02(s,1h),7.84-7.75(m,3h),7.59-7.51(m,3h),7.11(s,1h),4.20(d,j＝12.0hz,1h),4.11-4.09(m,2h),2.92(s,2h),2.55-2.53(m,2h),1.27(s,9h)。
實(shí)施例9
在反應(yīng)瓶中，把1-(3,4-二氯苯基)-2-boc-氨基-3,4-(4,5-二氫-1,2,3-三氮唑)-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷58g溶解在hcl/ch3oh1000ml中，在室溫下攪拌反應(yīng)2h，減壓濃縮除去溶劑得到褐色固體1-(3,4-二氯苯基)-2-氨基-3,4-(4,5-二氫-1,2,3-三氮唑)-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷鹽酸鹽50g；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:8.08(s,1h),7.82-7.77(m,3h),7.62-7.60(m,2h),7.33-7.31(m,1h),7.11(d,j＝4.0hz,1h),5.12(s,2h),4.20(d,j＝12.0hz,1h),4.11-4.09(m,2h),2.92(s,2h),2.55-2.53(m,2h)。
實(shí)施例10
在反應(yīng)瓶中，把1-(3,4-二氯苯基)-2-氨基-3,4-(4,5-二氫-1,2,3-三氮唑)-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷鹽酸鹽20g加入到二氯甲烷300ml中，再加入tea10g和tbtu10g，在室溫下攪拌1h后滴加溶有苯甲酸12g的二氯甲烷溶液100ml，繼續(xù)室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全后向反應(yīng)液中加入飽和氯化鈉溶液6000ml洗滌反應(yīng)液，用二氯甲烷2000ml*3萃取，合并有機(jī)相，再用飽和氯化鈉溶液1000ml洗滌有機(jī)相一次，蒸除有機(jī)相中溶劑得到1-(3,4-二氯苯基)-2-酰胺基-3,4-(1,2,3-三氮唑)-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷類化合物粗品，粗品用體積比為3:1的甲醇與水的混合液1000ml重結(jié)晶得到1-(3,4-二氯苯基)-2-酰胺基苯-3,4-(4,5-二氫-1,2,3-三氮唑)-5-(3,5-雙三氟甲基苯基)-戊烷純品26g；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:8.17(s,1h),8.02-7.96(m,4h),7.64-7.59(m,3h),7.41-7.37(m,3h),7.12-7.11(m,1h),6.23(s,1h),5.15(s,2h),4.20(d,j＝12.0hz,1h),4.11-4.09(m,1h),2.93(s,1h),2.55-2.53(m,2h)。
實(shí)施例11
生物活性測定
本實(shí)施例選用大腸桿菌(革蘭氏陰性短桿菌)和金黃葡萄糖球菌(革蘭氏陽性菌)作為抗菌活性測試對(duì)象。首先是制備液體培養(yǎng)基(將蛋白胨1g、酵母膏0.5g、氯化鈉1g、蒸餾水100ml置于250ml錐形瓶中，放在電爐上邊攪拌邊加熱，待混合澄清均勻時(shí)，停止加熱，將瓶口用紗布和牛皮紙依次封口待用)和固體培養(yǎng)基(將蛋白胨1g、酵母膏0.5g、氯化鈉1g、瓊脂2g、蒸餾水100ml置于250ml錐形瓶中，放在電爐上邊攪拌邊加熱，待混合澄清均勻時(shí)，停止加熱，將瓶口用紗布和牛皮紙依次封口待用)；然后通過高壓滅菌鍋對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理。其次是菌液的制備，把大腸桿菌和金黃葡萄糖球菌菌種活化后，用移液槍移取100μl活化后的菌液，置于滅完菌的100ml蒸餾水中混合均勻。最后通過紫外燈對(duì)平板進(jìn)行滅菌，然后趁熱將培養(yǎng)基快速倒入平板中，厚度約0.15cm，均勻鋪平，靜置，讓其緩慢凝固，凝固后放入37℃的保溫箱中培養(yǎng)一天做無雜菌檢測。
用dmf分別配置所合成的目標(biāo)化合物及對(duì)照化合物溶液，置于容量瓶中待用。用打孔器在濾紙上打孔，孔徑為5mm，然后將濾紙片滅菌后浸泡在濃度為10mg/ml的樣品溶液中待用。
在超凈工作臺(tái)上，點(diǎn)燃酒精燈，用移液槍取10μl稀釋的培養(yǎng)液加到固體培養(yǎng)基表面，并涂布均勻。用無菌鑷子取浸泡過的園濾紙片鋪到培養(yǎng)基表面。每個(gè)平板放4片，進(jìn)行3次平行實(shí)驗(yàn)，其中一片進(jìn)行空白對(duì)照。將放有藥片的平板置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h，觀察現(xiàn)象。通過瓊脂培養(yǎng)基上分別出現(xiàn)不同大小的透明圓環(huán)-抑菌圈，通過測量抑菌圈直徑就可以看出各樣品的抑菌活性大小。
我們發(fā)現(xiàn)該類化合物對(duì)金黃葡萄球菌的抑制作用普遍優(yōu)于對(duì)大腸桿菌的抑制作用。
以上實(shí)施例描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征及優(yōu)點(diǎn)，本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明原理的范圍下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)均落入本發(fā)明保護(hù)的范圍內(nèi)。