一株防治植物根結(jié)線蟲的萎縮芽孢桿菌及其應(yīng)用的制作方法

本發(fā)明屬于植物病害生物防治技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株防治植物根結(jié)線蟲的萎縮芽孢桿菌及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

根結(jié)線蟲因其世界范圍性的地理分布以及廣泛的寄主范圍，對許多重要的經(jīng)濟(jì)作物造成嚴(yán)重危害，被認(rèn)為是世界范圍內(nèi)最重要的病原物之一。據(jù)估計，最常見的種可以侵染超過5500種植物。根結(jié)線蟲的寄主遍及糧食、油料、蔬菜、果樹等作物，例如番茄、生菜、黃瓜、花生、煙草、柑橘等植物都可被根結(jié)線蟲侵染。植物根系發(fā)病后多個根結(jié)連在一起,形成大小不一的腫瘤，發(fā)病晚期根變得粗糙且容易腐爛。根部畸形導(dǎo)致整個植物運輸系統(tǒng)受損，從而導(dǎo)致植株地上部分出現(xiàn)發(fā)育不良、矮化、黃化以及果實畸形等癥狀，更加嚴(yán)重時則導(dǎo)致植株死亡。

線蟲病害在生產(chǎn)上已成為一類重要的頑固性病害，控制該病害的發(fā)生與蔓延是確保作物產(chǎn)量與品質(zhì)而急需解決的問題。目前根結(jié)線蟲病的防治主要有以下3種方法，即農(nóng)業(yè)防治、化學(xué)防治和生物防治。

種植抗性品種是一種重要的控制線蟲病害發(fā)生的農(nóng)業(yè)措施，而抗病品種的缺乏限制了它的發(fā)展，而且部分抗性品種并沒有很全面的應(yīng)用。部分番茄抗性品種的種植與其它防治手段的聯(lián)合使用雖然已經(jīng)取得了一定的效果，但是因為有些品種在一些國家當(dāng)?shù)禺a(chǎn)量低，所以推廣后并沒有受到種植者們的歡迎。

長期以來，我國農(nóng)作物的病蟲害防治主要依賴化學(xué)農(nóng)藥，現(xiàn)階段防治根結(jié)線蟲的主要方法還是依賴于化學(xué)藥劑。化學(xué)藥劑高效，易使用，但是由于農(nóng)藥污染較為嚴(yán)重，食品中農(nóng)藥檢出率高達(dá)90％以上，這嚴(yán)重危害了消費者的身體健康。同時，由于食品農(nóng)藥殘留問題導(dǎo)致我國農(nóng)產(chǎn)品出口受阻，這對我國現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展構(gòu)成了嚴(yán)重影響。因此，農(nóng)藥殘留已成為食品安全生產(chǎn)中急需解決的問題。相比化學(xué)農(nóng)藥，生物農(nóng)藥具有安全、環(huán)保和無殘留等優(yōu)點。注重低毒、高效和選擇性強(qiáng)的生物農(nóng)藥開發(fā)已成為當(dāng)前的研究熱點之一。

目前，許多研究者提倡并在重點研究開發(fā)利用生物防治技術(shù)來控制線蟲病害。生物防治措施既對環(huán)境友好，對人畜安全，又能有效控制病害的發(fā)生與蔓延所以頗受青睞。目前，許多研究者提倡并在重點研究開發(fā)利用生物防治技術(shù)來控制線蟲病害。生物防治措施既對環(huán)境友好，對人畜安全，又能有效控制病害的發(fā)生與蔓延所以頗受青睞。目前已經(jīng)報道過的生防真菌有淡紫紫孢菌(Purpureocillium lilacinum)、厚垣輪枝菌(Verticillium chlamydosporium)、被毛孢(Hissutella spp.)、綠色木霉(Trichoderma viride)等，殺線效果較好的生防細(xì)菌有巴氏桿菌(Pasteuria spp.)、芽孢桿菌(Bacillus spp.)和假單胞菌(Pseudomonas spp.)、除蟲鏈霉菌(Streptomyces avermitilis)等。

迄今為止，利用細(xì)菌防治線蟲病害的報道不少，但是關(guān)于利用萎縮芽孢桿菌防治線蟲病害研究尚未被報道過。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的第一個目的是提供一種萎縮芽孢桿菌Bacillus atrophaeus XZ-O2*(本發(fā)明或稱為XZ-O2*菌株)，該菌株對根結(jié)線蟲病有較強(qiáng)的防治效果。該菌株已于2016年9月5日送至中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，分類命名：Bacillus atrophaeus XZ-O2*；保藏編號：CCTCC NO：M 2016459；地址：中國武漢武漢大學(xué)。

本發(fā)明的第二個目的是在于提供了一種Bacillus atrophaeus XZ-O2*在制備防治根結(jié)線蟲病生物制劑藥物中的應(yīng)用，特別適合于根結(jié)線蟲病的防治。

本發(fā)明最后一個目的在于提供了一種Bacillus atrophaeus XZ-O2*在促進(jìn)豌豆生長中的應(yīng)用。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施：

一種Bacillus atrophaeus XZ-O2*，通過以下方式獲得：

申請人從中國西藏自治區(qū)土壤土樣中分離、篩選得到一株對根結(jié)線蟲具有較強(qiáng)防治效果的菌株，將其命名為XZ-O2*。通過形態(tài)學(xué)、生理生化測定及分子生物學(xué)的鑒定，鑒定為萎縮芽孢桿菌(Bacillus atrophaeus)。

該菌株已于2016年9月5日送至中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，分類命名：Bacillus atrophaeus XZ-O2*；保藏編號：CCTCC NO：M 2016459；地址：中國武漢武漢大學(xué)。

Bacillus atrophaeus XZ-O2*菌株菌落特征：菌落圓形，乳白色，不透明，單個菌落四周隆起，中部塌陷，生長后期可產(chǎn)生黑褐色色素，革蘭氏染色后菌體呈現(xiàn)紫色，為陽性菌。

平板培養(yǎng)Bacillus atrophaeus XZ-O2*使用的是NA培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基組分及配方如下：蛋白胨5g，葡萄糖2.5g，牛肉膏3g，瓊脂20g，補(bǔ)充蒸餾水至1000mL，調(diào)pH至7.0，在121℃高壓蒸汽滅菌30min；35℃，暗培養(yǎng)。

一種萎縮芽孢桿菌XZ-O2*在制備防治根結(jié)線蟲病生物制劑藥物中的應(yīng)用，包括利用該菌株作為唯一有效成分或有效成分之一制備成防治植物植物線蟲病害的藥物，或利用萎縮芽孢桿菌XZ-O2*的發(fā)酵上清液制備根結(jié)線蟲卵孵化抑制劑。

本發(fā)明的保護(hù)內(nèi)容還包括萎縮芽孢桿菌XZ-O2*在制備生物殺線劑的應(yīng)用。

一種萎縮芽孢桿菌XZ-O2*在促進(jìn)豌豆生長中的應(yīng)用，包括利用所述的萎縮芽孢桿菌XZ-O2*發(fā)酵液用于制備豌豆促生長制劑。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點：

1.本發(fā)明篩選出一株防治根結(jié)線蟲病的新菌株XZ-O2*，該菌株是一種萎縮芽孢桿菌，目前沒有關(guān)于該菌株防治根結(jié)線蟲病的相關(guān)報道。

2.用該菌的發(fā)酵菌液，能有效地控制線蟲病害的發(fā)生和危害。本發(fā)明篩選出的XZ-O2*菌株對根結(jié)線蟲線蟲在室內(nèi)生測試驗中，XZ-O2*的發(fā)酵上清液對根結(jié)線蟲7d卵孵化的抑制率可達(dá)50.9％，發(fā)酵上清液對二齡幼蟲24h的致死率可達(dá)到86.5％；室內(nèi)盆栽試驗結(jié)果表顯示，XZ-O2*發(fā)酵菌液處理組的豌豆根系根結(jié)數(shù)明顯減少，60天后防效可達(dá)58.25％。在豌豆根結(jié)線蟲病的大田試驗中，120天后XZ-O2*處理組的豌豆根系根結(jié)數(shù)明顯減少，對根結(jié)線蟲病的防效高達(dá)58.97％。

3. XZ-O2*的發(fā)酵上清液對豌豆生長的試驗中，XZ-O2*菌株對豌豆有較好的促生作用，在株高、根長、根部鮮重方面均與對照組均有差異顯著(5％水平上)。

4.本發(fā)明使用的菌株對根結(jié)線蟲病防效較高，對人畜無毒；成本低。

5.本發(fā)明利用萎縮芽孢桿菌XZ-O2*菌株的發(fā)酵菌液直接防治根結(jié)線蟲病，生產(chǎn)和使用均十分簡單，生產(chǎn)中沒有用到有機(jī)溶劑，降低了生產(chǎn)過程中和產(chǎn)品中的污染，也不會產(chǎn)生溶劑中毒，具有生物農(nóng)藥對人畜安全的優(yōu)點。

附圖說明

圖1為菌株XZ-O2*在牛肉膏蛋白胨平板上的菌落形態(tài)、革蘭氏染色圖片。

圖2為盆栽試驗中XZ-O2*處理組與清水對照組60天豌豆根系圖片。

圖3盆栽試驗中XZ-O2*處理組與清水對照組60天豌豆植株圖片。

圖4田間試驗中XZ-O2*處理組與清水對照組120天豌豆植株圖片。

圖5田間試驗中XZ-O2*處理組與清水對照組120天豌豆根系圖片。

具體實施方式

本發(fā)明所述技術(shù)方案，如未特別說明，均為本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)。本發(fā)明所用試劑或材料，如未特別說明，均來源于商業(yè)渠道。

實施例1：

XZ-O2*菌株的分離及鑒定

1.1 XZ-O2*菌株的分離

申請人從中國西藏自治區(qū)土壤土樣中分離、篩選得到一株對根結(jié)線蟲具有較強(qiáng)防治效果的菌株，將其命名為XZ-O2*。本發(fā)明的XZ-O2*菌株的分離和純化采用稀釋涂布平板法、平板劃線、生物測定等方法。

1.2菌株的鑒定

1.2.1菌株的形態(tài)學(xué)鑒定

通過觀察菌落的顏色、形態(tài)、邊緣、透明度、光澤度、培養(yǎng)基的顏色等，并通過革蘭氏染色觀察菌體形態(tài)特征。

將XZ-O2*菌株在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上劃線培養(yǎng)，從圖1中可以看到：XZ-O2*菌落乳白色、不透明、菌落中部塌陷有褶皺、菌落無光澤、邊緣不整齊，后期可產(chǎn)生色素，培養(yǎng)基變褐色。鏡檢發(fā)現(xiàn)菌體呈桿狀，革蘭氏染色為陽性，有芽孢，上述形態(tài)特征表明菌株XZ-O2*屬于芽孢桿菌屬。

1.2.2菌株生理生化特征檢測

采用酶試驗、藥物敏感試驗、氨基酸水解試驗、6.5％NaCl生長耐受試驗、尿素水解試驗等生理生化實驗測定。

XZ-O2*部分生理生化實驗結(jié)果如表1。結(jié)果表明，細(xì)菌菌株XZ-O2*生理生化特征與芽孢桿菌屬生理生化特征基本相似。

表1 XZ-O2*部分生理生化特征

注：“+”表示陽性，“—”表示陰性。

1.2.3菌株XZ-O2*的分子鑒定

將XZ-O2*無菌操作臺中接種環(huán)挑取單菌落于分裝好的NA液體培養(yǎng)基中，35℃，180rpm條件下震蕩培養(yǎng)12h，并利用細(xì)菌16SrDNA區(qū)細(xì)菌鑒定的通用引物：27f(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)、1492r(5′-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′)進(jìn)行菌液PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增程序為：95℃預(yù)變性5min，95℃30s、55℃30s、72℃45s，30個循環(huán)，72℃10min，4℃保存。PCR反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)1.5％瓊脂糖凝膠電泳檢測，檢測合格后送生工公司測序。

經(jīng)測序獲得菌株XZ-O2*的16S rDNA序列大小為1453bp(SEQ ID NO.1所示)，通過Blast分析，選取與之同源性較高的菌株，利用軟件MEGA5.20進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析、NJ法構(gòu)建菌株的16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果表明XZ-O2*與Bacillus atrophaeus聚在一個分支上，統(tǒng)計支持率為100％，結(jié)合之前形態(tài)特征和生理生化實驗，將XZ-O2*鑒定為萎縮芽孢桿菌。

該菌株已于2016年9月5日送至中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，分類命名：Bacillus atrophaeus XZ-O2*；保藏編號：CCTCC NO：M 2016459；地址：中國武漢武漢大學(xué)。

培養(yǎng)XZ-O2*菌株使用的是NA培養(yǎng)液，其組分及配方如下：蛋白胨5g，葡萄糖2.5g，牛肉膏3g，補(bǔ)充蒸餾水至1000mL，調(diào)pH至7.0，在121℃高壓蒸汽滅菌30min。

搖瓶發(fā)酵參數(shù)條件：用挑針挑取細(xì)菌單個菌落，接種于裝有150mL NA培養(yǎng)液的三角瓶中，35℃，160rpm，搖培72h。將細(xì)菌菌液分裝入離心管中，8000r/min離心3min，將菌體與上清液分開，上清液過0.22μm的細(xì)菌過濾器，收集至另一離心管中。用于實施例2和實施例3。

實施例2：

XZ-O2*菌株發(fā)酵上清液對根結(jié)線蟲卵孵化的影響

將XZ-O2*的上清液加入24孔板中，每孔中加入700μL,然后取100個根結(jié)線蟲卵與細(xì)菌上清液均勻混合，重復(fù)三次，設(shè)置無菌水為對照；將24孔板放置在25℃恒溫箱中，7天后于體式顯微鏡下觀察，計數(shù)，并計算根結(jié)線蟲卵孵化率與相對抑制率。

表2 XZ-O2*發(fā)酵上清液對根結(jié)線蟲卵孵化的影響(7d，25℃)

注：表中字母不同表示差異顯著(SPSS 17.0t檢驗，P≤0.05)

XZ-O2*菌株發(fā)酵上清液對根結(jié)線蟲卵孵化的結(jié)果顯示：以ddH2O為對照組的CK在7天后卵的孵化率達(dá)到了86.5％，但是經(jīng)XZ-O2*發(fā)酵上清液處理的卵孵化率僅為42.4％，顯著抑制了根結(jié)線蟲卵的孵化(P≤0.05)，相對抑制率可達(dá)到50.9％(表2)，說明XZ-O2*菌株發(fā)酵上清液能夠有效的抑制根結(jié)線蟲卵的孵化。

實施例3：

XZ-O2*菌株發(fā)酵上清液對根結(jié)線蟲二齡幼蟲的影響

將XZ-O2*的上清液加入24孔板中，每孔中加入700μL，同時加入100條根結(jié)線蟲二齡幼蟲與上清液均勻混合，重復(fù)三次，同時設(shè)置無菌水作為對照參考，將24孔板放置在25℃恒溫箱中，分別在12h與24h后于體式顯微鏡下觀察，并記錄結(jié)果。

表3 XZ-O2*發(fā)酵上清液對根結(jié)線蟲二齡幼蟲的影響(25℃)

注：表中字母不同表示差異顯著(SPSS 17.0t檢驗，P≤0.05)

XZ-O2*菌株發(fā)酵上清液對根結(jié)線蟲二齡幼蟲的影響實驗結(jié)果顯示：經(jīng)過ddH₂O處理后12h，24h的二齡幼蟲死亡率均為0，XZ-O2*菌株發(fā)酵上清液處理組在處理后12h和24h后，對二齡幼蟲致死的死亡率分別為83.3％和86.5％(表3)。實驗證明XZ-O2*菌株發(fā)酵上清液對根結(jié)線蟲二齡幼蟲具有非常好的致死效果。

實施例4：

XZ-O2*菌株防治豌豆根結(jié)線蟲的溫室盆栽試驗

供試材料和方法：

豌豆：中豌六號

線蟲：南方根結(jié)線蟲Meloidogyne incognita

豌豆種子浸泡7-8個小時后播種于口徑為18cm、高為11cm的營養(yǎng)缽中，每營養(yǎng)缽1.5kg無線蟲土壤，出苗后每個營養(yǎng)缽留一棵豌豆苗。

XZ-O2*液體發(fā)酵培養(yǎng)：發(fā)酵培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基(溶劑為水，蛋白胨5g，葡萄糖2.5g，牛肉膏3g，補(bǔ)充蒸餾水至1000mL，調(diào)pH至7.0，在121℃高壓蒸汽滅菌30min。)。挑取XZ-O2*單菌落接種到裝有150mL NA液體培養(yǎng)基的三角瓶中，35℃，160rpm，搖培72h，得到XZ-O2*發(fā)酵液。該XZ-O2*發(fā)酵液中，芽孢桿菌XZ-O2*的含量為2×10 ⁹cfu/mL。

試驗設(shè)如下兩個處理：

XZ-O2*處理組：待豌豆幼苗苗長出4片真葉后接種南方根結(jié)線蟲：將培養(yǎng)好的南方根結(jié)線蟲配制成100條/mL的線蟲懸浮液，取10mL均勻加入植株根系周圍。同時在當(dāng)天進(jìn)行發(fā)酵液處理，用2×10⁹cfu/mL的XZ-O2*發(fā)酵液10mL灌根處理豌豆幼苗。試驗設(shè)3次重復(fù)，每個重復(fù)處理8株豌豆幼苗。然后放置在溫室中進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)30天后補(bǔ)施一次發(fā)酵液，正常田間管理。

對照組：將XZ-O2*發(fā)酵液替換為等量的清水，其它實驗操作與XZ-O2*處理組相同。

病害調(diào)查：分別距離第一次施藥60d進(jìn)行病害調(diào)查，拍照記錄。①豌豆生長情況的調(diào)查：測量并統(tǒng)計株高、地上部分鮮重(不含果實)、根部長度、根部鮮重等數(shù)據(jù)。②豌豆根結(jié)線蟲病發(fā)病情況調(diào)查：將豌豆植株的根剪下，將每組各處理的根收集在一起，剪碎并在榨汁機(jī)中打漿2次，第1次10s，第2次20s，先后用200目、325目的篩子過濾，蒸餾水沖洗篩子，收集留在325目篩子上的線蟲和卵；各處理每組各取1mL的懸液，置于自制的雙層玻片中觀察，對其中的根結(jié)線蟲與根結(jié)線蟲卵進(jìn)行計數(shù)，并計算每棵豌豆根部中根結(jié)線蟲和根結(jié)線蟲卵的數(shù)量。

防治效果＝(對照組根結(jié)數(shù)—處理組根結(jié)數(shù))/對照組根結(jié)數(shù)×100％

表4 XZ-O2*發(fā)酵液對豌豆生長情況的影響(60d)

注：表中字母不同表示差異顯著(SPSS 17.0t檢驗，P≤0.05)

豌豆生長情況的調(diào)查結(jié)果表明：在第一次藥劑處理后60天時對豌豆幼苗生長指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計分析時發(fā)現(xiàn)XZ-O2*處理組的所有生理指標(biāo)均高于與CK組，并且在0.05水平上存在顯著性差異(表4)。試驗證明XZ-O2*發(fā)酵液對豌豆生長有顯著地促進(jìn)作用。

表5.盆栽試驗中XZ-O2*發(fā)酵液對根結(jié)線蟲的防治效果(60d)

注：表中字母不同表示差異顯著(SPSS 17.0t檢驗，P≤0.05)

XZ-O2*發(fā)酵液對根結(jié)線蟲的防治效果證明：XZ-O2*液體發(fā)酵培養(yǎng)物在沒有任何助劑填加的條件下，施用2次，60天后對豌豆根結(jié)線蟲病防效仍達(dá)58.25％(表5)。經(jīng)XZ-O2*處理后的豌豆苗根系發(fā)達(dá)，根結(jié)少，植株生長正常，未發(fā)現(xiàn)明顯的藥害，對豌豆安全，具有良好的應(yīng)用價值。

實施例5：

XZ-O2*菌株防治豌豆根結(jié)線蟲的田間試驗

供試材料和方法：

豌豆：中豌六號

線蟲：南方根結(jié)線蟲Meloidogyne incognita

豌豆種子播種于線蟲病害較為嚴(yán)重的溫室大棚(華中農(nóng)業(yè)大學(xué)實驗農(nóng)場，武漢)，每隴3行，每行6穴。出苗10d后間苗，每穴留一株豌豆幼苗。

XZ-O2*液體發(fā)酵培養(yǎng)：發(fā)酵培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基(溶劑為水，蛋白胨5g，葡萄糖2.5g，牛肉膏3g，補(bǔ)充蒸餾水至1000mL，調(diào)pH至7.0，在121℃高壓蒸汽滅菌30min。)。挑取XZ-O2*單菌落接種到裝有150mL NA液體培養(yǎng)基的三角瓶中，35℃，160rpm，搖培72h，得到XZ-O2*發(fā)酵液。該XZ-O2*發(fā)酵液中，芽孢桿菌XZ-O2*的含量為2×10 ⁹cfu/mL。

試驗設(shè)如下兩個處理：

XZ-O2*處理組：播種豌豆種子30d后，進(jìn)行發(fā)酵液處理，用2×10⁹cfu/mL的XZ-O2*發(fā)酵液10mL灌根處理豌豆幼苗。1隴即一個重復(fù)，每隴共18株豌豆，試驗設(shè)3次重復(fù)，每個重復(fù)處理1隴豌豆幼苗，保持正常田間管理。

清水對照組(CK)：將XZ-O2*發(fā)酵液替換為等量的清水，其它實驗操作與XZ-O2*處理組相同。

病害調(diào)查：120d后，對豌豆生長情況和發(fā)病狀況進(jìn)行調(diào)查和拍照記錄，并進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。①豌豆生長情況的調(diào)查：測量并統(tǒng)計株高、地上部分鮮重(含果實)、根部長度、根部鮮重等數(shù)據(jù)。②豌豆根結(jié)線蟲病發(fā)病情況調(diào)查：將豌豆根系用清水輕輕沖洗干凈后，

觀察根系發(fā)病情況，對病害進(jìn)行分級。

病害分級：

0級：無根結(jié)；

1級：有少數(shù)根結(jié)，占全根系1％-25％；

2級：根系根結(jié)數(shù)量中等，占全根系的26％-50％；

3級：根系根結(jié)數(shù)量多，占全根的51％-75％；

4級：根系根結(jié)數(shù)量很多，占全根系76％-100％

防治效果＝(對照組根結(jié)級數(shù)—處理組根結(jié)級數(shù))/對照組根結(jié)級數(shù)×100％

表6田間試驗中XZ-O2*發(fā)酵液對豌豆地上部分生長的影響(120d)

注：表中字母不同表示差異顯著(SPSS 17.0t檢驗，P≤0.05)

豌豆地上部分生長情況的調(diào)查證明：調(diào)查120d后豌豆苗的地上部分鮮重(含果實)、株高、單株豆莢數(shù)、單株豆莢重，并利用SPSS 17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，XZ-O2*處理組的各項生長指標(biāo)均明顯高于清水處理組(CK)，并且在0.05水平上存在顯著性差異(表6)。

表7 XZ-O2*發(fā)酵液對豌豆根結(jié)線蟲的田間防治效果(120d)

注：表中字母不同表示差異顯著(SPSS 17.0t檢驗，P≤0.05)

XZ-O2*發(fā)酵液對豌豆根結(jié)線蟲的田間防治效果證明：120d后對豌豆地下部分鮮重和根長測量統(tǒng)計，并對根結(jié)進(jìn)行病害分級，并利用SPSS 17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，XZ-O2*處理組的地下部分鮮重和根長明顯高于清水處理組(CK)，并且在0.05水平上存在顯著性差異；XZ-O2*處理組的單株根結(jié)病害級數(shù)相對于清水處理組(CK)也顯著下降，XZ-O2*發(fā)酵液對于豌豆根結(jié)線蟲的防治效果可達(dá)到58.97％(表7)。經(jīng)XZ-O2*處理后的豌豆苗根系發(fā)達(dá)，根結(jié)少，植株生長正常，未發(fā)現(xiàn)明顯的藥害(圖4，圖5)，對豌豆安全，具有良好的應(yīng)用價值。

SEQUENCE LISTING

<110> 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)

<120> 一株防治植物根結(jié)線蟲的萎縮芽孢桿菌及其應(yīng)用

<130> 一株防治植物根結(jié)線蟲的萎縮芽孢桿菌及其應(yīng)用

<160> 1

<170> PatentIn version 3.1

<210> 1

<211> 1453

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

gcgttgcggg tgctatacat gcagtcgagc ggacagatgg gagcttgctc cctgatgtta 60

gcggcggacg ggtgagtaac acgtgggtaa cctgcctgta agactgggat aactccggga 120

aaccggggct aataccggat gcttgtttga accgcatggt tcaaacataa aaggtggctt 180

cggctaccac ttacagatgg acccgcggcg cattagctag ttggtgaggt aatggctcac 240

caaggcaacg atgcgtagcc gacctgagag ggtgatcggc cacactggga ctgagacacg 300

gcccagactc ctacgggagg cagcagtagg gaatcttccg caatggacga aagtctgacg 360

gagcaacgcc gcgtgagtga tgaaggtttt cggatcgtaa agctctgttg ttagggaaga 420

acaagtgccg ttcaaatagg gcggcacctt gacggtacct aaccagaaag ccacggctaa 480

ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag gtggcaagcg ttgtccggaa ttattgggcg 540

taaagggctc gcaggcggtt tcttaagtct gatgtgaaag cccccggctc aaccggggag 600

ggtcattgga aactggggaa cttgagtgca gaagaggaga gtggaattcc acgtgtagcg 660

gtgaaatgcg tagagatgtg gaggaacacc agtggcgaag gcgactctct ggtctgtaac 720

tgacgctgag gagcgaaagc gtggggagcg aacaggatta gataccctgg tagtccacgc 780

cgtaaacgat gagtgctaag tgttaggggg tttccgcccc ttagtgctgc agctaacgca 840

ttaagcactc cgcctgggga gtacggtcgc aagactgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg 900

cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt 960

cttgacatcc tctgacaccc ctagagatag ggcttcccct tcgggggcag agtgacaggt 1020

ggtgcatggt tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc 1080

aacccttgat cttagttgcc agcattcagt tgggcactct aaggtgactg ccggtgacaa 1140

accggaggaa ggtggggatg acgtcaaatc atcatgcccc ttatgacctg ggctacacac 1200

gtgctacaat ggacagaaca aagggcagcg agaccgcgag gttaagccaa tcccacaaat 1260

ctgttctcag ttcggatcgc agtctgcaac tcgactgcgt gaagctggaa tcgctagtaa 1320

tcgcggatca gcatgccgcg gtgaatacgt tcccgggcct tgtacacacc gcccgtcaca 1380

ccacgagagt ttgtaacacc cgaagtcggt gaggtaacct ttatggagcc agccgccgaa 1440

ggtgacagag tgg 1453