一種含有硒脲類sirtuin抑制彈頭的sirtuin抑制劑及其制備方法與流程

本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種含硒類化合物及其制備技術(shù)。

背景技術(shù)：

作為一種主要的翻譯后修飾，賴氨酸側(cè)鏈?；捌淙ヵ；言诮曜C明能有效地調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)被修飾蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能[1-3]。細(xì)胞內(nèi)蛋白賴氨酸側(cè)鏈酰基化及去?；且粋€(gè)動(dòng)態(tài)過程，其中的?；梢允禽^小的乙?；?acetyl)也可以是較龐大的丁二?；?succinyl)或十四?；?myristoyl)。需要指出的是，根據(jù)現(xiàn)有的知識(shí)，?；梢允敲复呋倪^程(比如被乙酰轉(zhuǎn)移酶家族成員(protein lysine acetyltransferases)所催化)[4]也可以是非酶催化的過程[5]，而去?；敲复呋倪^程，即被蛋白酰基賴氨酸去?；讣易宄蓡T(protein acyl-lysine deacylases)所催化[6-8]。

Sirtuin代表一類細(xì)胞內(nèi)蛋白?；嚢彼崛ヵ；竅7,8]。Sirtuin能催化NAD⁺和?；嚢彼岬目s合，形成去?；漠a(chǎn)物以及煙酰胺(nicotinamide)和2’-O-AADPR?，F(xiàn)有研究表明，除了組蛋白(histones)，sirtuin也接受其它細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)作為天然底物[9]。從細(xì)菌到人類的各種活性生物體中均已發(fā)現(xiàn)了sirtuin[10]。酵母中的沉默信息調(diào)節(jié)蛋白2(Sir2)是所發(fā)現(xiàn)的首例sirtuin；它的蛋白乙酰賴氨酸去乙酰催化活性是在2000年被發(fā)現(xiàn)的[11]。迄今為止，哺乳類動(dòng)物和人體中已發(fā)現(xiàn)了7個(gè)sirtuin，即SIRT1,SIRT2,SIRT3,SIRT4,SIRT5,SIRT6,SIRT7。SIRT1,SIRT2和SIRT3均能有效地催化去除較小的乙?；?acetyl)和較龐大的十四酰基(myristoyl)；SIRT5能有效地催化去除丁二?；?succinyl)；SIRT6能有效地催化去除十四?；?myristoyl)[1,7]。

Sirtuin催化的去?；磻?yīng)已被證明能有效地調(diào)節(jié)一些非常重要的生命過程，比如基因轉(zhuǎn)錄，細(xì)胞凋亡，DNA損傷修復(fù)，代謝[12-14]，并且該去?；磻?yīng)的抑制被認(rèn)為是當(dāng)今發(fā)展針對(duì)一些人類疾病(比如癌癥和代謝疾病)的一個(gè)重要新型策略[15-17]。Sirtuin抑制劑也應(yīng)能幫助更進(jìn)一步探索抑制sirtuin催化的去?；磻?yīng)的治療潛力。

現(xiàn)有的sirtuin抑制劑主要由兩大途徑獲得[7,15,18]：化合物庫(kù)篩選(包括虛擬篩選)和sirtuin催化機(jī)制導(dǎo)向的設(shè)計(jì)。后者是由我們課題組(在美國(guó)Akron大學(xué)期間)和John M.Denu教授課題組(美國(guó)Wisconsin大學(xué)Madison分校)所開拓的一個(gè)重要領(lǐng)域[19,20]。到目前為止，多種sirtuin催化機(jī)制導(dǎo)向的抑制劑所賴以發(fā)揮sirtuin抑制功效的催化機(jī)制導(dǎo)向的sirtuin抑制彈頭已被發(fā)現(xiàn)[7,18]；但是在所有的彈頭當(dāng)中，目前只有硫脲彈頭能被sirtuin催化形成一個(gè)絕對(duì)不能夠被繼續(xù)催化轉(zhuǎn)化的中間體(即化學(xué)穩(wěn)定的異硫脲中間體)；而其它的彈頭被sirtuin催化形成的中間體仍然能夠緩慢地被sirtuin繼續(xù)催化轉(zhuǎn)化形成終產(chǎn)物，以至于削弱對(duì)于sirtuin的抑制功效。然而，硫的極化度和親核性相對(duì)于硒來說都較小，所以硫脲彈頭在sirtuin催化下與NAD⁺的親核取代反應(yīng)的能力比硒脲要差，并且硫脲的抗氧化能力也比硒脲的要弱。

參考文獻(xiàn)：

1.Choudhary,C.；Weinert,B.T.；Nishida,Y.；Verdin,E.；Mann,M.Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2014,15,536-550.

2.Bernal,V.；-Cerezo,S.；Gallego-Jara,J.；Ecija-Conesa,A.；de Diego,T.；Iborra,J.L.；Cánovas,M.New Biotechnol.2014,31,586-595.

3.Ringel,A.E.；Roman,C.；Wolberger,C.Protein Sci.2014,23,1686-1697.

4.Aka,J.A.；Kim,G.W.；Yang,X.J.Handbook of Experimental Pharmacology 2011,(206),1-12.

5.Wagner,G.R.；Payne,R.M.J.Biol.Chem.2013,288,29036-29045.

6.Seto,E.；Yoshida,M.Cold Spring Harb.Perspect.Biol.2014,6,a018713.

7.Chen,B.；Zang,W.；Wang,J.；Huang,Y.；He,Y.；Yan,L.；Liu,J.；Zheng W.Chem.Soc.Rev.2015,44,5246-5264.

8.Bheda,P.；Jing,H.；Wolberger,C.；Lin,H.Annu.Rev.Biochem.2016,85,405-429.

9.Martínez-Redondo,P.；Vaquero,A.Genes Cancer 2013,4,148-163.

10.Greiss,S.；Gartner,A.Mol.Cells 2009,28,407-415.

11.Imai,S.；Armstrong,C.M.；Kaeberlein,M.；Guarente,L.Nature 2000,403,795-800.

12.Dai,Y.；Faller,D.V.Transl.Oncogenomics 2008,3,53-65.

13.Choi,J.E.；Mostoslavsky,R.Curr.Opin.Genet.Dev.2014,26,24-32.

14.Sebastián,C.；Mostoslavsky,R.Semin Cell Dev Biol.2015,43,33-42.

15.Hu,J.；Jing,H.；Lin,H.Future Med Chem.2014,6,945-966.

16.Imai,S.；Guarente,L.Trends Pharmacol Sci.2010,31,212-220.

17.Min,S.W.；Sohn,P.D.；Cho,S.H.；Swanson,R.A.；Gan,L.Front Aging Neurosci.2013,5,53.

18.Zheng,W.Mini Rev Med Chem.2013,13,132-154.

19.Fatkins,D.G.；Monnot,A.D.；Zheng,W.Bioorg.Med.Chem.Lett.2006,16,3651-3656.

20.Smith,B.C.；Denu,J.M.Biochemistry.2007,46,14478-14486.

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種含有硒脲類sirtuin抑制彈頭的sirtuin抑制劑及其制備方法。本發(fā)明中的sirtuin抑制劑將含有硒脲類抑制彈頭，以提高之前報(bào)道的含有硫脲類抑制彈頭的sirtuin抑制劑的抑制強(qiáng)度及抗氧化能力。采用的具體技術(shù)方案如下：

第一種 含有硒脲類sirtuin抑制彈頭的sirtuin抑制劑，其特征在于具有下列結(jié)構(gòu)通式(I)：

R1是任何烷基、芳基或者芳烷基；X是O或者S或者NH；Y是C＝O或者C＝S；Z是O或者NH或者CH₂；R2是H或者任何烷基、芳基或者芳烷基；R3是甲基(CH₃)或者CH₂CH₂COOH或者或者CH₂-(CH)₁₀-CH₃或者CH₂-(CH)₁₁-CH₃或者CH₂-(CH)₁₂-CH₃或者CH₂-(CH)₁₃-CH₃或者CH₂-(CH)₁₄-CH₃；

所述結(jié)構(gòu)通式(I)中：

R1-X-Y是具有任何氨基酸序列的肽，氨基酸數(shù)目1-15；其中X是一個(gè)氨基酸中與氨基直接相連的碳，Y是羰基；

Z-R2是具有任何氨基酸序列的肽，氨基酸數(shù)目1-15；其中Z是NH；

R3是甲基(CH₃)或者CH₂CH₂COOH或者或者CH₂-(CH)₁₀-CH₃或者CH₂-(CH)₁₁-CH₃或者CH₂-(CH)₁₂-CH₃或者CH₂-(CH)₁₃-CH₃或者CH₂-(CH)₁₄-CH₃；

所述結(jié)構(gòu)通式(I)中：

R1是H或者任何烷基、芳基或者芳烷基；X是H或者任何烷基、芳基或者芳烷基；

Y是任何烷基、芳基或者芳烷基；

Z是O或者NH或者CH₂；

R2是H或者任何烷基、芳基或者芳烷基；

R3是甲基(CH₃)或者CH₂CH₂COOH或者或者CH₂-(CH)₁₀-CH₃或者

CH₂-(CH)₁₁-CH₃或者CH₂-(CH)₁₂-CH₃或者CH₂-(CH)₁₃-CH₃或者CH₂-(CH)₁₄-CH₃。

第二種 含有硒脲類sirtuin抑制彈頭的sirtuin抑制劑，其特征在于具有下列結(jié)構(gòu)通式(II)：

X是任何烷基、芳基或者芳烷基；

Y是任何烷基、芳基或者芳烷基；

Z是–C(＝O)-NH–或者–C(＝O)-O–或者–NH-C(＝O)-NH–或者–O-C(＝O)-NH–或者

–O-C(＝O)-O–或者–NH-C(＝O)–或者–O-C(＝O)–或者–NH-C(＝O)-O–或者–S–或者–S-S–或

者

–C＝C–或者當(dāng)直接連接在芳環(huán)上時(shí)，連接點(diǎn)是鄰位或者間位或者對(duì)位；

R3是甲基(CH₃)或者CH₂CH₂COOH或者或者CH₂-(CH)₁₀-CH₃或者

CH₂-(CH)₁₁-CH₃或者CH₂-(CH)₁₂-CH₃或者CH₂-(CH)₁₃-CH₃或者CH₂-(CH)₁₄-CH₃；

所述結(jié)構(gòu)通式(II)中：

X是–C(＝O)–或者–C(＝S)–或者–NH-C(＝O)–或者–NH-C(＝S)–或者–O-C(＝O)–或者

–S-C(＝O)–或者–S-C(＝S)–；

Y是NH或者O或者S；

Z是–C(＝O)-NH–或者–C(＝O)-O–或者–NH-C(＝O)-NH–或者–O-C(＝O)-NH–或者

–O-C(＝O)-O–或者–NH-C(＝O)–或者–O-C(＝O)–或者–NH-C(＝O)-O–或者–S–或者–S-S–或

者

–C＝C–或者當(dāng)直接連接在芳環(huán)上時(shí)，連接點(diǎn)是鄰位或者間位或者對(duì)位；

X和Z之間的連接為任何烷基、芳基或者芳烷基；

Y和Z之間的連接為任何烷基、芳基或者芳烷基；

R3是甲基(CH₃)或者CH₂CH₂COOH或者或者CH₂-(CH)₁₀-CH₃或者

CH₂-(CH)₁₁-CH₃或者CH₂-(CH)₁₂-CH₃或者CH₂-(CH)₁₃-CH₃或者CH₂-(CH)₁₄-CH₃。

所述結(jié)構(gòu)通式(II)中：

X是具有任何氨基酸序列的肽，氨基酸數(shù)目1-15；

Y是具有任何氨基酸序列的肽，氨基酸數(shù)目1-15；

Z是–C(＝O)-NH–或者–C(＝O)-O–或者–NH-C(＝O)-NH–或者–O-C(＝O)-NH–或者

–O-C(＝O)-O–或者–NH-C(＝O)–或者–O-C(＝O)–或者–NH-C(＝O)-O–或者–S–或者–S-S–或

者

–C＝C–或者當(dāng)直接連接在芳環(huán)上時(shí)，連接點(diǎn)是鄰位或者間位或者對(duì)位；

X和Z之間的連接為直接或者通過任何烷基、芳基或者芳烷基連接到X肽的N端或者X

肽中任何一個(gè)氨基酸的側(cè)鏈；Y和Z之間的連接為直接或者通過任何烷基、芳基或者芳烷基連接到Y(jié)肽的C端或者Y；

肽中任何一個(gè)氨基酸的側(cè)鏈；

R3是甲基(CH₃)或者CH₂CH₂COOH或者或者CH₂-(CH)₁₀-CH₃或者

CH₂-(CH)₁₁-CH₃或者CH₂-(CH)₁₂-CH₃或者CH₂-(CH)₁₃-CH₃或者CH₂-(CH)₁₄-CH₃。

第三種 含有硒脲類sirtuin抑制彈頭的sirtuin抑制劑，其特征在于具有下列結(jié)構(gòu)通式(III)：

X是–C(＝O)–或者–C(＝S)–或者–NH-C(＝O)–或者–NH-C(＝S)–或者–O-C(＝O)–或者

–S-C(＝O)–或者–S-C(＝S)–或者任何一個(gè)氨基酸；

Y是NH或者O或者S或者任何一個(gè)氨基酸；

X和Y的連接：

通過一個(gè)具有任何氨基酸序列的肽，氨基酸數(shù)目1-20；連接方式：X端

接該肽的N端，Y端接該肽的C端；或者X端接該肽的C端，Y端接該肽的N端；或者X端接該肽的N端，

Y端接該肽中的一個(gè)氨基酸側(cè)鏈；或者X端接該肽的C端，Y端接該肽中的一個(gè)氨基酸

側(cè)鏈；

或者Y端接該肽的N端，X端接該肽中的一個(gè)氨基酸側(cè)鏈；或者Y端接該肽的C端，X

端接

該肽中的一個(gè)氨基酸側(cè)鏈；或者X端接該肽中的一個(gè)氨基酸側(cè)鏈，Y端接該肽中的另一

個(gè)氨基酸側(cè)鏈；

R3是甲基(CH₃)或者CH₂CH₂COOH或者或者CH₂-(CH)₁₀-CH₃或者

CH₂-(CH)₁₁-CH₃或者CH₂-(CH)₁₂-CH₃或者CH₂-(CH)₁₃-CH₃或者CH₂-(CH)₁₄-CH₃。

所述第一種含有硒脲類sirtuin抑制彈頭的sirtuin抑制劑的制備方法，其特征在于：將結(jié)構(gòu)通式(IV)的化合物(或者其鹽酸鹽)與結(jié)構(gòu)通式(V)的化合物反應(yīng)而得：所述的結(jié)構(gòu)通式(IV)為結(jié)構(gòu)通式(V)為

R1，X，Y，Z，R2，R3的定義與權(quán)利要求1至3項(xiàng)中的一致，反應(yīng)時(shí)反應(yīng)物中所有敏感基團(tuán)需要被預(yù)先保護(hù)，等反應(yīng)結(jié)束后統(tǒng)一去除保護(hù)基團(tuán)。

所述第二種含有硒脲類sirtuin抑制彈頭的sirtuin抑制劑的制備方法，其特征在于通過將結(jié)構(gòu)通式(VI)的化合物或者其鹽酸鹽與結(jié)構(gòu)通式(V)的化合物反應(yīng)制備而得；

所述的結(jié)構(gòu)通式(VI)為所述的結(jié)構(gòu)通式(V)為X，Y，Z，R3的定義與權(quán)利要求4至6項(xiàng)中的一致，反應(yīng)時(shí)反應(yīng)物中所有敏感基團(tuán)需要被預(yù)先保護(hù)，等反應(yīng)結(jié)束后統(tǒng)一去除保護(hù)基團(tuán)。

所述第三種含有硒脲類sirtuin抑制彈頭的sirtuin抑制劑的制備方法，其特征在于：通過將結(jié)構(gòu)通式(VII)的化合物或者其鹽酸鹽與結(jié)構(gòu)通式(V)的化合物反應(yīng)而得；

所述的結(jié)構(gòu)通式(VII)為所述的結(jié)構(gòu)通式(V)為X，Y，R3的定義與權(quán)利要求第7項(xiàng)中的一致，反應(yīng)時(shí)反應(yīng)物中所有敏感基團(tuán)需要被預(yù)先保護(hù)，等反應(yīng)結(jié)束后統(tǒng)一去除保護(hù)基團(tuán)。

所述三種含有硒脲類sirtuin抑制彈頭的sirtuin抑制劑在發(fā)展所有sirtuin催化活性抑制劑中的用途。

所述三種含有硒脲類sirtuin抑制彈頭的sirtuin抑制劑所發(fā)展出的所有sirtuin催化活性抑制劑在治療癌癥，神經(jīng)退行性疾病，代謝疾病中的運(yùn)用。

本發(fā)明具有有益效果。因?yàn)槲攘蛴兄叩臉O化度以至于更強(qiáng)的親核性，所以硒脲彈頭比之前報(bào)道的硫脲彈頭更容易進(jìn)行sirtuin催化的第一步與NAD⁺的親核取代反應(yīng)，以及比硫脲彈頭具有更強(qiáng)的抗氧化能力，所以本發(fā)明的含有硒脲類sirtuin抑制彈頭的抑制劑比之前報(bào)道的含有硫脲類sirtuin抑制彈頭的抑制劑具有更強(qiáng)的sirtuin抑制功效及抗氧化能力。本發(fā)明的含有硒脲類sirtuin抑制彈頭的抑制劑可用于發(fā)展新型的治療人類疾病的藥物，具體地，在治療癌癥、神經(jīng)退行性疾病、代謝疾病中能得到很好的應(yīng)用。

附圖說明

圖1中從左到右分別為含有硒脲類SIRT5，SIRT1/2/3，SIRT6抑制彈頭的三個(gè)抑制劑。

圖2為本發(fā)明的硒脲類SIRT5抑制劑的合成方案。

圖3為本發(fā)明的硒脲類SIRT1/2/3抑制劑的合成方案。

圖4為本發(fā)明的硒脲類SIRT6抑制劑的合成方案。

圖5為本發(fā)明的另一個(gè)硒脲類SIRT5抑制劑的合成方案。

具體實(shí)施例

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的詳細(xì)說明。需要指出的是，本發(fā)明人課題組在之前的工作中(參見：Zang,W.；Hao,Y.；Wang,Z.；Zheng,W.Bioorg.Med.Chem.Lett.2015,25,3319-3324；Liu,J.；Zheng,W.Org.Biomol.Chem.2016,14,5928-5935)運(yùn)用了圖1中的肽骨架將硫脲類的抑制彈頭裝入以評(píng)估各個(gè)彈頭的sirtuin抑制強(qiáng)度，所示的三個(gè)彈頭的硫脲版是我們之前所發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的硫脲類SIRT5,SIRT1/2/3,SIRT6抑制彈頭，所以這些同樣的肽骨架也被用于裝入硒脲類sirtuin抑制彈頭以評(píng)估它們對(duì)于sirtuin的抑制強(qiáng)度，如圖1所示。

實(shí)施例1.一個(gè)含有硒脲類SIRT5抑制彈頭的抑制劑(圖1)的化學(xué)合成。該化合物的合成過程如圖2所示，具體步驟如下：

步驟一.3mmol H₃COOC(CH₂)₂NHCHO溶于15ml的DCM中，加3.6mmol伯吉斯試劑，回流反應(yīng)2h，生成黃色液體；加10ml的DCM稀釋，用10ml蒸餾水分液兩次，棄水層；5ml的飽和食鹽水分液，保留有機(jī)層。往有機(jī)層中加入無水硫酸鈉干燥，經(jīng)過濾，旋蒸，得到產(chǎn)物一。

步驟二.將產(chǎn)物一充分溶解于30ml的四氫呋喃(THF)中，加入三乙胺及0.48g硒粉加熱回流至充分反應(yīng)，生成深黃色液體；對(duì)所述深黃色液體使用硅藻土過濾，得濾液，經(jīng)旋蒸、稀鹽酸酸化后，再加乙酸乙酯萃取兩次，得有機(jī)層；對(duì)有機(jī)層繼續(xù)用蒸餾水洗去過量的酸后，再用飽和食鹽水分離掉過量的水，用無水硫酸鈉干燥，過濾取有機(jī)層并經(jīng)旋蒸后，得產(chǎn)物二。所述步驟二為無水無氧反應(yīng)。

步驟三.稱取0.02mmol賴氨酸三聚體，加三乙胺調(diào)pH到7，再加入2.8l三乙胺。同時(shí)取5μl的產(chǎn)物二溶于250μlDMF和65 l水的混和溶劑中。所配制的兩個(gè)溶液混合后，先在零下80攝氏度存放4.5min，然后在4攝氏度反應(yīng)2h，之后用冰乙醚沉降得到產(chǎn)物三。

步驟四.將產(chǎn)物三溶解于甲醇125μl和超純水42μl的混合溶劑中，加入2.1mg氫氧化鋰一水合物(LiOH·H₂O)，混合均勻，放置在零下80攝氏度4.5min以減緩初始反應(yīng)速率，然后在4攝氏度環(huán)境下充分反應(yīng)，鹽酸酸化后進(jìn)行冰乙醚沉降處理并使用高效液相色譜法(HPLC)純化，得到硒脲類SIRT5抑制彈頭及含有它的硒脲類SIRT5抑制劑。

實(shí)施例2.一個(gè)含有硒脲類SIRT1/2/3抑制彈頭的抑制劑(圖1)的化學(xué)合成。該化合物的合成過程如圖3所示，具體步驟如下：

步驟一.2mmol CH₃NHCHO溶于6ml的DCM中，加3mmol伯吉斯試劑，回流反應(yīng)2h；加5ml的DCM稀釋，用5ml蒸餾水分液兩次，棄水層；2ml飽和食鹽水分液，保留有機(jī)層。有機(jī)層中加入無水硫酸鈉干燥，經(jīng)過濾，旋蒸，得到產(chǎn)物一。

步驟二.將產(chǎn)物一充分溶解于24ml四氫呋喃(THF)中，加入三乙胺及0.72g硒粉加熱回流5h，生成粗品；對(duì)所述粗品使用硅藻土過濾，得濾液，經(jīng)旋整、稀鹽酸酸化后，再加乙酸乙酯萃取兩次，得有機(jī)層；對(duì)有機(jī)層繼續(xù)用蒸餾水洗去過量的酸后，再用飽和食鹽水分離掉過量的水，用無水硫酸鈉干燥，過濾取有機(jī)層并經(jīng)旋蒸后，得產(chǎn)物二。所述步驟二為無水無氧反應(yīng)。

步驟三.稱取0.02mmol賴氨酸三聚體，加三乙胺調(diào)pH到7，再加入2.8 l三乙胺。同時(shí)取5μl的產(chǎn)物二溶于250μlDMF和65l水的混和溶劑中。所配制的兩個(gè)溶液混合后，先在零下80攝氏度存放5min，然后在4攝氏度反應(yīng)2h，之后用冰乙醚沉降產(chǎn)物并使用高效液相色譜法(HPLC)純化，得到硒脲類SIRT1/2/3抑制彈頭及含有它的硒脲類SIRT1/2/3抑制劑。

實(shí)施例3.一個(gè)含有硒脲類SIRT6抑制彈頭的抑制劑(圖1)的化學(xué)合成。該化合物的合成過程如圖4所示。

步驟一.通過固相多肽合成(SPPS)的方法，側(cè)鏈完全保護(hù)的五肽被接在MBHA樹脂上。

步驟二.經(jīng)1％的TFA/DMF溶液處理，中間位置的賴氨酸側(cè)鏈被選擇性地脫保護(hù)釋放出游離的氨基。

步驟1a.1mmol H₃C(CH₂)₁₁NHCHO溶于10ml的DCM，加1.6mmol伯吉斯試劑，回流反應(yīng)3h；加5ml的DCM稀釋，用15ml蒸餾水分液兩次，棄水層；10ml飽和食鹽水分液，保留有機(jī)層；有機(jī)層中加入無水硫酸鈉干燥，經(jīng)過濾，旋蒸，得到產(chǎn)物一。

步驟1b.將產(chǎn)物一充分溶解于15ml四氫呋喃(THF)中，加入0.97ml三乙胺及0.24g硒粉加熱回流至充分反應(yīng)，生成粗品；對(duì)所述粗品使用硅藻土過濾，得濾液，經(jīng)旋蒸、稀鹽酸酸化后，再加乙酸乙酯萃取兩次，得有機(jī)層；對(duì)有機(jī)層繼續(xù)用蒸餾水洗去過量的酸后，再用飽和食鹽水分離掉過量的水，用無水硫酸鈉干燥，過濾取有機(jī)層并經(jīng)旋蒸后，得產(chǎn)物二。所述步驟1b為無水無氧反應(yīng)。

步驟三.取5μl的產(chǎn)物二溶于250μl DMF和65l水的混和溶劑中，然后將此溶液與步驟二得到的樹脂混合，先在零下80攝氏度存放5.5min，之后在4攝氏度反應(yīng)2h，然后樹脂用DMF和DCM洗滌，并用真空泵干燥，得到仍連接在樹脂上的含有硒脲類SIRT6抑制彈頭的側(cè)鏈完全保護(hù)的五肽。

步驟四.步驟三得到的干燥樹脂與TFA/DCM/H₂O的混合溶劑混勻，在室溫反應(yīng)4h后過濾，濾液經(jīng)旋蒸濃縮后用冰乙醚沉降產(chǎn)物并使用高效液相色譜法(HPLC)純化，得到硒脲類SIRT6抑制彈頭及含有它的硒脲類SIRT6抑制劑。

實(shí)施例4.另一個(gè)含有硒脲類SIRT5抑制彈頭的抑制劑的化學(xué)合成。該化合物的合成如圖5所示，具體過程如下：

步驟一.3mmol H₃COOC(CH₂)₂NHCHO溶于15ml的DCM中，加3.6mmol伯吉斯試劑，回流反應(yīng)2h，生成黃色液體；加10ml的DCM稀釋，用10ml蒸餾水分液兩次，棄水層；5ml飽和食鹽水分液，保留有機(jī)層；有機(jī)層中加入無水硫酸鈉干燥，經(jīng)過濾，旋蒸，得到產(chǎn)物一。

步驟二.將產(chǎn)物一充分溶解于30ml四氫呋喃(THF)中，加入三乙胺及0.48g硒粉加熱回流至充分反應(yīng)，生成深黃色液體；對(duì)所述深黃色液體使用硅藻土過濾，得濾液，經(jīng)旋蒸、稀鹽酸酸化后，再加乙酸乙酯萃取兩次，得有機(jī)層；對(duì)有機(jī)層繼續(xù)用蒸餾水洗去過量的酸后，再用飽和食鹽水分離掉過量的水，用無水硫酸鈉干燥，過濾取有機(jī)層并經(jīng)旋蒸后，得產(chǎn)物二。所述步驟二為無水無氧反應(yīng)。

步驟三.取5μl的產(chǎn)物二溶于250μl DMF和65 l水的混合溶劑中，然后將此溶液與0.02mmol如圖5所示的環(huán)肽混合，先在零下80攝氏度存放4.5min，之后在4攝氏度反應(yīng)2h，旋蒸后得到產(chǎn)物三。

步驟四.產(chǎn)物三與TFA/DCM/H₂O的混合溶劑混勻，在室溫反應(yīng)4h后旋蒸濃縮，之后用冰乙醚沉降產(chǎn)物并使用高效液相色譜法(HPLC)純化，得到產(chǎn)物四。

步驟五.產(chǎn)物四然后溶解于甲醇125μl和超純水42μl的混合溶劑中，加入2.1mg氫氧化鋰一水合物(LiOH·H₂O)，混合均勻，放置在零下80攝氏度4.5min以減緩初始反應(yīng)速率，然后在4攝氏度環(huán)境下充分反應(yīng)，鹽酸酸化后進(jìn)行冰乙醚沉降處理并使用高效液相色譜法(HPLC)純化，得到最終產(chǎn)物即另一個(gè)含有硒脲類SIRT5抑制彈頭的抑制劑。