專利名稱：一種抗凝血鼠藥大隆半抗原及完全抗原的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及免疫學技術領域中半抗原和完全抗原的制備方法，特別涉及一種抗凝血鼠藥大隆半抗原及完全抗原的制備方法。
背景技術：
大隆是一種緩效滅鼠劑，為香豆素類化合物，利用該類化合物能夠破壞老鼠體內的凝血酶原，造成體內各臟器及粘膜大面積出血，最后達到殺死老鼠的目的，故銅稱為抗凝血類殺鼠藥。近年來隨著毒鼠強、氟乙酰胺等急性滅鼠藥被禁用，取而代之的是這些新一代的抗凝血滅鼠劑。雖然此類滅鼠劑有良好的滅鼠效果，但是隨著近年來的廣泛應用，因誤用、自殺等導致的案件及事件時有發(fā)生。這就要求公安司法鑒定部門對各種涉及抗凝血類殺鼠藥的檢材進行檢測。臨床上建立生物樣品中這些抗凝血滅鼠劑的檢測方法，對配合中毒病人的臨·床診斷與治療有很大意義。免疫是生物體識別和排除抗原異物達到維護自身生理的平衡和穩(wěn)定。以抗原抗體反應為基礎的各種免疫技術發(fā)展迅速，廣泛應用于醫(yī)學和生物學研究領域的定性、定量和定位，因其高度特異性和靈敏性(可達10-12 10_9g水平)，尤其適于生物樣本等復雜體系的分析檢驗。大隆屬于小分子物質(分子量小于IOOODa)，缺乏T細胞表位而無法直接誘導動物機體產生特異性抗體，但與蛋白質大分子載體偶聯(lián)后，可借助其T細胞表位來間接誘導B細胞的增殖及分化，產生特異性抗體。小分子與蛋白載體的偶聯(lián)物稱為完全抗原。如果小分子自身帶有供偶聯(lián)的活性官能團(如氨基、羧基等)，則偶聯(lián)反應可直接進行，否則就必須對毒物分子進行衍生化，接上供偶聯(lián)反應的活性官能團以合成人工抗原，這一步又稱為半抗原的合成。半抗原及人工抗原的合成對于建立其免疫分析法至關重要，許多因素都將直接影響到能否制備出高質量的抗體，如選擇合適的中間體、活性官能團引入位點的選擇、半抗原產物的分離純化、偶聯(lián)臂的長短、半抗原與載體分子的偶聯(lián)比等。有的毒物因在半抗原合成過程中合成步驟多、產物分離純化困難，有時甚至無法制備出令人滿意的抗體。有關大隆半抗原及完全抗原的制備方法還未見相關文獻報道。
發(fā)明內容
針對現有技術中存在的不足，本發(fā)明的目的在于針對大隆作為小分子毒物不能直接誘導動物機體產生特異性抗體，提供一種抗凝血鼠藥大隆半抗原及完全抗原的制備方法。本發(fā)明的技術方案是這樣實現的一種抗凝血鼠藥大隆半抗原的制備方法，包括如下步驟(I)將大隆和丁二酸酐分別加入到四氫呋喃中，在攪拌下進行反應(如式I所示)；
權利要求
1.一種抗凝血鼠藥大隆半抗原的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 (1)將大隆和丁二酸酐分別加入到四氫呋喃中，在攪拌下進行反應；反應式如下
2.根據權利要求I所述的抗凝血鼠藥大隆半抗原的制備方法，其特征在于，在步驟(I)中，在溫度為10-30°C的條件下攪拌5-24h。
3.根據權利要求I所述的抗凝血鼠藥大隆半抗原的制備方法，其特征在于，在步驟(I)中，在溫度為20-21 °C的條件下攪拌12h。
4.根據權利要求I所述的抗凝血鼠藥大隆半抗原的制備方法，其特征在于，在步驟(2)中，水的溫度為0°C。
5.根據權利要求1-4任一所述的抗凝血鼠藥大隆半抗原的制備方法，其特征在于，大隆與丁二酸酐的物質的量之比為1:1 4。
6.根據權利要求5所述的抗凝血鼠藥大隆半抗原的制備方法，其特征在于，大隆在四氫呋喃中的濃度為O. I O. 5mol/L。
7.根據權利要求5所述的抗凝血鼠藥大隆半抗原的制備方法，其特征在于，大隆在四氫呋喃中的濃度為O. 2mol/L。
8.抗凝血鼠藥大隆完全抗原的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 (1)將大隆和丁二酸酐分別加入到四氫呋喃中，在攪拌下進行反應； (2)將步驟(I)中反應得到的混合物倒入水中，有灰白色固體析出； (3)過濾，乙醇重結晶，得到大隆半抗原； (4)分別將大隆半抗原、二環(huán)己基碳二亞胺和BSA加入到二甲亞砜中，然后再加入pH為6 7的磷酸緩沖溶液，攪拌； (5)透析,冷凍干燥后制成大隆完全抗原。
9.根據權利要求8所述抗凝血鼠藥大隆完全抗原的制備方法，其特征在于，在步驟(4)中大隆半抗原與二環(huán)己基碳二亞胺的質量之比為1:1 I. 8，大隆半抗原與BSA的質量之比為2 3:1，每100毫克大隆半抗原需要二甲亞砜O. 5 2毫升、需要pH為6 7的磷酸緩沖溶液I 2. 5毫升。
10.根據權利要求8所述抗凝血鼠藥大隆完全抗原的制備方法，其特征在于，步驟(4)中在15 30°C的條件下攪拌。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗凝血鼠藥大隆半抗原及完全抗原的制備方法，包括如下步驟(1)將大隆和丁二酸酐分別加入到四氫呋喃中，在攪拌下進行反應；(2)將步驟(1)中反應得到的混合物倒入水中，有灰白色固體析出；(3)過濾，乙醇重結晶，得到大隆半抗原；(4)分別將大隆半抗原、二環(huán)己基碳二亞胺和BSA加入到二甲亞砜中，然后再加入pH為6～7的磷酸緩沖溶液，攪拌；(5)透析，冷凍干燥后制成大隆完全抗原。本發(fā)明的制備方法簡便、快速，可用于免疫動物，制備大隆的單克隆抗體，進而建立抗凝血鼠藥大隆的快速檢測方法，廣泛適用于法庭科學、臨床醫(yī)學等領域中。
文檔編號C07D311/56GK102875512SQ201210421338
公開日2013年1月16日 申請日期2012年10月29日 優(yōu)先權日2012年10月29日
發(fā)明者董穎, 杜鴻雁, 欒玉靜, 王炯, 王瑞花, 常靖, 于忠山, 何毅, 王芳琳, 侯小平, 張云峰, 姚伊人 申請人:公安部物證鑒定中心