克林霉素亞砜異構(gòu)體的拆分方法與流程

本發(fā)明涉及一種亞砜類化合物異構(gòu)體的拆分方法，具體涉及用高效液相色譜法拆分克林霉素亞砜混旋體。

背景技術(shù)：
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克林霉素亞砜是藥物克林霉素在體內(nèi)的活性代謝產(chǎn)物，是一種手性化合物。由于亞砜類化合物具有錐形結(jié)構(gòu)，存在三個明顯的位阻即氧原子及烷基或者芳基和電子差異的配基，使其具有光學(xué)活性。

拆分克林霉素亞砜的異構(gòu)體，得到單一的手性亞砜化合物，可以為于克林霉素原料藥及其制劑的質(zhì)量研究提供雜質(zhì)對照品，在拆分藥物克林霉素及同類化合物時也可提供參考，還可以為其他不對稱反應(yīng)提供誘導(dǎo)劑。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的是提供一種操作簡便，收率高的克林霉素亞砜的拆分方法。

本發(fā)明利用克林霉素亞砜光學(xué)活性的特點，用高效液相色譜法拆分其異構(gòu)體，能夠得到單一的手性亞砜化合物。

本發(fā)明通過實驗，找到了合適的高效液相色譜條件，得到目標(biāo)產(chǎn)物克林霉素亞砜：

高效液相色譜(HPLC)條件為：

流動相：A：乙腈；B：水，體積比為10％:90％(0分鐘)，40％:60％(20分鐘)，10％:90％(21分鐘)，10％:90％(30分鐘)；并在流動相中添加適量有機酸或者揮發(fā)性有機酸鹽。

流動相中加入有機酸或者揮發(fā)性有機酸鹽，有助于得到更好的分離色譜峰，并減少拖尾等。

所述有機酸選自甲酸和/或冰乙酸，體積百分比為0.05％-0.15％，優(yōu)選0.1％；

所述揮發(fā)性有機酸鹽選自甲酸銨和/或乙酸銨，濃度為5-20mmol/L，優(yōu)選15mmol/L。

所用的色譜柱是辛烷鍵合硅膠柱或十八烷基色譜柱。

本發(fā)明的特點在于純化方法簡單，分離效果好。

附圖說明：

圖1為實施例1得到的克林霉素亞砜的HPLC色譜圖(縱座標(biāo)是強度峰面積(單位：AU)，橫座標(biāo)是時間(單位：min))。

圖2為圖1中RT7.332色譜峰的[M+H]質(zhì)譜圖(縱座標(biāo)是強度Intensity(單位：cps)，橫座標(biāo)是質(zhì)荷比m/z)；

圖3為圖1中RT8.570色譜峰的[M+H]質(zhì)譜圖(縱座標(biāo)是強度Intensity(單位：cps)，橫座標(biāo)是質(zhì)荷比m/z)；

圖4為圖1中RT9.159色譜峰的[M+H]質(zhì)譜圖(縱座標(biāo)是強度Intensity(單位：cps)，橫座標(biāo)是質(zhì)荷比m/z)。

具體實施方式

下面通過具體實施例來說明本發(fā)明，但本發(fā)明不受這些實施例限制。

實施例1克林霉素亞砜的拆分

稱取5.1023g鹽酸克林霉素加入50ml圓底燒瓶中，加入2ml水，再加入4.5ml30％過氧化氫水溶液，振搖使溶解，于冰浴中(10℃)攪拌2小時后，加入三倍體積的無水乙醇溶液，即有固體析出，抽濾，固體置烘箱中常溫減壓抽干，得到4.97g克林霉素亞砜。收率為97.4％。

將得到的固體用水配制成濃度約為100μg/ml的溶液，進行高效液相色譜儀分析。

試驗材料、儀器與色譜條件

LC-2010AHT日本島津高效液相色譜儀色譜柱：Agilent XDB-C8柱(150mm×4.6mm，5μm)，進樣量為100μl；流速：1.0ml/min。流動相為乙腈-醋酸銨，按下表進行線性梯度洗脫：

克林霉素亞砜結(jié)構(gòu)中的S帶有一對孤對電子，該孤對電子的位置不同導(dǎo)致該克林霉素亞砜具有不同的構(gòu)型。

圖1中顯示，該色譜條件下，檢測到RT7.3302、RT8.570以及RT9.159三個色譜峰，峰面積比分別為29.2％，66.9％及3.9％。分別收集RT7.3302、RT8.570及RT9.159色譜峰的接出液進行電噴霧質(zhì)譜分析。

試驗儀器與試驗條件

美國Applied Biosystems公司API3000型高效液相色譜三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀質(zhì)譜儀。條件參數(shù)為：離子源：API3000(ESI)，采用正離子模式檢測；離子噴霧電壓(Ion Spray Voltage)5500V。

實驗結(jié)果分析：根據(jù)克林霉素結(jié)構(gòu)分析，在雙氧水作用下，克林霉素結(jié)構(gòu)中-S-CH₃易被氧化成亞砜，或者進一步氧化成砜?？肆置顾鼐_分子量為424.18，克林霉素亞砜的[M+H]峰m/z應(yīng)為441，如圖2和圖3，其中[M+H]峰m/z均為441.14，故RT 7.3302和、RT8.570色譜峰為同一物質(zhì)，均為克林霉素亞砜。圖4中，[M+H]峰m/z為457.5，為克林霉素加兩個氧原子，即克林霉素砜。

本合成方法是利用巰甲基不穩(wěn)定易于被氧化的特點來定向合成克林霉素亞砜。圖中顯示：克林霉素亞砜混旋體經(jīng)色譜方法分離，在不同的保留時間出現(xiàn)兩個峰，且兩個色譜峰具有相同的分子量，說明兩個峰分別為同一物質(zhì)的異構(gòu)體，表明拆分成功。