N-9-芴甲氧羰基肼基樹脂及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了N-9-芴甲氧羰基肼基樹脂及其制備方法和應(yīng)用。其中，該N-9-芴甲氧羰基肼基樹脂具有如式1所示的結(jié)構(gòu)：本發(fā)明的N-9-芴甲氧羰基肼基樹脂合成簡便、取代度較高、便于長期保存、不易變質(zhì)。
【專利說明】N-9-芴甲氧羰基肼基樹脂及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于固相多肽合成【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地，涉及N-9-芴甲氧羰基肼基樹脂及其制備方法，以及制備多肽酰肼的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蛋白質(zhì)的化學(xué)全合成能夠在原子水平調(diào)控蛋白質(zhì)的組成結(jié)構(gòu)，從而有希望回答有關(guān)蛋白質(zhì)在生命過程中起功能的一系列問題。高效的蛋白質(zhì)全合成技術(shù)特別具有學(xué)術(shù)價值與商業(yè)價值。合成蛋白質(zhì)的常用策略是首先在固相上合成多肽片段，其次在水溶液中實(shí)現(xiàn)多肽片段的連接。目前使用最成功的多肽片段連接方法是Stephen Kent教授報(bào)道的自然化學(xué)連接NCL。自然化學(xué)連接策略的基本原理是利用多肽I的C端硫酯單元與多肽2的N端半胱氨酸單元發(fā)生化學(xué)選擇性反應(yīng)，從而將多肽I和多肽2拼接為一個肽片段。不幸的是，該策略需要用到的C端硫酯單元只能通過Boc固相合成法直接獲得。而Boc固相合成法需要使用劇毒試劑氟化氫HF，且操作復(fù)雜，對環(huán)境不友好。最近發(fā)現(xiàn)利用Fmoc固相合成法可以得到C端酰肼單元，而酰肼單元可以在水溶液中迅速轉(zhuǎn)化成C端硫酯單元參與自然化學(xué)連接NCL，稱之為酰肼參與的自然化學(xué)連接NCL。隨后酰肼參與的自然化學(xué)連接NCL被用于多段多肽拼接反應(yīng)、環(huán)蛋白合成等。目前多肽C段酰肼的合成主要通過第一代肼基Wang樹月旨(Angew.Chem.1nt.Ed.2011，50，7645-7649.;中國專利 ZL201110062686.3)和第二代肼基 2-Cl-Trityl-Cl 樹脂(Lett.Pept.Sc1.1995，2，315-318;ChemBioChem2012, 13，542-546;Acta Chim.Sinica2012, 70, 1471-1476.)。第二代相比第一代樹脂制備酰肼的產(chǎn)率和純度有所提高。但上述兩種樹脂保存期較短，容易變質(zhì)。
[0003]因而，目前用于固相多肽酰肼合成的樹脂仍有待改進(jìn)。
【發(fā)明內(nèi)容】
`[0004]本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決上述技術(shù)問題之一或至少提供一種有用的商業(yè)選擇。為此，本發(fā)明的一個目的在于提出一種合成簡便、取代度較高、便于長期保存的固相多肽酰肼合成用樹脂。
[0005]在本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提供一種N-9-芴甲氧羰基(Fmoc)肼基樹脂。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述N-9-芴甲氧羰基肼基樹脂具有如式I所示的結(jié)構(gòu):
[0006]
【權(quán)利要求】
1.一種N-9-芴甲氧羰基肼基樹脂，其特征在于，具有如式I所示的結(jié)構(gòu):
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的N-9-芴甲氧羰基肼基樹脂，其特征在于，具有如式2所示的結(jié)構(gòu):
3.一種制備N-9-芴甲氧羰基肼基樹脂的方法，其特征在于，包括: 將載體樹脂在有機(jī)溶劑中進(jìn)行溶脹處理，以便得到經(jīng)過溶脹的載體樹脂； 于預(yù)定溫度條件下，向所述經(jīng)過溶脹的載體樹脂中加入堿和N-9-芴甲氧羰基肼鹽酸鹽，振蕩混合，并反應(yīng)預(yù)定時間，以便得到反應(yīng)混合物； 向所述反應(yīng)混合物中加入甲醇處理10分鐘以上，并將經(jīng)過甲醇處理的反應(yīng)混合物抽干，以便得到樹脂； 將所述樹脂依次用二氯甲烷、N，N- 二甲基甲酰胺、水、N，N- 二甲基甲酰胺、甲醇、乙醚分別洗3次，并抽干，以便得到經(jīng)過洗滌的樹脂； 將所述經(jīng)過洗滌的樹脂真空干燥至少2小時，以便得到N-9-芴甲氧羰基肼基樹脂。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述載體樹脂為三苯甲基氯樹脂、4-甲基三苯甲基氯樹脂、4-甲氧基三苯甲基氯樹脂或2-氯三苯甲基氯樹脂， 任選地，所述載體樹脂的取代度為0.3mmol/g~1.4mmol/g,優(yōu)選0.58mmol/g。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述有機(jī)溶劑為選自N，N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷和N-甲基吡咯烷酮的至少一種， 任選地，所述溶脹是在0攝氏度冰浴條件下進(jìn)行的。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述預(yù)定溫度為4攝氏度-37攝氏度，優(yōu)選25攝氏度， 任選地，所述預(yù)定時間為6小時-24小時，優(yōu)選12小時。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，振蕩混合的方式為水平平搖、垂直翻轉(zhuǎn)或磁子攪拌，優(yōu)選為磁子攪拌。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述N-9-芴甲氧羰基肼鹽酸鹽的摩爾用量為所述載體樹脂取代度的2-6倍，優(yōu)選4倍。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述堿為二異丙基乙基胺、三乙胺或吡啶， 任選地，所述堿的摩爾用量為所述載體樹脂取代度的5-15倍，優(yōu)選10倍。
10.一種制備多肽酰肼的方法，其特征在于，包括: 利用權(quán)利要求3-9任意一項(xiàng)所述的方法制備N-9-芴甲氧羰基肼基樹脂； 脫除所述N-9-芴甲氧羰基肼基樹脂上的Fmoc保護(hù)基團(tuán)； 利用脫除Fmoc保護(hù)基團(tuán)的N-9-芴甲氧羰基肼基樹脂，通過Fmoc固相多肽合成方法制備多肽酰肼。
【文檔編號】C08F8/30GK103755843SQ201310675781
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年12月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月11日
【發(fā)明者】劉磊, 黃軼超, 高帥 申請人:清華大學(xué)