本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及己烯雌酚的新用途，具體涉及一種己烯雌酚的藥物組合物及其醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
：己烯雌酚是人工合成的非甾體雌激素物質(zhì)，能產(chǎn)生與天然雌二醇相同的所有藥理與治療作用。主要用于雌激素低下癥及激素平衡失調(diào)引起的功能性出血、閉經(jīng)，還可用于死胎引產(chǎn)前，以提高子宮肌層對(duì)催產(chǎn)素的敏感性。迄今為止，尚未見(jiàn)己烯雌酚及其藥物組合物與變應(yīng)性鼻炎的相關(guān)性報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種己烯雌酚的藥物組合物，該藥物組合物中含有己烯雌酚和一種天然產(chǎn)物，己烯雌酚和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療變應(yīng)性鼻炎。本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(Ⅰ)，一種己烯雌酚的藥物組合物，包括己烯雌酚、如權(quán)利要求1所述的化合物(Ⅰ)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤(rùn)滑劑。進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。上述化合物(Ⅰ)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將銀杏葉粉碎，用75～85％乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用10％乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70％乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、4:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75％的甲醇水溶液等度洗脫，收集10～15個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)。進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，所述大孔樹(shù)脂為D101型大孔吸附樹(shù)脂。上述化合物(Ⅰ)在制備治療變應(yīng)性鼻炎的藥物中的應(yīng)用。上述己烯雌酚的藥物組合物在制備治療變應(yīng)性鼻炎的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明提供的己烯雌酚的藥物組合物中含有己烯雌酚和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，己烯雌酚、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)變應(yīng)性鼻炎具有治療作用；己烯雌酚和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)變應(yīng)性鼻炎的治療效果進(jìn)一步提高，可以開(kāi)發(fā)成治療變應(yīng)性鼻炎的藥物。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。實(shí)施例1：化合物(Ⅰ)分離制備及結(jié)構(gòu)確證試劑來(lái)源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購(gòu)自上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。分離方法：(a)將銀杏葉(2kg)粉碎，用80％乙醇熱回流提取(15L×3次)，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味(3L)，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水飽和的正丁醇(3L×3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用D101型大孔樹(shù)脂除雜，先用10％乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70％乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為60:1(10個(gè)柱體積)、30:1(8個(gè)柱體積)、15:1(10個(gè)柱體積)和5:1(8個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1(10個(gè)柱體積)、4:1(8個(gè)柱體積)和2:1(6個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75％的甲醇水溶液等度洗脫，收集10～15個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)(HPLC歸一化純度大于98％)。結(jié)構(gòu)確證：HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z393.1835，結(jié)合核磁特征可得分子式為C21H28O7，不飽和度為8。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δH(ppm，pyridine-d5，500MHz)：H-2α(2.68，m)，H-2β(2.53，m)，H-3α(1.32，m)，H-3β(1.33，m)，H-5β(2.11，s)，H-9β(1.56，d，J＝3.5Hz)，H-11α(4.55，br，s)，H-12α(2.32，dd，J＝12.8，5.0Hz)，H-12β(1.83，m)，H-13α(1.78，br，s)，H-14α(2.42，m)，H-14β(1.81，m)，H-16(2.17，m)，H-17α(3.79，d，J＝10.0，4.0Hz)，H-17β(3.66，d，J＝10.0，4.0Hz)，H-18(1.24，s)，H-19(1.08，s)，H-20α(5.37，d，J＝9.50Hz)，H-20β(4.34，d，J＝9.50Hz)，17-OMe(3.28，s)；核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δC(ppm，pyridine-d5，125MHz)：207.3(C，1-C)，32.9(CH2，2-C)40.7(CH2，3-C)，34.5(C，4-C)，64.6(CH，5-C)，215.1(C，6-C)，101.2(C，7-C)，61.3(C，8-C)，55.1(CH，9-C)，44.6(C，10-C)，66.8(CH，11-C)，29.8(CH2，12-C)，29.4(CH，13-C)，29.6(CH2，14-C)，225.4(C，15-C)，58.6(CH，16-C)，69.8(CH2，17-C)，34.6(CH3，18-C)，22.4(CH3，19-C)，66.2(CH2，20-C)，58.1(CH3，17-OCH3)。在氫譜中可以觀察到兩個(gè)單峰甲基信號(hào)[δH1.24(3H，s)與1.08(3H，s)]，一個(gè)甲氧基信號(hào)[δH3.28(3H，s，17-OMe)]，兩個(gè)連氧亞甲基質(zhì)子信號(hào)[δH3.79(1H，d，J＝10.0，4.0Hz，H-17α)與3.66(1H，d，J＝10.0，4.0Hz，H-17β)，5.37(1H，d，J＝9.50Hz，H-20α)與4.34(1H，d，J＝9.50Hz，H-20β)]，一個(gè)連氧次甲基質(zhì)子信號(hào)[δH4.55(1H，br，s，H-11α)]；在碳譜中顯示該化合物有21個(gè)碳信號(hào)，其中有三個(gè)羰基碳信號(hào)，一個(gè)半縮醛碳信號(hào)以及三個(gè)連氧碳信號(hào)。結(jié)合以上信息可以得出該化合物可能是一個(gè)二萜類化合物，通過(guò)文獻(xiàn)查閱可以發(fā)現(xiàn)該化合物和已知化合物ent-1β,6α,7α,11β-tetrahydroxy-17-methoxy-7β,20-epoxy-kauran-15-one具有及其相似的結(jié)構(gòu)。將新化合物的核磁數(shù)據(jù)和ent-1β,6α,7α,11β-tetrahydroxy-17-methoxy-7β,20-epoxy-kauran-15-one進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)該化合物仍然是ent-kauranoid型的化合物。與已知化合物進(jìn)行比較，C-6和C-1位羥基的缺失，以及兩個(gè)羰基信號(hào)的出現(xiàn)，我們猜測(cè)該化合物是已知化合物的C-1和C-6位羥基氧化的產(chǎn)物。進(jìn)一步的對(duì)新化合物的HMBC譜的解析中，H-5/C-6，H-5/C-7以及H-5/C-10的相關(guān)性證實(shí)了C-6位羰基的存在。同時(shí)，H-5/C-1，H-2/C-1之間的相關(guān)性證實(shí)了C-1位羰基的存在。ROESY譜中，H-11β/H-9β之間的相關(guān)性說(shuō)明C-11位的羥基為α構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過(guò)ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：實(shí)施例2：藥理作用本實(shí)施例使用甲苯2，4二異氰酸酯(TDI)致敏兔制備變應(yīng)性鼻炎兔模型，觀察藥物改善動(dòng)物鼻充血、流涕及噴嚏等方面的抗變應(yīng)性鼻炎作用。1、材料與方法1.1動(dòng)物兔(浙江中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供)，雌雄各半。1.2試劑與樣品己烯雌酚購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。化合物(Ⅰ)自制，制備方法見(jiàn)實(shí)施例1。甲苯2，4二異氰酸酯(TDI)原液1ml(上?；瘜W(xué)試劑站中心化工廠產(chǎn))。0.9％生理鹽水(浙江平湖莎普愛(ài)思制藥有限公司)，己烯雌酚、化合物(Ⅰ)及其組合物用1.4％酒精制成氣霧劑。1.3兔分組及模型制備兔隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、己烯雌酚組(6％，質(zhì)量百分含量，下同)、化合物(Ⅰ)組(6％)、己烯雌酚與化合物(Ⅰ)組合物組【3％己烯雌酚+3％化合物(Ⅰ)】。治療組和模型對(duì)照組用配制的10％TDI溶液滴入鼻腔致敏鼻黏膜；正常對(duì)照組用生理鹽水滴鼻。每側(cè)鼻腔0.1ml，1次/d，連續(xù)7d，然后每2d滴1次，共4次，致敏時(shí)間共15d。治療組于致敏結(jié)束后第2天用藥物氣霧劑，每側(cè)鼻腔噴1次，一次0.1ml，2次/d，共15d；模型對(duì)照組和正常對(duì)照組予以1.4％酒精，方法同治療組。治療期間治療組與模型對(duì)照組均每2天予以10％TDI溶液(每側(cè)鼻腔0.1ml)激發(fā)1次。1.4鼻分泌量測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)┐沃委熀?d，觀察動(dòng)物30min鼻分泌量。計(jì)分方法：無(wú)涕0分，涕流至前鼻孔1分，超過(guò)前鼻孔2分，流至鼻唇溝之間3分，至下唇處4分，涕流滿面5～6分。1.5噴嚏次數(shù)、抓癢次數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)┐沃委熀?d，觀察動(dòng)物30min噴嚏次數(shù)、抓癢次數(shù)。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1對(duì)變應(yīng)性鼻炎模型兔噴嚏次數(shù)、抓癢次數(shù)的影響與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組動(dòng)物出現(xiàn)打噴嚏及抓癢(P＜0.01)；與模型對(duì)照組比較，己烯雌酚與化合物(Ⅰ)組合物組噴嚏次數(shù)、抓癢次數(shù)明顯減少(P＜0.01)；與模型對(duì)照組比較，己烯雌酚組、化合物(Ⅰ)組噴嚏次數(shù)、抓癢次數(shù)減少(P＜0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。2.2對(duì)變應(yīng)性鼻炎模型兔鼻分泌量的影響與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組兔的鼻分泌量明顯增加(P＜0.01)與模型對(duì)照組比較，己烯雌酚與化合物(Ⅰ)組合物組鼻分泌量明顯減少(P＜0.01)；與模型對(duì)照組比較，己烯雌酚組、化合物(Ⅰ)組鼻分泌量減少(P＜0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。表1對(duì)變應(yīng)性鼻炎模型兔噴嚏次數(shù)、抓癢次數(shù)和鼻分泌量的影響組別平均噴嚏次數(shù)平均抓癢次數(shù)鼻分泌量評(píng)分正常對(duì)照組210模型對(duì)照組21185.6己烯雌酚組1082.4化合物(Ⅰ)組1172.5己烯雌酚與化合物(Ⅰ)組合物組321.3變應(yīng)性鼻炎是由多種細(xì)胞因子和多種免疫活性細(xì)胞，特別是EOS、肥大細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞參與的，以鼻黏膜變應(yīng)性炎癥為特征的超敏反應(yīng)性疾病。鼻黏膜中含有大量黏液及漿液腺體，這些腺體的分泌物和大分子氣體在保持氣道內(nèi)表面液體平衡和抵御細(xì)菌入侵過(guò)程中起重要作用。因此，腺體分泌異常會(huì)導(dǎo)致鼻腔生理功能紊亂，變應(yīng)性鼻炎是發(fā)生在鼻黏膜的變應(yīng)性疾病，腺體過(guò)度分泌為其主要的特征之一。肥大細(xì)胞及嗜酸粒細(xì)胞數(shù)目增多及肥大細(xì)胞脫顆粒是變應(yīng)性鼻炎鼻黏膜典型的病理特征。上述結(jié)果表明，己烯雌酚、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)變應(yīng)性鼻炎具有治療作用；己烯雌酚和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)變應(yīng)性鼻炎的治療效果進(jìn)一步提高，可以開(kāi)發(fā)成治療變應(yīng)性鼻炎的藥物。上述實(shí)施例的作用在于說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 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