專利名稱：一種齊考諾肽的固相合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種齊考諾肽的固相合成方法。
背景技術(shù)：
齊考諾肽(ziconotide)是ω-芋螺毒素MVIIA的合成形式，天然型存在于南太平洋海洋蝸牛(Conusmagus)體內(nèi)，是由25個(gè)氨基酸組成的陽離子多肽,包括3對(duì)二硫鍵連接的6個(gè)半胱氨酸殘基,分子量為2639.12。它是強(qiáng)效的、特異性、選擇性、可逆的的N型電壓敏感性鈣通道(N-typevoltage-sensitive calcium channels, N-type VSCCs)阻滯劑，可阻止脊髓初級(jí)疼痛傳入神經(jīng)元上鈣離子的涌入，抑制神經(jīng)遞質(zhì)如P物質(zhì)、降鈣素基因相關(guān)肽以及谷氨酸等的釋放，從而阻止或降低疼痛信號(hào)的傳導(dǎo)，對(duì)其他離子通道沒有明顯的親和力。鞘內(nèi)注射齊考諾肽可以阻斷初級(jí)傷害感受器的傳入神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，同時(shí)阻止疼痛信號(hào)從脊髓向腦部傳導(dǎo)，從而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。長(zhǎng)期給藥不會(huì)引起耐受性，優(yōu)于鞘內(nèi)注射嗎啡，可用于治療難治性、阿片類藥物無效或已產(chǎn)生耐藥性的病例。一系列的臨床實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明鞘內(nèi)注射齊考諾肽可以治療帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛，幻肢痛，HIV相關(guān)神經(jīng)病理性疼痛，難治性癌痛，手術(shù)后疼痛。而且齊考諾肽不與阿片受體、膽堿能受體、單胺類受體或肽能受體結(jié)合。此外，齊考諾肽仍存在部分副作用，表現(xiàn)為:頭暈，惡心，眼球震顫，步態(tài)異常，便秘，尿潴留，嗜睡，體位性低血壓，嘔吐，思維混亂，視力異常。頭暈，惡心，思維混亂，頭痛最為常見。通過劑量調(diào)整和緩慢滴定，其副作用是可控，可逆的。有精神病史的病人不能用齊考諾肽治療。對(duì)有精神缺陷、幻覺情緒改變的病人要嚴(yán)密監(jiān)護(hù)。如果有精神問題發(fā)生，應(yīng)當(dāng)終止齊考諾肽治療并改用精神藥物治療。2004年美國(guó)食品及藥物管理局批準(zhǔn)其用于鞘內(nèi)注射治療，主要適用于其他治療方法不能耐受或不能控制的嚴(yán)重慢性疼痛患者。在歐洲，齊考諾肽也被允許用于嚴(yán)重慢性疼痛患者的治療。2007年，聯(lián)合鎮(zhèn)痛會(huì)議專門小組推薦齊考諾肽作為一線鞘內(nèi)鎮(zhèn)痛藥物。生物提取現(xiàn)受到現(xiàn)有有限生物資源的影響，提取過程較繁瑣，效率低，且比較難得到高純度的產(chǎn)物。低溫自然成環(huán)反應(yīng)屬于熱力學(xué)控制，環(huán)化過程慢，過程控制較復(fù)雜，反應(yīng)收率低。齊考諾肽的合成技術(shù)主要是液態(tài)合成法，很少有固相合成法的報(bào)道。其相關(guān)專利主要集中在藥理和治療方面，如US2007269528，US2006234936, LU91181。2007年中國(guó)專利局公布一篇相關(guān)專利CN101412752A介紹了一種采用Fmoc策略固相合成齊考諾肽的方法[I]，合成路線如下:該方法以Fmoc-Rink Amide-MBHA樹脂為固相載體，以HOBt和DIC為縮合劑，依次將側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸連到樹脂上，得到含25個(gè)氨基酸的線性全保護(hù)肽樹脂，其中形成二硫鍵的三組Cys分別由Trt、Acm、Mob保護(hù),不同組Cys由不同的保護(hù)基保護(hù)，同組Cys由同一種保護(hù)基保護(hù)。將線性全保護(hù)肽樹脂溶于I %的TFA/DCM溶液，室溫反應(yīng)20分鐘脫 去Trt保護(hù)基，過濾后加入水、乙腈、DMSO (體積比10:15:1)，稀氨水調(diào)節(jié)PH至8，室溫下攪拌反應(yīng)4小時(shí)，得到齊考諾肽一環(huán)肽樹脂。將得到的一環(huán)肽樹脂中加入0.4mmol/ml的碘/甲醇溶液，室溫反應(yīng)2小時(shí)，洗滌過濾得到齊考諾肽二環(huán)肽樹脂。將得到的二環(huán)肽樹脂溶于三氟醋酸、三氟甲磺酸、硫代苯甲醚、乙二硫醇(體積比:80:8:8:4)混合溶液中，室溫反應(yīng)3小時(shí)，過濾沉淀后得到齊考諾肽二環(huán)肽粗品。將得到的二環(huán)肽粗品溶于水中，調(diào)PH至8，雙氧水存在下室溫反應(yīng)一小時(shí)，得到齊考諾肽三環(huán)粗肽，HPLC制備純化得到齊考諾肽。整個(gè)合成過程反應(yīng)流程如
圖1所示。該方法的優(yōu)勢(shì)在于采用純固相方法，操作比較簡(jiǎn)單。但是，在固相條件下完成前兩個(gè)二硫鍵的氧化，重復(fù)難度很大；切割肽樹脂時(shí)，容易導(dǎo)致兩對(duì)二硫鍵的斷裂和重排而使產(chǎn)物純化復(fù)雜；最后一步雙氧水作用的環(huán)化過程中肽濃度要求非常低，不適于商品化大規(guī)模生產(chǎn)，并且該過程很容易形成二聚物或多聚物。2009年中國(guó)專利局公布一篇相關(guān)專利CNlO 1709082A介紹了一種齊考諾肽的制備方法[2]，合成路線如下:該方法以氨基樹脂為固相載體，在HATU/HOAt作用下首先與Fmoc-Cys (Acm) -OH縮合得到Fmoc-Cys (Acm)-氨基樹脂。該樹脂肽與Fmoc氨基酸在偶聯(lián)劑作用下生成全保護(hù)的線性全保護(hù)肽，其中全部Cys側(cè)鏈均用Acm保護(hù)。使用TFA、苯甲醚、苯甲硫醚、乙二硫醇(90:5:3:2)裂解肽樹脂，得到Cys側(cè)鏈含有Acm的齊考諾肽線性粗肽。將粗肽用TFA溶解，加入Tl (TFA) 3反應(yīng)脫除Acm保護(hù)基，然后DTT輔助自然氧化得到齊考諾肽，純化，總收率在30 %以上。整個(gè)合成過程反應(yīng)流程如圖2所示。該方法的優(yōu)勢(shì)在于合成步驟簡(jiǎn)便。但是，Cys的保護(hù)基全部選用Acm，同時(shí)脫除，同時(shí)形成三對(duì)二硫鍵，導(dǎo)致二硫鍵的連接準(zhǔn)確率低，產(chǎn)率低，純化困難。2011年中國(guó)專利局公布一篇相關(guān)專利CN102268082A介紹了一種齊考諾肽的固相合成方法[3]，合成路線如下:該方法以Fmoc-氨基樹脂為固相載體，以HOBt和HBTU為縮合劑，依次將側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸連到樹脂上，得到含25個(gè)氨基酸的線性全保護(hù)肽樹脂，其中形成二硫鍵的三組Cys分別由Trt、Acm、tBu保護(hù),不同組Cys由不同的保護(hù)基保護(hù)，同組Cys由同一種保護(hù)基保護(hù)。將線性全保護(hù)肽樹脂溶于三氟乙酸、苯甲硫醚、二巰基乙烷和苯甲醚(90:5:2.5:2.5),室溫反應(yīng)2小時(shí)脫去Trt保護(hù)基，得到Cys側(cè)鏈含有Acm和tBu的線性粗肽。將該粗肽溶于乙酸溶液，加入10倍摩爾當(dāng)量的I2，室溫反應(yīng)I小時(shí)，同時(shí)形成兩對(duì)二硫鍵得到二環(huán)肽。將得到的二環(huán)肽溶于二甲基亞砜、苯甲醚和三氟乙酸(258:1.6:100000)混合溶液中，室溫反應(yīng)5小時(shí)，凍干得到齊考諾肽三環(huán)肽粗品，HPLC制備純化得到齊考諾肽。整個(gè)合成過程反應(yīng)流程如圖3所示。該方法的優(yōu)勢(shì)在于簡(jiǎn)化了合成步驟。但是前兩個(gè)二硫鍵同時(shí)形成，會(huì)形成三種二硫鍵連接方式不同的異構(gòu)體，而這三種異構(gòu)體因極性差異很小，導(dǎo)致很難在HPLC制備純化中分開，導(dǎo)致最終得到的產(chǎn)物純度低，雜質(zhì)多。而且二甲基亞砜和苯甲醚氧化強(qiáng)度不大，形成三環(huán)肽的過程很難重復(fù)出來，且反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)，易形成二聚體。參考文獻(xiàn):[I]路楊，李新宇。齊考諾肽的固相合成方法:中國(guó)，200710301598.8[P].2009-04-22。
[2]宓鵬程，李紅玲，馬亞平，袁建成。一種齊考諾肽的固相合成方法:中國(guó)，200910188686.0[P]。2010-05-19。[3]董守良，李梅興。一種齊考諾肽的固相合成方法:中國(guó)，201110139661.9[P]。2011-12-07。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種定向二硫鍵形成、高產(chǎn)率、純化簡(jiǎn)便、反應(yīng)條件溫和、有利于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)的固相齊考諾肽合成方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案:一種齊考諾肽的固相合成方法，所述方法包括如下順序步驟:(I)以Fmoc-氨基樹脂為固相載體，從C端到N端依次縮合反應(yīng)連接25個(gè)側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸，得到25個(gè)氨基酸的線性全保護(hù)肽樹脂，其中，形成二硫鍵的三組Cys (1-16，8-20, 15-25)分別連接Trt、Acm或tBu保護(hù)基，同組的Cys連接相同保護(hù)基,不同組的Cys連接不同的保護(hù)基；(2)將步驟⑴得到的線性全保護(hù)肽樹脂進(jìn)行線性切割，切割的同時(shí)脫去除Cys (Acm)和Cys (tBu)外的其它所有氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)基,得到含Cys (Acm)和Cys (tBu)的線性肽；(3)氧化步驟(2)得到的線性肽形成第一對(duì)二硫鍵，得到單二硫環(huán)肽；(4)脫除步驟(3)得到的單二硫環(huán)肽中Cys (Acm)的Acm保護(hù)基，同時(shí)環(huán)化形成第二對(duì)二硫鍵，得到雙二硫環(huán)肽；(5)脫除步驟(4)·得到的雙二硫環(huán)肽中Cys (tBu)的tBu保護(hù)基，同時(shí)環(huán)化形成第三對(duì)二硫鍵，得到三二硫環(huán)肽；(6)步驟(5)得到的三二硫環(huán)肽經(jīng)HPLC純化、凍干得到齊考諾肽。步驟(I)中，所述的氨基樹脂為Rink Amide樹脂、Rink Amide-MBHA樹脂、RinkAmide-BHA 樹脂、Rink Amide-AM 樹脂、PAL 樹脂、Knorr 樹脂或 Sieber 樹脂。步驟(I)中，以Fmoc-氨基樹脂為固相載體，從C端到N端依次縮合反應(yīng)連接如下25 個(gè)側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸:Fmoc_Cys (Acm)-OH, Fmoc-Lys (Boc) -OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ser (tBu)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Cys(tBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Thr-0H, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Cys(Acm)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Cys(tBu)-OH, Fmoc-Lys (Boc)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(Boc) -OH, Fmoc-Cys (Trt) -OH,得到的25個(gè)氨基酸的線性全保護(hù)肽樹脂如下:NH2-Cys (Acm)-Lys(Boc)-Gly-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Cys(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Thr-Cys(Trt)-Cys(Acm)-Asp (OtBu)-Tyr(tBu)-Met-Leu-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Cys(tBu)-Lys (Boc) -Ala-Gly-Lys (Boc) -Gly-Lys (Boc) -Cys (Trt) -NH-Rink Amide MBHA 樹脂。其中，F(xiàn)moc=荷甲氧羰基,Trt=三苯甲基,Acm=乙酰胺甲基,tBu=叔丁基，Pbf=2, 2, 4, 6, 7-五甲二氫苯并呋喃-5-磺?；?，Boc=叔丁基氧羰基。步驟(I)中，從C端到N端依次縮合反應(yīng)連接25個(gè)側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸，得到25個(gè)氨基酸的線性全保護(hù)肽樹脂，方法為:按1: (4 8): (4 8)的摩爾比分別稱取溶脹后的氨基樹脂、Fmoc保護(hù)氨基酸、偶聯(lián)劑，將Fmoc保護(hù)氨基酸和偶聯(lián)劑溶于二甲基甲酰胺，預(yù)活化，然后加入溶脹后并已經(jīng)脫除Fmoc保護(hù)基的氨基樹脂，室溫震蕩反應(yīng)0.5 3小時(shí)連接Fmoc保護(hù)氨基酸，連接下一個(gè)氨基酸前用哌啶的N，N- 二甲基甲酰胺溶液脫Fmoc保護(hù)基3次，時(shí)間分別為3 5分鐘、3 5分鐘、15 25分鐘，每次連接一個(gè)氨基酸之后和脫除Fmoc保護(hù)基之后都需用二氯甲烷和二甲基甲酰胺交替洗滌3 10次，用量為5 10ml/g樹脂；其中，所述的偶聯(lián)劑為DIC與組分A摩爾當(dāng)量比為1:2的混合物，或組分A、組分B和組分C三者摩爾當(dāng)量比為1:1:2的混合物，其中組分A為HOBt或HOAt，組分B為HBTU、HATU, TBTU 或 PyBOP，組分 C 為 DIPEA 或 TMP。步驟⑵中，將三氟乙酸、苯酚、水、TIS按照體積比88:5:5:2混合，或者，將三氟乙酸、茴香硫醚、乙二硫醇、苯甲醚按照體積比90:5:3:2混合，將上述兩種混合液中的任意一種加入到步驟(I)得到的線性全保護(hù)肽樹脂中，震蕩反應(yīng)I 2小時(shí)后，將反應(yīng)液逐滴滴入冰乙醚中，沉淀，離心，倒掉上清，收集沉淀物，反復(fù)洗漆5 8次,得到含Cys (Acm)和Cys (tBu)的線性肽。
權(quán)利要求
1.一種齊考諾肽的固相合成方法，其特征在于，所述方法包括如下順序步驟: (1)以Fmoc-氨基樹脂為固相載體，從C端到N端依次縮合反應(yīng)連接25個(gè)側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸，得到25個(gè)氨基酸的線性全保護(hù)肽樹脂，其中，形成二硫鍵的三組Cys分別連接Trt、Acm或tBu保護(hù)基，同組的Cys連接相同保護(hù)基，不同組的Cys連接不同的保護(hù)基； (2)將步驟(I)得到的線性全保護(hù)肽樹脂進(jìn)行線性切割，切割的同時(shí)脫去除Cys(Acm)和Cys (tBu)外的其它所有氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)基,得到含Cys(Acm)和Cys (tBu)的線性肽； (3)氧化步驟(2)得到的線性肽形成第一對(duì)二硫鍵，得到單二硫環(huán)肽； (4)脫除步驟(3)得到的單二硫環(huán)肽中Cys(Acm)的Acm保護(hù)基，同時(shí)環(huán)化形成第二對(duì)_■硫鍵，得到雙_■硫環(huán)妝； (5)脫除步驟(4)得到的雙二硫環(huán)肽中Cys(tBu)的tBu保護(hù)基，同時(shí)環(huán)化形成第三對(duì)二硫鍵，得到三二硫環(huán)肽； (6)步驟(5)得到的三二硫環(huán)肽經(jīng)HPLC純化、凍干得到齊考諾肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的齊考諾肽的固相合成方法，其特征在于，步驟⑴中，所述的氨基樹脂為 Rink Amide樹脂、Rink Amide-MBHA樹脂、Rink Amide-BHA樹脂、Rink Amide-AM樹脂、PAL樹脂、Knorr樹脂或Sieber樹脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的齊考諾肽的固相合成方法，其特征在于，步驟(I)中，以Fmoc-氨基樹脂為固相載體，從C端到N端依次縮合反應(yīng)連接如下25個(gè)側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸:Fmoc-Cys (Acm)-OH, Fmoc-Lys (Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ser (tBu)-0H，F(xiàn)moc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Cys(tBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Thr-OH,Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc -Cys (Acm)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-0H,Fmoc-Met-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Cys(tBu)-0H,Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH,Fmoc-Lys (Boc) -OH, Fmoc-Cys (Trt)-OH,得到的25個(gè)氨基酸的線性全保護(hù)肽樹脂如下:NH2-Cys(Acm)-Lys(Boc)-Gly-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Cys(tBu)-Ser (tBu)-Gly - Thr-Cys(Trt)-Cys(Acm)-Asp (OtBu)-Tyr(tBu)-Met-Leu-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Cys(tBu)-Lys (Boc) -Ala-Gly-Lys (Boc) -Gly-Lys (Boc) -Cys (Trt) -NH-Rink Amide MBHA 樹脂。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的齊考諾肽的固相合成方法，其特征在于，步驟(I)中，從C端到N端依次縮合反應(yīng)連接25個(gè)側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸，得到25個(gè)氨基酸的線性全保護(hù)肽樹脂，方法為:按1: (4 8): (4 8)的摩爾比分別稱取溶脹后的氨基樹脂、Fmoc保護(hù)氨基酸、偶聯(lián)劑，將Fmoc保護(hù)氨基酸和偶聯(lián)劑溶于二甲基甲酰胺，預(yù)活化，然后加入溶脹后并已經(jīng)脫除Fmoc保護(hù)基的氨基樹脂，室溫震蕩反應(yīng)0.5 3小時(shí)連接Fmoc保護(hù)氨基酸，連接下一個(gè)氨基酸前用哌啶的N，N- 二甲基甲酰胺溶液脫Fmoc保護(hù)基3次，時(shí)間分別為3 5分鐘、3 5分鐘、15 25分鐘，每次連接一個(gè)氨基酸之后和脫除Fmoc保護(hù)基之后都需用二氯甲烷和二甲基甲酰胺交替洗滌3 10次，用量為5 10ml/g樹脂； 其中，所述的偶聯(lián)劑為DIC與組分A摩爾當(dāng)量比為1:2的混合物，或組分A、組分B和組分C三者摩爾當(dāng)量比為1:1:2的混合物，其中組分A為HOBt或HOAt，組分B為HBTU、HATU、TBTU 或 PyBOP，組分 C 為 DIPEA 或 TMP。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的齊考諾肽的固相合成方法，其特征在于，步驟(2)中，將三氟乙酸、苯酚、水、TIS按照體積比88:5:5:2混合，或者，將三氟乙酸、茴香硫醚、乙二硫醇、苯甲醚按照體積比90:5:3:2混合，將上述兩種混合液中的任意一種加入到步驟(I)得到的線性全保護(hù)肽樹脂中，震蕩反應(yīng)I 2小時(shí)后，將反應(yīng)液逐滴滴入冰乙醚中，沉淀，離心，倒掉上清，收集沉淀物，反復(fù)洗漆5 8次,得到含Cys (Acm)和Cys (tBu)的線性肽。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的齊考諾肽的固相合成方法，其特征在于，步驟(3)中，將步驟(2)得到的線性肽溶于乙酸水溶液，碳酸胺調(diào)節(jié)pH值至6，加入體積百分含量為20%的DMSO，室溫下攪拌反應(yīng)2小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束，加入兩倍體積的三氟乙酸、乙腈與水的混合液終止反應(yīng)，凍干溶液，得到單二硫環(huán)肽；其中，三氟乙酸、乙腈與水的混合液中，三氟乙酸的體積百分含量為0.05%,乙腈的體積百分含量為5%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的齊考諾肽的固相合成方法，其特征在于，步驟⑷中，將步驟(3)得到單二硫環(huán)肽溶于乙酸水溶液中，加入10 15倍摩爾當(dāng)量的I2單質(zhì)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)I 2小時(shí)，反應(yīng)完全后，加入2倍體積的四氯化碳和水按照體積比1:1的混合物終止反應(yīng)，靜置分層，收集水相，用四氯化碳反復(fù)洗滌5 6次，然后反萃取2 3次，收集水相，凍干溶液，得到雙二硫環(huán)肽。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的齊考諾肽的固相合成方法，其特征在于，步驟(5)中，將步驟(4)得到的雙二硫環(huán)肽溶于三氟乙酸中，依次加入10倍摩爾當(dāng)量的二苯基亞砜，150倍摩爾當(dāng)量的三氯甲基硅烷，100倍摩爾當(dāng)量的苯甲醚，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)15分鐘，將溶液逐滴滴入冰乙醚中，靜置，離心， 倒掉上清，收集沉淀物，乙醚重復(fù)洗滌2 3遍，風(fēng)干，得到三二硫環(huán)肽。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種齊考諾肽的固相合成方法，以Fmoc-氨基樹脂為固相載體，縮合反應(yīng)連接25個(gè)側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸，得到線性全保護(hù)肽樹脂，其中，形成二硫鍵的三組Cys分別連接Trt、Acm或tBu保護(hù)基；將樹脂進(jìn)行線性切割，切割的同時(shí)脫去除Cys(Acm)和Cys(tBu)外的其它所有氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)基；氧化線性肽形成第一對(duì)二硫鍵，得到單二硫環(huán)肽；脫除單二硫環(huán)肽中Cys(Acm)的Acm保護(hù)基，同時(shí)環(huán)化形成第二對(duì)二硫鍵，得到雙二硫環(huán)肽；脫除雙二硫環(huán)肽中Cys(tBu)的tBu保護(hù)基，同時(shí)環(huán)化形成第三對(duì)二硫鍵，得到三二硫環(huán)肽；三二硫環(huán)肽經(jīng)純化、凍干得到齊考諾肽。
文檔編號(hào)C07K14/435GK103242441SQ20131020221
公開日2013年8月14日 申請(qǐng)日期2013年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月27日
發(fā)明者董守良, 曹碩, 陳強(qiáng), 常民, 彭雅麗 申請(qǐng)人:江蘇施美康藥業(yè)股份有限公司