一種醋酸甲羥孕酮膠囊的有關(guān)物質(zhì)及其分析檢測(cè)方法與流程

本發(fā)明屬于藥物制劑分析領(lǐng)域，具體涉及一種醋酸甲羥孕酮膠囊的有關(guān)物質(zhì)及其分析檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

醋酸甲羥孕酮膠囊，適應(yīng)癥為用于不能手術(shù)，復(fù)發(fā)性或轉(zhuǎn)移性激素依賴性腫瘤的姑息治療或輔助治療，如子宮內(nèi)膜癌、腎癌、乳腺癌等。

醋酸甲羥孕酮膠囊的活性成分為醋酸甲羥孕酮，醋酸甲羥孕酮作為乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等激素依賴性腫瘤的內(nèi)分泌治療藥物，以及用于治療月經(jīng)不調(diào)、功能性子宮出血、子宮內(nèi)膜異位癥，亦可用于短效復(fù)方口服避孕片的孕激素成分，并可用于孕婦保胎。目前臨床廣泛應(yīng)用并取得較滿意的效果。同時(shí)，醋酸甲羥孕酮作為內(nèi)分泌藥物單用或與抗腫瘤藥物合用治療前列腺癌、腎癌、前列腺腺瘤也有提高療效的作用。其他治療乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌、腎癌、前列腺腺瘤的化療藥物有一定的毒副作用，對(duì)病人機(jī)體產(chǎn)生傷害，但是醋酸甲羥孕酮的優(yōu)點(diǎn)在于不但能夠單獨(dú)治療或協(xié)同治療，還能明顯改善患者的厭食、體重減輕和惡病質(zhì)等癥狀，從而改善患者的全身狀況和生活質(zhì)量。

醋酸甲羥孕酮化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種醋酸甲羥孕酮膠囊的有關(guān)物質(zhì)及其分析檢測(cè)方法，該有關(guān)物質(zhì)為首次檢出并報(bào)道。

本發(fā)明的目的之一是提供一種醋酸甲羥孕酮膠囊中的有關(guān)物質(zhì)，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

本發(fā)明的目的之二是提供上述有關(guān)物質(zhì)的制備方法，包括如下步驟：

步驟S1，高溫破壞：將醋酸甲羥孕酮原料藥置于100～120℃條件下破壞16～24小時(shí)；

步驟S2，富集：將上述高溫破壞樣品溶于甲醇體積百分濃度為60％～70％的甲醇水溶液中，攪拌，抽濾，收集濾液，減壓濃縮得濃縮物；

步驟S3，粗品制備：將上述濃縮物用正相硅膠柱色譜分離，依次用體積比為30:1、15:1和8:1的二氯甲烷-甲醇混合溶劑梯度洗脫，收集8:1洗脫部分，濃縮得粗品；

步驟S4，精制：將上述粗品用反相硅膠柱純化，固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠，流動(dòng)相為乙腈體積百分濃度為65％～75％的乙腈水溶液，等度洗脫，收集第8～12個(gè)柱體積洗脫液，濃縮，冷凍干燥即得所述有關(guān)物質(zhì)。

進(jìn)一步地，所述的制備方法包括如下步驟：

步驟S1，高溫破壞：將醋酸甲羥孕酮原料藥置于110℃條件下破壞20小時(shí)；

步驟S2，富集：將上述高溫破壞樣品溶于甲醇體積百分濃度為65％的甲醇水溶液中，攪拌，抽濾，收集濾液，減壓濃縮得濃縮物；

步驟S3，粗品制備：將上述濃縮物用正相硅膠柱色譜分離，依次用體積比為30:1、15:1和8:1的二氯甲烷-甲醇混合溶劑梯度洗脫，收集8:1洗脫部分，濃縮得粗品；

步驟S4，精制：將上述粗品用反相硅膠柱純化，固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠，流動(dòng)相為乙腈體積百分濃度為70％的乙腈水溶液，等度洗脫，收集第9～11個(gè)柱體積洗脫液，濃縮，冷凍干燥即得所述有關(guān)物質(zhì)。

本發(fā)明的目的之三是提供上述有關(guān)物質(zhì)的分析方法，包括如下參數(shù)：

色譜柱：Xtimate C18(4.6mm×250mm，5μm)；

流動(dòng)相：A為乙腈，B為含0.03mol/L磷酸二氫鈉的水溶液(磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.8)；

梯度洗脫程序：0～6min，A30％；6～26min，A30％→80％；26～32min，A 80％；32～35min，A 80％→30％；35～40min，A 30％；

流動(dòng)相流速：1.0mL·min^-1；

檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm；

柱溫：35℃；

進(jìn)樣量：10μL。

本發(fā)明的目的之四是提供上述有關(guān)物質(zhì)在醋酸甲羥孕酮膠囊有關(guān)物質(zhì)檢查中作為對(duì)照品的用途。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：

該有關(guān)物質(zhì)為首次報(bào)道，為發(fā)明人在醋酸甲羥孕酮膠囊有關(guān)物質(zhì)研究中意外發(fā)現(xiàn)并經(jīng)結(jié)構(gòu)確證，其在醋酸甲羥孕酮原料藥和片劑中均可檢測(cè)到，且含量大于萬(wàn)分之五，有必要對(duì)其進(jìn)行分析控制。該有關(guān)物質(zhì)與醋酸甲羥孕酮的色譜保留行為非常接近，傳統(tǒng)等度色譜條件很難分析發(fā)現(xiàn)該有關(guān)物質(zhì)的存在，因此，本發(fā)明還提供了該有關(guān)物質(zhì)的分析檢測(cè)方法。本發(fā)明有助于醋酸甲羥孕酮膠囊的質(zhì)量研究控制的進(jìn)一步研究，如長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察和毒理考察，以提高醋酸甲羥孕酮膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明有關(guān)物質(zhì)氫譜數(shù)據(jù)歸屬圖；

圖2為本發(fā)明有關(guān)物質(zhì)碳譜數(shù)據(jù)歸屬圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。

實(shí)施例1：有關(guān)物質(zhì)的制備和結(jié)構(gòu)確證

取10g醋酸甲羥孕酮原料均勻攤在培養(yǎng)皿中，置于烘箱中，110℃破壞20小時(shí)。然后，將高溫破壞樣品溶于甲醇體積百分濃度為65％的甲醇-水溶液中，攪拌20分鐘，用抽濾漏斗抽濾，收集濾液，減壓濃縮得濃縮物6.2g；然后將濃縮物用10ml甲醇溶解，用15g粒度為100～200目的正相硅膠拌樣，揮干溶劑，用150g粒度為200～300目的正相硅膠作為分離硅膠進(jìn)行柱色譜分離，依次用體積比為30:1、15:1和8:1的二氯甲烷-甲醇混合溶劑梯度洗脫，每個(gè)比例洗脫10個(gè)柱體積，收集8:1洗脫部分，減壓濃縮得粗品4.1g；然后將粗品用乙腈體積百分濃度為70％的乙腈水溶液溶解，用反相硅膠柱純化，固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠，流動(dòng)相為乙腈體積百分濃度為70％的乙腈-水，等度洗脫，收集第9～11個(gè)柱體積的洗脫液，減壓濃縮，冷凍干燥得粉末2.2g。HPLC歸一化純度大于99％。

結(jié)構(gòu)確證：

HR-ESIMS顯示[M+H]⁺為m/z 385.2408，結(jié)合核磁特征可得分子式為C₂₄H₃₂O₄。氫譜數(shù)據(jù)及歸屬見(jiàn)圖1(ppm,methanol-d₄,500MHz)；碳譜數(shù)據(jù)及歸屬見(jiàn)圖2(ppm,methanol-d₄,150MHz)。綜合質(zhì)譜和核磁數(shù)據(jù)，結(jié)合醋酸甲羥孕酮的結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)可確證該物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示：

實(shí)施例2：有關(guān)物質(zhì)的制備

取10g醋酸甲羥孕酮原料均勻攤在培養(yǎng)皿中，置于烘箱中，100℃破壞24小時(shí)。然后，將高溫破壞樣品溶于甲醇體積百分濃度為60％的甲醇-水溶液中，攪拌20分鐘，用抽濾漏斗抽濾，收集濾液，減壓濃縮得濃縮物6.0g；然后將濃縮物用10ml甲醇溶解，用15g粒度為100～200目的正相硅膠拌樣，揮干溶劑，用150g粒度為200～300目的正相硅膠作為分離硅膠進(jìn)行柱色譜分離，依次用體積比為30:1、15:1和8:1的二氯甲烷-甲醇混合溶劑梯度洗脫，每個(gè)比例洗脫10個(gè)柱體積，收集8:1洗脫部分，減壓濃縮得粗品4.0g；然后將粗品用乙腈體積百分濃度為65％的乙腈水溶液溶解，用反相硅膠柱純化，固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠，流動(dòng)相為乙腈體積百分濃度為65％的乙腈-水，等度洗脫，收集第10～12個(gè)柱體積的洗脫液，減壓濃縮，冷凍干燥得粉末1.8g。HPLC歸一化純度大于99％。

實(shí)施例3：有關(guān)物質(zhì)的制備

取10g醋酸甲羥孕酮原料均勻攤在培養(yǎng)皿中，置于烘箱中，120℃破壞16小時(shí)。然后，將高溫破壞樣品溶于甲醇體積百分濃度為70％的甲醇-水溶液中，攪拌20分鐘，用抽濾漏斗抽濾，收集濾液，減壓濃縮得濃縮物6.3g；然后將濃縮物用10ml甲醇溶解，用15g粒度為100～200目的正相硅膠拌樣，揮干溶劑，用150g粒度為200～300目的正相硅膠作為分離硅膠進(jìn)行柱色譜分離，依次用體積比為30:1、15:1和8:1的二氯甲烷-甲醇混合溶劑梯度洗脫，每個(gè)比例洗脫10個(gè)柱體積，收集8:1洗脫部分，減壓濃縮得粗品4.2g；然后將粗品用乙腈體積百分濃度為75％的乙腈水溶液溶解，用反相硅膠柱純化，固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠，流動(dòng)相為乙腈體積百分濃度為75％的乙腈-水，等度洗脫，收集第8～10個(gè)柱體積的洗脫液，減壓濃縮，冷凍干燥得粉末2.4g。HPLC歸一化純度大于97％。

實(shí)施例4：醋酸甲羥孕酮膠囊加速試驗(yàn)(40℃條件下30天)樣品檢測(cè)分析

醋酸甲羥孕酮膠囊：收集市售不同品牌的醋酸甲羥孕酮膠囊(距生產(chǎn)日期3個(gè)月內(nèi))。

對(duì)照品溶液制備：精密稱取2mg本發(fā)明有關(guān)物質(zhì)于200ml容量瓶中，用乙腈溶解定容，作為有關(guān)物質(zhì)儲(chǔ)備液；精密量取有關(guān)物質(zhì)儲(chǔ)備液1ml于20ml容量瓶中，用液相分析方法中初始比例的流動(dòng)相稀釋定容(約0.5μg/mL)。

供試品溶液制備：取40℃條件下放置30天的醋酸甲羥孕酮膠囊研磨成細(xì)粉，精密稱取細(xì)粉適量(約含醋酸甲羥孕酮12.5mg)置于25ml容量瓶中，添加液相分析方法中初始比例的流動(dòng)相，超聲使醋酸甲羥孕酮溶解，放冷，稀釋至刻度。

對(duì)照溶液：精密量取供試品溶液0.5ml于200ml容量瓶中，用液相分析方法中初始比例的流動(dòng)相稀釋至刻度。

液相色譜條件：

高效液相色譜儀：Agilent 1260，二元泵，VWD；

色譜柱：Xtimate C18(4.6mm×250mm，5μm)；

流動(dòng)相：A為乙腈，B為含0.03mol/L磷酸二氫鈉的水溶液(磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.8)；

梯度洗脫程序：0～6min，A 30％；6～26min，A 30％→80％；26～32min，A 80％；32～35min，A 80％→30％；35～40min，A 30％；

流動(dòng)相流速：1.0mL·min^-1；

檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm；

柱溫：35℃；

進(jìn)樣量：10μL。

分別精密量取有關(guān)物質(zhì)對(duì)照品溶液、供試品溶液和對(duì)照溶液10μL注入液相色譜儀分析。結(jié)果在醋酸甲羥孕酮膠囊(南京先河制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20150302)中檢測(cè)到本發(fā)明提供的有關(guān)物質(zhì)(保留時(shí)間為醋酸甲羥孕酮保留時(shí)間1.25倍)，該有關(guān)物質(zhì)的色譜峰與醋酸甲羥孕酮色譜峰分離度大于2.0，且峰純度檢查合格。該醋酸甲羥孕酮膠囊中該有關(guān)物質(zhì)的含量為0.05～0.15％，有必要列入醋酸甲羥孕酮膠囊的質(zhì)量研究控制中進(jìn)行進(jìn)一步研究，如長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察和毒理考察，以提高醋酸甲羥孕酮膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

上述實(shí)施例的作用在于說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。