豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝的制作方法

專利名稱：豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及肝素鈉生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝。
背景技術(shù)：
肝素鈉又稱肝素，是一種含有硫酸基的酸性粘多糖類天然抗凝血物質(zhì)。肝素鈉為白色或類白色粉末，無臭無味，有引濕性，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮、二氧六環(huán)等有機(jī)溶劑。肝素鈉廣泛存在于哺乳動(dòng)物肝、肺、腸黏膜中，多與蛋白質(zhì)結(jié)合成復(fù)合體存在。酶解蛋白可分離肝素鈉，肝素鈉是含硫酸、氨基、醛糖酸的粘多糖。在PH8-9時(shí)，帶負(fù)電荷，可與陰離子交換劑進(jìn)行離子交換，進(jìn)行粗分離，多糖液在高濃度乙醇中沉淀進(jìn)行精純。肝素鈉是血液化學(xué)成分測(cè)定中最好的抗凝劑。肝素鈉是一種含硫酸基團(tuán)的黏多糖，分子量為1.5萬，其抗凝機(jī)制是與抗凝酶II一起，在低濃度能抑制因子IX a、VDI和PF3之間的作用，并能加強(qiáng)抗凝血酶III滅活絲氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成；還有抑制凝血酶的自我催化及抑制因子X的作用。傳統(tǒng)的肝素鈉的酶解生產(chǎn)方法往往以豬小腸的腸粘膜為原料提取，腸衣往往棄做它用，存在的缺陷是:豬小腸無法有效利用，生產(chǎn)周期長(zhǎng)，能耗大，收率低，生產(chǎn)一億國(guó)際單位肝素鈉粗品需2800-3000根豬小腸的粘膜，產(chǎn)品純度低，肝素鈉的效價(jià)至多為80U/mg，并產(chǎn)生大量的腸渣和廢水，污染環(huán)境。CN1308088A的發(fā)明公開了一種利用生物發(fā)酵工藝生產(chǎn)肝素鈉的方法。該方法采用2709蛋白酶作為催化劑，D204強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂作為離子交換樹脂，并采用150-180目多層布篩進(jìn)行過濾。該方法存在如下缺陷:產(chǎn)品收率、純度也較低，并產(chǎn)生大量的腸渣和廢水，污染環(huán)境；豬小腸取腸粘膜后剩余的腸衣、腸皮無法有效利用來獲取肝素鈉，豬小腸的利用效率低
發(fā)明內(nèi)容
`本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，提供一種豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，能對(duì)豬小腸進(jìn)行綜合利用，提高了豬小腸的利用率，生產(chǎn)周期短，產(chǎn)品收率、純度較高，減少了腸渣和廢水的排放，利于環(huán)保。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:
一種豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，所述的工藝步驟如下:
(O前處理:將豬小腸放入刮腸機(jī)中，獲得豬小腸粘膜漿液待用，剩余腸衣、腸皮，腸皮單獨(dú)用于提取肝素鈉。腸皮提取肝素鈉的工藝采用發(fā)明人在先申請(qǐng)的公告號(hào)CN101891842A發(fā)明專利公開的方法進(jìn)行。(2)腸衣泡把:將腸衣繞把形成腸衣把，接著將腸衣把放入浸泡液中第一次浸泡4-5小時(shí)，取出浙干，使用腸衣專用鹽對(duì)腸衣把腌制處理，之后，將腸衣把放入浸泡液中二次浸泡6-8小時(shí),第一次浸泡的浸泡液為飽和氯化鈉溶液,二次浸泡的浸泡液為鹽度15° -18°的氯化鈉溶液；第一次浸泡及二次浸泡時(shí)，每IOOOL浸泡液均浸泡160±5把腸衣把，收集第一次浸泡的浸出液待用，收集二次浸泡后的浸出液作為下一次提取時(shí)腸衣把第一次浸泡的浸泡液。第一次浸泡的浸泡液與二次浸泡的浸泡液的體積相同。豬小腸經(jīng)過刮腸機(jī)處理后，得到的腸衣上仍會(huì)殘留小部分腸粘膜(無法提取肝素鈉造成浪費(fèi))，且腸衣中也含有部分肝素鈉，以往直接將腸衣經(jīng)過簡(jiǎn)單腌制后就當(dāng)制作香腸的原料使用，這樣往往造成腸衣無法有效利用，降低了豬小腸獲得肝素鈉的收率。本發(fā)明通過第一次浸泡，可將大部分在腸衣中存在的肝素鈉提取出(包括腸粘膜中的)，第一次浸泡的浸出液用于下一步酶解時(shí)調(diào)節(jié)豬小腸粘膜漿液鹽度的原料，無需外加氯化鈉溶液，節(jié)約氯化鈉溶液的用量，第一次浸泡的浸出液中也含有部分肝素鈉，能與酶解獲得的肝素鈉匯合，無需各自提純操作。這樣節(jié)省步驟，第一次浸泡的浸出液若有多余可暫時(shí)儲(chǔ)存用于下次提取。第一次浸泡后對(duì)腸衣把腌制處理，這樣加工后腸衣可以滿足做香腸的需求。再對(duì)腸衣進(jìn)行二次浸泡，能把腸衣中殘存的肝素鈉溶出，增加肝素鈉的收率。腌制處理后的腸衣把含有大量的鹽分，因此只需控制二次浸泡的浸泡液為鹽度15° -18°，加入腌制處理后的腸衣把浸泡，二次浸泡的浸泡液即可達(dá)到飽和鹽水的程度，這樣鹽能多次利用，節(jié)約了鹽的用量。

二次浸泡后的浸出液(即含有小部分肝素鈉的飽和鹽水)作為下一次提取時(shí)腸衣把第一次浸泡的浸泡液，通過這樣操作，二次浸泡的原料即浸泡液還能再次利用，無需新配飽和氯化鈉溶液作為第一次浸泡的浸泡液，大大節(jié)約了鹽的用量。二次浸泡后剩余的腸衣可以作為加工香腸的原料出售。(3)酶解:將豬小腸粘膜漿液加入酶解罐，豬小腸粘膜漿液為豬小腸粘膜:水=1: 2.5-4的重量比的混合物，向酶解罐中加入步驟(2)收集的第一次浸泡的浸出液調(diào)節(jié)酶解罐中料液的鹽度至5±0.5°，控制料液的pH在8.5±0.5 ;接著按每1000L料液加1.2±0.4kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在53±3°C，鹽度4.2±0.2°，pH 7.0±0.5保持3±0.5小時(shí)；最后升溫至85_88°C，保持20_25min得酶解液，過濾去殘?jiān)?。本步驟最后酶解液過濾去殘?jiān)鼤r(shí)，往往采用布袋過濾去殘?jiān)?，這樣效率往往較低，發(fā)明人通過實(shí)踐探索，發(fā)明了采用振動(dòng)篩過濾去殘?jiān)姆绞?，大大提高了過濾速度，提高了生產(chǎn)效率，是代替布袋過濾的好方法。(4)吸 附:將酶解液輸入吸附罐，降溫至57±3°C，加水調(diào)節(jié)鹽度至3.0±0.5°，控制pH 7.0-7.5，按每1000L酶解液加3_8kg的樹脂量，向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂，攪拌吸附6-8小時(shí)后，收集樹脂。(5)洗滌:將收集的樹脂用水洗滌至pH為中性，再將樹脂放入鹽度4±1°、溫度55-60°C的氯化鈉溶液，攪拌至少I小時(shí)進(jìn)行洗滌，其中，樹脂:氯化鈉溶液=1:1.3-1.7 (w/V)?？刂坡然c溶液溫度在55-60°C，便于將樹脂表面油脂類的附著物清洗干凈，便于洗脫。(6)洗脫:將步驟(5)洗滌后的樹脂倒入洗脫罐中進(jìn)行兩次洗脫，其中，第一次洗脫為:將樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度55-60°C的氯化鈉溶液中攪拌至少3小時(shí)，樹月旨:氯化鈉溶液=1:1-1.4 (w/v);第二次洗脫為:將第一次洗脫后的樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度55-60°C的氯化鈉溶液中攪拌至少3小時(shí)，樹脂:氯化鈉溶液=1:0.8-1.2 (w/v);合并兩次收集的洗脫液?？刂苾纱蜗疵撓疵摃r(shí)的氯化鈉溶液溫度在55_60°C，便于將油脂狀的肝素鈉從樹脂上洗脫下來，增加得率。(7)沉淀:將步驟(6)收集到的洗脫液倒入沉淀罐中，攪拌條件下向沉淀罐中加入酒精度85±5°的酒精，酒精用量以實(shí)測(cè)沉淀罐中混合液的酒精度到45° -60°為準(zhǔn)，靜置沉淀15小時(shí)以上，收集沉淀物。(8)干燥:步驟(7)得到的沉淀物加入酒精度85°以上的酒精進(jìn)行脫水1-3小時(shí)，濾干后做烘干處理即得肝素鈉產(chǎn)品。本發(fā)明中的w/v為質(zhì)量體積比具體為:kg:L。本發(fā)明將腸衣與腸粘膜聯(lián)合制取肝素鈉，提高了豬小腸的利用率，增加了豬小腸的附加值，生產(chǎn)一億國(guó)際單位肝素鈉粗品只需1400根左右豬小腸，產(chǎn)品純度高，肝素鈉的效價(jià)> 110U/mg。同時(shí)，剩余的腸皮也能得到有效利用。作為優(yōu)選，步驟(2)中腸衣繞把具體為:將腸衣按1±0.2米的長(zhǎng)度來回折疊，疊完后在中間捆扎形成腸衣把，每100±1米腸衣合成一把腸衣把；腸衣把兩次浸泡過程中，均用氣泵向浸泡液中充空氣使浸泡液上下翻滾流動(dòng)。將腸衣繞把，方便對(duì)腸衣的處理，形成的腸衣把采用吊掛的方式在浸泡池中浸泡。兩次浸泡過程中，均用氣泵向浸泡液中充空氣使浸泡液上下翻滾流動(dòng)，使得在腸衣中殘留的肝素鈉充分洗出，增加了浸泡液中肝素鈉的含量，有效提高肝素鈉的收率。作為優(yōu)選，步驟(2)中腌制處理具體為:第一步抹鹽:將腸衣專用鹽均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽1-1.2kg ;第一步抹鹽完成后腌制48小時(shí)以上，接著進(jìn)行第二步復(fù)鹽:將腸衣專用鹽再次均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽0.5-0.6kg ;第二步復(fù)鹽完成后腌制12-14小時(shí)。本發(fā)明有別于傳統(tǒng)的簡(jiǎn)單腌制處理，采用兩步法腌制處理，先第一步抹鹽，滿足腸衣做香腸的要求；再第二步復(fù)鹽，可以保證腸衣的色澤好，韌性更好，提高了作為香腸加工原料的品質(zhì)，增加了經(jīng)濟(jì)效益。作為優(yōu)選，步驟(3)處理得到的酶解液在6000-8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理20-40min后，再進(jìn)入下一步的吸附。酶解后得到乳濁狀液體，濾去殘?jiān)筮M(jìn)入離心機(jī)，啟動(dòng)離心機(jī)，酶解液在離心力作用下，使乳濁狀酶解液進(jìn)入離心機(jī)轉(zhuǎn)鼓后，固體顆?；蛎芏容^大的液體(含蛋白)向轉(zhuǎn)鼓壁沉降，形成沉洛，密度較小的肝素鈉分解液向轉(zhuǎn)鼓中心方向聚集，流至溢流口排出，成為分離液。沉渣通過蝸桿傳動(dòng)把沉渣從排渣口擠壓出來，分離液通過離心機(jī)從出料口排出，輸送到吸附罐內(nèi)進(jìn)行下一步樹脂吸附工序。
增加本步驟后在分解工段中直接清除了部分雜質(zhì)，使吸附工序中的樹脂能充分吸附肝素鈉，提高樹脂吸附有效性。在分解工序中直接進(jìn)行雜質(zhì)的分離，提高最終產(chǎn)品的純度?？刂齐x心速度和時(shí)間，保證離心分離的效果。作為優(yōu)選，將步驟(4)收集樹脂后剩余的料液重新輸送至吸附罐，控制溫度在57±3°C，pH 7.0-7.5，按每1000L料液加2_3kg的樹脂量向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂再次吸附6-8小時(shí)后，收集樹脂，然后與步驟(4)收集的樹脂合并后，進(jìn)入下一步的洗滌步驟。
本步驟將樹脂吸附后的料液重新進(jìn)行吸附，可以提高肝素鈉的收率，減少浪費(fèi)，同時(shí)能減少廢液中蛋白的含量，利于廢水處理。作為優(yōu)選，所述羅門哈斯FPA98CL型樹脂活化處理后再使用，活化處理為:樹脂用50-60°C溫水浸泡20小時(shí)以上后用清水沖洗干凈并浙干,再加入質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液攪拌I個(gè)小時(shí)以上，最后用清水沖洗至洗液PH為中性，所述氫氧化鈉溶液的加入量為每千克樹脂加入IL氫氧化鈉溶液的量計(jì)；活化后的樹脂在4000-5000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理10-30min,再用于吸附。將活化處理后待使用的樹脂通過離心機(jī)進(jìn)料口進(jìn)入離心機(jī)。啟動(dòng)離心機(jī)，樹脂在4000-5000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速作用下，樹脂進(jìn)入離心機(jī)轉(zhuǎn)鼓后，固體顆粒樹脂向轉(zhuǎn)鼓壁沉降，粘附在鼓壁內(nèi)。離心作用甩出的液體或密度較小的物質(zhì)向轉(zhuǎn)鼓中心方向聚集，流至溢流口排出，成為廢物。收集留在鼓壁的樹脂，準(zhǔn)備用于吸附工序。本步驟樹脂孔內(nèi)水分得到充分甩干，以增加樹脂的吸附空間，提高樹脂的吸附能力。作為優(yōu)選，步驟(6)收集的洗脫液進(jìn)入超濾機(jī)超濾后再進(jìn)入下一步沉淀，超濾機(jī)的超濾膜孔徑在0.45 μ m-0.6 μ m ;或步驟(6)收集的洗脫液在8000-10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理10-20min后，再進(jìn)入下一步沉淀。經(jīng)過超濾，可將洗脫液中的廢水和雜質(zhì)排除，有效提高產(chǎn)品的純度，并能減少下一步酒沉工藝中的酒精使用量，節(jié)約成本。把洗脫液通過離心機(jī)進(jìn)料口進(jìn)入離心機(jī)，啟動(dòng)離心機(jī)，洗脫液在分解液在離心力(8000-10000轉(zhuǎn)/分)作用下，使乳濁狀洗脫液進(jìn)入離心機(jī)轉(zhuǎn)鼓后，固體顆?；蛎芏容^大的液體(含蛋白)向轉(zhuǎn)鼓壁沉降，形成沉渣，密度較小的肝素鈉洗脫液向轉(zhuǎn)鼓中心方向聚集，流至溢流口排出，成為分離液。沉渣通過蝸桿傳動(dòng)把沉渣從排渣口擠壓出來，分離液通過離心機(jī)從出料口排出，輸送到沉淀罐內(nèi)進(jìn)行下一步酒精沉淀工序。本步驟增加對(duì)洗脫液離心的工序，從而在洗脫工序中直接去除部分雜質(zhì)和蛋白，從而提高最終產(chǎn)品的純度，并能減少下一步酒沉工藝中的酒精使用量，節(jié)約成本。

作為優(yōu)選，步驟(7)收集沉淀物后剩余的上清液輸入另一空沉淀罐中，向另一空沉淀罐中加入飽和氯化鈉溶液攪拌均勻，并調(diào)節(jié)PH為9-10，上清液與飽和氯化鈉溶液的體積比為1:0.5-0.7，靜置沉淀8-12小時(shí)后，收集沉淀，然后與步驟(7)得到的沉淀物合并后進(jìn)入下一步的干燥步驟。本步驟對(duì)第一次酒沉后的上清液再次進(jìn)行酒沉，可有效提高肝素鈉的收率，減少浪費(fèi)，利于廢水處理。更為優(yōu)選，將上述合并后的沉淀物進(jìn)入下一步干燥前進(jìn)行重溶再沉淀:將沉淀物:水=1:8-10的重量比混合，充分溶解形成沉淀物溶液，向沉淀物溶液中加入腸衣專用鹽，攪拌均勻，腸衣專用鹽的用量為沉淀物溶液質(zhì)量的1-3%;再加入酒精度85±5°的酒精再次沉淀，酒精用量以實(shí)測(cè)沉淀罐中混合液的酒精度到45° -60°為準(zhǔn)，靜置沉淀15小時(shí)以上，收集沉淀物，再進(jìn)入下一步干燥。通過增加了重溶再沉淀步驟，能有效解決高濃度的酒精和洗脫液容易形成鹽結(jié)晶混在肝素鈉產(chǎn)品中導(dǎo)致產(chǎn)品純度較低的問題。作為優(yōu)選，步驟(8)烘干處理的溫度為60_80°C。作為優(yōu)選，收集步驟(3)酶解液過濾獲得的殘?jiān)?，向酶解罐中加入鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液，然后將殘?jiān)匦录尤朊附夤拗校瑲堅(jiān)c鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液的重量比為1:5-6，控制料液的pH在8.5±0.5，接著按每IOOOL料液加1.0-1.2kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在55 ± I °C，保溫6-7小時(shí)；最后升溫至88-90°C，保持20-25min，再靜置20_30min后得酶解液，酶解液在6000-8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理20-40min后,進(jìn)入下一步的吸附?，F(xiàn)有工藝中，酶解剩余的殘?jiān)茨c渣往往棄之不用，這樣較浪費(fèi)且增加了環(huán)境的負(fù)擔(dān)。而本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過多年實(shí)踐探索，發(fā)明了一條有效再利用殘?jiān)墓に嚥襟E，通過對(duì)殘?jiān)脑俅蚊附馓幚恚芨M(jìn)一步分解殘?jiān)?，提取肝素鈉，增加了肝素鈉的收率，減少了廢物排放，利于環(huán)保。本發(fā)明的有益效果是:
1、本發(fā)明將腸衣與腸粘膜聯(lián)合制取肝素鈉，提高了豬小腸的利用率，增加了豬小腸的附加值，生產(chǎn)一億國(guó)際單位肝素鈉粗品只需1300-1400根左右豬小腸，產(chǎn)品純度高，肝素鈉的效價(jià)> 110U/mg。同時(shí)，剩余的腸皮也能得到有效利用。2、殘?jiān)脑俅蚊附馓崛?，能更進(jìn)一步分解殘?jiān)?，提取肝素鈉，增加了肝素鈉的收率，減少了廢物排放，利于環(huán)保。
具體實(shí)施例方式下面通過具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的具體說明。本發(fā)明中，若非特指，所采用的原料和設(shè)備等均可從市場(chǎng)購得或是本領(lǐng)域常用的。下述實(shí)施例中的方法，如無特別說明，均為本領(lǐng)域的常規(guī)方法。樹脂活化處理:
將新的羅門哈斯FPA98CL型樹脂(市售進(jìn)口樹脂，經(jīng)銷商北京博賽斯生物技術(shù)有限公司)用50°C溫水浸泡20小時(shí)后用清水沖洗干凈并浙干，再加入質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液攪拌I個(gè)小時(shí)以上，最后用清水沖洗至洗液PH為中性，所述氫氧化鈉溶液的加入量為每千克樹脂加入IL氫氧化鈉溶液的量計(jì)。研究表明，樹脂活化處理中采用的溫水溫度在50-60°C之間，浸泡時(shí)間在16-24小時(shí)之間，對(duì)樹脂的活化處理效果是等同的，在此不做——贅述?；罨蟮臉渲?000-5000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理10-30min，再用于吸附。
實(shí)施例1:
(O前處理:將豬小腸放入刮腸機(jī)(華運(yùn)牌280B型刮腸機(jī))中，獲得豬小腸粘膜漿液(豬小腸粘膜:水=1: 2.5的重量比的混合物)待用，剩余腸衣、腸皮，腸皮單獨(dú)用于提取肝素鈉。(2)腸衣泡把:將腸衣按I ±0.2米的長(zhǎng)度來回折疊，疊完后在中間捆扎形成腸衣把，每100± I米腸衣合成一把腸衣把，接著將腸衣把放入飽和氯化鈉溶液中第一次浸泡4小時(shí)，取出浙干，使用腸衣專用鹽對(duì)腸衣把腌制處理:第一步抹鹽:將腸衣專用鹽均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽Ikg ;第一步抹鹽完成后腌制48小時(shí)，接著進(jìn)行第二步復(fù)鹽:將 腸衣專用鹽再次均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽0.6kg ;第二步復(fù)鹽完成后腌制12小時(shí)；之后，將腸衣把放入鹽度15° -18°的氯化鈉溶液中二次浸泡6小時(shí),第一次浸泡及二次浸泡時(shí),每1000L浸泡液均浸泡160±5把腸衣把，第一次浸泡的浸泡液與二次浸泡的浸泡液體積相等，收集第一次浸泡的浸出液待用，收集二次浸泡后的浸出液作為下一次提取時(shí)腸衣把第一次浸泡的浸泡液。二次浸泡后剩余的腸衣可以作為加工香腸的原料出售。腸衣把兩次浸泡過程中，均用氣泵向浸泡液中充空氣使浸泡液上下翻滾流動(dòng)。(3)酶解:將2000L豬小腸粘膜漿液加入酶解罐，向酶解罐中加入步驟(2)收集的第一次浸泡的浸出液調(diào)節(jié)酶解罐中料液的鹽度至5±0.5°，控制料液的pH在8左右；接著按每1000L料液加0.8kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在56°C，鹽度4.2±0.2° ,pH 6.5保持2.5小時(shí)；最后升溫至85°C，保持25min得酶解液，過濾去殘?jiān)蝗缓竺附庖涸?000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理40min后，再進(jìn)入下一步的吸附。收集酶解液過濾獲得的殘?jiān)蛎附夤拗屑尤臌}度5±0.5°的氯化鈉溶液，然后將殘?jiān)匦录尤朊附夤拗?，殘?jiān)c鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液的重量比為1:5，控制料液的pH在8左右，接著按 每1000L料液加1.0kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在56°C，保溫6小時(shí)；最后升溫至88°C，保持25min，再靜置30min后得酶解液，酶解液在6000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理40min后，進(jìn)入下一步的吸附。(4)吸附:將酶解液輸入吸附罐，降溫至54°C，加水調(diào)節(jié)鹽度至3.0±0.5°，控制PH 7.0，按每1000L酶解液加3kg的樹脂量，向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂，攪拌吸附8小時(shí)后，收集樹脂；將收集樹脂后剩余的料液重新輸送至吸附罐，控制溫度在54°C, pH 7.0，按每1000L料液加2kg的樹脂量向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂再次吸附8小時(shí)后，收集樹脂，然后與吸附酶解液收集的樹脂合并后，進(jìn)入下一步的洗滌步驟。(5)洗滌:將收集的樹脂用水洗滌至pH為中性，再將樹脂放入鹽度4±1°、溫度55°C的氯化鈉溶液，攪拌3小時(shí)進(jìn)行洗滌，其中，樹脂:氯化鈉溶液=1:1.3 (w/v)；
(6)洗脫:將步驟(5)洗滌后的樹脂倒入洗脫罐中進(jìn)行兩次洗脫，其中，第一次洗脫為:將樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度55°C的氯化鈉溶液中攪拌5小時(shí)，樹脂:氯化鈉溶液=1:1 (w/v);第二次洗脫為:將第一次洗脫后的樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度55°C的氯化鈉溶液中攪拌5小時(shí)，樹脂:氯化鈉溶液=1:0.8 (w/v);合并兩次收集的洗脫液；
收集的洗脫液進(jìn)入超濾機(jī)超濾后再進(jìn)入下一步沉淀，超濾機(jī)的超濾膜孔徑在
0.45 μ m-0.6 μ m。(7)沉淀:將洗脫液倒入沉淀罐中，攪拌條件下向沉淀罐中加入酒精度80°的酒精，酒精用量以實(shí)測(cè)沉淀罐中混合液的酒精度到45°為準(zhǔn)，靜置沉淀20小時(shí)，收集沉淀物；收集沉淀物后剩余的上清液輸入另一空沉淀罐中，向另一空沉淀罐中加入飽和氯化鈉溶液攪拌均勻，并調(diào)節(jié)PH為9，上清液與飽和氯化鈉溶液的體積比為1:0.5，靜置沉淀12小時(shí)后，收集沉淀，然后與洗脫液沉淀得到的沉淀物合并后進(jìn)入下一步的干燥。(8)干燥:向沉淀物加入酒精度85°的酒精進(jìn)行脫水3小時(shí)，濾干后60°C烘干即得肝素鈉產(chǎn)品。經(jīng)檢測(cè)，生產(chǎn)一億國(guó)際單位肝素鈉粗品只需1400根左右豬小腸，肝素鈉的效價(jià)>110U/mg。
實(shí)施例2:
(O前處理:將豬小腸放入刮腸機(jī)(華運(yùn)牌280B型刮腸機(jī))中，獲得豬小腸粘膜漿液(豬小腸粘膜:水=1: 4的重量比的混合物)待用，剩余腸衣、腸皮，腸皮單獨(dú)用于提取肝素鈉。(2)腸衣泡把:將腸衣按1±0.2米的長(zhǎng)度來回折疊，疊完后在中間捆扎形成腸衣把，每100± I米腸衣合成一把腸衣把，接著將腸衣把放入飽和氯化鈉溶液中第一次浸泡5小時(shí)，取出浙干，使用腸衣專用鹽對(duì)腸衣把腌制處理:第一步抹鹽:將腸衣專用鹽均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽1.2kg ;第一步抹鹽完成后腌制48小時(shí)，接著進(jìn)行第二步復(fù)鹽:將腸衣專用鹽再次均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽0.5kg ;第二步復(fù)鹽完成后腌制12小時(shí)；之后，將腸衣把放入鹽度15° -18°的氯化鈉溶液中二次浸泡8小時(shí)，第一次浸泡及二次浸泡時(shí)，每1000L浸泡液均浸泡160±5把腸衣把,第一次浸泡的浸泡液與二次浸泡的浸泡液體積相等,收集第一次浸泡的浸出液待用，收集二次浸泡后的浸出液作為下一次提取時(shí)腸衣把第一次浸泡的浸泡液。二次浸泡后剩余的腸衣可以作為加工香腸的原料出售。腸衣把兩次浸泡過程中，均用氣泵向浸泡液中充空氣使浸泡液上下翻滾流動(dòng)。(3)酶解:將1000L豬小腸粘膜漿液加入酶解罐，向酶解罐中加入步驟(2)收集的第一次浸泡的浸出液調(diào)節(jié)酶解罐中料液的鹽度至5±0.5°，控制料液的pH在9左右；接著按每1000L料液加1.6kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在50°C，鹽度4.2±0.2。，pH 7.5保持3.5小時(shí)；最后升溫至88°C，保持20min得酶解液，過濾去殘?jiān)?；然后酶解液?000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理20min后，再進(jìn)入下一步的吸附。收集酶解液過濾獲得的殘?jiān)?，向酶解罐中加入鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液，然后將殘?jiān)匦录尤朊附夤拗?，殘?jiān)c鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液的重量比為1:6，控制料液的pH在9左右，接著按每1000L料液加1.2kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在54°C，保溫7小時(shí)；最后升溫至90°C，保持20min，再靜置20min后得酶解液，酶解液在8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn) 速下，離心處理20min后，進(jìn)入下一步的吸附。(4)吸附:將酶解液輸入吸附罐，降溫至60°C，加水調(diào)節(jié)鹽度至3.0±0.5°，控制PH7.5，按每1000L酶解液加8kg的樹脂量，向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂，攪拌吸附6小時(shí)后，收集樹脂；將收集樹脂后剩余的料液重新輸送至吸附罐，控制溫度在60°C，pH 7.5,按每1000L料液加3kg的樹脂量向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂再次吸附6小時(shí)后，收集樹脂，然后與吸附酶解液收集的樹脂合并后，進(jìn)入下一步的洗滌步驟。(5)洗滌:將收集的樹脂用水洗滌至pH為中性，再將樹脂放入鹽度4±1°、溫度60°C的氯化鈉溶液,攪拌I小時(shí)進(jìn)行洗漆，其中，樹脂:氯化鈉溶液=1: 1.7 (w/v)；
(6)洗脫:將步驟(5)洗滌后的樹脂倒入洗脫罐中進(jìn)行兩次洗脫，其中，第一次洗脫為:將樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度60°C的氯化鈉溶液中攪拌3小時(shí)，樹脂:氯化鈉溶液=1: 1.4 (w/v);第二次洗脫為:將第一次洗脫后的樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度60°C的氯化鈉溶液中攪拌3小時(shí)，樹脂:氯化鈉溶液=1: 1.2 (w/v);合并兩次收集的洗脫液；
收集的洗脫液在8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理20min后，再進(jìn)入下一步沉淀。(7)沉淀:將洗脫液倒入沉淀罐中，攪拌條件下向沉淀罐中加入酒精度90°的酒精，酒精用量以實(shí)測(cè)沉淀罐中混合液的酒精度到60°為準(zhǔn)，靜置沉淀15小時(shí)，收集沉淀物；收集沉淀物后剩余的上清液輸入另一空沉淀罐中，向另一空沉淀罐中加入飽和氯化鈉溶液攪拌均勻，并調(diào)節(jié)PH為10，上清液與飽和氯化鈉溶液的體積比為1:0.7，靜置沉淀8小時(shí)后，收集沉淀，然后與洗脫液沉淀得到的沉淀物合并后進(jìn)入下一步的干燥。(8)干燥:向沉淀物加入酒精度90°的酒精進(jìn)行脫水I小時(shí)，濾干后80°C烘干即得肝素鈉產(chǎn)品。經(jīng)檢測(cè)，生產(chǎn)一億國(guó)際單位肝素鈉粗品只需1400根左右豬小腸，肝素鈉的效價(jià)>110U/mg。
實(shí)施例3:
(O前處理:將豬小腸放入刮腸機(jī)(華運(yùn)牌280B型刮腸機(jī))中，獲得豬小腸粘膜漿液(豬小腸粘膜:水=1: 3的重量比的混合物)待用，剩余腸衣、腸皮，腸皮單獨(dú)用于提取肝素鈉。(2)腸衣泡把:將腸衣按I ±0.2米的長(zhǎng)度來回折疊，疊完后在中間捆扎形成腸衣把，每100± I米腸衣合成一把腸衣把，接著將腸衣把放入飽和氯化鈉溶液中第一次浸泡
4.5小時(shí)，取出浙干，使用腸衣專用鹽對(duì)腸衣把腌制處理:第一步抹鹽:將腸衣專用鹽均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽1.1kg ;第一步抹鹽完成后腌制50小時(shí)，接著進(jìn)行第二步復(fù)鹽:將腸衣專用鹽再次均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽0.5kg ;第二步復(fù)鹽完成后腌制14小時(shí)；之后，將腸衣把放入鹽度15° -18°的氯化鈉溶液中二次浸泡7小時(shí)，第一次浸泡及二次浸泡時(shí)，每1000L浸泡液均浸泡160±5把腸衣把,第一次浸泡的浸泡液與二次浸泡的浸泡液體積相等,收集第一次浸泡的浸出液待用，收集 二次浸泡后的浸出液作為下一次提取時(shí)腸衣把第一次浸泡的浸泡液。二次浸泡后剩余的腸衣可以作為加工香腸的原料出售。腸衣把兩次浸泡過程中，均用氣泵向浸泡液中充空氣使浸泡液上下翻滾流動(dòng)。(3)酶解:將1500L豬小腸粘膜漿液加入酶解罐，向酶解罐中加入步驟(2)收集的第一次浸泡的浸出液調(diào)節(jié)酶解罐中料液的鹽度至5±0.5°，控制料液的pH在8.5左右；接著按每1000L料液加1.2kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在53°C，鹽度4.2±0.2° ,pH 7.0左右保持3小時(shí)；最后升溫至86°C，保持22min得酶解液，過濾去殘?jiān)?；然后酶解液?000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理30min后，再進(jìn)入下一步的吸附。收集酶解液過濾獲得的殘?jiān)?，向酶解罐中加入鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液，然后將殘?jiān)匦录尤朊附夤拗校瑲堅(jiān)c鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液的重量比為1:5.5，控制料液的pH在8.5，接著按每1000L料液加1.1kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在55°C，保溫6.5小時(shí)；最后升溫至89°C，保持22min，再靜置25min后得酶解液，酶解液在7000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理30min后，進(jìn)入下一步的吸附。(4)吸附:將酶解液輸入吸附罐，降溫至57°C，加水調(diào)節(jié)鹽度至3.0±0.5°，控制PH 7.0左右，按每1000L酶解液加5kg的樹脂量，向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹月旨，攪拌吸附7小時(shí)后，收集樹脂；將收集樹脂后剩余的料液重新輸送至吸附罐，控制溫度在57°C，pH 7.0左右，按每1000L料液加2.5kg的樹脂量向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂再次吸附7小時(shí)后，收集樹脂，然后與吸附酶解液收集的樹脂合并后，進(jìn)入下一步的洗滌步驟。(5)洗滌:將收集的樹脂用水洗滌至pH為中性，再將樹脂放入鹽度4±1°、溫度58°C的氯化鈉溶液，攪拌2小時(shí)進(jìn)行洗滌，其中，樹脂:氯化鈉溶液=1:1.5 (w/v)；(6)洗脫:將步驟(5)洗滌后的樹脂倒入洗脫罐中進(jìn)行兩次洗脫，其中，第一次洗脫為:將樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度58°C的氯化鈉溶液中攪拌4小時(shí)，樹脂:氯化鈉溶液=1:1.2 (w/v);第二次洗脫為:將第一次洗脫后的樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度58°C的氯化鈉溶液中攪拌4小時(shí)，樹脂:氯化鈉溶液=1:1 (w/v);合并兩次收集的洗脫液；
收集的洗脫液在10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理IOmin后，再進(jìn)入下一步沉淀。(7)沉淀:將洗脫液倒入沉淀罐中，攪拌條件下向沉淀罐中加入酒精度85°的酒精，酒精用量以實(shí)測(cè)沉淀罐中混合液的酒精度到50°為準(zhǔn)，靜置沉淀18小時(shí)，收集沉淀物；收集沉淀物后剩余的上清液輸入另一空沉淀罐中，向另一空沉淀罐中加入飽和氯化鈉溶液攪拌均勻，并調(diào)節(jié)PH為9，上清液與飽和氯化鈉溶液的體積比為1:0.6，靜置沉淀10小時(shí)后，收集沉淀，然后與洗脫液沉淀得到的沉淀物合并后進(jìn)入下一步的干燥。作為優(yōu)選可將步驟(7)最后合并得到的沉淀物:水=1:8-10的重量比混合，充分溶解形成沉淀物溶液，向沉淀物溶液中加入腸衣專用鹽，攪拌均勻，腸衣專用鹽的用量為沉淀物溶液質(zhì)量的1-3%;再加入酒精度85±5°的酒精再次沉淀，酒精用量以實(shí)測(cè)沉淀罐中混合液的酒精度到45° -60°為準(zhǔn)，靜置沉淀15小時(shí)以上，收集沉淀物，再進(jìn)入下一步干燥。通過增加了重溶再沉淀步驟，能有效解決高濃度的酒精和洗脫液容易形成鹽結(jié)晶混在肝素鈉產(chǎn)品中導(dǎo)致產(chǎn)品純度較低的問題。
(8)干燥:向沉淀物加入酒精度85°的酒精進(jìn)行脫水2小時(shí)，濾干后80°C烘干即得肝素鈉產(chǎn)品。經(jīng)檢測(cè)，生產(chǎn)一億國(guó)際單位肝素鈉粗品只需1400根左右豬小腸，肝素鈉的效價(jià)>110U/mg。以上所述的實(shí)施例只是本發(fā)明的一種較佳的方案，并非對(duì)本發(fā)明作任何形式上的限制，在不超出權(quán)利要求所記載的技術(shù)方案的前提下還有其它的變體及改型。
權(quán)利要求
1.一種豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:所述的工藝步驟如下: (1)前處理:將豬小腸放入刮腸機(jī)中，獲得豬小腸粘膜漿液待用，剩余腸衣、腸皮，腸皮單獨(dú)用于提取肝素鈉； (2)腸衣泡把:將腸衣繞把形成腸衣把，接著將腸衣把放入浸泡液中第一次浸泡4-5小時(shí)，取出浙干，使用腸衣專用鹽對(duì)腸衣把腌制處理，之后，將腸衣把放入浸泡液中二次浸泡6-8小時(shí),第一次浸泡的浸泡液為飽和氯化鈉溶液,二次浸泡的浸泡液為鹽度15° -18°的氯化鈉溶液；第一次浸泡及二次浸泡時(shí)，每IOOOL浸泡液均浸泡160 ±5把腸衣把,收集第一次浸泡的浸出液待用，收集二次浸泡后的浸出液作為下一次提取時(shí)腸衣把第一次浸泡的浸泡液； (3)酶解:將豬小腸粘膜漿液加入酶解罐，豬小腸粘膜漿液為豬小腸粘膜:水=1:2.5-4的重量比的混合物，向酶解罐中加入步驟(2)收集的第一次浸泡的浸出液調(diào)節(jié)酶解罐中料液的鹽度至5±0.5°，控制料液的pH在8.5±0.5 ;接著按每1000L料液加1.2 + 0.4kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在53±3°C，鹽度4.2±0.2°，pH 7.0±0.5保持3±0.5小時(shí)；最后升溫至85_88°C，保持20_25min得酶解液,過濾去殘?jiān)? (4)吸附:將酶解液輸入吸附罐，降溫至57±3°C，加水調(diào)節(jié)鹽度至3.0±0.5°，控制pH7.0-7.5，按每1000L酶解液加3-8kg的樹脂量，向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂，攪拌吸附6-8小時(shí)后，收集樹脂； (5)洗滌:將收集的樹脂用水洗滌至pH為中性，再將樹脂放入鹽度4±1°、溫度55-60°C的氯化鈉溶液，攪拌至少I小時(shí)進(jìn)行洗滌，其中，樹脂:氯化鈉溶液=1:1.3-1.7 (w/V); (6)洗脫:將步驟(5)洗滌后的樹脂倒入洗脫罐中進(jìn)行兩次洗脫，其中，第一次洗脫為:將樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度55-60°C的氯化鈉溶液中攪拌至少3小時(shí)，樹脂:氯化鈉溶液=1:1-1.4 (w/v);第二次洗脫為:將第一次洗脫后的樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度55-60°C的氯化鈉溶液中攪拌至少3小時(shí)，樹脂:氯化鈉溶液=1:0.8-1.2 (w/v);合并兩次收集的洗脫液； (7)沉淀:將步驟(6)收集到的洗脫液倒入沉淀罐中，攪拌條件下向沉淀罐中加入酒精度85±5°的酒精，酒精用量以實(shí)測(cè)沉淀罐中混合液的酒精度到45° -60°為準(zhǔn)，靜置沉淀15小時(shí)以上，收集沉淀物； (8)干燥:步驟(7)得到的沉淀物加入酒精度85°以上的酒精進(jìn)行脫水1-3小時(shí)，濾干后做烘干處理即得肝素鈉產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:步驟(2)中腸衣繞把具體為:將腸衣按I±0.2米的長(zhǎng)度來回折疊，疊完后在中間捆扎形成腸衣把，每100 ± I米腸衣合成一把腸衣把；腸衣把兩次浸泡過程中，均用氣泵向浸泡液中充空氣使浸泡液上下翻滾流動(dòng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:步驟(2)中腌制處理具體為:第一步抹鹽:將腸衣專用鹽均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽1-1.2kg ;第一步抹鹽完成后腌制48小時(shí)以上，接著進(jìn)行第二步復(fù)鹽:將腸衣專用鹽再次均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽0.5-0.6kg ;第二步復(fù)鹽完成后腌制12-14小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:步驟(3)處理得到的酶解液在6000-8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理20-40min后，再進(jìn)入下一步的吸附。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:將步驟(4)收集樹脂后剩余的料液重新輸送至吸附罐，控制溫度在57±3°C，pH 7.0-7.5，按每1000L料液加2-3kg的樹脂量向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂再次吸附6_8小時(shí)后，收集樹月旨，然后與步驟(4)收集的樹脂合并后，進(jìn)入下一步的洗滌步驟。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:所述羅門哈斯FPA98CL型樹脂活化處理后再使用，活化處理為:樹脂用50-60°C溫水浸泡20小時(shí)以上后用清水沖洗干凈并浙干，再加入質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液攪拌I個(gè)小時(shí)以上，最后用清水沖洗至洗液pH為中性，所述氫氧化鈉溶液的加入量為每千克樹脂加入IL氫氧化鈉溶液的量計(jì)；活化后的樹脂在4000-5000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理10-30min，再用于吸附。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或5所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:步驟(6)收集的洗脫液 進(jìn)入超濾機(jī)超濾后再進(jìn)入下一步沉淀，超濾機(jī)的超濾膜孔徑在0.45μ m-0.6μ m ;或步驟(6)收集的洗脫液在8000-10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理10-20min后，再進(jìn)入下一步沉淀。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或5所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:步驟(7)收集沉淀物后剩余的上清液輸入另一空沉淀罐中，向另一空沉淀罐中加入飽和氯化鈉溶液攪拌均勻，并調(diào)節(jié)PH為9-10，上清液與飽和氯化鈉溶液的體積比為1:0.5-0.7，靜置沉淀8-12小時(shí)后，收集沉淀，然后與步驟(7)得到的沉淀物合并后進(jìn)入下一步的干燥步驟。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或5所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:步驟(8)烘干處理的溫度為60-80°C。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或5所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:收集步驟(3)酶解液過濾獲得的殘?jiān)蛎附夤拗屑尤臌}度5±0.5°的氯化鈉溶液，然后將殘?jiān)匦录尤朊附夤拗校瑲堅(jiān)c鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液的重量比為1:5-6，控制料液的pH在8.5 + 0.5，接著按每1000L料液加1.0-1.2kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在55 土 1°C，保溫6-7小時(shí)；最后升溫至88-90 V，保持20_25min，再靜置20-30min后得酶解液，酶解液在6000-8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理20_40min后，進(jìn)入下一步的吸附。
全文摘要
本發(fā)明涉及肝素鈉生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝。本發(fā)明主要步驟為前處理、腸衣泡把、酶解、吸附、洗滌、洗脫、沉淀和干燥。本發(fā)明將腸衣與腸粘膜聯(lián)合制取肝素鈉，提高了豬小腸的利用率，增加了豬小腸的附加值，生產(chǎn)一億國(guó)際單位肝素鈉粗品只需1400根左右豬小腸，產(chǎn)品純度高，肝素鈉的效價(jià)＞110U/mg。同時(shí)，剩余的腸皮也能得到有效利用。
文檔編號(hào)C08B37/10GK103183746SQ20121034734
公開日2013年7月3日 申請(qǐng)日期2012年9月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月19日
發(fā)明者花瑞華, 潘為群, 潘為中 申請(qǐng)人:杭州龍揚(yáng)生物科技有限公司