異吲哚硼雜熒光染料及其制備方法和應(yīng)用與流程

本發(fā)明涉及熒光染料領(lǐng)域，具體地，涉及異吲哚硼雜熒光染料及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

近紅外熒光染料由于具有優(yōu)異的性能在生物成像、光動(dòng)力療法光伏和光電子學(xué)中有著廣泛的應(yīng)用，近年來受到人們的廣泛關(guān)注(chem.rev.,2012,112,4391)。例如，近紅外熒光染料可用于生物成像，具有背景干擾低、樣品穿透性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，能夠?qū)崿F(xiàn)對一些生物樣品如活體組織的細(xì)胞和亞細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)原位在線無損傷檢測，并可用于監(jiān)控活細(xì)胞與活體中的生物分子以及它們的運(yùn)動(dòng)過程，在化學(xué)生物學(xué)和臨床檢驗(yàn)診斷等方面顯示了較好的應(yīng)用前景。目前真正適合產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用的具有摩爾消光系數(shù)大、熒光量子效率、光穩(wěn)定性好并且可以進(jìn)行修飾衍生調(diào)控吸收發(fā)波段等諸多優(yōu)點(diǎn)于一身的近紅外熒光染料分子種類非常有限。因此，設(shè)計(jì)開發(fā)具有實(shí)用價(jià)值的功能性近紅外熒光染料分子具有十分重要的意義。

1999，burgess課題組首次提出合成了n2o2-bodipys，與bodipy相比n2o2-bodipys中的芳環(huán)不能圍繞芳基-吡咯鍵旋轉(zhuǎn)，約束之后導(dǎo)致環(huán)的剛性以及共軛增大，所以該類染料吸收發(fā)射紅移的同時(shí)熒光也得到增強(qiáng)(chem.commun.,1999,1889.)。

而目前，大多數(shù)的的異吲哚硼雜近紅外熒光染料的制備過程繁瑣、方法復(fù)雜，且制得的異吲哚硼雜近紅外熒光染料的光譜選擇性差，量子產(chǎn)率低且水溶性不好，不利于更進(jìn)一步的應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種異吲哚硼雜熒光染料及其制備方法和應(yīng)用，本發(fā)明提供的制備方法制得的異吲哚硼雜熒光染料不僅有良好的光譜選擇性、優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和溶解性，而且可以通過腦文格縮合反應(yīng)進(jìn)行衍生，由于成鹽之后具有良好的水溶性和滲入細(xì)胞的能力，同時(shí)還可以應(yīng)用于定位線粒體的成像。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種異吲哚硼雜熒光染料，所述異吲哚硼雜熒光染料的結(jié)構(gòu)如式(i)所示，

其中，r1、r2、r3、r4各自獨(dú)立為氫、c1-c12的烷基、鹵素或c1-c12的烷氧基；

r5、r6、r7、r8各自獨(dú)立為氫、c1-c12的烷基、鹵素、c1-c12的烷氧基、環(huán)烷基或芳基；

r9為氫、烯基或c1-c12的烷基；

r10、r11各自獨(dú)立為氫、c1-c12的烷基、鹵素或烯基；

r12為氫、c1-c12的烷基、鹵素、烯基或c1-c12的烷氧基；

r13為c1-c12的烷基，x為鹵素。

本發(fā)明還提供了一種上述異吲哚硼雜熒光染料制備方法，其中，所述制備方法包括如下步驟：在溶劑存在下，將鹵代烴(r13-x)與如式(ii)所示結(jié)構(gòu)的的化合物按照1：5-10的摩爾比在20-25℃、黑暗中攪拌12-15h、純化，即得到如式(i)所示的異吲哚硼雜熒光染料；

其中，r1、r2、r3、r4各自獨(dú)立為氫、c1-c12的烷基、鹵素或c1-c12的烷氧基；

r5、r6、r7、r8各自獨(dú)立為氫、c1-c12的烷基、鹵素、c1-c12的烷氧基、環(huán)烷基或芳基；

r9為氫、烯基或c1-c12的烷基；

r10、r11各自獨(dú)立為氫、c1-c12的烷基、鹵素或烯基；

r12為氫、c1-c12的烷基、鹵素、烯基或c1-c12的烷氧基；

所述r13為c1-c12的烷基，x為鹵素。

本發(fā)明還提供了一種上述異吲哚硼雜熒光染料的在熒光標(biāo)記和生物成像中的應(yīng)用。

通過上述技術(shù)方案，本發(fā)明中制得的異吲哚硼雜熒光染料不僅有良好的光譜選擇性、優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和溶解性，而且可以通過腦文格縮合反應(yīng)進(jìn)行衍生，由于成鹽之后具有良好的水溶性和滲入細(xì)胞的能力，同時(shí)還可以應(yīng)用于定位線粒體的成像。

本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的具體實(shí)施方式部分予以詳細(xì)說明。

附圖說明

附圖是用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與下面的具體實(shí)施方式一起用于解釋本發(fā)明，但并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。在附圖中：

圖1是檢測例2中的紫外吸收光譜圖；

圖2是檢測例3中的熒光發(fā)射光譜圖；

圖3是應(yīng)用例1中的細(xì)胞成像圖。

具體實(shí)施方式

以下對本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體實(shí)施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。

本發(fā)明中提供了異吲哚硼雜熒光染料，所述異吲哚硼雜熒光染料的結(jié)構(gòu)如式(i)所示，

其中，r1、r2、r3、r4各自獨(dú)立為氫、c1-c12的烷基、鹵素或c1-c12的烷氧基；

r5、r6、r7、r8各自獨(dú)立為氫、c1-c12的烷基、鹵素、c1-c12的烷氧基、環(huán)烷基或芳基；

r9為氫、烯基或c1-c12的烷基；

r10、r11各自獨(dú)立為氫、c1-c12的烷基、鹵素或烯基；

r12為氫、c1-c12的烷基、鹵素、烯基或c1-c12的烷氧基；

r13為c1-c12的烷基，x為鹵素。

本發(fā)明中，所述基團(tuán)r1-r13和x均可以各自獨(dú)立地在很寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高反應(yīng)物的轉(zhuǎn)換率以及所制得產(chǎn)物的水溶性，優(yōu)選地，所述r1、r2、r3、r4各自獨(dú)立為氫、甲基、乙基、丙基、叔丁基、氯、溴、碘、甲氧基或乙氧基；

r5、r6、r7、r8各自獨(dú)立為氫、甲基、乙基、丙基、叔丁基、正庚基、氟、氯、溴、碘、甲氧基、乙氧基、環(huán)戊基、環(huán)己基或苯基；

r9為氫、甲基、乙基、丙基、叔丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、乙烯基；

r10、r11各自獨(dú)立為氫、甲基、乙基、丙基、氯、溴、碘或4-甲基苯乙烯基；

r12為氫、甲基、乙基、丙基、氟、氯、溴、碘、環(huán)戊基、環(huán)己基、4-甲基苯乙烯基或4-甲氧基苯乙烯基；

r13為c1-c7的烷基，x為氯、溴、碘。

在本發(fā)明的一種具體的實(shí)施方式中，為了進(jìn)一步提高所制得異吲哚硼雜熒光染料的水溶性和光譜選擇性，優(yōu)選地，所述r1-r9為氫，r10為甲基、r11為乙基，r12為甲基或4-甲氧基苯乙烯基，r13為甲基，x為碘。

在另一種具體的實(shí)施方式中，所述的異吲哚硼雜熒光染料的具體結(jié)構(gòu)如式(g)或(i)所示；

本發(fā)明還提供了一種上述異吲哚硼雜熒光染料的制備方法，其中，所述制備方法包括如下步驟：

在溶劑存在下，將鹵代烴(r13-x)與如式(ii)所示結(jié)構(gòu)的的化合物按照1：5-10的摩爾比在20-25℃、黑暗中攪拌12-15h、純化，即得到如式(i)所示的異吲哚硼雜熒光染料；

其中，r1、r2、r3、r4各自獨(dú)立為氫、c1-c12的烷基、鹵素或c1-c12的烷氧基；

r5、r6、r7、r8各自獨(dú)立為氫、c1-c12的烷基、鹵素、c1-c12的烷氧基、環(huán)烷基或芳基；

r9為氫、烯基或c1-c12的烷基；

r10、r11各自獨(dú)立為氫、c1-c12的烷基、鹵素或烯基；

r12為氫、c1-c12的烷基、鹵素、烯基或c1-c12的烷氧基；

所述r13為c1-c12的烷基，x為鹵素。

本發(fā)明提供的制備方法中還包括了化合物(ii)的制備方法：

1)在溶劑存在下，將如式(ii-1)所示結(jié)構(gòu)的化合物與如式(ii-2)所示結(jié)構(gòu)的化合物進(jìn)行第一接觸反應(yīng)得到第一產(chǎn)物；

2)在溶劑存在下，所所述第一產(chǎn)物中添加4-吡啶硼酸進(jìn)行第二接觸反應(yīng)，得到如式(ii)所示結(jié)構(gòu)的化合物；

在上述的制備方法中，所述式(ii)、(ii-1)和(ii-2)中的各基團(tuán)和x均可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了進(jìn)一步提高各步驟產(chǎn)物的產(chǎn)率以及制得的異吲哚硼雜熒光染料的水溶性和光譜選擇性，優(yōu)選地，所述r1、r2、r3、r4各自獨(dú)立為氫、甲基、乙基、丙基、叔丁基、氯、溴、碘、甲氧基或乙氧基；

r5、r6、r7、r8各自獨(dú)立為氫、甲基、乙基、丙基、叔丁基、正庚基、氟、氯、溴、碘、甲氧基、乙氧基、環(huán)戊基、環(huán)己基或苯基；

r9為氫、甲基、乙基、丙基、叔丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、乙烯基；

r10、r11各自獨(dú)立為氫、甲基、乙基、丙基、氯、溴、碘或4-甲基苯乙烯基；

r12為氫、甲基、乙基、丙基、氟、氯、溴、碘、環(huán)戊基、環(huán)己基、4-甲基苯乙烯基或4-甲氧基苯乙烯基；

r13為c1-c7的烷基，x為氯、溴、碘；

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，為了提高所制得的異吲哚硼雜熒光染料的產(chǎn)率、水溶性和光譜選擇性，優(yōu)選地，所述r1-r9為氫，r10為甲基、r11為乙基，r12為甲基或4-甲氧基苯乙烯基；r13為甲基，x為碘。

在本發(fā)明的制備方法中，各原料的具體用量可以根據(jù)需要在寬的范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)節(jié)，但是為了提高反應(yīng)物的轉(zhuǎn)換率，促進(jìn)反應(yīng)進(jìn)行同時(shí)從降低成本的角度考慮，優(yōu)選地，相對于1mmol的如式(ii-1)所示的化合物，如式(ii-2)所示的化合物的用量為1.5-2.3mmol，所述4-吡啶硼酸的用量為2-10mmol；

本發(fā)明中各步驟所用的溶劑可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行，提高各步產(chǎn)物的產(chǎn)率，優(yōu)選地，所述溶劑各自獨(dú)立為二氯甲烷或甲苯。

在本發(fā)明中，所述第一接觸反應(yīng)和第二接觸反應(yīng)的條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得第一接觸反應(yīng)和第二接觸反應(yīng)能夠充分進(jìn)行，優(yōu)選地，所述第一接觸反應(yīng)的反應(yīng)條件為：反應(yīng)溫度為0-20℃，反應(yīng)時(shí)間為4-5h；

所述第二接觸反應(yīng)的反應(yīng)條件為：反應(yīng)溫度為20-120℃，反應(yīng)時(shí)間為2-12h。

另外，本發(fā)明還提供了一種上述異吲哚硼雜熒光染料在熒光標(biāo)記和生物成像中的應(yīng)用。

以下將通過實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。

以下實(shí)施例中，核磁測定采用瑞士bruker公司的av-300型核磁共振儀進(jìn)行；質(zhì)譜的測定采用美國儀器集團(tuán)的hplc/esi-ms型質(zhì)譜儀進(jìn)行；紫外光譜的測定采用日本島津公司的uv-2450型紫外/可見分光光度計(jì)進(jìn)行，熒光光譜的測定日本日立公司的·-4500fl熒光分光光度計(jì)進(jìn)行，相對熒光量子產(chǎn)率的測定采用熒光光譜的測定日本日立公司的f-4500fl熒光分光光度計(jì)進(jìn)行，單晶衍射的測定采用德國brukeraxs公司的smarapexⅱx-單晶衍射儀進(jìn)行，其中λmax表示最大吸收波長、εabs表示摩爾消光系數(shù)，λem^max表示最大熒光發(fā)射波長，φf表示相對熒光量子產(chǎn)率和stokes-shift表示stokes位移；相對熒光量子產(chǎn)率(φf)的測定是以其中相對熒光量子產(chǎn)率φf的測定以cv(φ＝0.54，在甲醇溶液中)為標(biāo)準(zhǔn)染料，根據(jù)公式φf＝φs*(ix/is)*(as/ax)*(nx/ns)²計(jì)算所得，其中φs為標(biāo)準(zhǔn)物cv的熒光量子產(chǎn)率，i為譜圖積分面積，a為吸光度，n為溶劑的折光率，下角標(biāo)s為標(biāo)準(zhǔn)物，x為待測物。

以下實(shí)施例中使用的原料：三氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯、乙二醇、無水乙醚、哌啶是上海凌峰化學(xué)試劑有限公司的產(chǎn)品，三乙胺、二氯甲烷、甲苯是國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司的產(chǎn)品，三溴氧磷、三氯氧磷、冰醋酸、是無錫亞盛化學(xué)試劑有限公司的產(chǎn)品，鹽酸是揚(yáng)州滬寶化學(xué)試劑有限公司的產(chǎn)品，氫氧化鈉是西隴化工股份有限公司的產(chǎn)品，鄰苯二甲酰亞胺、對甲氧基苯甲醛、甲基硼酸、苯硼酸、4-甲氧基苯硼酸和4-二甲基氨基苯硼酸是安耐吉化學(xué)公司的產(chǎn)品，4-吡啶硼酸、2-羥基-苯硼酸、2-萘硼酸和1-蒽硼酸是蘇州蘇凱路有限公司的產(chǎn)品。

制備例1

原料1-(3-溴-1h-異吲哚-1-亞基)-n,n-二甲基甲胺的制備：將1.5g(5.24mmol)pobr3置于于250ml圓底燒瓶中，加50ml二氯甲烷，冷卻至0℃，在攪拌下向溶液中滴加0.27ml(3.49mmol)dmf，5min內(nèi)滴完，然后將反應(yīng)置于20℃下攪拌0.5小時(shí)，冷卻至0℃，稱取1.0g(7.5mmol)異吲哚-1-酮用二氯甲烷溶解后置于恒壓滴液漏斗滴加到上述混合物中。滴加完成后移入60℃油浴中加熱回流，tlc點(diǎn)板。2.5h反應(yīng)完全，待冷卻至室溫加入100ml冰水，用碳酸鈉調(diào)節(jié)ph值至8，萃取，濃縮，過柱子，重結(jié)晶得淡黃色固體。

制備例2

原料(2-羥基苯基)-2h-異吲哚-1-甲醛的制備：稱取1-(3-溴-1h-異吲哚-1-亞基)-n,n-二甲基甲胺400mg(1.66mmol)，2-羥基苯硼酸331mg(3.5mmol)na2co3(1m,5ml)于100mlschlenk反應(yīng)器中，在三沖三放后在通氬氣的條件下加入pd(pph3)460mg,(0.05mmol)，再次三沖三放后，移至75℃油浴中加熱攪拌12h。冷卻至室溫后用水萃取，收集有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋蒸得黃色固體。用無水乙醇溶解后，加入飽和氫氧化鈉溶液加熱回流3h。除去乙醇后，用水與乙酸乙酯萃取，用稀hcl(3m)中和至ph值為7，收集有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋蒸，重結(jié)晶得黃色固體

(2-羥基苯基)-2h-異吲哚-1-甲醛的核磁氫譜檢測結(jié)果如下：¹hnmr(300mhz,d6-dmso)δ13.39(s,1h),10.18(s,1h),9.85(s,1h),8.12(s,1h),7.77(d,j＝8.3hz,1h),7.56(d,j＝7.3hz,1h),7.34-7.25(m,2h),7.17-7.13(m,1h),7.03(d,j＝7.9hz,1h),6.98-6.93(m,1h).

制備例3

如式(ii’)所示化合物的制備：

稱取(2-羥基苯基)-2h-異吲哚-1-甲醛30mg(0.13mmol)用20ml二氯甲烷溶解，接著向溶液中加入2,4-二甲基-3-乙基吡咯32mg(0.26mmol)。在冰浴(溫度為0℃)條件下加入稀釋過的pocl30.01ml(0.13mmol)，恢復(fù)至25℃并攪拌4小時(shí)后通過硅膠柱色譜法提純制得第一反應(yīng)產(chǎn)物；用甲苯溶解第一產(chǎn)物后并加入4-吡啶硼酸160mg(1.3mmol)、回流2小時(shí)。蒸發(fā)溶劑后，殘余產(chǎn)物通過硅膠柱色譜法(洗脫液：乙酸乙酯/石油醚)純化，得到藍(lán)色粉末即為式(ii’)所示結(jié)構(gòu)的異吲哚硼雜熒光染料(重量產(chǎn)率為49％)。

如式(ii’)所示結(jié)構(gòu)的異吲哚硼雜熒光染料的的核磁氫譜和核磁碳譜參數(shù)如下所述：

¹hnmr(300mhz,d6-dmso)δ8.36(d,j＝8.3hz,1h),8.25(d,j＝8.0hz,1h),8.18(d,j＝5.8hz,4h),7.63(t,j＝7.5hz,1h),7.48-7.66(m,2h),7.30(d,j＝8.2hz,1h),7.05(t,j＝7.5hz,1h),6.96(d,j＝5.3hz,2h),2.43(s,3h),2.37(q,j＝7.0hz,2h),2.29(s,3h),1.00(t,j＝7.4hz,3h).¹³cnmr(125mhz,d6-dmso)δ155.9,150.3,148.4,142.4,135.0,134.6,133.8,131.8,130.2,129.4,127.7,126.9,126.3,126.2,125.5,123.7,120.7,120.0,118.3,118.2,16.9,14.8,12.9,9.4.hrms(apci)calcd.forc28h24bn3o[m+h]⁺:430.2085,found:430.2084。

制備例4

如式(ii”)所示化合物的制備：

用15ml甲苯溶解化合物80mg(0.19mmol)的如式(ii’)所示的異吲哚硼雜熒光染料于50mlschlenk反應(yīng)器中，然后用注射器向上述體系中加入對甲氧基苯甲醛59mg(1.9mmol)、哌啶(1.5ml)和乙酸(0.5ml)得到混合溶液。將所述混合溶液在140℃油浴中回流48小時(shí)，并且通過使用含有無水cacl2的索格利特萃取器除去反應(yīng)期間形成的任何水。停止反應(yīng)后，在真空下除去溶劑。粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜法(硅膠，洗脫液：乙酸乙酯/石油醚)純化，得到綠色粉末即如式(ii”)所示的異吲哚硼雜熒光染料(重量產(chǎn)率為29％)；

如式(ii”)所示結(jié)構(gòu)的異吲哚硼雜熒光染料的的核磁氫譜和核磁碳譜參數(shù)如下所述：

¹hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.17(t,j＝6.0hz,3h),8.01(d,j＝3hz,1h),7.95(d,j＝3hz,1h),7.81(d,j＝16.7hz,1h),7.54(d,j＝8.2hz,3h),7.43(m,3h),7.31(d,j＝8.2hz,1h),7.18-7.08(m,3h),7.00(t,j＝7.8hz,3h),3.89(s,3h),2.70(q,j＝6.0hz,2h),2.31(s,3h),1.20(t,j＝7.4hz,3h).¹³cnmr(125mhz,cdcl3)δ159.9,156.8,148.04,147.8,143.9,135.1,134.4,133.6,133.4,131.6,130.7,129.1,128.9,128.1,127.1,126.6,126.5,126.1,123.7,120.4,120.2,120.0,118.8,118.5,114.7,114.5,55.4,18.8,14.1,9.3.hrms(apci)calcd.forc36h30bn3o2[m+h]⁺:548.2504,found:548.2524.

實(shí)施例1

式(g)所示的異吲哚硼雜熒光染料的制備：

用1ml氯仿溶解15mg(0.03mmol)如式(ii’)所示結(jié)構(gòu)的異吲哚硼雜熒光染料于10ml的離心管制得溶液，將ch3i159mg(1.12mmol)加入上述溶液并在20℃、黑暗中攪拌12h。收集沉淀，并用石油醚洗滌三次，得到藍(lán)色粉末即為如式(g)所示的異吲哚硼雜熒光染料(重量產(chǎn)率為90％)。

¹hnmr(300mhz,d6-dmso)δ8.49(d,j＝6.0hz,2h),8.39(d,j＝8.1hz,1h),8.30(d,j＝9.2hz,2h),8.21(d,j＝7.7hz,1h),7.67(d,j＝7.7hz,1h),7.62(d,j＝5.8hz,2h),7.56-7.46(m,2h),7.41(d,j＝8.1hz,1h),7.09(d,j＝7.4hz,1h),4.07(s,3h),2.46(s,3h),2.20-2.31(m,5h),1.00(t,j＝7.3hz,3h).¹³cnmr(125mhz,d6^-dmso)δ155.0,150.2,143.5,142.8,135.6,135.2,134.3,131.5,130.6,130.0,129.1,127.7,127.2,126.7,125.6,123.9,121.4,121.0,120.2,118.7,118.0,47.2,16.9,14.7,12.9,9.5.hrms(esi)calcd.forc29h27bin3o[m-i]⁺:444.2242,found:444.2229。

實(shí)施例2

式(i)所示的異吲哚硼雜熒光染料的制備：

用1ml氯仿溶解15mg(0.03mmol)如式(ii”)所示結(jié)構(gòu)的異吲哚硼雜熒光染料于10ml的離心管制得溶液，將ch3i159mg(1.12mmol)加入上述溶液并在20℃、黑暗中攪拌12h。收集沉淀，并用石油醚洗滌三次，得到藍(lán)色粉末即為如式(i)所示的異吲哚硼雜熒光染料(重量產(chǎn)率為90％)。

如式(i)所示的異吲哚硼雜熒光染料的磁氫譜和核磁碳譜參數(shù)如下所述：

¹hnmr(300mhz,d6-dmso)δ8.41(t,j＝6.8hz,3h),8.33-8.22(m,3h),7.78-7.58(m,6h),7.53-7.44(m,4h),7.23(d,j＝16.9hz,2h),7.12-7.03(m,3h),3.98(s,3h),3.82(s,3h),2.66(q,j＝6hz,2h),2.31(s,3h),1.10(t,j＝7.2hz,3h).¹³cnmr(125mhz,d6-dmso)δ160.1,147.1,143.5,136.1,134.7,134.1,131.5,130.2,128.7,128.4,127.4,127.2,127.1,124.2,121.7,121.3,120.2,117.9,117.2,116.7,114.9,79.3,55.4,47.2,18.2,13.9,9.2.hrms(esi)calcd.forc37h33bin3o2[m-i]⁺:562.2660,found:562.2654。

檢測例1

對實(shí)施例1和實(shí)施例2制得的如式(g)和(i)所示的異吲哚硼雜熒光染料在甲醇和dmso中的的光譜性質(zhì)；

其中，式(g)所示的異吲哚硼雜熒光染料的測試結(jié)果如表1所示，

式(i)所示的異吲哚硼雜熒光染料的測試結(jié)果如表2所示；

表1-2中：stokes-shift＝λem^max-λmax(nm)＝1/λmax–1/λem^max(cm^-1)。

表1

表2

檢測例2

對式(g)和(i)所示的異吲哚硼雜熒光染料進(jìn)行紫外吸收表征，結(jié)果見圖1所示。其中，實(shí)線代表的是如式(g)所示結(jié)構(gòu)的異吲哚硼雜熒光染料的紫外吸收曲線；虛線代表的是如式(i)所示結(jié)構(gòu)的異吲哚硼雜熒光染料的紫外吸收曲線。

檢測例3

對式(g)和(i)所示的異吲哚硼雜熒光染料進(jìn)行表征熒光發(fā)射光譜表征，結(jié)果見圖2所示。其中，實(shí)線代表的是如式(g)所示結(jié)構(gòu)的異吲哚硼雜熒光染料的紫外吸收曲線；虛線代表的是如式(i)所示結(jié)構(gòu)的異吲哚硼雜熒光染料的紫外吸收曲線。

應(yīng)用例1

將實(shí)施例1制得的如式(g)所示結(jié)構(gòu)的異吲哚硼雜熒光染料進(jìn)行細(xì)胞熒光成像應(yīng)用：小鼠細(xì)胞(b16-wt)首先用濃度為2μmol/l的如式(g)所示結(jié)構(gòu)的異吲哚硼雜熒光染料和羅丹明b(rh123)共染色后在37℃，20％co2氣氛中孵育45,min。然后用pbs(ph為7.2-7.4)洗滌三次將細(xì)胞與細(xì)胞染劑(dapi)(0.5μm)在37℃，20％co2氣氛中孵育30分鐘，再用pbs洗滌三次。在替換培養(yǎng)基后，使用激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞成像，具體結(jié)果見圖3所示。

圖3中：左圖(1)是式子(g)所示結(jié)構(gòu)的異吲哚硼雜熒光染料、rh123和dapi細(xì)胞共染色的細(xì)胞成像圖，其中，式子(g)所示結(jié)構(gòu)的異吲哚硼雜熒光染料呈現(xiàn)紅色熒光，rh123呈現(xiàn)綠色熒光，dapi呈現(xiàn)藍(lán)色熒光。中圖(2)是rh123與dapi細(xì)胞共染色的細(xì)胞成像圖，其中，rh123呈現(xiàn)綠色熒光、dapi呈現(xiàn)藍(lán)色熒光。右圖(3)是式子(g)所示結(jié)構(gòu)的異吲哚硼雜熒光染料和dapi細(xì)胞共染色的細(xì)胞成像圖，其中，式子(g)所示結(jié)構(gòu)的異吲哚硼雜熒光染料呈現(xiàn)紅色熒光，dapi呈現(xiàn)藍(lán)色熒光。

圖1中是對式(g)和(i)所示的異吲哚硼雜熒光染料進(jìn)行紫外吸收表征的結(jié)果，結(jié)果顯示見圖1所示。由圖可看出(i)所示的異吲哚硼雜熒光染料較(g)所示的異吲哚硼雜熒光染料的紫外吸收光譜紅移了接近77nm.

圖2中是對式(g)和(i)所示的異吲哚硼雜熒光染料進(jìn)行熒光發(fā)射光譜表征的結(jié)果，結(jié)果顯示見圖2所示。由圖可看出(i)所示的異吲哚硼雜熒光染料較(g)所示的異吲哚硼雜熒光染料熒光發(fā)射波長紅移了接近84nm。

從圖3可以看出如式(g)所示結(jié)構(gòu)的異吲哚硼雜熒染料進(jìn)行細(xì)胞共染色的結(jié)果可以得出本發(fā)明提供的異吲哚硼雜熒染料能夠用作近紅外線粒體靶向熒光探針。

以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式中的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種簡單變型，這些簡單變型均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

另外需要說明的是，在上述具體實(shí)施方式中所描述的各個(gè)具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進(jìn)行組合，為了避免不必要的重復(fù)，本發(fā)明對各種可能的組合方式不再另行說明。

此外，本發(fā)明的各種不同的實(shí)施方式之間也可以進(jìn)行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明所公開的內(nèi)容。