本發(fā)明涉及2型糖尿病的治療的藥物領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及對(duì)2型糖尿病有治療作用的一類(lèi)苯基噻吩酰胺類(lèi)SGLT2/SGLT1雙靶點(diǎn)抑制劑、其制備方法，以及在醫(yī)藥上的用途。
背景技術(shù)：
：糖尿病是一種以高血糖為特征的代謝性疾病。高血糖則是由于胰島素分泌缺陷或其生物作用受損，或兩者兼有引起。糖尿病時(shí)長(zhǎng)期存在的高血糖，導(dǎo)致各種組織，特別是眼、腎、心臟、血管、神經(jīng)的慢性損害、功能障礙。目前尚無(wú)根治糖尿病的方法，但通過(guò)多種治療手段可以對(duì)糖尿病進(jìn)程進(jìn)行適當(dāng)控制。主要包括幾個(gè)方面：糖尿病患者的教育，自我監(jiān)測(cè)血糖，飲食治療，運(yùn)動(dòng)治療和藥物治療?？诜笛撬幬镉珊芏喾N，如磺酰脲類(lèi)、雙胍類(lèi)、噻唑烷二酮類(lèi)、糖苷酶抑制劑類(lèi)，等等，但是這些藥物普遍具有各種不同的副作用，如肝臟毒性、低血糖、腹脹、心臟病風(fēng)險(xiǎn)，等等。因此全新作用靶點(diǎn)的藥物在臨床上是迫切需求的。鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)體(sodium-glucoselinkedtransporter,SGLT)是一種葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，有兩種亞型即SGLT1和SGLT2，兩者在腎臟近曲小管中均有分布，對(duì)腎臟中葡萄糖重吸收的貢獻(xiàn)分別為10％和90％，除此之外SGLT1也分布在腸道中，與GLUT一起負(fù)責(zé)腸道中葡萄糖的吸收。抑制SGLT2能使腎小管中的葡萄糖不能順利重吸收進(jìn)入血液而隨尿液排出，從而降低血糖濃度，目前上市的SGLT2抑制劑有多個(gè)，如dapagliflozin、canagliflozin和empagliflozin等。這些上市的抑制劑均是選擇性的SGLT2抑制劑，對(duì)SGLT1抑制作用很弱。在SGLT2抑制劑研發(fā)的初期，SGLT2/SGLT1的選擇性曾經(jīng)被認(rèn)為是很重要的指標(biāo)，因?yàn)橐种芐GLT1在理論上可能引起腸胃道副反應(yīng)。但是近幾年的研究表明，這種理論上的擔(dān)心是沒(méi)有必要的，且已經(jīng)被LX4211的臨床試驗(yàn)所證實(shí)(ZambrowiczB,etal.EffectsofLX4211,adualsodium-dependentglucosecotransporters1and2inhibitor,onpostprandialglucose,insulin,glucagon-likepeptide1,andpeptidetyrosineinadose-timingstudyinhealthysubjects,ClinTher.,2013,35(8),1162-1173.e8)。由于SGLT2/SGLT1抑制劑能夠在抑制SGLT2的基礎(chǔ)上進(jìn)一步抑制SGLT1，而這種抑制能夠增加腎臟中尿糖的排出并減少腸道中葡萄糖的吸收，因此這類(lèi)抑制劑被認(rèn)為是一種全新的控制血糖的選擇。本發(fā)明公開(kāi)了一類(lèi)苯基噻吩酰胺類(lèi)SGLT2/SGLT1雙靶點(diǎn)抑制劑，這些化合物可用于制備治療2型糖尿病的藥物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種具有良好的SGLT2/SGLT1雙靶點(diǎn)抑制活性，具有通式I的一類(lèi)非糖苷類(lèi)化合物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供制備具有通式I的化合物的方法。本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供含有通式I的化合物在制備治療2型糖尿病藥物方面的應(yīng)用?，F(xiàn)結(jié)合本發(fā)明的目的對(duì)本
發(fā)明內(nèi)容進(jìn)行具體描述。本發(fā)明具有通式I的化合物具有下述結(jié)構(gòu)式：其中，R1選自H、甲基、乙基。優(yōu)選以下通式I的化合物具有以下結(jié)構(gòu)，本發(fā)明所述通式I化合物通過(guò)以下路線合成：化合物II轉(zhuǎn)變?yōu)槠鋵?duì)應(yīng)的酰氯III；酰氯III在堿存在下與化合物IV反應(yīng)，得到化合物V；化合物V在堿存在下與環(huán)戊二烯發(fā)生縮合反應(yīng)，得到化合物I；其中R1的定義如前所述。本發(fā)明所述通式I化合物具有SGLT2/SGLT1的雙重抑制作用，可作為有效成分用于制備2型糖尿病的治療藥物。本發(fā)明所述通式I化合物的活性是通過(guò)受體結(jié)合試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證的。本發(fā)明的通式I化合物在相當(dāng)寬的劑量范圍內(nèi)是有效的。例如每天服用的劑量約在1mg-1000mg/人范圍內(nèi)，分為一次或數(shù)次給藥。實(shí)際服用本發(fā)明通式I化合物的劑量可由醫(yī)生根據(jù)有關(guān)的情況來(lái)決定。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。需要說(shuō)明的是，下述實(shí)施例僅是用于說(shuō)明，而并非用于限制本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的教導(dǎo)所做出的各種變化均應(yīng)在本申請(qǐng)權(quán)利要求所要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。實(shí)施例1化合物I-1的合成A.化合物V-1的合成4.36g(20mmol)化合物II-1溶于10mL干燥的二氯甲烷中，室溫下攪拌，慢慢滴加3.81g(30mmol)新蒸餾的草酰氯，而后滴加2滴DMF，然后反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)混合物在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，而后在真空油泵上干燥5分鐘，再以10mL二氯甲烷溶解，冰水浴冷卻下攪拌，而后慢慢滴加2.70g(20mmol)IV-1和6.07g(60mmol)三乙胺，滴加完畢后反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，TLC檢查反應(yīng)完成。反應(yīng)完成后，往反應(yīng)混合物傾倒入100mL冰水中，攪拌，使用50mL×3的CH2Cl2萃取，合并萃取相，依次用1％稀鹽酸和鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，得到的殘余物使用柱層析純化，得到化合物V-1，白色固體，ESI-MS,m/z＝336([M+H]+)。B.化合物I-1的合成3.35g(10mmol)化合物V-1和1.32g(20mmol)新蒸餾的環(huán)戊二烯溶于20mL無(wú)水乙醇中，攪拌，加入3.40g(50mmol)固體乙醇鈉，室溫下繼續(xù)攪拌過(guò)夜，TLC檢查反應(yīng)完成。反應(yīng)混合物傾倒入100mL冰水中，攪拌，使用50mL×3的CH2Cl2萃取，合并萃取相，鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，得到的殘余物使用柱層析純化，得到化合物I-1,白色固體，ESI-MS,m/z＝384([M+H]+)。實(shí)施例2-6參照實(shí)施例1操作步驟，合成了下表所列化合物。實(shí)施例7化合物體外對(duì)人SGLT2和人SGLT1的抑制人SGLT2表達(dá)載體制備將表達(dá)人SGLT2的全長(zhǎng)cDNA克隆(購(gòu)自GenScript公司)(在cDNA兩端置了HindIII和NotI位點(diǎn))亞克隆至pEAK15表達(dá)載體(美國(guó)Theracos公司)的HindIII和NotI位點(diǎn)之間。含有目標(biāo)基因的克隆用限制性?xún)?nèi)切酶酶切的方法確定。人SGLT2穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系制備利用限制性?xún)?nèi)切酶NsiI消化含有人SGLT2的質(zhì)粒，使之線性化，用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)線性DNA進(jìn)行純化。用轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine2000(Invitrogen公司)將純化后的DNA轉(zhuǎn)入HEK293細(xì)胞(美國(guó)Theracos公司)。將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞在含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中于37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)24小時(shí)后，在相同的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入呤霉素(Invitrogen公司)繼續(xù)培養(yǎng)2周，將經(jīng)過(guò)篩選后具有嘌呤霉素抗性的細(xì)胞接種于新的96孔板中(每孔一個(gè)細(xì)胞)，在含有嘌呤酶素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，直至細(xì)胞長(zhǎng)至匯合狀態(tài)。具有嘌呤霉素抗性的細(xì)胞克隆通過(guò)反映SGLT2活性的甲基-α-D-[U-14C]吡喃糖苷攝取試驗(yàn)進(jìn)一步篩選(實(shí)驗(yàn)方法在下文中有詳述)。選擇具有最高信噪比的細(xì)胞克隆用于后續(xù)的甲基-α-D-[U-14C]吡喃糖苷攝取試驗(yàn)。人SGLT1表達(dá)細(xì)胞制備含有全長(zhǎng)人SGLT1cDNA的pDream2.1表達(dá)載體購(gòu)于GenScript公司。質(zhì)粒在大腸桿菌DH5α中進(jìn)行擴(kuò)增，該菌株培養(yǎng)于含有氨芐青霉素的Luria-Bertani(LB)培養(yǎng)基中。用QIAGENPlasmidMidi試劑盒(QIAGEN公司)抽提質(zhì)粒。用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑，按照操作手冊(cè)的方法將人SGLT1表達(dá)載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)入COS-7細(xì)胞(購(gòu)自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心)。轉(zhuǎn)染細(xì)胞在含有10％DMSO的DMEM中于-80℃保存。甲基-α-D-[U-14C]吡喃糖苷攝取試驗(yàn)試驗(yàn)前，將分別表達(dá)SGLT1和SGLT2的細(xì)胞用含有10％FBS的DMEM接種于96孔ScintiPlate液閃板(PerkinElmer公司)(每孔加入100μL培養(yǎng)液，含1×105個(gè)細(xì)胞)，并于37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)48小時(shí)。細(xì)胞用150μL含鈉緩沖液(137mMNaCl，5.4mMKCl，2.8mMCaCl2，1.2mMMgCl2，10mM三羥甲基氨基甲烷/N-2-羥乙基哌嗪-N’-乙烷磺酸[Tris/Hepes]，pH7.2)或者無(wú)鈉緩沖液(137mMN-甲基-葡糖胺，5.4mMKCl，2.8mMCaCl2，1.2mMMgCl2，10mMTris/Hepes，pH7.2)洗兩次。將待測(cè)化合物溶于含25％人血漿和40μCi/mL甲基-α-D-[U-14C]吡喃糖苷(AmershamBiosciences/GEHealthcare)的含鈉或無(wú)鈉緩沖液中，制備成一系列合適濃度的待測(cè)化合物溶液。96孔板每孔加入50μL待測(cè)化合物溶液，振蕩培養(yǎng)2小時(shí)(SGLT1分析)或1.5小時(shí)(SGLT2分析)。細(xì)胞用150μL清洗緩沖液(137mMN-甲基葡糖胺，10mMTris/Hepes，pH7.2)洗兩次，用TopCount液閃計(jì)數(shù)儀(PerkinElmer公司)對(duì)甲基-α-D-[U-14C]吡喃糖苷攝取進(jìn)行定量分析。鈉依賴(lài)性吡喃糖苷攝取量即為用含鈉緩沖液處理得到的攝取量減去無(wú)鈉緩沖液處理得到的攝取量的差值(三復(fù)孔的平均值)。結(jié)果如下列表所示。本發(fā)明的部分化合物對(duì)人SGLT2和人SGLT1抑制的IC50值化合物IC50(hSGLT2,nM)IC50(hSGLT1,nM)dapagliflozin1.41339實(shí)施例1化合物13.522.4實(shí)施例2化合物23.837.1實(shí)施例3化合物17.029.6實(shí)施例4化合物16.227.9實(shí)施例5化合物19.332.7實(shí)施例6化合物17.630.2上述IC50的測(cè)定結(jié)果表明，本發(fā)明的化合物為強(qiáng)的SGLT2/SGLT1雙靶點(diǎn)抑制劑，可以用來(lái)制備治療2型糖尿病的藥物。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3