一種高純度大蒜三硫二丙烯的制備方法與流程

本發(fā)明涉及大蒜油的提純方法領(lǐng)域，具體涉及一種高純度大蒜三硫二丙烯的制備方法。

背景技術(shù)：

大蒜三硫二丙烯是大蒜的主要活性成分，來源于百合科蔥屬植物大蒜（Allium sativum L）的地下鱗莖。它的殺菌作用在高等植物中最強(qiáng)，能夠殺滅很多病源菌及人體內(nèi)的寄生蟲，在西歐被稱為“天然盤尼西林”；具有較強(qiáng)的抗癌效果；還可以增加血漿中胰島素的含量，降低血糖水平，被科學(xué)家譽(yù)為植物黃金。大蒜素注射液為國家食品藥品監(jiān)督管理局通報(bào)的高風(fēng)險(xiǎn)品種之一，引起不安全的因素主要是含有二硫二丙烯等易降解的雜質(zhì)；工業(yè)生產(chǎn)中也有合成大蒜三硫二丙烯，但其中含有的氯丙烯等雜質(zhì)很難除去，不應(yīng)代替天然大蒜三硫二丙烯入藥。

對于大蒜三硫二丙烯的提取工藝，孫淑愛，胡秀沂，劉麗梅等分別用水蒸汽蒸餾的方法進(jìn)行了提取；李瑜，梁永清，楊銳，李志東等人分別采用不同的溶劑進(jìn)行了萃取研究；彭力宏和畢艷紅等人分別研究過用超臨界CO₂萃取及分子蒸餾技術(shù)提取大蒜三硫二丙烯；H.B. Sowbhagya等人用酶輔助法提取過大蒜三硫二丙烯。用這些方法分離得到的大蒜三硫二丙烯純度均相對較低。

專利105461604A用固相萃取技術(shù)對大蒜素進(jìn)行了純化，該專利存在以下問題：國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中大蒜素【性狀】項(xiàng)下規(guī)定：“本品能與無水乙醇或氯仿混溶，在水中幾乎不溶”，該專利采用冷水溶解提取大蒜素，提取的物質(zhì)可能是蒜氨酸，與本專利目標(biāo)化合物不同；再者，純化時(shí)洗脫液為甲醇-水，得到的大蒜素含有較多甲醇，不適合醫(yī)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提出了一種高純度大蒜三硫二丙烯制備方法，解決了大蒜三硫二丙烯純度低、不適合醫(yī)用、去除大蒜二硫二丙烯等雜質(zhì)的問題，且制備的產(chǎn)品中不含有甲醇?xì)埩簟?/p>

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種高純度大蒜三硫二丙烯制備方法，步驟如下：

（1）大蒜去皮粉碎、置于空氣中10-15分鐘，采用水蒸汽蒸餾技術(shù)提取大蒜揮發(fā)油，蒸餾時(shí)間為30-45分鐘；

（2）將步驟（1）中的大蒜揮發(fā)油加入到C₁₈或C₈色譜柱中，用體積比為60~90%的甲醇-水溶液洗脫，得到大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液；

（3）用HPLC法檢測步驟（2）中得到的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液的純度，將純度大于90%的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液收集起來；

（4）用注射用大豆油或玉米油分三次萃取步驟（3）收集的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液，得到大蒜三硫二丙烯油溶液；

（5）用水對步驟（4）得到的大蒜三硫二丙烯油溶液進(jìn)行萃取，萃取三次，得到不含甲醇的大蒜三硫二丙烯油溶液。

所述步驟（1）中水蒸汽蒸餾技術(shù)為：向粉碎的大蒜中加入三倍量的蒸餾水，用揮發(fā)油提取裝置加熱至沸騰，收集餾出物大蒜揮發(fā)油。

所述步驟（3）中HPLC法檢測色譜條件為：

流動(dòng)相為甲醇：水：甲酸=80：20：0.1；色譜柱為Hypersil-ODS(5μm，250mm×4.6mm)；柱溫為室溫；流速為1ml/min；UV檢測波長為252 nm；進(jìn)樣量為10μl。

步驟（3）濃度低于90%的部分另外收集，重復(fù)步驟（2），（3）的操作，直到大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液的濃度高于90%。

所述步驟（4）中大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液與注射用大豆油或玉米油的體積比為10-20。

所述步驟（5）中用水的用量為步驟（4）中注射用大豆油或玉米油體積的5~10倍。

對最終制備的三硫二丙烯利用GC檢測，參考《中國藥典》（2015版，第四部 0871，采用乙醇做溶劑）GC色譜條件：空氣流速：400ml/min，氫氣和氮?dú)饬魉伲?0ml/min；色譜柱：TG-WAXMS（30m×0.32mm，0.5μm）；氣化室溫度：100℃，柱溫：50℃維持1min，20℃/min升至150℃，檢測器溫度：200℃。分流比：50：1。

本發(fā)明的有益效果是：本法中選擇的色譜條件能夠?qū)⒋笏馊蚨┡c大蒜二硫二丙烯等雜質(zhì)很好的分離，降低大蒜二硫二丙烯的含量，且最終制備的產(chǎn)品中不含甲醇?xì)埩簟１痉椒蔀橛歪槃┗蚱渌苿┨峁┘兌容^高的天然大蒜油，本發(fā)明也適合合成大蒜三硫二丙烯中氯丙烯的去除，本發(fā)明制備的高純度的三硫二丙烯適合醫(yī)用。

附圖說明

圖1是實(shí)施例1中大蒜素對照品HPLC圖（保留時(shí)間10.886 min）；

圖2是實(shí)施例1步驟（4）萃取后甲醇-水溶液的HPLC圖，

圖3是實(shí)施例1中甲醇對照溶液GC圖（保留時(shí)間3.902 min的峰為甲醇）；

圖4是實(shí)施例1步驟（5）制備的大蒜三硫二丙烯油溶液GC圖；

圖5是純度檢查HPLC色譜圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

本實(shí)施例中高純度大蒜三硫二丙烯制備方法如下：

（1）大蒜去皮粉碎，置于空氣中10分鐘，采用水蒸汽蒸餾技術(shù)提取大蒜油，直接讓粉碎的大蒜與三倍質(zhì)量的水混合，用揮發(fā)油提取裝置加熱至沸騰，收集大蒜揮發(fā)油，蒸餾時(shí)間為30分鐘；

（2）將步驟（1）中的大蒜揮發(fā)油加入到C₁₈色譜柱中，用體積比為60%的甲醇-水溶液洗脫，得到大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液；

（3）用HPLC法檢測步驟（2）中得到的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液的純度，將純度大于90%的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液收集起來；將檢測到的純度低于90%的三硫二丙烯的甲醇-水溶液另外收集，重復(fù)步驟2的操作；

HPLC法色譜條件：流動(dòng)相為甲醇：水：甲酸=80：20：0.1，色譜柱為Hypersil-ODS(5 μm，250 mm × 4.6 mm)，柱溫為室溫，流速為1ml/min，UV檢測波長為252 nm，進(jìn)樣量為10 μl；

（4）用注射用大豆油分三次萃取步驟（3）收集的三硫二丙烯的甲醇-水溶液，大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液與注射用大豆油或玉米油的體積比為10-20倍，得到大蒜三硫二丙烯油溶液，利用HPLC檢測，萃取三次后甲醇-水中幾乎無大蒜三硫二丙烯，色譜圖如圖1、2所示；

（5）用水對步驟（4）得到的大蒜三硫二丙烯油溶液進(jìn)行萃取，水的用量為注射用大豆油體積的5~10倍，萃取三次，得到大蒜三硫二丙烯溶液。

對步驟（5）得到的大蒜三硫二丙烯溶液進(jìn)行GC檢測，對照品溶液（分析甲醇配制的乙醇溶液）和大蒜三硫二丙烯的濃度均參考《中國藥典》（2015版，第四部0871，采用乙醇做溶劑）GC色譜條件：空氣流速：400ml/min，氫氣和氮?dú)饬魉伲?0ml/min；色譜柱：TG-WAXMS（30m×0.32mm，0.5μm）；氣化室溫度：100℃，柱溫：50℃維持1min，20℃/min升至150℃，檢測器溫度：200℃，分流比為50：1。

檢測結(jié)果見圖3和圖4，從圖中可以看出得到的大蒜三硫二丙烯溶液中無甲醇?xì)埩簦粡膱D5可看出，所得大蒜三硫二丙烯的純度超過92%。

實(shí)施例2

本實(shí)施例中高純度大蒜三硫二丙烯制備方法如下：

（1）大蒜去皮粉碎，置于空氣中12分鐘，采用水蒸汽蒸餾技術(shù)提取大蒜油，直接讓粉碎的大蒜與三倍質(zhì)量的水混合，用揮發(fā)油提取裝置加熱至沸騰，收集大蒜揮發(fā)油，蒸餾時(shí)間為40分鐘；

（2）將步驟（1）中的大蒜揮發(fā)油加入到C₈色譜柱中，用體積比為80%的甲醇-水溶液洗脫，得到大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液；

（3）用HPLC法檢測步驟（2）中得到的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液的純度，將純度大于90%的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液收集起來；將檢測到的純度低于90%的三硫二丙烯的甲醇-水溶液另外收集，重復(fù)步驟2的操作；

HPLC色譜條件：流動(dòng)相為甲醇：水：甲酸=80：20：0.1，色譜柱為Hypersil-ODS(5 μm，250 mm × 4.6 mm)，柱溫：室溫，流速：1ml/min，UV檢測波長：252 nm，進(jìn)樣量：10 μl；

（4）用注射玉米油分三次萃取步驟（3）收集的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液，大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液與注射用大豆油或玉米油的體積比為15倍，得到大蒜三硫二丙烯油溶液，利用HPLC檢測，萃取三次后水中幾乎無大蒜三硫二丙烯；

（5）用水對步驟（4）得到的大蒜三硫二丙烯油溶液進(jìn)行萃取，水的用量為注射用大豆油體積的10倍，萃取三次，得到大蒜三硫二丙烯溶液。

對步驟（5）得到的三硫二丙烯溶液進(jìn)行GC檢測，檢測方法同實(shí)施例1，結(jié)果顯示無甲醇?xì)埩簦K產(chǎn)物中大蒜三硫二丙烯的純度超過90%。

實(shí)施例3

本實(shí)施例中高純度大蒜三硫二丙烯制備方法如下：

（1）大蒜去皮粉碎，置于空氣中15分鐘，采用水蒸汽蒸餾技術(shù)提取大蒜油，直接讓粉碎的大蒜與三倍質(zhì)量的水混合，用揮發(fā)油提取裝置加熱至沸騰，收集大蒜揮發(fā)油，蒸餾時(shí)間為45分鐘；

（2）將步驟（1）中的大蒜油加入到C₁₈色譜柱中，用體積比為90%的甲醇-水溶液洗脫，得到三硫二丙烯的甲醇-水溶液；

（3）用HPLC法檢測步驟（2）中得到的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液的純度，將純度大于90%的大蒜三硫二丙烯的甲醇-水溶液收集起來；將檢測到的純度低于90%的三硫二丙烯的甲醇-水溶液另外收集，重復(fù)步驟2的操作；

HPLC色譜條件：流動(dòng)相為甲醇：水：甲酸=80：20：0.1，色譜柱為Hypersil-ODS(5 μm，250 mm × 4.6 mm)，柱溫：室溫，流速：1ml/min，UV檢測波長：252 nm，進(jìn)樣量：10 μl；

（4）用注射玉米油分三次萃取步驟（3）收集的三硫二丙烯的甲醇-水溶液，注射用大豆油的的體積為三硫二丙烯的甲醇-水溶液的100倍，得到大蒜三硫二丙烯油溶液，利用HPLC檢測，萃取三次后水中幾乎無大蒜三硫二丙烯；

（5）用水對步驟（4）得到的大蒜三硫二丙烯油溶液進(jìn)行萃取，水的用量為注射用大豆油體積的10倍，萃取三次，得到大蒜三硫二丙烯溶液。

對步驟（5）得到的三硫二丙烯溶液進(jìn)行GC檢測，檢測方法同實(shí)施例1，結(jié)果顯示無甲醇?xì)埩?，終產(chǎn)物中大蒜三硫二丙烯的純度超過90%。