米諾地爾分子印跡聚合物及其制備方法以及米諾地爾固相萃取柱和分離純化米諾地爾的方法與流程

本發(fā)明涉及米諾地爾檢測技術(shù)領(lǐng)域，是一種米諾地爾分子印跡聚合物及其制備方法以及米諾地爾固相萃取柱和使用該米諾地爾固相萃取分離純化米諾地爾的方法。

背景技術(shù)：

米諾地爾是20世紀(jì)70年代研制的一種鉀通道開放劑，主要用于治療頑固性高血壓。米諾地爾是一種二型的5a還原酶抑制劑。因?yàn)槊字Z地爾在高血壓的治療中發(fā)現(xiàn)其具有使毛發(fā)變長變粗的作用，所以目前它被開發(fā)應(yīng)用作為治療男性禿發(fā)的外用藥物。到目前為止，米諾地爾引起頭發(fā)生長的機(jī)制仍然沒有完全解釋清楚，認(rèn)為其中包含了多種途徑。1988年美國FDA批準(zhǔn)米諾地爾可用于治療男性雄激素性脫發(fā)。隨著人們生活水平的提高，用藥的天然性越來越受到追捧，嚴(yán)密監(jiān)測米諾地爾產(chǎn)品的含量對于患者用藥安全具有重要意義，而隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，米諾地爾的定量方法也由原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的分光光度法提高為高效液相色譜法，目前高效液相測定含有米諾地爾的產(chǎn)品中的米諾地爾需要對測定樣品進(jìn)行前處理，具體為：例如：稱取0.5g(精確至0.01g)試樣于10mL干燥具塞比色管中,加入10mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％三氯乙酸,超聲提取10min,再渦旋振蕩提取1min,以4 000r/min離心5min,上清液待凈化，若樣品中油脂含量較高,可用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％三氯乙酸溶液飽和的正己烷先除脂,再用SPE柱凈化，準(zhǔn)確吸取1.0mL待凈化液,移至已活化的MCX固相萃取柱中,依次用3mL水、3mL甲醇洗滌,棄去流出液，再用10mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％氨化甲醇洗脫,收集洗脫液，洗脫液于50℃水浴中用氮?dú)獯蹈珊?用甲醇定容至1.0mL，渦旋振蕩搖勻,過0.22μm濾膜供HPLC測定。由此可以看出，目前測定產(chǎn)品中的米諾地爾的方法前處理手段操作復(fù)雜，并且該前處理手段對樣品中米諾地爾的純化度不高，使得其后續(xù)采用高效液相色譜測定時，對樣品存在較大的干擾。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種米諾地爾分子印跡聚合物及其制備方法，根據(jù)本發(fā)明方法得到的米諾地爾分子印跡聚合物對米諾地爾具有較高的親和性，本發(fā)明還提供了一種米諾地爾固相萃取柱以及使用該米諾地爾固相萃取柱進(jìn)行萃取分離純化米諾地爾的方法，采用本發(fā)明的米諾地爾固相萃取柱進(jìn)行萃取分離純化米諾地爾的方法，有效解決了目前測定市售的含有米諾地爾的生發(fā)產(chǎn)品中米諾地爾時前處理手段操作復(fù)雜、樣品干擾大的問題。

本發(fā)明的技術(shù)方案之一是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的：一種米諾地爾分子印跡聚合物，按下述方法得到：

第一步，首先用無機(jī)酸對球形硅膠進(jìn)行回流清洗18小時至24小時得到活化后的硅膠，然后用水將活化后的硅膠洗至中性后烘干至恒重，其中，無機(jī)酸與球形硅膠的質(zhì)量比為5:1至10:1；

第二步，按重量份數(shù)計(jì)將1份活化后的硅膠分散于10份至25份的有機(jī)試劑Ⅰ中得到硅膠分散溶液，接著向其中加入3-氨丙基三乙氧基硅烷對球形硅膠進(jìn)行硅烷化，硅烷化的反應(yīng)條件為氮?dú)猸h(huán)境下110℃至150℃反應(yīng)18小時至24小時，球形硅膠與3-氨丙基三乙氧基硅烷的質(zhì)量比為1:1至1:1.5，硅烷化反應(yīng)完成后得到硅烷化硅膠，用有機(jī)試劑Ⅱ洗滌硅烷化硅膠除去未反應(yīng)完的3-氨丙基三乙氧基硅烷，然后將硅烷化硅膠干燥至恒重；

第三步，按1g干燥后的硅烷化硅膠溶解于10ml至20ml甲醇的比例將干燥后的硅烷化硅膠溶解于甲醇中得到硅烷化硅膠甲醇溶液，按干燥后的硅烷化硅膠：4，4′-偶氮-二(4-氰基戊酸)：對二甲氨基吡啶：二環(huán)己基碳二亞胺的質(zhì)量比為454.5:11.36:1:8.38至454.5:12.2:1:9.8的比例向硅烷化硅膠甲醇溶液中加入4，4′-偶氮-二(4-氰基戊酸)、對二甲氨基吡啶和二環(huán)己基碳二亞胺，采用超聲混合均勻并溶解，在氮?dú)猸h(huán)境下80℃至85℃反應(yīng)18小時至24小時得到表修飾硅膠混合物，將表修飾硅膠混合物進(jìn)行過濾后的濾餅用有機(jī)試劑Ⅲ進(jìn)行清洗除去未反應(yīng)完的4，4′-偶氮-二(4-氰基戊酸)、對二甲氨基吡啶和二環(huán)己基碳二亞胺得到表面修飾硅膠，然后將表面修飾硅膠干燥至恒重；

第四步，將功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑、引發(fā)劑、表面修飾硅膠和印跡分子米諾地爾采用超聲方式進(jìn)行混合均勻并溶解得到混合溶液，其中，原料中：印跡分子米諾地爾與功能單體之間物質(zhì)的量之比為0.005:1至5:1，交聯(lián)劑與功能單體物質(zhì)的量之比為0.5:1至20：1，表面修飾硅膠與功能單體物質(zhì)的量之比為1:1至1：1.5，致孔劑的用量為功能單體、交聯(lián)劑、表面修飾硅膠和印跡分子米諾地爾總體積的30％至75％，引發(fā)劑的用量為功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑、表面修飾硅膠和印跡分子米諾地爾總體積的2％至4％；

第五步，將混合溶液進(jìn)行聚合得到聚合物；

第六步，將聚合物先進(jìn)行過濾棄去濾液得到濾餅，然后用有機(jī)試劑Ⅳ沖洗濾餅除去其中的沒有參加反應(yīng)的功能單體、交聯(lián)劑和引發(fā)劑，再用有機(jī)混合溶液洗脫除去濾餅中的印跡分子米諾地爾得到無印跡分子的聚合物；

第七步，將無印跡分子的聚合物用有機(jī)試劑Ⅴ洗至中性，在真空下干燥至恒重得到米諾地爾分子印跡聚合物。

下面是對上述發(fā)明技術(shù)方案之一的進(jìn)一步優(yōu)化或/和改進(jìn)：

上述第五步中的聚合采用熱引發(fā)聚合，熱引發(fā)聚合的溫度為60℃至90℃，聚合反應(yīng)時間為6小時至48小時；或，第五步中的聚合采用光引發(fā)聚合，光引發(fā)聚合的條件為：高壓汞燈的功率為125W或150W，聚合時間為0.5小時至48小時。

上述第二步中，用有機(jī)試劑Ⅱ洗滌的具體方法為：先用苯洗滌2次至3次，再用丙酮洗滌2次至3次；或，第二步中，用有機(jī)試劑Ⅱ洗滌的具體方法為：先用甲苯洗滌2次至3次，再用乙醚洗滌2次至3次；或，第二步中，用有機(jī)試劑Ⅱ洗滌的具體方法為：先用乙酸乙酯洗滌2次至3次，再用甲醇洗滌2次至3次；或，第六步中的有機(jī)混合溶液為甲醇與乙酸按體積比9:1至4:1混合后得到的有機(jī)混合溶液；或，第六步中的有機(jī)混合溶液為乙腈與乙酸按體積比9:1至4:1混合后得到的有機(jī)混合溶液。

上述當(dāng)印跡分子米諾地爾呈酸性時功能單體選用酰胺類的單體，當(dāng)印跡分子米諾地爾呈堿性時功能單體選用吡啶類的單體或丙烯酸類的單體，酰胺類的單體為丙烯酰胺或二丙烯酰胺-2-甲基-1-丙磺酸，吡啶類的單體為2,6-二氨基吡啶或4-乙烯基吡啶(4-VP)或2-乙烯基吡啶，丙烯酸類單體為丙烯酸或甲基丙烯酸或三氯甲基丙烯酸或甲基丙烯酸甲酯或甲基丙烯酸羥乙基酯或甲基丙烯酸二乙胺乙基酯；或/和，交聯(lián)劑為三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯或N,N-亞甲基二丙烯酰胺或乙二醇二甲基丙烯酸酯或二乙烯基苯；或/和，致孔劑為二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙腈、甲醇、異丙醇中的一種；或/和，引發(fā)劑為有機(jī)過氧類或偶氮類化合物；或/和，第一步中，無機(jī)酸為鹽酸或硝酸，鹽酸或硝酸的體積百分?jǐn)?shù)濃度為5％至10％；或/和，第二步中，有機(jī)試劑Ⅰ為苯或甲苯或乙酸乙酯；或/和，第三步中，采用有機(jī)試劑Ⅲ進(jìn)行清洗時先用甲醇沖洗2次至3次，再用石油醚沖洗2次至3次；或/和，第六步中的有機(jī)試劑Ⅳ為二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙腈、甲、異丙醇中的一種；或/和，第七步中的有機(jī)試劑Ⅴ為二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙腈、甲醇、異丙醇中的一種。

本發(fā)明的技術(shù)方案之二是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的：一種米諾地爾分子印跡聚合物的制備方法，按下述步驟進(jìn)行：第一步，首先用無機(jī)酸對球形硅膠進(jìn)行回流清洗18小時至24小時得到活化后的硅膠，然后用水將活化后的硅膠洗至中性后烘干至恒重，其中，無機(jī)酸與球形硅膠的質(zhì)量比為5:1至10:1，球形硅膠為300目至400目的球形硅膠；

第二步，按重量份數(shù)計(jì)將1份活化后的硅膠分散于10份至25份的有機(jī)試劑Ⅰ中得到硅膠分散溶液，接著向其中加入3-氨丙基三乙氧基硅烷對球形硅膠進(jìn)行硅烷化，硅烷化的反應(yīng)條件為氮?dú)猸h(huán)境下110℃至150℃反應(yīng)18小時至24小時，球形硅膠與3-氨丙基三乙氧基硅烷的質(zhì)量比為1:1至1:1.5，硅烷化反應(yīng)完成后得到硅烷化硅膠，用有機(jī)試劑Ⅱ洗滌硅烷化硅膠除去未反應(yīng)完的3-氨丙基三乙氧基硅烷，然后將硅烷化硅膠干燥至恒重；

第三步，按1g干燥后的硅烷化硅膠溶解于10ml至20ml甲醇的比例將干燥后的硅烷化硅膠溶解于甲醇中得到硅烷化硅膠甲醇溶液，按干燥后的硅烷化硅膠：4，4′-偶氮-二(4-氰基戊酸)：對二甲氨基吡啶：二環(huán)己基碳二亞胺的質(zhì)量比為454.5:11.36:1:8.38至454.5:12.2:1:9.8的比例向硅烷化硅膠甲醇溶液中加入4，4′-偶氮-二(4-氰基戊酸)、對二甲氨基吡啶和二環(huán)己基碳二亞胺，采用超聲混合均勻并溶解，在氮?dú)猸h(huán)境下80℃至85℃反應(yīng)18小時至24小時得到表修飾硅膠混合物，將表修飾硅膠混合物進(jìn)行過濾后的濾餅用有機(jī)試劑Ⅲ進(jìn)行清洗除去未反應(yīng)完的4，4′-偶氮-二(4-氰基戊酸)、對二甲氨基吡啶和二環(huán)己基碳二亞胺得到表面修飾硅膠，然后將表面修飾硅膠干燥至恒重；

第四步，將功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑、引發(fā)劑、表面修飾硅膠和印跡分子米諾地爾采用超聲方式進(jìn)行混合均勻并溶解得到混合溶液，其中，原料中：印跡分子米諾地爾與功能單體之間物質(zhì)的量之比為0.005:1至5:1，交聯(lián)劑與功能單體物質(zhì)的量之比為0.5:1至20：1，表面修飾硅膠與功能單體物質(zhì)的量之比為1:1至1：1.5，致孔劑的用量為功能單體、交聯(lián)劑、表面修飾硅膠和印跡分子米諾地爾總體積的30％至75％，引發(fā)劑的用量為功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑、表面修飾硅膠和印跡分子米諾地爾總體積的2％至4％；

第五步，將混合溶液進(jìn)行聚合得到聚合物；

第六步，將聚合物先進(jìn)行過濾棄去濾液得到濾餅，然后用有機(jī)試劑Ⅳ沖洗濾餅除去其中的沒有參加反應(yīng)的功能單體、致孔劑、交聯(lián)劑和引發(fā)劑，再用有機(jī)混合溶液洗脫除去濾餅中的印跡分子米諾地爾得到無印跡分子的聚合物；

第七步，將無印跡分子的聚合物用有機(jī)試劑Ⅴ洗至中性，在真空下干燥至恒重得到米諾地爾分子印跡聚合物。

下面是對上述發(fā)明技術(shù)方案之二的進(jìn)一步優(yōu)化或/和改進(jìn)：

上述第五步中的聚合采用熱引發(fā)聚合，熱引發(fā)聚合的溫度為60℃至90℃，聚合反應(yīng)時間為6小時至48小時；或，第五步中的聚合采用光引發(fā)聚合，光引發(fā)聚合的條件為：高壓汞燈的功率為125W或150W，聚合時間為0.5小時至48小時。

上述第二步中，用有機(jī)試劑Ⅱ洗滌的具體方法為：先用苯洗滌2次至3次，再用丙酮洗滌2次至3次；或，第二步中，用有機(jī)試劑Ⅱ洗滌的具體方法為：先用甲苯洗滌2次至3次，再用乙醚洗滌2次至3次；或，第二步中，用有機(jī)試劑Ⅱ洗滌的具體方法為：先用乙酸乙酯洗滌2次至3次，再用甲醇洗滌2次至3次；或，第六步中的有機(jī)混合溶液為甲醇與乙酸按體積比9:1至4:1混合后得到的有機(jī)混合溶液；或，第六步中的有機(jī)混合溶液為乙腈與乙酸按體積比9:1至4:1混合后得到的有機(jī)混合溶液。

上述當(dāng)印跡分子米諾地爾呈酸性時功能單體選用酰胺類的單體，當(dāng)印跡分子米諾地爾呈堿性時功能單體選用吡啶類的單體或丙烯酸類的單體，酰胺類的單體為丙烯酰胺或二丙烯酰胺-2-甲基-1-丙磺酸，吡啶類的單體為2,6-二氨基吡啶或4-乙烯基吡啶(4-VP)或2-乙烯基吡啶，丙烯酸類單體為丙烯酸或甲基丙烯酸或三氯甲基丙烯酸或甲基丙烯酸甲酯或甲基丙烯酸羥乙基酯或甲基丙烯酸二乙胺乙基酯；或/和，交聯(lián)劑為三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯或N,N-亞甲基二丙烯酰胺或乙二醇二甲基丙烯酸酯或二乙烯基苯；或/和，致孔劑為二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙腈、甲醇、異丙醇中的一種；或/和，引發(fā)劑為有機(jī)過氧類或偶氮類化合物；或/和，第一步中，無機(jī)酸為鹽酸或硝酸，鹽酸或硝酸的體積百分?jǐn)?shù)濃度為5％至10％；或/和，第二步中，有機(jī)試劑Ⅰ為苯或甲苯或乙酸乙酯；或/和，第三步中，采用有機(jī)試劑Ⅲ進(jìn)行清洗時先用甲醇沖洗2次至3次，再用石油醚沖洗2次至3次；或/和，第六步中的有機(jī)試劑Ⅳ為二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙腈、甲、異丙醇中的一種；或/和，第七步中的有機(jī)試劑Ⅴ為二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙腈、甲醇、異丙醇中的一種。

本發(fā)明的技術(shù)方案之三是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的：一種使用米諾地爾分子印跡聚合物得到的米諾地爾固相萃取柱，按下述方法得到：將米諾地爾分子印跡聚合物填充到注射器中制得米諾地爾固相萃取柱。

本發(fā)明的技術(shù)方案之四是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的：一種使用米諾地爾固相萃取柱進(jìn)行分離純化米諾地爾的方法，按下述方法進(jìn)行：第一步，按體積份數(shù)計(jì)，分別取1份至2份市售含有米諾地爾的生發(fā)產(chǎn)品、3份至5份的水、3份至5份的甲醇、3份至5份的甲醇和乙酸按體積比9:1混合的混合洗脫液；第二步，按1.5g至2g米諾地爾分子印跡聚合物處理1mL至2mL市售含有米諾地爾的生發(fā)產(chǎn)品計(jì)，選擇合適規(guī)模的米諾地爾固相萃取柱；第三步，將市售含有米諾地爾的生發(fā)產(chǎn)品加入到米諾地爾固相萃取柱中，先依次用水和甲醇進(jìn)行沖洗，再用混合洗脫液進(jìn)行洗脫，收集洗脫成分。

本發(fā)明方法得到的米諾地爾分子印跡聚合物對米諾地爾具有較高的親和性，采用本發(fā)明的米諾地爾分子印跡聚合物制備得到的米諾地爾固相萃取柱進(jìn)行萃取分離純化米諾地爾的方法，使得測定市售的含有米諾地爾的生發(fā)產(chǎn)品中米諾地爾時前處理手段操作簡單，便于實(shí)施，并且，采用對米諾地爾具有較高親和性的米諾地爾分子印跡聚合物分離純化待測樣品，有效提高待測樣品的純度，有效減少高效液相色譜測定待測樣品時對樣品的干擾。

附圖說明

附圖1為本發(fā)明溶液中米諾地爾的濃度變化與單位質(zhì)量聚合物微球?qū)Φ孜锏奈搅康年P(guān)系曲線圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明不受下述實(shí)施例的限制，可根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案與實(shí)際情況來確定具體的實(shí)施方式。本發(fā)明中所提到各種化學(xué)試劑和化學(xué)用品如無特殊說明，均為現(xiàn)技術(shù)中公知公用的化學(xué)試劑和化學(xué)用品；本發(fā)明中的百分?jǐn)?shù)如沒有特殊說明，均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)；本發(fā)明中的水如沒有特殊說明，為自來水或純凈水；本發(fā)明中的溶液若沒有特殊說明，均為溶劑為水的水溶液，例如，鹽酸溶液即為鹽酸水溶液；本發(fā)明中的常溫一般指15℃到25℃的溫度，一般定義為25℃。

下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步描述：

實(shí)施例1，該米諾地爾分子印跡聚合物，按下述制備方法得到：

第一步，首先用無機(jī)酸對球形硅膠進(jìn)行回流清洗18小時至24小時得到活化后的硅膠，然后用水將活化后的硅膠洗至中性后烘干至恒重，其中，無機(jī)酸與球形硅膠的質(zhì)量比為5:1至10:1，球形硅膠為300目至400目的球形硅膠；

第二步，按重量份數(shù)計(jì)將1份活化后的硅膠分散于10份至25份的有機(jī)試劑Ⅰ中得到硅膠分散溶液，接著向其中加入3-氨丙基三乙氧基硅烷對球形硅膠進(jìn)行硅烷化，硅烷化的反應(yīng)條件為氮?dú)猸h(huán)境下110℃至150℃反應(yīng)18小時至24小時，球形硅膠與3-氨丙基三乙氧基硅烷的質(zhì)量比為1:1至1:1.5，硅烷化反應(yīng)完成后得到硅烷化硅膠，用有機(jī)試劑Ⅱ洗滌硅烷化硅膠除去未反應(yīng)完的3-氨丙基三乙氧基硅烷，然后將硅烷化硅膠干燥至恒重；

第三步，按1g干燥后的硅烷化硅膠溶解于10ml至20ml甲醇的比例將干燥后的硅烷化硅膠溶解于甲醇中得到硅烷化硅膠甲醇溶液，按干燥后的硅烷化硅膠：4，4′-偶氮-二(4-氰基戊酸)：對二甲氨基吡啶：二環(huán)己基碳二亞胺的質(zhì)量比為454.5:11.36:1:8.38至454.5:12.2:1:9.8的比例向硅烷化硅膠甲醇溶液中加入4，4′-偶氮-二(4-氰基戊酸)、對二甲氨基吡啶和二環(huán)己基碳二亞胺，采用超聲混合均勻并溶解，在氮?dú)猸h(huán)境下80℃至85℃反應(yīng)18小時至24小時得到表修飾硅膠混合物，將表修飾硅膠混合物進(jìn)行過濾后的濾餅用有機(jī)試劑Ⅲ進(jìn)行清洗除去未反應(yīng)完的4，4′-偶氮-二(4-氰基戊酸)、對二甲氨基吡啶和二環(huán)己基碳二亞胺得到表面修飾硅膠，然后將表面修飾硅膠干燥至恒重；

第四步，將功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑、引發(fā)劑、表面修飾硅膠和印跡分子米諾地爾采用超聲方式進(jìn)行混合均勻并溶解得到混合溶液，其中，原料中：印跡分子米諾地爾與功能單體之間物質(zhì)的量之比為0.005:1至5:1，交聯(lián)劑與功能單體物質(zhì)的量之比為0.5:1至20：1，表面修飾硅膠與功能單體物質(zhì)的量之比為1:1至1：1.5，致孔劑的用量為功能單體、交聯(lián)劑、表面修飾硅膠和印跡分子米諾地爾總體積的30％至75％，引發(fā)劑的用量為功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑、表面修飾硅膠和印跡分子米諾地爾總體積的2％至4％；

第五步，將混合溶液進(jìn)行聚合得到聚合物；

第六步，將聚合物先進(jìn)行過濾棄去濾液得到濾餅，然后用有機(jī)試劑Ⅳ沖洗濾餅除去其中的沒有參加反應(yīng)的功能單體、致孔劑、交聯(lián)劑和引發(fā)劑，再用有機(jī)混合溶液洗脫除去濾餅中的印跡分子米諾地爾得到無印跡分子的聚合物；

第七步，將無印跡分子的聚合物用有機(jī)試劑Ⅴ洗至中性，在真空下干燥至恒重得到米諾地爾分子印跡聚合物。根據(jù)本發(fā)明方法得到的米諾地爾分子印跡聚合物對米諾地爾具有較高的親和性。

實(shí)施例2，該米諾地爾分子印跡聚合物按下述制備方法得到：第一步，首先用無機(jī)酸對球形硅膠進(jìn)行回流清洗18小時或24小時得到活化后的硅膠，然后用水將活化后的硅膠洗至中性后烘干至恒重，其中，無機(jī)酸與球形硅膠的質(zhì)量比為5:1或10:1，球形硅膠為300目或400目的球形硅膠；

第二步，按重量份數(shù)計(jì)將1份活化后的硅膠分散于10份或25份的有機(jī)試劑Ⅰ中得到硅膠分散溶液，接著向其中加入3-氨丙基三乙氧基硅烷對球形硅膠進(jìn)行硅烷化，硅烷化的反應(yīng)條件為氮?dú)猸h(huán)境下110℃或150℃反應(yīng)18小時或24小時，球形硅膠與3-氨丙基三乙氧基硅烷的質(zhì)量比為1:1或1:1.5，硅烷化反應(yīng)完成后得到硅烷化硅膠，用有機(jī)試劑Ⅱ洗滌硅烷化硅膠除去未反應(yīng)完的3-氨丙基三乙氧基硅烷，然后將硅烷化硅膠干燥至恒重；

第三步，按1g干燥后的硅烷化硅膠溶解于10ml或20ml甲醇的比例將干燥后的硅烷化硅膠溶解于甲醇中得到硅烷化硅膠甲醇溶液，按干燥后的硅烷化硅膠：4，4′-偶氮-二(4-氰基戊酸)：對二甲氨基吡啶：二環(huán)己基碳二亞胺的質(zhì)量比為454.5:11.36:1:8.38或454.5:12.2:1:9.8的比例向硅烷化硅膠甲醇溶液中加入4，4′-偶氮-二(4-氰基戊酸)、對二甲氨基吡啶和二環(huán)己基碳二亞胺，采用超聲混合均勻并溶解，在氮?dú)猸h(huán)境下80℃-85℃反應(yīng)18小時或24小時得到表修飾硅膠混合物，將表修飾硅膠混合物進(jìn)行過濾后的濾餅用有機(jī)試劑Ⅲ進(jìn)行清洗除去未反應(yīng)完的4，4′-偶氮-二(4-氰基戊酸)、對二甲氨基吡啶和二環(huán)己基碳二亞胺得到表面修飾硅膠，然后將表面修飾硅膠干燥至恒重；

第四步，將功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑、引發(fā)劑、表面修飾硅膠和印跡分子米諾地爾采用超聲方式進(jìn)行混合均勻并溶解得到混合溶液，其中，原料中：印跡分子米諾地爾與功能單體之間物質(zhì)的量之比為0.005:1或5:1，交聯(lián)劑與功能單體物質(zhì)的量之比為0.5:1或20：1，表面修飾硅膠與功能單體物質(zhì)的量之比為1:1或1：1.5，致孔劑的用量為功能單體、交聯(lián)劑、表面修飾硅膠和印跡分子米諾地爾總體積的30％或75％，引發(fā)劑的用量為功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑、表面修飾硅膠和印跡分子米諾地爾總體積的2％或4％；

第五步，將混合溶液進(jìn)行聚合得到聚合物；

第六步，將聚合物先進(jìn)行過濾棄去濾液得到濾餅，然后用有機(jī)試劑Ⅳ沖洗濾餅除去其中的沒有參加反應(yīng)的功能單體、致孔劑、交聯(lián)劑和引發(fā)劑，再用有機(jī)混合溶液洗脫除去濾餅中的印跡分子米諾地爾得到無印跡分子的聚合物；

第七步，將無印跡分子的聚合物用有機(jī)試劑Ⅴ洗至中性，在真空下干燥至恒重得到米諾地爾分子印跡聚合物。

實(shí)施例3，作為上述實(shí)施例的優(yōu)化，第五步中的聚合采用熱引發(fā)聚合，熱引發(fā)聚合的溫度為60℃至90℃，聚合反應(yīng)時間為6小時至48小時；或，第五步中的聚合采用光引發(fā)聚合，光引發(fā)聚合的條件為：高壓汞燈的功率為125W或150W，聚合時間為0.5小時至48小時。

實(shí)施例4，作為上述實(shí)施例的優(yōu)化，用有機(jī)試劑Ⅱ洗滌的具體方法為：先用苯洗滌2次至3次，再用丙酮洗滌2次至3次；或，第二步中，用有機(jī)試劑Ⅱ洗滌的具體方法為：先用甲苯洗滌2次至3次，再用乙醚洗滌2次至3次；或，第二步中，用有機(jī)試劑Ⅱ洗滌的具體方法為：先用乙酸乙酯洗滌2次至3次，再用甲醇洗滌2次至3次；或，第六步中的有機(jī)混合溶液為甲醇與乙酸按體積比9:1至4:1混合后得到的有機(jī)混合溶液；或，第六步中的有機(jī)混合溶液為乙腈與乙酸按體積比9:1至4:1混合后得到的有機(jī)混合溶液。

實(shí)施例5，作為上述實(shí)施例的優(yōu)化，當(dāng)印跡分子呈酸性時功能單體選用酰胺類的單體，當(dāng)印跡分子呈堿性時選用吡啶類的單體或丙烯酸類的單體，酰胺類的單體為丙烯酰胺或二丙烯酰胺-2-甲基-1-丙磺酸，吡啶類的單體為2,6-二氨基吡啶或4-乙烯基吡啶(4-VP)或2-乙烯基吡啶，丙烯酸類為丙烯酸或甲基丙烯酸或三氯甲基丙烯酸或甲基丙烯酸甲酯或甲基丙烯酸羥乙基酯或甲基丙烯酸二乙胺乙基酯；或/和，交聯(lián)劑為三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯或N,N-亞甲基二丙烯酰胺或乙二醇二甲基丙烯酸酯或二乙烯基苯；或/和，致孔劑為二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙腈、甲醇、異丙醇中的一種；或/和，引發(fā)劑為有機(jī)過氧類或偶氮類化合物；或/和，第一步中，無機(jī)酸為鹽酸或硝酸，鹽酸或硝酸的體積百分?jǐn)?shù)濃度為5％至10％；或/和，第二步中，有機(jī)試劑Ⅰ為苯或甲苯或乙酸乙酯；或/和，第三步中，采用有機(jī)試劑Ⅲ進(jìn)行清洗先用甲醇沖洗2次至3次，再用石油醚沖洗2次至3次；或/和，第六步中的有機(jī)試劑Ⅳ為二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙腈、甲醇、異丙醇中的一種；或/和，第七步中的有機(jī)試劑Ⅴ為二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙腈、甲醇、異丙醇中的一種。

實(shí)施例6，該使用米諾地爾分子印跡聚合物得到的米諾地爾固相萃取柱，按下述方法得到：將米諾地爾分子印跡聚合物填充到注射器中制得米諾地爾固相萃取柱。

實(shí)施例7，該使用米諾地爾固相萃取柱進(jìn)行分離純化米諾地爾的方法，按下述方法進(jìn)行：第一步，按體積份數(shù)計(jì)，分別取1份至2份市售含有米諾地爾的生發(fā)產(chǎn)品、3份至5份的水、3份至5份的甲醇、3份至5份的甲醇和乙酸按體積比9:1混合的混合洗脫液；第二步，按1.5g至2g米諾地爾分子印跡聚合物處理1mL至2mL市售含有米諾地爾的生發(fā)產(chǎn)品計(jì)，選擇合適規(guī)模的米諾地爾固相萃取柱；第三步，將市售含有米諾地爾的生發(fā)產(chǎn)品加入到米諾地爾固相萃取柱中，先依次用水和甲醇進(jìn)行沖洗，再用混合洗脫液進(jìn)行洗脫，收集洗脫成分。采用本發(fā)明的米諾地爾固相萃取柱進(jìn)行萃取分離純化米諾地爾的方法，使得測定市售的含有米諾地爾的生發(fā)產(chǎn)品中米諾地爾是前處理手段操作簡單，便于實(shí)施，并且，采用對米諾地爾具有較高親和性的米諾地爾分子印跡聚合物分離純化待測樣品，有效提高待測樣品的純度，有效減少高效液相色譜測定待測樣品時對樣品的干擾。

將采用本發(fā)明上述實(shí)施例得到的米諾地爾分子印跡聚合物作為MIPs(P1)；采用本發(fā)明上述實(shí)施例的方法，但不添加印跡分子米諾地爾，制備空白印跡分子聚合物NIPs(P2)。

稱取一組等量的MIPs(P1)和NIPs(P2)各30mg，分別置于離心管中，加入0mmol/L至2mmol/L米諾地爾乙腈溶液5mL，于恒溫震蕩器上20℃180rpm振蕩24h，然后9000r/min離心10min，取吸附液稀釋至一定體積，用紫外分光光度計(jì)測定平衡吸附液中米諾地爾的濃度，根據(jù)結(jié)合前后溶液中米諾地爾的濃度變化計(jì)算單位質(zhì)量聚合物微球?qū)Φ孜锏奈搅?，見圖1。由圖1可以看出，MIPs(P1)的吸附量明顯高于NIPs(P2)對米諾地爾的吸附性能，說明MIPs(P1)具有較高的親和性。

以上技術(shù)特征構(gòu)成了本發(fā)明的實(shí)施例，其具有較強(qiáng)的適應(yīng)性和實(shí)施效果，可根據(jù)實(shí)際需要增減非必要的技術(shù)特征，來滿足不同情況的需求。