穿心蓮內(nèi)酯的工業(yè)化制備色譜分離純化方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種穿心蓮內(nèi)酯的工業(yè)化制備色譜分離純化方法。包括以下步驟：（1）將穿心蓮葉粉碎后溶解于溶劑中，對原料浸提，固液分離后得到提取液；（2）將上述提取液用干燥方法除去液體，過濾獲得穿心蓮內(nèi)酯粗品；(3)將穿心蓮內(nèi)酯粗品配置成溶液，過濾除去不溶物，獲得穿心蓮內(nèi)酯溶液；(4)將上述穿心蓮內(nèi)酯溶液泵入動態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，經(jīng)兩次梯度洗脫，用檢測波長為254mm的紫外光度檢測器，收集保留時間在15—20min的餾出液。本發(fā)明所用溶劑廉價、安全，分離純化過程一步完成，且可在線實時監(jiān)測，大大提高了安全性，節(jié)約了原料和時間成本，適用于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】穿心蓮內(nèi)醒的工業(yè)化制備色譜分離純化方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物提取領(lǐng)域，特別是涉及一種穿也蓮內(nèi)醋的工業(yè)化制備色譜分 離純化方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 穿也蓮為爵床科穿也蓮屬植物，在亞洲幾個世紀W前就用于治療胃腸道和呼吸道 感染、發(fā)熱、瘡疹、咽喉痛和各種細菌性感染。在中醫(yī)里，穿也蓮是一種治療感冒的重要草 藥，它用于退熱、驅(qū)毒，且價格低廉。
[0003] 由于穿也蓮內(nèi)醋是穿也蓮的主要有效成分，與莖、果相比，穿也蓮葉中含穿也蓮內(nèi) 醋最高；穿也蓮內(nèi)醋為醋類結(jié)構(gòu)，在水溶液中易水解、開環(huán)、異構(gòu)化，故影響藥物穩(wěn)定性。在 對穿也蓮內(nèi)醋的穩(wěn)定性研究中發(fā)現(xiàn)，在不同溫度、不同抑值環(huán)境、不同的生物樣品及不同 有機溶劑中，穿也蓮內(nèi)醋穩(wěn)定性都有較明顯的差異。溫度越低，穿也蓮內(nèi)醋的穩(wěn)定性越好； 在堿性條件下不穩(wěn)定，且隨著堿性強度的增加，其不穩(wěn)定性增強；其在酸性條件下較穩(wěn)定， 但并非酸性越強，穩(wěn)定性就越好；其最穩(wěn)定的抑值為3?5。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)穿也蓮內(nèi)醋具 有W下藥理作用；抗菌消炎、解熱作用；抗癌和免疫調(diào)節(jié)作用；病毒和免疫增強作用；也血 管作用；保護肝臟。
[0004] 有關(guān)穿也蓮內(nèi)醋提取分離的方法報道較多，有水提醇沉法、堿提己醇重結(jié)晶法、水 提大孔吸附樹脂洗脫法等。專利號為201310096203. 0的中國專利"穿也蓮內(nèi)醋及其制備方 法"描述了一種重結(jié)晶制備穿也蓮內(nèi)醋的方法，該方法前處理步驟較為繁瑣，需使用大量己 醇，且所得純度不高。專利號為201310577892. 7的中國專利"高品質(zhì)穿也蓮內(nèi)醋組分的制 備方法"描述了用反相色譜和親水色譜結(jié)合進行少量高品質(zhì)穿也蓮內(nèi)醋的提取方法，該方 法相較于前一篇專利，在分離方法上已有了較大提高，但仍存在分離時間較長，產(chǎn)品分離量 有限，且難W實時監(jiān)測分離進度的問題。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對目前穿也蓮粗品精制過程中所存在的工藝繁 雜，純度不高，分離時間較長，產(chǎn)品分離量有限，且難W實時監(jiān)測分離進度等問題。
[0006] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種采用工業(yè)化制備色譜分離系統(tǒng)一步在線 分離制備高純度穿也蓮內(nèi)醋的新方法。本發(fā)明的技術(shù)方案如下：一種穿也蓮內(nèi)醋的工業(yè)化 制備色譜分離純化方法，包括W下步驟： (1) 將穿也蓮葉粉碎后溶解于溶劑中，在輔助作用下對原料浸提，固液分離后得到提取 液； (2) 將上述提取液用干燥方法除去液體，過濾獲得穿也蓮內(nèi)醋粗品； (3) 將穿也蓮內(nèi)醋粗品配置成溶液，過濾除去不溶物，獲得穿也蓮內(nèi)醋溶液； (4) 將上述穿也蓮內(nèi)醋溶液粟入動態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，經(jīng)兩次梯度洗脫，用檢 測波長為254mm的紫外光度檢測器，收集保留時間在15 - 20min的觸出液； 其中： 步驟（4)中所述動態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，柱尺寸為戀50*250mm，填料為10-50 y m反相球形娃膠，流動相為有機溶劑的水溶液，濃度為10 - 90wt%。
[0007] 進一步地，步驟（4)中所述流動相為己醇和水，第一次梯度范圍為30:70-80:20， 流速為1001111/111111，洗脫時間為30111111，第二次梯度范圍為90:10，洗脫時間為20111山。
[0008] 進一步地，步驟（4)中所述流動相為甲醇和水，第一次梯度范圍為40:60-20:80， 流速為120ml/min洗脫時間為50min，第二次梯度范圍為90:10,洗脫時間為lOmin。
[0009] 進一步地，步驟（4)中所述流動相為己膳和水，第一次梯度范圍為20:80-30:70， 流速為8〇1111/111111，洗脫時間為3〇111111，第二次梯度范圍為50:50，洗脫時間為2〇111111。
[0010] 進一步地，步驟（4)中所述反相球形娃膠為反相正十八焼基娃膠。
[0011] 進一步地，步驟（4)中所述反相正十八焼基娃膠粒徑為lOym或22ym。
[0012] 進一步地，步驟（1)中所述溶劑為水或有機溶劑或水和有機溶劑的混合物。
[0013] 進一步地，步驟（1)中所述輔助作用為加熱，采用微波或超聲波加熱。
[0014] 進一步地，步驟（2)中所述干燥方法為噴霧或旋蒸。
[0015] 本發(fā)明的有益效果是直接采用粗品提取后的穿也蓮提取液來制備穿也蓮內(nèi)醋，無 需大量復雜繁瑣的前處理過程，所用溶劑廉價、安全，分離純化過程一步完成，且可在線實 時監(jiān)測，大大提高了安全性，節(jié)約了原料和時間成本，適用于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。高效液相 色譜最終測定顯示，穿也蓮內(nèi)醋純度大于97%，總雜小于3%。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0016] 圖1是原始穿也蓮內(nèi)醋粗品的高效液相色譜測定圖譜。
[0017] 圖2是用填充了 10 ym正十八焼基反相娃膠填料的動態(tài)軸向壓縮柱分離純化穿 也蓮內(nèi)醋的高效液相色譜測定圖譜，進樣400mg。
[0018] 圖3是用填充了 10 y m正十八焼基反相娃膠填料的動態(tài)軸向壓縮柱分離純化穿也 蓮內(nèi)醋的高效液相色譜測定圖譜，進樣Ig。
[0019] 圖4是用填充了 10 ym正十八焼基反相娃膠填料的動態(tài)軸向壓縮柱分離純化穿也 蓮內(nèi)醋的高效液相色譜測定圖譜，進樣3g。
[0020] 圖5是用填充了 10 y m正十八焼基反相娃膠填料的動態(tài)軸向壓縮柱分離純化穿也 蓮內(nèi)醋的制備圖譜，進樣3g。
【具體實施方式】
[0021] 下面通過具體的實施例對本發(fā)明做進一步說明。
[0022] 將穿也蓮葉粉碎后用水或有機溶劑或水/有機溶劑混合溶劑在輔助作用下對原 料進行浸提，其中輔助作用包括加熱，采用微波或超聲等；固液分離后得到墨綠色穿也蓮提 取液；再采用干燥手段除去液體，其中干燥手段包括噴霧或旋蒸等，獲得穿也蓮內(nèi)醋粗品 (穿也蓮內(nèi)醋含量在10-50%之間)，此時，穿也蓮內(nèi)醋粗品的高效液相色譜測定圖譜如圖1 所示。
[0023] 采用高效液相色譜（冊LC)研究和優(yōu)化穿也蓮內(nèi)醋的最佳分離純化條件。爾后將 其等比例放大，于填充有反相正十八焼基娃膠填料的動態(tài)軸向壓縮柱（DAC)內(nèi)進行分離，在 線收集穿也蓮內(nèi)醋對應色譜峰的洗脫液，一步分離純度>95%，最高可達99% W上；收率一般 在70%~90%范圍內(nèi)，與純度成反比。
[0024] 采用填料為10-50微米反相球形娃膠，優(yōu)選10或22微米C18反相球形娃膠； 流動相為有機溶劑的水溶液，有機溶劑包括但不限于甲醇、己醇、己膳等，濃度在 10-90wt%之間，出于成本考慮，優(yōu)選甲醇、己醇。
[0025] 實施例1 1. 取400mg穿也蓮內(nèi)醋粗品配置成溶液，過濾除去不溶物； 2. 將穿也蓮內(nèi)醋溶液粟入動態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，柱尺寸為〇50X250mm， 正十八焼基反相娃膠填料粒徑為10 ym，上樣量為400mg，流動相為己醇與水，梯度范圍為 30 ;70?80 ;20,流速為lOOml/min，洗脫時間30min。之后將梯度調(diào)整為90 ;10,繼續(xù)洗脫 20min，一個分離周期結(jié)束。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為254nm，收集保留時間在 15?20min的觸出液。如圖2所示，經(jīng)HPLC分析純度為99. 0%。
[002引 實施例2 1. 取Ig穿也蓮內(nèi)醋粗品配置成溶液，過濾除去不溶物； 2. 將穿也蓮內(nèi)醋溶液粟入動態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，柱尺寸為050X250mm， 正十八焼基反相娃膠填料粒徑為10 y m，上樣量為Ig，流動相為己醇與水，梯度范圍為 30 ;70?80 ;20,流速為lOOml/min，洗脫時間30min。之后將梯度調(diào)整為90 ;10,繼續(xù)洗脫 20min，一個分離周期結(jié)束。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為254nm，收集保留時間在 15?20min的觸出液。如圖3所示，經(jīng)HPLC分析純度為99. 3%。
[0027] 實施例3 1. 取3g穿也蓮內(nèi)醋粗品配置成濃度溶液，過濾除去不溶物； 2. 將穿也蓮內(nèi)醋溶液粟入動態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，柱尺寸為〇50X250mm， 正十八焼基反相娃膠填料粒徑為lOym，上樣量為3g，流動相為己醇與水，梯度范圍為 30 ;70?80 ;20,流速為lOOml/min，洗脫時間30min。之后將梯度調(diào)整為90 ;10,繼續(xù)洗脫 20min，一個分離周期結(jié)束。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為254nm，收集保留時間在 15?20min的觸出液。如圖4所示，經(jīng)HPLC分析純度為99. 90%。填料粒徑為10 y m正十八 焼基反相娃膠填料的動態(tài)軸向壓縮柱分離純化穿也蓮內(nèi)醋的制備圖譜，如圖5所示。
[002引 實施例4 1. 取3g穿也蓮內(nèi)醋粗品配置成濃度溶液，過濾除去不溶物； 2. 將穿也蓮內(nèi)醋溶液粟入動態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，柱尺寸為050X250mm，填 料采用22微米反相球形娃膠，上樣量為3g，流動相為己醇與水，梯度范圍為30 ;70?80 ;20， 流速為lOOml/min，洗脫時間30min。之后將梯度調(diào)整為90 ;10,繼續(xù)洗脫20min，一個分離 周期結(jié)束。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為254nm，收集保留時間在15?20min的觸出 液。經(jīng)HPLC分析純度為98. 3%。
[0029] 實施例5 1. 取3g穿也蓮內(nèi)醋粗品配置成濃度溶液，過濾除去不溶物； 2. 將穿也蓮內(nèi)醋溶液粟入動態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，柱尺寸為0 50X 250mm，正 十八焼基反相娃膠填料粒徑為10 y m，上樣量為3g，采用流動相為甲醇與水，梯度范圍為 40 ;60?20 ;80,流速為120ml/min，洗脫時間50min。之后將梯度調(diào)整為90 ;10,繼續(xù)洗脫 lOmin，一個分離周期結(jié)束。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為254nm，收集保留時間在 15?20min的觸出液。經(jīng)HPLC分析純度為99. 5〇/〇。
[0030] 實施例6 1. 取3g穿也蓮內(nèi)醋粗品配置成濃度溶液，過濾除去不溶物； 2. 將穿也蓮內(nèi)醋溶液粟入動態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，柱尺寸為〇50X250mm， 正十八焼基反相娃膠填料粒徑為10 ym，上樣量為3g，采用流動相為己膳與水，梯度范圍 為20 ;80?30 ;70,流速為80ml/min，洗脫時間30min。之后將梯度調(diào)整為50 ;50,繼續(xù)洗脫 20min，一個分離周期結(jié)束。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為254nm，收集保留時間在 15?20min的觸出液。經(jīng)HPLC分析純度為98. 8〇/〇。
[0031] W上所述僅為用W解釋本發(fā)明的優(yōu)選實施例，并非據(jù)W對本發(fā)明作任何形式上的 限制，故凡是在本發(fā)明的創(chuàng)作精神基礎(chǔ)上所作的任何形式修飾或變更，皆應屬于本發(fā)明的 保護范疇。
【權(quán)利要求】
1. 一種穿心蓮內(nèi)酯的工業(yè)化制備色譜分離純化方法，其特征在于：包括以下步驟； 將穿心蓮葉粉碎后溶解于溶劑中，在輔助作用下對原料浸提，固液分離后得到提取 液； 將上述提取液用干燥方法除去液體，過濾獲得穿心蓮內(nèi)酯粗品； 將穿心蓮內(nèi)酯粗品配置成溶液，過濾除去不溶物，獲得穿心蓮內(nèi)酯溶液； 將上述穿心蓮內(nèi)酯溶液泵入動態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，經(jīng)兩次梯度洗脫，用檢測 波長為254mm的紫外光度檢測器，收集保留時間在15 - 20min的餾出液； 其中： 步驟（4)中所述動態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，柱尺寸為05〇*25〇mm，填料為10- 50μm反相球形硅膠，流動相為有機溶劑的水溶液，濃度為10 - 90wt%。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的穿心蓮內(nèi)酯的工業(yè)化制備色譜分離純化方法，其特征在 于：步驟（4)中所述流動相為乙醇和水，步驟（4)中所述兩次梯度洗脫，第一次梯度范圍為 30:70-80:20，流速為1001111/1^11，洗脫時間為301^11，第二次梯度范圍為90 :10，洗脫時間 為 20min〇
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的穿心蓮內(nèi)酯的工業(yè)化制備色譜分離純化方法，其特征在 于：步驟（4)中所述流動相為甲醇和水，步驟（4)中所述兩次梯度洗脫，第一次梯度范圍為 40:60-20:80,流速為120ml/min洗脫時間為50min，第二次梯度范圍為90:10,洗脫時間為 IOmin0
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穿心蓮內(nèi)酯的工業(yè)化制備色譜分離純化方法，其特征在 于：步驟（4)中所述流動相為乙腈和水，步驟（4)中所述兩次梯度洗脫，第一次梯度范圍為 20:80-30:70,流速為80ml/min，洗脫時間為30min，第二次梯度范圍為50:50,洗脫時間為 20min〇
5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的穿心蓮內(nèi)酯的工業(yè)化制備色譜分離純化方法， 其特征在于：步驟（4)中所述反相球形硅膠為反相正十八烷基硅膠。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的穿心蓮內(nèi)酯的工業(yè)化制備色譜分離純化方法，其特征在于： 所述反相正十八燒基娃膠粒徑為10μm或22μm。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的穿心蓮內(nèi)酯的工業(yè)化制備色譜分離純化方法，其特征在于： 步驟（1)中所述溶劑為水或有機溶劑或水和有機溶劑。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的穿心蓮內(nèi)酯的工業(yè)化制備色譜分離純化方法，其特征在于： 步驟（1)中所述輔助作用為加熱，采用微波或超聲波加熱。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的穿心蓮內(nèi)酯的工業(yè)化制備色譜分離純化方法，其特征在于： 步驟（2)中所述干燥方法為噴霧或旋蒸。
【文檔編號】C07D307/60GK104447642SQ201410795234
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月19日
【發(fā)明者】黃曦 申請人:黃曦