本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的說，涉及一種栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
栗蘑，又名灰樹花、舞茸、貝葉多孔菌、云蕈、千佛菌、重菇，是一種真菌，屬于食用菌類，含有豐富的氨基酸、蛋白質(zhì)等多種微量元素，具有松蕈樣芳香，栗蘑肉質(zhì)柔嫩，味如雞絲，脆似玉蘭。它有利于大腦發(fā)育，抑制常見的高血壓、糖尿病，抗衰老，栗蘑中己知的有效成分為β一葡聚糖，尤其是d一組分；它能提高人體t細(xì)胞的數(shù)量，增強(qiáng)機(jī)體對腫瘤的免疫力，具有明顯抗腫瘤效果。而且，栗蘑的產(chǎn)出期在5-10月份，恰在其他食用菌菇產(chǎn)出的空檔季節(jié)，產(chǎn)品競爭優(yōu)勢明顯，銷售市場十分廣闊，有著巨大的發(fā)展空間。
但是，目前栗蘑的液態(tài)菌種的培養(yǎng)方法大都工藝較為繁瑣，生產(chǎn)周期較長，污染較為嚴(yán)重、速度較慢，而且生產(chǎn)成本較高，同時(shí)，所制備得到的栗蘑的純度較低，不適宜于工廠化生產(chǎn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)方法。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是一種栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)方法，具體包括以下步驟：
提供一種栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基；
將栗蘑的原種接種到所述栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基中進(jìn)行密封培養(yǎng)，當(dāng)所述栗蘑的原種的菌絲萌發(fā)后，每天搖動(dòng)所述栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基1次直至獲得栗蘑的栽培種。
提供所述栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基的步驟包括：
將松樹枝200-300g、土豆200-400g和水1200ml-1800ml進(jìn)行混合，然后依次經(jīng)過煮沸、冷卻、過濾處理得到濾液，將糖類物質(zhì)15-30g加入到所述濾液中并溶解制得栗蘑的液態(tài)菌種營養(yǎng)濾液，取所述栗蘑的液態(tài)菌種營養(yǎng)濾液150ml置于培養(yǎng)瓶中，然后向所述培養(yǎng)瓶中加入洗凈烘干的谷殼10-30g和碳酸鈣1-5g，制得栗蘑的液態(tài)菌 種培養(yǎng)基。
基于上述，制備所述栗蘑的液態(tài)菌種營養(yǎng)濾液步驟中，所述糖類物質(zhì)是指蔗糖、葡萄糖或麥芽糖等，優(yōu)選地，用水浸泡新鮮麥粒300-400g，并在室溫下促使所述麥粒發(fā)芽直至麥芽長度約為所述麥粒長度的3-6倍，然后，將所述麥芽烘干并磨成麥芽粉，然后向所述麥芽粉中加入所述麥芽粉5-7倍質(zhì)量的所述濾液，經(jīng)糖化、過濾后制得栗蘑的液態(tài)菌種營養(yǎng)濾液。
所述栗蘑的原種菌絲萌發(fā)后，每間隔24小時(shí)搖動(dòng)所述栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基1次，使得所述栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基中的谷殼完全被浸濕。簡言之，在培養(yǎng)期間，每天定時(shí)搖動(dòng)所述栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基1次，比如每天早上8點(diǎn)、每天上午10點(diǎn)或每天下午3點(diǎn)搖動(dòng)所述栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基1次，使谷殼完全浸沒在所述栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基中等。
所述栗蘑的原種是通過對栗蘑的母種進(jìn)行一級(jí)培養(yǎng)或二級(jí)培養(yǎng)而獲得的。
基于上述，所述栗蘑的母種進(jìn)行一級(jí)培養(yǎng)的步驟包括：
將棉籽殼20-30g、谷殼20-30g、麩皮15-25g、玉米粉8-12g分別用水浸泡，過濾撈出后分別加水煮沸，撈出瀝干，然后進(jìn)行混合制得混合料，向所述混合料中加入蔗糖5-10g、碳酸鈣1-5g和磷肥1-5g，混合均勻制得栗蘑的一級(jí)原種培養(yǎng)基；
對所述栗蘑的一級(jí)原種培養(yǎng)基進(jìn)行高溫滅菌、冷卻處理，然后向所述栗蘑的一級(jí)原種培養(yǎng)基中接入栗蘑的母種進(jìn)行培養(yǎng)，獲得栗蘑的一級(jí)原種。
基于上述，其中制備栗蘑的一級(jí)原種培養(yǎng)基過程中，將所述棉籽殼浸泡30-35小時(shí)，且每5小時(shí)換水一次，所述谷殼浸泡3-4小時(shí)，所述麩皮、玉米粉浸泡1-3小時(shí)。
基于上述，所述栗蘑的母種進(jìn)行二級(jí)培養(yǎng)的步驟包括：
將松針100-200g和水1200ml-1800ml進(jìn)行混合、煮沸，冷卻、過濾處理，制得栗蘑的二級(jí)原種營養(yǎng)液，然后將小麥20-30g、玉米25-40g、谷殼15-25g、米糠15-25g、蔗糖1-5g、石膏1-5g、磷肥1-5g混合均勻制得栗蘑的二級(jí)原種培養(yǎng)基混合料，并加入到與所述栗蘑的二級(jí)原種培養(yǎng)基混合料等質(zhì)量的所述栗蘑的二級(jí)原種營養(yǎng)液中，混合均勻制得栗蘑的二級(jí)原種培養(yǎng)基；
將所述栗蘑的二級(jí)原種培養(yǎng)基進(jìn)行高溫滅菌、冷卻處理，然后將栗蘑的一級(jí)原種接入到所述栗蘑的二級(jí)原種培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，獲得栗蘑的二級(jí)原種。
基于上述，所述栗蘑的母種的培養(yǎng)方法包括如下步驟：
將土豆50-60g、瓊脂8-14g、維生素b劑0.5-0.8g及葡萄糖5-7g加入1500ml的水中進(jìn)行加熱，直至所述瓊脂全部煮化，得到栗蘑的母種培養(yǎng)基；對所述栗蘑的母種培養(yǎng)基進(jìn)行高溫滅菌、冷卻處理，然后將栗蘑的菌株菌絲接入到所述栗蘑的母種培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，獲得所述栗蘑的母種。
本發(fā)明相對現(xiàn)有技術(shù)具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步，具體的說，本發(fā)明所提供的栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)方法，在栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)的過程中，不需要對培養(yǎng)基進(jìn)行連續(xù)搖動(dòng)，只需每天對栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基搖動(dòng)一次即可，降低了培養(yǎng)過程所利用的設(shè)備的利用率，從而降低了生產(chǎn)成本，而且該培養(yǎng)方法簡單、易于操作；每天采用定時(shí)搖動(dòng)保證了所述栗蘑的液態(tài)菌種菌絲營養(yǎng)液的均勻性。進(jìn)一步講，栗蘑的菌絲的生長以谷殼為載體，利用谷殼之間的間隙吸收營養(yǎng)，并附著在液態(tài)表面上的谷殼上進(jìn)行生長，無需額外向其培養(yǎng)基中通入無菌空氣，減少了繁雜的操作和許多昂貴的無菌設(shè)備，節(jié)約了成本并縮短了菌種的培育時(shí)間。
更進(jìn)一步講，本發(fā)明中所述栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基的原料經(jīng)過煮汁后再使用，使得菌種培養(yǎng)基的養(yǎng)料分布比較均勻，有利于栗蘑的菌絲體吸收利用，產(chǎn)出的菌種整齊均勻。在菌種培育的各階段采用不同的培養(yǎng)基原料，使得不同培養(yǎng)階段的栗蘑的能夠?qū)ε囵B(yǎng)基中的營養(yǎng)成分充分吸收，達(dá)到最好的培育效果。
具體實(shí)施方式
下面通過具體實(shí)施方式，對本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
實(shí)施例1
本實(shí)施例提供一種栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)方法，選用粗柄栗蘑的926號(hào)原種作為栗蘑的栽培種的菌株進(jìn)行培養(yǎng)，具體包括以下步驟：
將松樹枝200g、土豆200g和水1800ml混合、煮沸并保持30分鐘，然后冷卻至室溫，過濾后制得濾液；將蔗糖30g加入到所述濾液中并溶解制得栗蘑的液態(tài)菌種營養(yǎng)濾液，取所述栗蘑的液態(tài)菌種營養(yǎng)濾液150ml置于培養(yǎng)瓶中，然后向所述培養(yǎng)瓶中加入洗凈烘干的谷殼20g和碳酸鈣5g，制得栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基。
將所述栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基放置于滅菌鍋中，在1.5kg/cm3、110℃下滅菌0.5小時(shí)，取出冷卻至室溫后，將裝有所述栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基的三角瓶置于接種箱中密封2小時(shí)，然后將粗柄栗蘑的926號(hào)原種接入到所述栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基中，置于30℃的培養(yǎng)室中進(jìn)行密封培養(yǎng)，當(dāng)所述栗蘑的原種菌絲萌發(fā)后，每天上午10點(diǎn)整 定時(shí)搖動(dòng)所述培養(yǎng)基1次至所述培養(yǎng)基中的谷殼完全被浸濕，直至獲得粗柄栗蘑的926號(hào)栽培種。
為了更好的了解不同時(shí)期栗蘑的菌絲體的生長情況，確定液態(tài)培養(yǎng)時(shí)間，在生長時(shí)間為0-144h范圍內(nèi)，利用專用的采樣器每12h進(jìn)行1次取樣，測定栗蘑的菌絲生物量。具體操作步驟為：栗蘑的菌種每階段培養(yǎng)結(jié)束后選用采樣器抽取所述三角瓶中適量的液體，以轉(zhuǎn)速為4000r/min速度離心15min，然后棄去清液，將得到的栗蘑的菌絲體用蒸餾水清洗數(shù)次后，置于真空干燥箱中，40℃下烘干至恒重，計(jì)算培養(yǎng)得到的栗蘑的菌絲生物量。
實(shí)施例2
本實(shí)施例提供一種栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)方法，選用粗柄栗蘑的926號(hào)原種作為栗蘑的栽培種的菌株進(jìn)行培養(yǎng)，具體培養(yǎng)步驟如下：將松樹枝300g、土豆400g和水1800ml混合、煮沸并保持30分鐘，然后冷卻至室溫，過濾后制得濾液；取新鮮的麥粒400g，在清水中浸泡12小時(shí)，室溫下讓其發(fā)芽，待其芽長約為麥粒的3倍時(shí)，取出在60-80℃下烘干，磨成麥芽粉，然后將所述麥芽粉加入所述濾液中，加入的所述濾液是所述麥芽粉的6倍，在50℃的條件下糖化6小時(shí)經(jīng)4層紗布過濾后制得栗蘑的液態(tài)菌種營養(yǎng)濾液；取所述栗蘑的液態(tài)菌種營養(yǎng)濾液150ml置于培養(yǎng)瓶中，然后向所述培養(yǎng)瓶中加入洗凈烘干的谷殼20g和碳酸鈣5g，制得栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基。
將所述栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基放置于滅菌鍋中，在1.5kg/cm3、110℃下滅菌0.5小時(shí)，取出冷卻至室溫后，將裝有所述栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基的三角瓶置于接種箱中密封2小時(shí)，然后將粗柄栗蘑的926號(hào)原種接入到所述栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)基中，置于30℃的培養(yǎng)室中進(jìn)行密封培養(yǎng)，當(dāng)所述栗蘑的原種菌絲萌發(fā)后，每天上午10點(diǎn)整定時(shí)搖動(dòng)所述培養(yǎng)基1次至所述培養(yǎng)基中的谷殼完全被浸濕，直至獲得粗柄栗蘑的926號(hào)栽培種。
實(shí)驗(yàn)測得采用此液態(tài)菌種培養(yǎng)基培養(yǎng)出的粗柄栗蘑的926號(hào)的生物量為平均值為8.545g/l，生產(chǎn)成本為0.355元/g。
實(shí)施例3
本實(shí)施例提供一種栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)方法，選用粗柄栗蘑的926號(hào)原種作為栗蘑的栽培種的菌株進(jìn)行培養(yǎng)，與實(shí)施例1不同的是，所述粗柄栗蘑的926號(hào)栽培種的培養(yǎng)過程中所采用的培養(yǎng)基原料如下：麥麩40g、玉米粉20g、黃豆粉10g、kh2po41g、 mgso41g，實(shí)驗(yàn)測得采用此液態(tài)菌種培養(yǎng)基培養(yǎng)出的粗柄栗蘑的926號(hào)的生物量為平均值為7.148g/l，生產(chǎn)成本為0.465元/g。
實(shí)施例4
本實(shí)施例提供一種栗蘑的液態(tài)菌種培養(yǎng)方法，選用粗柄栗蘑的926號(hào)原種作為栗蘑的栽培種的菌株進(jìn)行培養(yǎng)，與實(shí)施例1、實(shí)施例2和實(shí)施例3均不同的是，所述粗柄栗蘑的926號(hào)栽培種的培養(yǎng)過程中所采用的培養(yǎng)基原料如下：土豆200g、蔗糖30g、酵母膏5g、kh2po40.5g、mgso40.5g，實(shí)驗(yàn)測得采用此液態(tài)菌種培養(yǎng)基培養(yǎng)出的粗柄栗蘑的926號(hào)的生物量為平均值為6.754g/l，生產(chǎn)成本為0.41元/g。
最后應(yīng)當(dāng)說明的是：以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非對其限制；盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：依然可以對本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行修改或者對部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明請求保護(hù)的技術(shù)方案范圍當(dāng)中。