本發(fā)明屬于農(nóng)產(chǎn)品活性物質(zhì)原花青素提取
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種提取山竹殼中原花青素的方法。
背景技術(shù)：
：原花青素(簡稱PC)是自然界中廣泛存在于植物中的一種多酚物質(zhì)混合物，紅棕色粉末，氣微、味澀，溶于水和大多有機溶劑，具有非常強的體內(nèi)生物活性，是目前世界公認的高效抗氧化劑，能夠保護人體免受自由基的損傷。原花青素在日常生活中應(yīng)用十分廣泛，如在護膚方面，原花青素添加進護膚品中能有效改善肌膚彈性，起抗衰老、美白和抗紫外線等作用，在化妝品市場上則可用做口紅；醫(yī)療保健方面，原花青素制成保健品能增強機體免疫力，具有降血脂、抑制結(jié)腸癌細胞，預防心腦血管疾病和動脈粥樣硬化；因此原花青素在護膚、化妝品行業(yè)、醫(yī)藥保健、功能性食品等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。原花青素在葡萄、高粱、蘋果、可可豆等豆類及野生水果如玫瑰果、櫻桃、草莓等植物中廣泛分布，隨著植物研究范圍的擴大，越來越多的研究顯示山竹殼中也存在原花青素。目前，有關(guān)提取原花青素的方法主要有以下幾種：傳統(tǒng)有機溶劑萃取法、水溶液提取法、超臨界流體萃取法、微波輔助提取法等，但有機溶劑提取法受試劑選擇、原料大小、料液比等多種因素的影響，且有機溶劑毒副作用大且產(chǎn)物提取率低，提取時間長，易破壞熱穩(wěn)定性較弱的成分，雜質(zhì)含量高，污染環(huán)境；水溶液提取法選擇水作為提取劑，浸提耗時長，溫度高，易造成原花青素的損失，同時水的極性較大，溶出雜質(zhì)較多，提取純度較低；超臨界流體萃取法成本高，對操作條件的要求比較高。綜上，原花青素傳統(tǒng)提取方法普遍存在提取效率低與花青素不穩(wěn)定等問題，因此，探索新的提取技術(shù)以提高花青素的提取效率和穩(wěn)定性是今后原花青素提取研究的發(fā)展方向。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種從山竹殼中提取原花青素的方法。利用此方法所提取的原花青素可廣泛應(yīng)用于護膚品行業(yè)、醫(yī)藥保健和功能性食品等領(lǐng)域。本發(fā)明是一種利用溶劑輔助高壓脈沖電場方法提取山竹殼中的原花青素，原料為山竹殼。該方法首先是將懷枝去殼后將果皮進行干燥、粉碎、過篩，獲到山竹殼粉末，再將山竹殼粉末經(jīng)粗提、高壓脈沖電場處理、提取、純化、干燥等步驟提取山竹殼中的原花青素。該發(fā)明改進了目前從山竹殼中提取原花青素的效率，具有重要的經(jīng)濟和社會效益。本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：一種提取山竹殼中原花青素的方法，所述方法包括下列步驟：1)將山竹殼晾干，液氮粉碎后過40～80目篩，裝入容器，密封保存于4℃冰箱備用；2)稱取山竹殼，以1：10～15的料液重量比加入乙醇水溶液，再按150U/mL加入纖維素酶，在PH值為4～8進行粗提取0.5～1.5h，過濾、減壓、濃縮后得到濃縮液，加入乙醚去除脂類化合物，再用甲醇與乙酸乙酯混合溶液進行萃取，加入水后減壓、去除有機溶劑即得到粗提液；3)將粗提液按重量比1：10～20加入質(zhì)量分數(shù)30％冰醋酸水溶液，將粗提液與冰醋酸水溶液放置于高壓脈沖電場中提取1～2小時，得提取液；4)純化：將提取液減壓過濾，回收溶劑后，經(jīng)過大孔吸附樹脂分離，并采用10倍重的蒸餾水和60％質(zhì)量分數(shù)乙醇水溶液進行洗脫；5)干燥：把洗脫液置于50～60℃真空中進行濃縮，最后冷凍干燥成粉末，得到產(chǎn)物。優(yōu)選的是，步驟2)中粗提取溫度為35～45℃，乙醇水溶液質(zhì)量分數(shù)為60～70％。優(yōu)選的是，步驟2)中所述的甲醇與乙酸乙酯重量比為1：4。優(yōu)選的是，步驟2)中所述的乙醚、甲醇、乙酸乙酯濃度質(zhì)量分數(shù)大于99％，乙醚與濃縮液的重量比為1∶1，甲醇與乙酸乙酯混合溶液與濃縮液的重量比為2∶1。優(yōu)選的是，步驟3)中所述的高壓脈沖電場電場強度為20～30kV/cm，脈沖數(shù)為6～8。優(yōu)選的是，步驟3)中高壓脈沖電場設(shè)備中提取2小時。優(yōu)選的是，步驟4)中所述的大孔吸附樹脂為AB-8。本發(fā)明至少包括以下有益效果：(1)溶劑輔助高壓脈沖電場提取分離主要是根據(jù)物質(zhì)中的有效成分的存在狀態(tài)、極性、溶解度等設(shè)計的一項新型提取原花青素工藝，具有成本低、投資少、提取時間短、提取效率高等特點，在提取過程中高壓脈沖電場的處理不會造成原料溫度的升高，可以有效地保護原花青素提取物的生理活性，保證了產(chǎn)品的穩(wěn)定性，具有很大的推廣應(yīng)用價值。(2)本發(fā)明提供的從山竹殼中提取原花青素的方法，比一般的原花青素提取工藝得率高，是常規(guī)有機溶劑法的約2.5倍，微波輔助法的約1.6倍，超聲波輔助法的約1.4倍，提取溫度低，能很好保持原花青素的活性，避免了超聲波輔助方法的噪聲大、處理量小的缺陷，能夠連續(xù)處理樣品，適于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。(3)采用本發(fā)明所公開的方法，填補了目前利用溶劑輔助高壓脈沖電場從山竹殼中提取原花青素的技術(shù)空白。本發(fā)明的其它優(yōu)點、目標和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn)，部分還將通過對本發(fā)明的研究和實踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。具體實施方式結(jié)合下列實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書文字能夠據(jù)以實施。實施例1提取山竹殼中原花青素的方法包括下列步驟：1)將山竹殼晾干，液氮粉碎后過40目篩，裝入容器，密封保存于4℃冰箱備用；2)稱取山竹殼，以1∶10的料液重量比加入乙醇水溶液，再按150U/mL加入纖維素酶，在PH值為4進行粗提取0.5h，過濾、減壓、濃縮后得到濃縮液，加入乙醚去除脂類化合物，再用甲醇與乙酸乙酯混合溶液進行萃取，加入水后減壓、去除有機溶劑即得到粗提液；3)將粗提液按重量比1∶10加入質(zhì)量分數(shù)30％冰醋酸水溶液，將粗提液與冰醋酸水溶液放置于高壓脈沖電場中提取1小時，得提取液；4)純化：將提取液減壓過濾，回收溶劑后，經(jīng)過大孔吸附樹脂分離，并采用10倍重的蒸餾水和60％質(zhì)量分數(shù)乙醇水溶液進行洗脫；5)干燥：把洗脫液置于50℃真空中進行濃縮，最后冷凍干燥成粉末，得到產(chǎn)物。實施例2提取山竹殼中原花青素的方法包括下列步驟：1)將山竹殼晾干，液氮粉碎后過80目篩，裝入容器，密封保存于4℃冰箱備用；2)稱取山竹殼，以1∶15的料液重量比加入質(zhì)量分數(shù)為60％乙醇水溶液，再按150U/mL加入纖維素酶，在PH值為8，溫度為35℃，進行粗提取1.5h，過濾、減壓、濃縮后得到濃縮液，加入乙醚去除脂類化合物，再用甲醇與乙酸乙酯混合溶液進行萃取，加入水后減壓、去除有機溶劑即得到粗提液，所述的乙醚、甲醇、乙酸乙酯濃度質(zhì)量分數(shù)大于99％，乙醚與濃縮液的重量比為1∶1，甲醇與乙酸乙酯混合溶液與濃縮液的重量比為2∶1，所述的甲醇與乙酸乙酯重量比為1∶4；3)將粗提液按重量比1∶20加入質(zhì)量分數(shù)30％冰醋酸水溶液，將粗提液與冰醋酸水溶液放置于電場強度為20kV/cm高壓脈沖電場中提取2小時，脈沖數(shù)為6，得提取液；4)純化：將提取液減壓過濾，回收溶劑后，經(jīng)過AB-8大孔吸附樹脂分離，并采用10倍重的蒸餾水和60％質(zhì)量分數(shù)乙醇水溶液進行洗脫；5)干燥：把洗脫液置于50℃真空中進行濃縮，最后冷凍干燥成粉末，得到產(chǎn)物。實施例3提取山竹殼中原花青素的方法包括下列步驟：1)將山竹殼晾干，液氮粉碎后過60目篩，裝入容器，密封保存于4℃冰箱備用；2)稱取山竹殼，以1∶12的料液重量比加入質(zhì)量分數(shù)為70％乙醇水溶液，再按150U/mL加入纖維素酶，在PH值為6，溫度為45℃，進行粗提取1.0h，過濾、減壓、濃縮后得到濃縮液，加入乙醚去除脂類化合物，再用甲醇與乙酸乙酯混合溶液進行萃取，加入水后減壓、去除有機溶劑即得到粗提液，所述的乙醚、甲醇、乙酸乙酯濃度質(zhì)量分數(shù)大于99％，乙醚與濃縮液的重量比為1∶1，甲醇與乙酸乙酯混合溶液與濃縮液的重量比為2∶1，所述的甲醇與乙酸乙酯重量比為1∶4；3)將粗提液按重量比1∶15加入質(zhì)量分數(shù)30％冰醋酸水溶液，將粗提液與冰醋酸水溶液放置于電場強度為30kV/cm高壓脈沖電場中提取1.5小時，脈沖數(shù)為8，得提取液；4)純化：將提取液減壓過濾，回收溶劑后，經(jīng)過AB-8大孔吸附樹脂分離，并采用10倍重的蒸餾水和60％質(zhì)量分數(shù)乙醇水溶液進行洗脫；5)干燥：把洗脫液置于55℃真空中進行濃縮，最后冷凍干燥成粉末，得到產(chǎn)物。將600g山竹殼平均分成6組分別采用實施例1-3方法與有機溶劑法、微波輔助法、超聲波輔助法對比試驗提取原花青素，采用葡萄籽原青花素作為標準品，配置標準溶液，采用鐵鹽催化比色法在550nm處比色作出標準曲線，測定提取產(chǎn)物中原花青素含量，并按下列公式計算出得率和純度，得率(％)＝(產(chǎn)物中原花青素質(zhì)量/山竹殼質(zhì)量)×100％純度(％)＝(產(chǎn)物中原花青素質(zhì)量/產(chǎn)物質(zhì)量)×100％提取山竹殼原花青素得率和純度如下表所示：實施例1實施例2實施例3有機溶劑法微波輔助法超聲波輔助法得率4.12％4.20％4.09％1.65％2.59％2.95％純度99.0％98.5％98.8％92.5.3％95.6.0％97.6％從測試結(jié)果得出結(jié)論：本發(fā)明提供的方法得出的產(chǎn)物的純度比有機溶劑法、微波輔助法、超聲波輔助法提取得到的產(chǎn)物純度高，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，并且比一般的原花青素提取工藝得率高，是常規(guī)有機溶劑法的約2.5倍，微波輔助法的約1.6倍，超聲波輔助法的約1.4倍。盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列運用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細節(jié)和這里示出與描述的實施例。當前第1頁1 2 3