專利名稱：美洲簾蛤多糖的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種多糖的制備方法，尤其是一種操作簡單、提取率高，可同時制備蛤
類營養(yǎng)保健調味品的美洲簾蛤多糖的制備方法。
背景技術：
美洲簾蛤又稱硬殼蛤，原產(chǎn)于美國及加拿大沿岸，是美國淺海和灘涂主要的經(jīng)濟 雙殼貝類之一，它與我國文蛤相似，同屬簾蛤科，肉質細嫩，肉味鮮美，富含蛋白質，經(jīng)濟價 值高，但與文蛤不同，它個體大，體內沒有泥沙，可在多種底質的灘涂和淺海正常生長，適應 力好、生長快、耐受性強，除此之外美洲簾蛤還富含抗腫瘤、抗衰老、降血壓、降血脂、增強免 疫力和抗氧化等活性成分，在國際市場上供不應求。目前，對于多糖的提取大多采用以下兩 種方法單一的乙醇提取法，不僅得率低，而且因提取物混雜大量的蛋白質給后續(xù)純化帶來 麻煩；化學試劑沉淀多糖方法(如CPC等)，提取多糖后所產(chǎn)生的副產(chǎn)物不能食用。
發(fā)明內容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術所存在的問題，提供一種操作簡單、提取率高，可同時 制備蛤類營養(yǎng)保健調味品的美洲簾蛤多糖的制備方法。 本發(fā)明的技術解決方案是一種美洲簾蛤多糖的制備方法，其特征在于依次按以 下步驟進行 a.選取鮮活的美洲簾蛤，洗凈后取肉，采用組織搗碎機搗碎，得到蛤肉糜制品；
b.蛤肉糜制品與水按質量比為1 : 1 3勻漿，得到蛤肉糜漿；
c.向蛤肉糜漿中加入木瓜蛋白酶或堿性蛋白酶或復合蛋白酶，采用1 4N氫氧化 鈉或鹽酸調節(jié)pH，酶解1 5小時，得到蛤肉酶解液A ; d.將得到蛤肉酶解液A采用1 4N氫氧化鈉或鹽酸調節(jié)pH，用風味酶進一步酶 解l 3h，得蛤肉酶解液B; e.向蛤肉酶解液B中加入與c和d步驟等體積等當量的鹽酸或氫氧化鈉溶液，得 到蛤肉酶解中和液； f.將蛤肉酶解中和液濃縮至蛋白含量為3 10%，離心去沉淀后，添加食鹽至終 濃度達到1 2%，得到蛤肉酶解鹽溶液； g.向得到的蛤肉酶解鹽溶液中加入3 7倍體積的無水乙醇，搖勻后，在1 6°C 下靜置12 24小時，采用8000 12000轉/分鐘離心15 30分鐘，得到上清液和沉淀 兩部分；將沉淀物用丙酮洗滌，用Sevag試劑脫蛋白后，裝入截留分子量為6000Da的透析袋 中透析24h，得到粗多糖； h.將所得的粗多糖過DEAE-52纖維素離子交換柱，先用0. 02mol/L pH7. 4磷酸鹽 緩沖液洗脫，再以0 2mol/L NaCl溶液進行梯度洗脫，流速為1 2mL/min，采用苯酚 硫 酸法跟蹤測定多糖，收集單一糖峰組分； i.將得到的單一糖峰組分，采用S印hadex-G100凝膠層析柱作進一步分離純化，用蒸餾水洗脫，流速為0. 2mL/min，采用苯酚-硫酸法跟蹤測定多糖，用自動收集器收集單 一糖峰組分； j.將收集的單一糖峰組分進行濃縮，凍干，即得到美洲簾蛤多糖。
所述c步驟是加入酶活力單位為100萬u/g的木瓜蛋白酶，加酶量為蛤肉質量的 4. 0 8. 0%，用1 4N氫氧化鈉或鹽酸調節(jié)p朋.0 7. O，在溫度為55 60。C條件下酶 解1 5h。 所述c步驟是是加入酶活力單位為2. 4AU/克的堿性蛋白酶，加酶量為蛤肉質量的 1.0 1.5%，用1 4N氫氧化鈉或鹽酸調節(jié)pH7. 5 8. 0，在溫度為55 6(TC條件下酶 解1 2h。 所述c步驟是加入酶活力單位為1. 5AU/克的復合蛋白酶，加酶量為蛤肉質量的 1.0 1.5X，用1 4N鹽酸調節(jié)p朋.0 6. 5，在溫度為55 6(TC條件下酶解3 5h。
所述d步驟是采用1 4N氫氧化鈉或鹽酸調節(jié)蛤類酶解液A的pH至6. 5 7. 0， 加入酶活力500LAPU/克的風味酶，加酶量為蛤肉質量的0. 25 1. 0% ，在溫度為45 50°C 條件下，酶解l 3h。 所述g步驟是將離心后得到的上清液減壓濃縮，回收乙醇，然后將濃縮液加熱至 90 98t:，保溫10 15分鐘后，再將濃縮液冷卻至3(TC以下或干燥得到蛤營養(yǎng)保健調味
PR o 本發(fā)明是以美洲簾蛤為原料，生產(chǎn)方法操作簡單，所采用的復合酶解，有利于多糖 的溶出，調節(jié)離子濃度和電荷(酸堿中和及添加氯化鈉)，有利于多糖的沉淀，比單一乙醇 沉淀提取的粗多糖得率及純度高；復合酶解的同時還可以得到抗氧化的保健成分和調味成 分，既提供了美洲簾蛤多糖產(chǎn)品，又綜合利用了副產(chǎn)物，提高了美洲簾蛤的附加值。
具體實施例方式
實施例1 : a.選取新鮮或活的美洲簾蛤，洗凈后取肉，采用組織搗碎機搗碎，得到蛤肉糜制
PI
PR b.蛤肉糜制品與水按質量比為1 : 1 3勻漿，得到蛤肉糜漿；
c.向蛤肉糜漿中加入木瓜蛋白酶，酶活力單位為100萬u/g，加酶量為蛤肉質量的 4. 0 8. 0%，用1 4N氫氧化鈉或鹽酸調節(jié)p朋.0 7. O，在溫度為55 60。C條件下酶 解l 5h，得到蛤肉酶解液A; d.將得到蛤肉酶解液A采用風味酶進一步酶解，采用1 4N氫氧化鈉或鹽酸調節(jié) 蛤類酶解初液的pH至6. 5 7. O，加入酶活力500LAPU/克的風味酶，加酶量為蛤肉質量的 0. 25 1.0X，在溫度為45 50。C條件下，酶解1 3h，得蛤肉酶解液B;
e.向蛤肉酶解液B中加入與c和d步驟等體積等當量的鹽酸或氫氧化鈉溶液，以 中和整個酶解過程中音調節(jié)pH值時所添加的氫氧化鈉或鹽酸溶液，得到蛤肉酶解中和液；
f.將蛤肉酶解中和液濃縮至蛋白含量為3 10%，離心去沉淀后，添加食鹽，使食 鹽的濃度達到1 2%，得到蛤肉酶解鹽溶液； g.向得到的蛤肉酶解鹽溶液中加入3 7倍體積的無水乙醇，搖勻后，在1 6°C 下靜置12 24小時，采用8000 12000轉/分鐘離心15 30分鐘，得到上清液和沉淀兩部分，將沉淀物經(jīng)過丙酮洗滌，用Sevag試劑脫蛋白后，裝入截留分子量為6000Da的透析 袋中透析24h，得到粗多糖； h.將所得的粗多糖過DEAE 52纖維素離子交換柱，先用0. 02mol/L pH7. 4磷 酸鹽緩沖液洗脫，再以0 2mol/L NaCl溶液進行梯度洗脫，流速為1 2mL/min，采用苯 酚_硫酸法跟蹤測定多糖，收集單一糖峰組分； i.將得到的單一糖峰組分，采用S印hadex-G100凝膠層析柱作進一步分離純化， 用蒸餾水洗脫，流速為0. 2mL/min，采用苯酚-硫酸法跟蹤測定多糖，用自動收集器收集單 一糖峰組分； j.將收集的單一糖峰組分進行濃縮，凍干，即得到美洲簾蛤多糖。 提純后的多糖得率為1.6% (干物質)，采用苯酚-硫酸法測定的多糖產(chǎn)品純度為
87%。
實施例2 : 除c步驟，均同實施例1。實施例2的c步驟是加入酶活力單位為2. 4AU/克的堿 性蛋白酶，加酶量為蛤肉質量的1. 0 1. 5% ，用1 4N氫氧化鈉或鹽酸調節(jié)pH7. 5 8. 0， 在溫度為55 6(TC條件下酶解1 2h。 提純后的多糖產(chǎn)品得率為2.7% (干物質)，采用苯酚-硫酸法測定的多糖產(chǎn)品純
度為84%。 實施例3 : 除c步驟，均同實施例1或實施例2。實施例3的c步驟是酶活力單位為1. 5AU/ 克的復合蛋白酶，加酶量為蛤肉質量的1.0 1.5%，用1 4N鹽酸調節(jié)pH6.0 6.5，在 溫度為55 6(TC條件下酶解3 5h。 提純后的多糖產(chǎn)品得率為2. 9% (干物質)，采用苯酚-硫酸法測定的多糖產(chǎn)品純
度為85%。 實施例4 : 其余步驟均同實施例1或實施例2或實施例3，只是將g步驟離心后得到的上清液 減壓濃縮，回收乙醇，然后將濃縮液加熱至90 98t:，保溫10 15分鐘后，迅速將濃縮液 冷卻至3(TC以下，得到液體蛤營養(yǎng)保健調味品，或干燥后得到蛤固體營養(yǎng)保健調味品。
采用凱氏定氮法測定的液體蛤營養(yǎng)保健調味品中的蛋白質含量為3 9%，甲醛 滴定法測定的氨基態(tài)氮含量為1. 2 3. 8g/100ml ;采用凱氏定氮法測定的固體營養(yǎng)保健 調味品中的蛋白質含量為68 73%，采用分光光度法測定的清除DPra自由基的清除率為 21 44%。
權利要求
一種美洲簾蛤多糖的制備方法，其特征在于依次按以下步驟進行a.選取鮮活的美洲簾蛤，洗凈后取肉，采用組織搗碎機搗碎，得到蛤肉糜制品；b.蛤肉糜制品與水按質量比為1∶1～3勻漿，得到蛤肉糜漿；c.向蛤肉糜漿中加入木瓜蛋白酶或堿性蛋白酶或復合蛋白酶，采用1～4N氫氧化鈉或鹽酸調節(jié)pH，酶解1～5小時，得到蛤肉酶解液A；d.將得到蛤肉酶解液A采用1～4N氫氧化鈉或鹽酸調節(jié)pH，用風味酶進一步酶解1～3h，得蛤肉酶解液B；e.向蛤肉酶解液B中加入與c和d步驟等體積等當量的鹽酸或氫氧化鈉溶液，得到蛤肉酶解中和液；f.將蛤肉酶解中和液濃縮至蛋白含量為3～10％，離心去沉淀后，添加食鹽，使食鹽終濃度達到1～2％，得到蛤肉酶解鹽溶液；g.向得到的蛤肉酶解鹽溶液中加入3～7倍體積的無水乙醇，搖勻后，在1～6℃下靜置12～24小時，采用8000～12000轉/分鐘離心15～30分鐘，得到上清液和沉淀兩部分；將沉淀物用丙酮洗滌，用Sevag試劑脫蛋白后，裝入截留分子量為6000Da的透析袋中透析24h，得到粗多糖；h.將所得的粗多糖過DEAE-52纖維素離子交換柱，先用0.02mol/L pH7.4磷酸鹽緩沖液洗脫，再以0～2mol/L NaCl溶液進行梯度洗脫，流速為1～2mL/min，采用苯酚～硫酸法跟蹤測定多糖，收集單一糖峰組分；i.將得到的單一糖峰組分，采用Sephadex-G100凝膠層析柱作進一步分離純化，用蒸餾水洗脫，流速為0.2mL/min，采用苯酚-硫酸法跟蹤測定多糖，用自動收集器收集單一糖峰組分；j.將收集的單一糖峰組分進行濃縮，凍干，即得到美洲簾蛤多糖。
2. 根據(jù)權利要求1所述的美洲簾蛤多糖的制備方法，其特征在于所述c步驟是加入酶活力單位為100萬u/g的木瓜蛋白酶，加酶量為蛤肉質量的4. 0 8. 0% ，用1 4N氫氧化鈉或鹽酸調節(jié)P朋.0 7. O，在溫度為55 6(TC條件下酶解1 5h。
3. 根據(jù)權利要求1所述的美洲簾蛤多糖的制備方法，其特征在于所述c步驟是是加入酶活力單位為2. 4AU/克的堿性蛋白酶，加酶量為蛤肉質量的1. 0 1. 5%，用1 4N氫氧化鈉或鹽酸調節(jié)pH7. 5 8. O，在溫度為55 6(TC條件下酶解1 2h。
4. 根據(jù)權利要求1所述的美洲簾蛤多糖的制備方法，其特征在于所述c步驟是加入酶活力單位為1. 5AU/克的復合蛋白酶，加酶量為蛤肉質量的1. 0 1. 5%，用1 4N鹽酸調節(jié)p朋.0 6. 5，在溫度為55 6(TC條件下酶解3 5h。
5. 根據(jù)權利要求l所述的美洲簾蛤多糖的制備方法，其特征在于所述d步驟是采用1 4N氫氧化鈉或鹽酸調節(jié)蛤類酶解液A的pH至6. 5 7. 0，加入酶活力500LAPU/克的風味酶，加酶量為蛤肉質量的0. 25 1. 0%，在溫度為45 5(TC條件下，酶解1 3h。
6. 根據(jù)權利要求1所述的美洲簾蛤多糖的制備方法，其特征在于所述g步驟是將離心后得到的上清液減壓濃縮，回收乙醇，然后將濃縮液加熱至90 98t:，保溫10 15分鐘后，再將濃縮液冷卻至3(TC以下或干燥得到蛤營養(yǎng)保健調味品。
全文摘要
本發(fā)明公開一種美洲簾蛤多糖的制備方法，依次按以下步驟進行制美洲簾蛤肉糜制品；蛤肉糜制品與水勻漿，得到蛤肉糜漿；向蛤肉糜漿中加入木瓜蛋白酶或堿性蛋白酶或復合蛋白酶酶解；用風味酶進一步酶解；向蛤肉酶解液中加入鹽酸或氫氧化鈉溶液，得到蛤肉酶解中和液；將蛤肉酶解中和液濃縮，離心去沉淀后，添加食鹽得到蛤肉酶解鹽溶液；向得到的蛤肉酶解鹽溶液中加入無水乙醇，得到上清液和沉淀兩部分；將沉淀物用丙酮洗滌，用Sevag試劑脫蛋白后，裝入截留分子量為6000Da的透析袋中透析24h，得到粗多糖；將所得的粗多糖過DEAE-52纖維素離子交換柱，收集單一糖峰組分并采用Sephadex-G100凝膠層析柱作進一步分離純化，濃縮，凍干，即得到美洲簾蛤多糖。
文檔編號C08B37/00GK101736051SQ20091024906
公開日2010年6月16日 申請日期2009年12月31日 優(yōu)先權日2009年12月31日
發(fā)明者何云海, 佟長青, 李偉, 李智博, 汪秋寬, 蘇延明, 趙前程, 金橋 申請人:大連水產(chǎn)學院