硫基三唑化合物及其在寄生性原蟲動物感染中的用途的制作方法

本發(fā)明涉及具有藥理活性的新的硫基三唑化合物、其制備方法、藥物組合物和它們在治療一些寄生性原蟲動物感染(例如瘧疾特別是惡性瘧原蟲(plasmodiumfalciparum)感染)中的用途。

背景技術(shù)：

寄生性原蟲動物感染是多種醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域重大疾病的原因，包括人類中的瘧疾和鳥類、魚類和哺乳動物的各種球蟲病。許多疾病對于宿主是威脅生命的，并在畜牧業(yè)中造成相當(dāng)大的經(jīng)濟(jì)損失，例如由以下種屬引起的疾?。喊狼蛳x屬、泰勒蟲屬、巴貝蟲屬、隱孢子蟲屬、弓形體屬(如布氏弓形蟲，非洲昏睡病和卡氏弓形蟲、恰加斯病)和瘧原蟲(如惡性瘧原蟲)，以及鞭毛綱諸如利什曼原蟲屬(如杜氏利什曼原蟲)。越來越受關(guān)注的另一種寄生性生物是卡氏肺囊蟲，其在免疫缺陷型和免疫妥協(xié)宿主(包括感染hiv的那些)中常?？蓪?dǎo)致致命的肺炎。

瘧疾是一種蚊子傳播的疾病，在人類中，可以由五種瘧原蟲寄生蟲引起，其中惡性瘧原蟲是最有具毒性的。2013年，世界范圍內(nèi)估計有一億二千八百萬人感染瘧疾，瘧疾也造成58.4萬人死亡(其中撒哈拉以南的非洲占90％)，幼兒和孕婦是受影響最嚴(yán)重的群體。2013年，瘧疾殺死了估計43.7萬名五歲以下的兒童(worldhealthorganization.(2014).worldmalariareport.geneva,switzerland,worldhealthorganization)。

對經(jīng)典治療的耐藥性和針對當(dāng)前的治療選擇(基于青蒿素的聯(lián)合療法)新出現(xiàn)的耐藥性揭示了迫切需要具有新作用機(jī)制的新治療劑(worldhealthorganization.jointassessmentoftheresponsetoartemisininresistanceinthegreatermekongsub-region.2011年11月至2012年2月.總結(jié)報告)。2010年，gsk公布了已經(jīng)在表型篩選方法中顯示出抑制惡性瘧原蟲寄生蟲生長的超過13,500種化合物的細(xì)節(jié)。(gamo,f.j.etal.(2010)thousandsofchemicalstartingpointsforantimalarialleadidentification.nature465,305–310)。公眾在tcams(trescantosantimalarialset)為名的開放數(shù)據(jù)庫中可獲得這些化合物的分子結(jié)構(gòu)和說明(http://www.ebi.ac.uk/chemblntd)。

tcams化合物集中的一種這樣的化合物是tcmdc-125114(化合物524404chembl數(shù)據(jù)庫):

另一種方法是計算機(jī)輔助藥物設(shè)計。shah等人(journalofchemicalmodelling(2012),52(3),696-710)公開了化合物32作為他們研究的一部分。

在他們的測定中，發(fā)現(xiàn)化合物32是無活性的(參見shah等人，698頁最后一段–“例如，缺少r2取代基的化合物(27-34)或具有較短r2取代基的化合物(35-38)是無活性的”,和第699頁表2)。r2取代基在化合物32中的位置如下所示(參見shah等人的圖2，其為1,2,4-三唑系列化合物的通式結(jié)構(gòu))。

已公開了四個與chembl524404和化合物32具有類似結(jié)構(gòu)的化學(xué)庫化合物，但它們不具有已知活性。三個可獲自vitasmlaboratory(網(wǎng)址:http://www.vitasmlab.com)，第四個獲自enamine(網(wǎng)址:http://www.enamine.net)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明涉及新的硫基三唑化合物，用于一些寄生蟲感染(例如瘧疾，特別是惡性瘧原蟲感染)的化學(xué)療法中，其制備方法和包含所述化合物的藥物組合物。

發(fā)明詳述

本發(fā)明提供了式(i)化合物:

(r)-2-((3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-5-基)硫基)-1-(1h-吲哚-3-基)丙烷-1-酮或其鹽。

本發(fā)明還包括藥學(xué)上可接受的鹽。在本發(fā)明的具體實施方案中，式(i)化合物的藥學(xué)上可接受的鹽可以優(yōu)于相應(yīng)的游離堿，因為這樣的鹽賦予分子更大的穩(wěn)定性或溶解性，從而有助于配制成劑型。因此，本發(fā)明還涵蓋式(i)化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指保留主題化合物的所需生物活性并表現(xiàn)出最小的不希望的毒理作用的鹽。關(guān)于合適的鹽的綜述參見berge等人，j.pharm.sci.,1977,66,1-19。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”包括任何藥學(xué)上可接受的酸或堿的加成鹽。這些藥學(xué)上可接受的鹽可以在所述化合物的最終分離和純化期間原位制備，或者分別使經(jīng)純化的所述化合物與合適的酸或堿反應(yīng)。鹽可以從溶液中沉淀出來并通過過濾收集，或者可以通過蒸發(fā)溶劑來回收。

因此，根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供了式(i)化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。

式(i)的化合物含有堿性官能團(tuán)，因此能夠通過用合適的酸處理形成藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。藥學(xué)上可接受的酸加成鹽可以通過任選地在合適的溶劑(如有機(jī)溶劑)中，將式(i)化合物與合適的強(qiáng)無機(jī)或有機(jī)酸(例如氫溴酸、鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、高氯酸、對甲苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、2-羥基乙磺酸、萘磺酸(例如2-萘磺酸)反應(yīng)來形成，得到通常通過例如結(jié)晶和過濾分離的鹽。藥學(xué)上可接受的酸加成鹽包括氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、高氯酸鹽、對甲苯磺酸鹽、苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽或萘磺酸鹽(例如2-萘磺酸鹽)。在一個實施方案中，式(i)化合物的藥學(xué)上可接受的酸加成鹽是強(qiáng)酸的鹽，例如氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、高氯酸鹽、磷酸鹽、對甲苯磺酸鹽、苯磺酸鹽或甲磺酸鹽。

式(i)化合物的合適的藥學(xué)上可接受的鹽包括與適當(dāng)堿形成的單或二堿鹽。可通過將式(i)的化合物與合適的無機(jī)或有機(jī)堿反應(yīng)形成藥學(xué)上可接受的堿加成鹽。藥學(xué)上可接受的堿加成鹽包括鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、銨鹽、n-甲基葡萄糖胺鹽、銨鹽和膽堿鹽。

本發(fā)明在其范圍內(nèi)包括所有可能的式(i)化合物的鹽的化學(xué)計量和非化學(xué)計量形式。

式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可以以固體或液體的形式存在，這兩者均包括在本發(fā)明中。在固態(tài)中，式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可以以無定形物質(zhì)或結(jié)晶形式存在，或作為其混合物存在。應(yīng)當(dāng)理解，可以形成式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥學(xué)上可接受的溶劑合物，其中在結(jié)晶過程中溶劑分子被結(jié)合到晶格中。溶劑合物可以包括非水溶劑(如乙醇、異丙醇、二甲基亞砜(dmso)、乙酸、乙醇胺和乙酸乙酯)，或者它們可以包括水作為被結(jié)合到所述晶格中的溶劑。其中水是被結(jié)合到晶格中的溶劑的溶劑合物通常被稱為“水合物”。

式(i)化合物的鹽可以通過使合適的化學(xué)計量的游離堿/酸與合適的酸/堿在合適的溶劑中接觸來制備。式(i)化合物的游離堿/酸可以例如在溶液中，并且加入固體形式的適當(dāng)?shù)乃?堿，或式(i)化合物的游離堿/酸和合適的酸/堿二者可以獨(dú)立地存在于溶液中。

用于溶解式(i)化合物的游離堿/酸的合適的溶劑包括例如醇如(異丙醇)；酮(如丙酮)；乙腈或甲苯。如果將堿作為在溶劑中的溶液加入，則使用的溶劑可包括丙酮、甲醇或水。

式(i)化合物的鹽可以通過常規(guī)方法從如上獲得的其溶液中以固體形式分離。例如，非結(jié)晶鹽可以通過以下方式制備：從溶液中沉淀、噴霧干燥或冷凍干燥溶液、將溶液蒸發(fā)至玻璃狀，或真空干燥油，或固化從游離堿和酸反應(yīng)得到的熔融物。還可以使用諸如噴霧干燥分散體(sdd)的方法將式(i)化合物制備為藥物物質(zhì)于聚合物基質(zhì)(如醋酸羥丙甲纖維素琥珀酸酯(hpmcas))中的無定形分子分散體。

式(i)化合物的鹽可以通過從其中所述鹽具有有限溶解度的溶劑中直接結(jié)晶，或通過研磨或以其它方式結(jié)晶非結(jié)晶鹽來制備。例如，可以使用有機(jī)溶劑如丙酮、乙腈、丁酮、1-丁醇、乙醇、1-丙醇或四氫呋喃或所述溶劑的混合物。可以通過蒸發(fā)一些或全部溶劑或通過在升高的溫度下結(jié)晶然后控制冷卻(例如分階段)冷卻，獲得改進(jìn)的產(chǎn)率的鹽?？梢酝ㄟ^仔細(xì)控制沉淀溫度和種晶，來提高生產(chǎn)過程的重復(fù)性和產(chǎn)品的粒度分布和形式。

適用于藥用的式(i)化合物的鹽和溶劑合物是其中抗衡離子或所締合的溶劑是藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物。然而，具有非藥學(xué)上可接受的抗衡離子或締合溶劑的鹽和溶劑合物在本發(fā)明的范圍內(nèi)，例如用作制備式(i)化合物或其鹽、溶劑合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物的中間體。

本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，可以在最終脫保護(hù)階段之前制備的式(i)化合物的某些保護(hù)的衍生物可能本身不具有藥理活性，但在某些情況下可以被口服或腸胃外給藥，然后在體內(nèi)代謝形成在第一方面中定義的藥物活性的化合物。因此，這樣的衍生物可以被描述為“前藥”。在第一方面中定義的化合物的所有保護(hù)的衍生物和前藥都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明化合物合適的前藥的實例描述于drugsoftoday,volume19,number9,1983,pp499–538和topicsinchemistry,chapter31,pp306–316和“designofprodrugs”byh.bundgaard,elsevier,1985,chapter1(將這些文獻(xiàn)所公開的內(nèi)容并入本申請作為參考)中。本領(lǐng)域技術(shù)人員將進(jìn)一步理解的是，本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的作為“前-基團(tuán)(pro-moieties)”的一些基團(tuán)，例如h.bundgaard在“designofprodrugs”(將這些文獻(xiàn)所公開的內(nèi)容并入本申請作為參考)中描述的那些基團(tuán)可被置于存在于式(i)化合物上的合適的官能團(tuán)上。式(i)化合物或其鹽或溶劑合物的合適前藥包括：酰胺、氨基甲酸酯、偶氮化合物、磷酰胺、糖苷。因此，在本發(fā)明的一個方面，其提供了式(i)化合物的前藥。

如上所述，式(i)化合物可以是其游離堿或式(i)化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或前藥形式，其在給藥接受者后能夠提供(直接或間接)式(i)化合物或其活性代謝物或殘基。這種藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物和前藥是本領(lǐng)域技術(shù)人員不經(jīng)過度實驗就可以識別的。然而，可以參考burger’smedicinalchemistryanddrugdiscovery,5thedition,vol1:principlesandpractice教導(dǎo)的內(nèi)容，將該文獻(xiàn)教導(dǎo)的關(guān)于所述衍生物的內(nèi)容并入本申請作為參考。

此外，式(i)化合物或其鹽和溶劑合物的一些結(jié)晶形式可以以一種或多種多晶型形式存在，其包括在本發(fā)明中。

還應(yīng)當(dāng)理解的是，式(i)的化合物可以以不同的互變異構(gòu)形式存在。所有可能的互變異構(gòu)體都在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。在式(i)化合物的單晶結(jié)構(gòu)分析中，發(fā)現(xiàn)互變異構(gòu)形式為：

(r)-2-((5-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-3-基)硫基)-1-(2h-吲哚-3-基)丙烷-1-酮。

式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可用于治療一些寄生蟲感染例如由以下導(dǎo)致的寄生性原蟲動物感染：致瘧性寄生蟲惡性瘧原蟲、艾美球蟲屬、卡氏肺囊蟲、卡氏弓形蟲、布氏弓形蟲或杜氏利什曼原蟲。具體地，式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可用于治療惡性瘧原蟲的感染。因此，本發(fā)明涉及治療這些病癥的方法。因此，提供了式(i)化合物或藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療。

本發(fā)明一個方面提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療寄生性原蟲動物感染。

本發(fā)明另一個方面提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療瘧疾。

本發(fā)明另一個方面提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療惡性瘧原蟲感染。

在本發(fā)明另一個方面中，提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于治療寄生性原蟲動物感染的藥物中的用途。

在本發(fā)明另一個方面中，提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于治療瘧疾的藥物中的用途。

在本發(fā)明另一個方面中，提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于治療惡性瘧原蟲感染的藥物中的用途。

在本發(fā)明的另一方面，提供了一種治療患有寄生性原蟲動物感染的人或動物受試者的方法，該方法包括向所述人或動物受試者施用有效量的式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在本發(fā)明的另一方面，提供了一種治療患有瘧疾的人或動物受試者的方法，所述方法包括向所述人或動物受試者施用有效量的式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在本發(fā)明的另一方面，提供了一種治療患有由惡性瘧原蟲導(dǎo)致的寄生性原蟲動物感染的人或動物受試者的方法，該方法包括向所述人或動物受試者施用有效量的式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

本發(fā)明的治療方法包括向有需要的患者施用安全且有效量的根據(jù)式(i)的化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽。

本申請使用的"治療"是指：(1)改善或預(yù)防所治療的病癥或所治療的病癥的一種或多種生物學(xué)表現(xiàn)，(2)干擾(a)生物級聯(lián)中導(dǎo)致或負(fù)責(zé)所治療的病癥的一個或多個點或(b)所治療病癥的一種或多種生物學(xué)表現(xiàn)，或(3)緩解與所治療病癥相關(guān)的一種或多種癥狀或影響。技術(shù)人員將會意識到，“預(yù)防”不是絕對的術(shù)語。在醫(yī)學(xué)中，“預(yù)防”是指藥物的預(yù)防性給藥，以實質(zhì)上降低病癥或其生物學(xué)表現(xiàn)的可能性或嚴(yán)重性，或延遲所述病癥或生物體現(xiàn)的發(fā)生。

如本文所用的“安全且有效量”是指在合理的醫(yī)學(xué)判斷的范圍內(nèi)，足以在待治療的病癥中顯著誘導(dǎo)陽性改變的化合物的量，但足夠低以避免嚴(yán)重副作用(具有合理的益處/風(fēng)險比例)。(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的安全且有效量將根據(jù)所選擇的具體化合物(例如取決于所述化合物的效力，功效和半衰期)；選擇的給藥路線；所治療的感染和/或病癥的性質(zhì)；所治療的感染和/或病癥的嚴(yán)重程度；所治療的患者的年齡，體型，體重和身體狀況；待治療的患者的醫(yī)療史；治療的持續(xù)時間；并用治療的性質(zhì)；所期望的治療效果；以及類似因素而變化，但是可以由技術(shù)人員常規(guī)地確定。

本文使用的"患者"是指人或其它動物。

式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可以通過任何合適的給藥途徑給藥，包括全身給藥。全身給藥包括口服給藥、胃腸外給藥、透皮給藥、直腸給藥和吸入給藥。腸胃外給藥是指除腸內(nèi)、透皮或吸入之外的給藥途徑，通常通過注射或輸注。腸胃外給藥包括靜脈內(nèi)、肌內(nèi)和皮下注射或輸注。吸入是指通過口腔或鼻腔通道給藥到患者的肺中。

式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可以僅給藥一次，或者根據(jù)給藥方案給藥，其中以不同的時間間隔給藥多個劑量達(dá)給定時間段。例如，劑量可以被每天給藥一次、兩次、三次或四次。可以給藥劑量，直到達(dá)到所期望的治療效果或無限期地給藥以保持所期望的治療效果。劑量也將根據(jù)預(yù)期治療的性質(zhì)而變化，其中“治療”如上所定義，例如與預(yù)防所治療的病癥相比，可以給藥更大劑量的化合物用于改善。本發(fā)明化合物的合適的給藥方案取決于該化合物的藥代動力學(xué)性質(zhì)，例如吸收、分布和半衰期，其可由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定。此外，用于本發(fā)明化合物的合適的給藥方案，包括給藥這種方案的持續(xù)時間取決于化合物的給藥途徑，所治療的病癥，所治療的病癥的嚴(yán)重程度，所治療的患者的年齡和身體狀況、待治療的患者的醫(yī)療史，任何并用治療的性質(zhì)，所期望的治療效果以及類似因素，它們在本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識和專業(yè)范圍內(nèi)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將進(jìn)一步理解的是，適當(dāng)?shù)慕o藥方案可能需要根據(jù)個體患者對給藥方案的反應(yīng)或個體患者的需求隨時間的改變而進(jìn)行調(diào)整。還將理解，如果式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與下文進(jìn)一步討論的一種或多種另外的活性治療劑組合施用，則本發(fā)明化合物的給藥方案也可以視需要根據(jù)一種或多種另外的活性治療劑的性質(zhì)和量而變化。

通常的每日劑量可以根據(jù)所選擇的具體給藥途徑而變化?？诜o藥的通常日劑量預(yù)計在約25mg/kg至約1000mg/kg的范圍內(nèi)。

本發(fā)明的化合物也可與其它活性治療劑組合使用。因此，本發(fā)明在另一方面提供了包含式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及另外的活性治療劑的組合。當(dāng)式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與對相同的病癥具有活性的第二種活性治療劑組合使用時，每種化合物的劑量可與單獨(dú)使用該化合物時的劑量不同。本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易理解適當(dāng)?shù)膭┝?。?yīng)當(dāng)理解的是，用于治療所需的本發(fā)明化合物的量將隨著所治療的病癥的性質(zhì)和患者的年齡和狀況而變化，并且將最終由主治醫(yī)師或獸醫(yī)酌情決定。

式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可以單獨(dú)使用或與一種或多種另外的活性治療劑組合使用，例如其它抗寄生蟲藥物，例如抗瘧疾藥物。

所述其他活性治療劑包括抗瘧疾藥(如，氯喹、甲氟喹、伯氨喹、乙胺嘧啶、奎寧、青蒿素、鹵泛群、多西環(huán)素、阿莫地喹、阿托伐醌、他非諾喹、氨苯砜、氯胍、磺胺多辛、環(huán)氯胍)和防治瘧(fansidar)。

上文所述的組合可以方便地以藥物制劑的形式使用，因此包含如上所定義的組合的藥物制劑與藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑一起構(gòu)成了本發(fā)明的另一方面。所述組合的各個組分可以通過任何方便的途徑依次或同時以單獨(dú)或組合的藥物制劑形式給藥。

當(dāng)依次給藥時，可以首先給藥式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者一種或多種另外的活性治療劑。當(dāng)同時給藥時，所述組合可以在相同或不同的藥物組合物中給藥。當(dāng)組合在相同的制劑中時，應(yīng)當(dāng)理解，式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及一種或多種另外的活性治療劑必須是穩(wěn)定的并且彼此相容，并且與制劑的其他組分相容。當(dāng)單獨(dú)制備時，式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和一種或多種另外的活性治療劑可以以任何便利的制劑形式提供，方便地以這些化合物在本領(lǐng)域中已知的方式進(jìn)行。

組合物

式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽通常(但非必須)在給藥患者之前配制成藥物組合物。一個方面中，本發(fā)明涉及包含式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物。在另一方面中，本發(fā)明涉及一種藥物組合物，其包含(a)一種式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和(b)一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。另一方面，本發(fā)明提供了包含式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物。在另一方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含(a)式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和(b)一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。

載體和/或賦形劑在與制劑的其它成分相容方面必須是“可接受的”并且對其接受者無害。

本發(fā)明的藥物組合物可以以散裝形式制備和包裝，其中可以取出安全且有效量的本發(fā)明化合物，然后給藥患者，例如以粉末或糖漿形式?；蛘?，本發(fā)明的藥物組合物可以以單位劑型形式制備和包裝，其中每個物理上離散的單元含有安全且有效量的本發(fā)明化合物。當(dāng)以單位劑型制備時，本發(fā)明的藥物組合物通常含有約0.1至1000mg的本發(fā)明化合物，另一方面含有0.1mg至約500mg的本發(fā)明化合物。

本發(fā)明的藥物組合物通常含有一種式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。然而，在一些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物含有多于一種式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。例如，在一些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物含有兩種本發(fā)明化合物。此外，本發(fā)明的藥物組合物可任選地進(jìn)一步包含一種或多種另外的活性治療化合物。本發(fā)明的藥物組合物通常含有多于一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。然而，在一些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物含有一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。

式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和藥學(xué)上可接受的一種或多種賦形劑通常被配制成適于通過所期望的給藥途徑向患者施用的劑型。例如，劑型包括適于以下情況的那些：(1)口服給藥，例如片劑、膠囊、小膠囊、丸劑、糖錠劑、粉末、糖漿、酏劑、混懸劑、溶液劑、乳劑、藥囊(sachet)和扁囊劑；(2)腸胃外給藥，例如無菌溶液劑、混懸劑和用于重構(gòu)的粉末劑；(3)透皮給藥，例如透皮貼劑；(4)直腸給藥，例如栓劑；(5)吸入，例如氣霧劑和溶液劑。

合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑會根據(jù)所選擇的具體劑型而變化。此外，合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑可針對它們在組合物中所發(fā)揮的具體功能進(jìn)行選擇。例如，一些藥學(xué)上可接受的賦形劑被選擇是由于它們具有促進(jìn)均一劑型的產(chǎn)生的能力。一些藥學(xué)上可接受的賦形劑被選擇是由于它們具有促進(jìn)穩(wěn)定劑型的產(chǎn)生的能力。一些藥學(xué)上可接受的賦形劑被選擇是由于它們具有促進(jìn)式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在給藥于所述患者后從身體的一個器官或部位攜帶或運(yùn)送到身體的另一個器官或部位的能力。一些藥學(xué)上可接受的賦形劑被選擇是由于它們具有增強(qiáng)患者順應(yīng)性的能力。

合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑包括以下類型的賦形劑:粘合劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、造粒劑、包衣劑、潤濕劑、溶劑、共溶劑、助懸劑、乳化劑、增甜劑、矯味劑、掩味劑、著色劑、抗結(jié)塊劑、保濕劑、螯合劑、增塑劑、增粘劑、抗氧化劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑和緩沖劑。技術(shù)人員理解的是，一些藥學(xué)上可接受的賦形劑可根據(jù)該賦形劑在制劑中存在多少和存在其他什么成分于該制劑中而發(fā)揮不止一種功能并且可發(fā)揮替代功能。

技術(shù)人員掌握本領(lǐng)域的知識和技能，從而能使他們選擇用在本發(fā)明中的適當(dāng)量的合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑。此外，有許多描述藥學(xué)上可接受的賦形劑的資源是技術(shù)人員可獲得的并且可用于選擇合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑。實例包括remington'spharmaceuticalsciences(mackpublishingcompany),thehandbookofpharmaceuticaladditives(gowerpublishinglimited),和thehandbookofpharmaceuticalexcipients(theamericanpharmaceuticalassociationandthepharmaceuticalpress)。

本發(fā)明的藥物組合物是使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)和方法制備的。本領(lǐng)域常用的方法中的一些描述在remington'spharmaceuticalsciences(mackpublishingcompany)中。

在一個方面中，本發(fā)明涉及固體或液體口服劑型，例如液體、片劑、錠劑或膠囊，其包含安全且有效量的本發(fā)明化合物和載體。所述載體可為稀釋劑或填充劑的形式。合適的稀釋劑和填充劑包括乳糖、蔗糖、右旋糖、甘露醇、山梨糖醇、淀粉(例如，玉米淀粉、馬鈴薯淀粉和預(yù)膠化淀粉)、纖維素及其衍生物(例如，微晶纖維素)、硫酸鈣和磷酸氫鈣。液體劑型通常由所述化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物在液體載體例如乙醇、橄欖油、甘油、葡萄糖(糖漿)或水中的懸浮液或溶液組成(例如加入矯味劑、懸浮劑或著色劑)。當(dāng)組合物為片劑或錠劑形式時，可以使用常規(guī)用于制備固體制劑的任何藥物載體。這種載體的實例包括硬脂酸鎂、石膏粉、滑石、明膠、阿拉伯膠、硬脂酸、淀粉、乳糖和蔗糖。當(dāng)組合物為膠囊形式時，任何常規(guī)包封都是適合的，例如使用上述載體或半固體例如癸酸的單-或二-甘油酯，gelucire^tm和labrasol^tm，或硬膠囊殼例如明膠。當(dāng)組合物為軟殼膠囊的形式例如明膠時，可以考慮常規(guī)用于制備分散體或懸浮液的任何藥物載體，例如水性膠或油，并且可以摻入軟膠囊殼中。

口服固體劑型可進(jìn)一步包含粘合劑形式的賦形劑。合適的粘合劑包括淀粉(例如，玉米淀粉、馬鈴薯淀粉和預(yù)膠化淀粉)、凝膠、阿拉伯膠、海藻酸鈉、海藻酸、西黃蓍膠、瓜爾膠、聚維酮和纖維素及其衍生物(例如，微晶纖維素)。所述口服固體劑型可進(jìn)一步包含崩解劑形式的賦形劑。合適的崩解劑包括交聚維酮、淀粉羥乙酸鈉、交聯(lián)羧甲纖維素、海藻酸和羧基甲基纖維素鈉。所述口服固體劑型可進(jìn)一步包含潤滑劑形式的賦形劑。合適的潤滑劑包括硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣和滑石。

本發(fā)明進(jìn)一步提供了制備藥物組合物的方法，所述方法包括將式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物與藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑混合。

用于口服給藥的制劑被適當(dāng)?shù)亟?jīng)配制以實現(xiàn)所述活性化合物的控制/延長釋放。

方法

用于形成酰氯和酰胺的一般方法描述在文獻(xiàn)(j.chem.res.2008(22)，530-533)中，使用合適的市售酸和苯胺作為起始原料。

所述式(i)化合物可通過不對稱或非不對稱路線合成。

在兩種類型的合成中，可使用以下方法合成3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮(中間體2)。

在非不對稱合成中，可使2-氯-1-(1h-吲哚-3-基)丙烷-1-酮和3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮(中間體2)一起反應(yīng)，然后手性分離式(i)化合物。

在不對稱合成中，(s)-2-氯-1-(1h-吲哚-3-基)丙烷-1-酮(中間體3)可通過將(2s)-2-氯丙酰氯加至吲哚來制備，然后將其加至3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮(中間體2)以制備式(i)化合物。

對于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，式(i)化合物可以使用與上述方法類似的方法或參考本文提供的實施例中詳述的實驗操作來制備。式(i)化合物的制備的更多細(xì)節(jié)參見實施例。

通過適當(dāng)?shù)牟僮骱捅Ｗo(hù)，式(i)化合物的合成通過與上述類似的方法完成。在任何具體情況下，可能需要特定的保護(hù)基團(tuán)?？梢栽趖wgreeneandpgmwuts‘protectivegroupsinorganicsynthesis’,第三版(1999),jwiley和sons中找到合適的保護(hù)基團(tuán)，但不限于那些。

實驗

縮寫

在描述本發(fā)明時，根據(jù)元素周期表來確定化學(xué)元素。本文使用的縮寫和符號符合化學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員對這些縮寫和符號的常用用途。本文使用以下縮寫:

anh無水的

aq.水性的

auc濃度-時間曲線下面積

awcl抗瘧疾全血篩選

cat.催化的

conc.濃縮的

dcm二氯甲烷

dmf二甲基甲酰胺

dmso-d6氘代二甲基亞砜

ed90消除90％的寄生蟲血癥的劑量

esms電噴霧質(zhì)譜

etoac乙酸乙酯

fassif禁食狀態(tài)刺激的腸液

fessif喂食狀態(tài)刺激的腸液

g克

h小時

hcl鹽酸

hplc高效液相色譜

hts高通量篩選

iproh2-丙醇

l升

m摩爾濃度

um微摩爾濃度

ug微克

meoh甲醇

min(s)分鐘

ml毫升

mmol毫摩爾

mg毫克

mhz兆赫

mw微波

n標(biāo)準(zhǔn)濃度

nahco3碳酸氫鈉

nacl氯化鈉

hplc高效液相色譜

¹hnmr質(zhì)子核磁共振波譜

pbs磷酸鹽緩沖溶液

p.falciparum惡性瘧原蟲

pf惡性瘧原蟲

rt室溫

rpm每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù)

sat.飽和的

sgf模擬胃液

thf四氫呋喃

uplc超高效液相色譜

℃攝氏度

[3h]hypoxanthine氚代次黃嘌呤

δppm以ppm為單位的化學(xué)位移

化合物制備

實施例

以下實施例例示了本發(fā)明。這些實施例不旨在限制本發(fā)明的范圍，而是為本領(lǐng)域技術(shù)人員制備和使用本發(fā)明的化合物、組合物和方法提供指導(dǎo)。雖然描述了本發(fā)明的具體實施方案，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，可以進(jìn)行各種改變和修改。

當(dāng)材料是商業(yè)上可以購買的時，這在化合物名稱之后的括號中以大寫字母表示。例如，在中間體1的制備中，草酰氯購自aldrich，因此稱為“草酰氯(aldrich)”。

中間體12-(3,5-二氯吡啶-4-甲?；?肼基硫代甲酰胺

i)向3,5-二氯吡啶-4-甲酸(manchester,50g,260.42mmol)于dcm(500ml)中的懸浮液中加入草酰氯(aldrich,24.24ml,286.462mmol)和30滴n,n-二甲基甲酰胺(dmf)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌3h。uplc(使用nhme2于ch3cn中)顯示反應(yīng)完成。真空蒸發(fā)溶劑得到所需產(chǎn)物，其為淺綠色固體(3,5-二氯吡啶-4-甲酰氯)，并且不經(jīng)任何進(jìn)一步純化即用于下一步驟。

ii)將氨基硫脲,99％(aldrich,23.735g,260.42mmol)和吡啶(21.02ml,260.42mmol)于n,n-二甲基甲酰胺(dmf)(330ml)中的溶液冷卻至0℃(冰浴)并在0℃通過插管加入3,5-二氯吡啶-4-甲酰氯于n,n-二甲基甲酰胺(dmf)(120ml)中的懸浮液。將反應(yīng)混合物加熱至80℃，保持3h。uplc顯示反應(yīng)完成。將其在genevac中減壓濃縮至干，得到粗制物，其為黃色固體。將該固體分批倒入250ml冷水中。將所得白色懸浮液離心并分離白色固體，在空氣流中干燥，得到所期望的化合物2-(3,5-二氯吡啶-4-甲酰基)肼基硫代甲酰胺(69.93g,收率＝84％,純度＝83％，通過uplc和nmr確定)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm:10.95(s,1h),10.00(s,1h),8.86(m,1h),8.78(s,2h),7.92(m,1h)[es+ms]m/z265(m+h)

中間體23-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮

方法a

將2-(3,5-二氯吡啶-4-甲?；?肼基硫代甲酰胺(中間體1,135.48g,426.61mmol)于2l1mnaoh水溶液的混合物在3.5lparr中在110℃(t設(shè)置＝120℃,在浴中的t測量＝110℃)加熱40小時。然后將溶液轉(zhuǎn)移到4l燒瓶中，用水洗滌反應(yīng)器，在0℃和在攪拌下，用200ml濃hcl酸化。將水性懸浮液用genevac旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥，然后取出水性溶液得到47.71g3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮，其為灰色固體(純度＝97％，通過uplc和nmr確定)。將產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm:14.11(s,1h).13.95(s,1h)8.91(s,2h).[es+ms]m/z247(m+)。

方法b

將2-(3,5-二氯吡啶-4-甲?；?肼基硫代甲酰胺(中間體1,3.0g,11.32mmol)于1n氫氧化鈉(16.97ml,16.97mmol)中的懸浮液放置在反應(yīng)容器中，將該容器密封并使用微波synthos3000設(shè)備加熱至150℃，保持60分鐘。在0℃，將反應(yīng)混合物通過加入6nhcl小心酸化直至中性ph，然后減壓下濃縮至四分之三。過濾固體并用水和dcm洗滌，得到3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮，其為淺黃色固體(1.63g)。將母液減壓濃縮至四分之三，過濾新的固體并用水和dcm洗滌，得到額外的3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮，其為淺黃色固體(534mg)，黃色固體。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm:14.20-14.02(br.s.,2h),8.97(s,2h)。

中間體3(s)-2-氯-1-(1h-吲哚-3-基)丙烷-1-酮

i)將草酰氯(aldrich,3.57ml,42.2mmol)和dmf(aldrich,25滴)加至攪拌的(2s)-2-氯丙酸(aldrich,4.17g.,89.6mmol.)于dcm(65ml)中的溶液中。將溶液在室溫攪拌2小時。然后將反應(yīng)混合物用rotavapor(p＝350mmbar,t?。?8℃)輕微濃縮，得到中間體((2s)-2-氯丙酰氯)的粗制溶液，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化即直接用在下一步驟中(步驟a)。

ii)在-10℃，向吲哚(aldrich,10.0g,85.3mmol)于dcm(65ml)中的溶液中歷時10分鐘滴加二乙基氯化鋁溶液(1.8m于甲苯中)(aldrich,29.4mmol,16.4ml)，并將混合物在相同溫度再攪拌5分鐘。在-10℃冷卻所述溶液后，歷時15分鐘滴加濃縮的(2s)-2-氯丙酰氯(步驟i)于dcm中的溶液。使反應(yīng)混合物攪拌1.5h，在此期間將反應(yīng)溫度逐漸溫?zé)嶂潦覝?。?℃，將反應(yīng)用meoh(放出乙烷)和nahco3溶液小心淬滅。然后用etoac將產(chǎn)物用水相中萃取出來(三次，300ml)。將收集的有機(jī)相用na2so4干燥，用rotavapor蒸發(fā)得到17.2g(s)-2-氯-1-(1h-吲哚-3-基)丙烷-1-酮(灰色固體,通過uplc確定為94％)，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化即用在下一步驟中。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm:11.00(s,1h),8.5(d,1h),8.20(m,1h),7.51(m,1h),7.25(m,2h),5.57(q,1h),1.65(d,3h).[es+ms]m/z207(m+)

實施例12-((3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-5-基)硫基)-1-(1h-吲哚-3-基)丙烷-1-酮

將3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-5(4h)-硫酮(中間體2,589mg,2.384mmol)懸浮在4ml1nnaoh中，然后在室溫加入溶解在15mletoh中的2-氯-1-(1h-吲哚-3-基)丙烷-1-酮(santilabs,450mg,2.167mmol)。然后將反應(yīng)混合物在80℃加熱3h。從反應(yīng)混合物除去乙醇，將所得水性溶液用etoac(2x10ml)萃取。盡管在acoet中發(fā)現(xiàn)一部分產(chǎn)物，但用etoac除去了大部分雜質(zhì)，目標(biāo)產(chǎn)物主要保留在水層中，含有少量雜質(zhì)。然后將水層用dcm(7ml)萃取。接著將水性溶液通過加入1nhcl加以酸化，然后將其用etoac(3x10ml)萃取。有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，得到2-((3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-5-基)硫基)-1-(1h-吲哚-3-基)丙烷-1-酮(730mg,81％)。

實施例1的外消旋混合物通過半制備性hplc來分離，得到實施例2(參見方法c)。

實施例2(r)-2-((3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-5-基)硫基)-1-(1h-吲哚-3-基)丙烷-1-酮

方法c

將2-((3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-5-基)硫基)-1-(1h-吲哚-3-基)丙烷-1-酮(實施例1,600mg,1.43mmol)通過半制備性手性hplc(柱chiralpackic20x250nm,等梯度溶劑為庚烷:iproh90:10,時間為30分鐘,波長為254nm,流速為18ml/min)分離，得到(r)-2-((3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-5-基)硫基)-1-(1h-吲哚-3-基)丙烷-1-酮(第一個洗脫的化合物)(e.e>99％；)

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm:14.81(s,1h),12.19(s,1h),8.89(s,2h),8.49(d,1h),8.25-8.23(m,1h),7.56-7.54(m,1h),7.29(m2h),5.37(q,1h),4.43(br.s.,1h),3.84(m,1h),1.70(d,3h)[es+ms]m/z418(m+h)(e.e>99％,通過從頭vcd分析確定絕對構(gòu)型)

方法d

向(2s)-2-氯-1-(1h-吲哚-3-基)丙烷-1-酮(中間體3,26.0g.,96.4mmol)于dmf(280ml)中的溶液中加入3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-4,5-二氫-1h-1,2,4-三唑-5-硫酮(中間體2,26.7g.,91.8mmol)和k2co3(aldrich,33.3g,241mmol.)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌1.5小時，然后加入更多的3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-4,5-二氫-1h-1,2,4-三唑-5-硫酮(中間體2,1.6g.,4.6mmol)并將混合物在室溫再攪拌1.5小時。然后加入200ml水并將一些雜質(zhì)用120mldcm萃取。然后加入固體nahco3將水溶液的ph調(diào)整至ph＝7，用etoac將產(chǎn)物從水溶液中萃取出來(9次，550ml)。將收集的有機(jī)相用na2so4干燥，然后用rotavapor除去溶劑得到粗制產(chǎn)物，將其通過快速色譜法純化(isolera,snap1500gsio2,洗脫劑＝etoac于環(huán)己烷中,從30％至60％)。將收集的含有產(chǎn)物的餾分用rotavapor濃縮直至形成80ml溶劑:白色固體，濃縮母液得到10.2g(r)-2-((3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-5-基)硫基)-1-(1h-吲哚-3-基)丙烷-1-酮(e.r＝87/13)，其為淺黃色固體。

在燒瓶中在室溫，將9.7gof(r)-2-((3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-5-基)硫基)-1-(1h-吲哚-3-基)丙烷-1-酮(e.r＝87/13)溶解在28mliproh中。然后將燒瓶在冰箱中在5℃放置一晚。然后除去有機(jī)溶液，固體用10mldcm洗滌得到5.96g(r)-2-((3-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-5-基)硫基)-1-(1h-吲哚-3-基)丙烷-1-酮(e.r＝99/1)

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm:14.81(s,1h),12.19(s,1h),8.89(s,2h),8.49(d,1h),8.25-8.23(m,1h),7.56-7.54(m,1h),7.29(m2h),5.37(q,1h),4.43(br.s.,1h),3.84(m,1h),1.70(d,3h)[es+ms]m/z418(m+h)

實施例3(r)-2-((5-(3,5-二氯吡啶-4-基)-1h-1,2,4-三唑-3-基)硫基)-1-(1h-吲哚-3-基)丙烷-1-酮

將按與實施例1類似的方式制備的化合物(158.6mg)懸浮在乙腈(1ml)中，用～5-10mg之前批次的化合物種晶并在室溫攪拌。1小時后，加入mecn(0.6ml)。數(shù)天后，將約1/3的漿液倒入新的小瓶(小瓶2)中。加入水(2滴)并將所述瓶放置在thermix中經(jīng)歷溫度循環(huán)。一旦小瓶2中出現(xiàn)了少量固體，則將溶液倒入新的帶蓋小瓶(小瓶3)中，該小瓶具有兩個孔以實現(xiàn)緩慢蒸發(fā)。一旦溶液已被蒸發(fā)成固體，將其通過拉曼光譜分析并與發(fā)現(xiàn)形式1相符(參見實施例4a)。

從在150(2)k收集的三維x射線衍射數(shù)據(jù)確定固體的晶體和分子結(jié)構(gòu)。研究證實了原子連接性，手性中心的絕對構(gòu)型和存在互變異構(gòu)體。

晶體數(shù)據(jù)和精修總結(jié):c18h13cl2n5os；m＝418.29；無色板狀；0.44x0.14x0.07mm；斜方晶體；空間群p212121(#19)；α＝β＝γ＝90°,z＝4；d計算＝1.538mgm^-3；θmax＝66.87°；收集的反射＝12966；獨(dú)立反射＝3200；rint＝0.0300；覆蓋度＝99.7％；抑制＝0；參數(shù)＝254；s＝1.049；r1[i>2σ(i)]＝0.0217；wr2(所有數(shù)據(jù))＝0.0553；絕對結(jié)構(gòu)參數(shù)＝-0.013(10)；和最大差異峰和孔＝0.196和

實施例4

pxrd、dsc和tga的設(shè)備和采集細(xì)節(jié)

粉末x-射線衍射(pxrd)。使用panalyticalx'pertpro衍射儀在si零背景晶片上獲得pxrd衍射圖。使用cukα(45kv/40ma)輻射和0.02°2θ步長以及x'celerator^tmrtms(實時多帶)檢測器收集所有衍射圖。除非另有說明，鎳過濾器用于減少不需要的輻射。入射光側(cè)的構(gòu)造:固定的發(fā)散狹縫(1/4度),0.04rad索勒狹縫,防散射狹縫(1/4度)和10mm的遮光膜(beammask)。衍射光側(cè)的構(gòu)造:固定的發(fā)散狹縫(1/4度)和0.04rad索勒狹縫。使用highscore軟件確定峰位置，并且以2θ角度(2θ)表示的每個峰位置的誤差幅度為約±0.1°2θ。

差示掃描量熱法(dsc)。使用裝配自動進(jìn)樣器和冷卻系統(tǒng)的tainstrumentsq100差示掃描熱量計在40ml/min氮?dú)獯迪聪逻M(jìn)行dsc。dsc熱分析圖以15℃/min在卷曲鋁盤(crimpedalpan)中獲得。

熱重量分析(tga)。tga熱分析圖是用tainstrumentsq500熱重量分析儀在40ml/min氮?dú)獯迪聪乱?5℃/min在pt或al盤中獲得。

實施例4a式(i)化合物的形式1的表征

固體形式的式(i)化合物的pxrd光譜如圖1所示。

式(i)化合物的特征性pxrd角和d-間距記錄在表1中。

表1:式(i)化合物的pxrd衍射角和d-間距

形式1的差示掃描量熱法和熱重量分析:

dsc熱曲線顯示熔化吸熱，起始溫度為196.26℃。

tga熱曲線顯示可忽略的重量損失，直至約230℃。

實施例4b式(i)化合物的形式2的表征

固體形式的式(i)化合物的pxrd光譜如圖2所示。

式(i)化合物的特征性pxrd角和d-間距記錄在表2中。

形式2的差示掃描量熱法和熱重量分析:

dsc熱曲線顯示熔化吸熱，起始溫度為202.75℃。

tga熱曲線顯示可忽略的重量損失，直至約220℃。

實施例4c式(i)化合物的形式3的表征

固體形式的式(i)化合物的pxrd光譜如圖3所示。

式(i)化合物的特征性pxrd角和d-間距記錄在表3中。

形式3的差示掃描量熱法和熱重量分析:

dsc熱曲線顯示熔化吸熱，起始溫度為203.58℃。

tga熱曲線顯示可忽略的重量損失，直至約220℃。

生物測定

可以在幾種生物測定之一中測試本發(fā)明的化合物以確定具有給定藥理學(xué)作用所需的化合物的濃度。測定如下所述。

體外效力

惡性瘧原蟲生長抑制測定.

使用[³h]次黃嘌呤摻入法一式三份地測定惡性瘧原蟲感染的紅細(xì)胞對化合物的敏感性，其中使用具有0.5％寄生蟲血癥(環(huán)形期)和2％血細(xì)胞比容的接種物。寄生蟲在rpmi1640(25mmhepes并補(bǔ)充有5％的albumax)中生長。將板在37℃，5％co2，5％o2，90％n2下孵育。孵育24h后，加入[3h]次黃嘌呤，將板再孵育24小時。之后，使用tomtec細(xì)胞收集器96在玻璃纖維過濾器上收獲板。將過濾器干燥并在閃爍器片上熔融，并通過使用wallacmicrobetatrilux(model1450ls-perkinelmer)定量所結(jié)合的放射性。使用grafit5程序(grafitprogram；erithacussoftware，horley，surrey，unitedkingdom)測定ic50。

結(jié)果

體內(nèi)有效性

惡性瘧原蟲體內(nèi)有效性測定

使用惡性瘧原蟲小鼠模型按照在以下文獻(xiàn)中描述的操作測定抗瘧疾體內(nèi)有效性:jimenez-díaz,m.b.,mulet,t.,viera,s.,gómez,v.,garuti,h.,j.,alvarez-doval,a.,shlutz,d.l.,martinez,a.,improvedmurinemodelofmalariausingplassmodiumfalciparum(competentstrainsandnon-myelodepletednod-scidil2r_nullmiceengraftedwithhumanerythrocytes)antimicrob.agentschemother2009,53(10),4533-4536

結(jié)果

在生物相關(guān)介質(zhì)中的溶解度評估

化合物的平衡溶解度在四個生物相關(guān)流體中在室溫在4h測量：禁食狀態(tài)(模擬腸液(fassif)、喂食狀態(tài)模擬腸流體(fessif)、模擬胃液(sgf)和磷酸鹽緩沖鹽水(pbs))。

溶劑和緩沖液

使用hplc級的有機(jī)溶劑。使用超純凈水(milli-q級)。用超純凈水制備緩沖液，并用0.45μ尼龍過濾器過濾。

i.操作.

平衡溶解度的測定(假設(shè)在所需溶劑中的化學(xué)穩(wěn)定性不成問題)。

a)秤取1mg固體化合物，裝在一個4ml玻璃小瓶中，并加入1ml新鮮制備的的相應(yīng)介質(zhì)(sgf，fassif，fessif或pbs)。所有這些樣品都是一式兩份制備的。

b)將樣品在室溫攪拌(輥式混合機(jī))4小時。如果需要，加入另外的固體化合物(0.1mg)以保持其過量(飽和溶液)。

c)4小時后，將樣品離心(10000rpm，10分鐘)，將上清液轉(zhuǎn)移到hplc小瓶中，并通過lc-ms進(jìn)行分析(根據(jù)需要事先用流動相進(jìn)行稀釋)。

d)用ph計(wtwph330i和ph電極sentix41)測量每個樣品最終溶液的ph。

分析性量化的lc-ms測定

通過lc-ms分析所有上清液。通過用色譜法中使用的流動相稀釋，相對于從1mg/mldmso(aldrichcat.ref.:27685-5)儲備溶液獲得的校準(zhǔn)曲線對這些樣品進(jìn)行定量。根據(jù)溶解度范圍，將u.v.(1μg/ml至100μg/ml)或ms(1μg/ml至1ng/ml)檢測器用于所述定量中。

數(shù)據(jù)分析

所有l(wèi)c-ms數(shù)據(jù)的分析使用masslynx3.4軟件和analyst1.4.2進(jìn)行。使用microsoftexcel進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計和圖形分析。使用樣品的峰面積和來自校準(zhǔn)曲線的峰面積計算每種化合物的濃度(μm)和溶解度(μg/ml)。

結(jié)果