專利名稱:一種高純度燈盞花乙素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物化學(xué)領(lǐng)域,具體涉及一種高純度植物原料藥燈盞花乙素的制備方法。
背景技術(shù):
燈盞花是菊科植物短葶飛蓬的干燥全草,又名燈盞細(xì)辛,分布在云南、四川、貴州、廣西、湖南等地。燈盞花素系從燈盞花中分離出的黃酮類有效成分,其中主要為燈盞花乙素(又名燈盞乙素,野黃芩苷),化學(xué)名為4’5、6_三羥基黃酮-7-0-葡萄糖醛酸苷,目前從市場上購得的燈盞花素原料藥經(jīng)HPLC分析,燈盞花乙素含量在90%左右,臨床上廣泛用于治療心腦血管疾病,療效確切。但其注射液穩(wěn)定性差,儲存時間短,臨床上個別患者用后時有冷熱反應(yīng)、皮膚瘙癢、皮疹等現(xiàn)象發(fā)生,這些現(xiàn)象的出現(xiàn)主要由于原料藥中一些未除去雜質(zhì)所 致。多年來燈盞花素原料藥精制方法一直未能很好的解決,因此有必要研究新的制備方法來解決高純度燈盞花乙素的工藝問題。關(guān)于高純度燈盞花乙素的工藝問題,中國專利200510010723提出一種制備高純度燈盞花乙素的方法,將燈盞花素在堿液中溶解,再加入大量的有機(jī)溶劑進(jìn)行沉淀,將沉淀物溶解后加酸析出沉淀,過濾、干燥得到燈盞花乙素,其純度能達(dá)到99%以上,但該方法需要使用酸堿和大量有機(jī)溶劑,給環(huán)境帶來很大的污染,且收率不高,工業(yè)化放大困難。
發(fā)明內(nèi)容
為解決上述問題,本公開目的在于提供一種反相層析填料,該填料是交聯(lián)聚甲基丙烯酸酯均粒微球,其做為柱層析填料床不但利于以水溶液做為流動相分離純化燈盞花乙素達(dá)到高純度和高產(chǎn)率,
為達(dá)到上述目的,本發(fā)明的技術(shù)方案是采用蘇州納微生物科技公司生產(chǎn)的Uni PMM系列單分散交聯(lián)聚甲基丙烯酸酯微球樹脂作為層析填料。其過程包括將該樹脂做為填料裝入色譜柱成為固定相。把含有待分離或分析含燈盞花乙素的燈盞花粗品流過該色譜柱,然后再把吸附在Uni PMM系列固定相上的待分離或分析的燈盞花乙素洗脫下來,
具體技術(shù)方案如下
一種高純度燈盞花乙素的制備方法,按照下述步驟進(jìn)行
(1)色譜柱平衡裝柱完成后,用超純水以每小時f4倍柱體積的流速平衡色譜柱;
(2)樣品制備稱取燈盞花乙素粗品加入到沸水,攪拌均勻,慢慢滴加精氨酸溶液,控制pH為6. 0 9. 0之間,使樣品溶解完全,定各后趁熱用濾紙過濾后備用;
(3)上樣將步驟(2)得到的樣品液,以每小時f4倍柱體積的流速連續(xù)流過樹脂柱 ,所用樹脂體積(L)和燈盞花乙素粗品的重量(g)比為100: f 100:3 ;
(4)洗脫上樣結(jié)束后繼續(xù)用去離子水洗脫,然后以每小時f4倍柱體積的速度洗脫,根據(jù)UV檢測情況分管收集,檢測純度;將純度合格的收集液合并,得到收集液,減壓濃縮得到浸膏;
(5)干燥將所得浸膏冷凍干燥得到燈盞花乙素,其純度大于99%。其中步驟(I)中優(yōu)選為2倍柱體積每小時的流速的流速平衡色譜柱;
其中步驟(2)中優(yōu)選pH值為8.0,
其中步驟(2)中所述的燈盞花乙素粗品純度80、2%,
其中步驟(2)中所述的燈盞花乙素粗品的濃度為l(Tl00mg/ml,
其中步驟(2)中優(yōu)選為2倍柱體積每小時的流速連續(xù)流過樹脂柱;
其中步驟(3)中所述的樹脂為Uni PMM系列交聯(lián)聚甲基丙烯酸酯均粒微球樹脂;
其中步驟(4)中優(yōu)選為2倍柱體積每小時的速度洗脫;
采用本技術(shù)方案的有益效果是蘇州納微生物科技有限公司生產(chǎn)的Uni PMM系列樹脂做為柱層析填料時可以使用去離子水做流動相的對樣品進(jìn)行分離,不需要有機(jī)溶劑,且具有極好的選擇性,一次操作就可得到99%以上純度的燈盞花乙素,與現(xiàn)有工藝相比,具有操作簡單,效率高,重現(xiàn)性好,容易工業(yè)化生產(chǎn),環(huán)境污染小等優(yōu)點。
具體實施例方式下面通過實施例更詳細(xì)地說明本發(fā)明。但是本發(fā)明的范圍并不限于這些實施例。實施例I
燈盞花素上樣液制備將12g精氨酸溶解在50mL沸水中供調(diào)pH使用。稱取30g燈盞花素粗品(純度90. 1%),加入400mL沸水,攪拌均勻,慢慢滴加精氨酸溶液,控制pH為8. 0,使樣品溶解完全,定容至600mL,趁熱膜過濾后備用。燈盞花乙素的純化采用49X460 mm玻璃柱,Uni PMM40-500樹脂(蘇州納微生物科技有限公司)為層析填料,裝柱體積867 mL,用3倍柱體積超純水以每小時I倍柱體積的流速平衡色譜柱。取配制的燈盞花素上樣液520 mL,以每小時I倍柱體積的流速連續(xù)流過樹脂柱上樣,上樣結(jié)束后繼續(xù)用去離子水洗脫,然后以每小時I倍柱體積的速度洗脫,根據(jù)UV檢測情況分管收集,檢測純度。將純度合格的收集液合并,得到收集液共300mL,HPLC檢測純度為99. 18%,本次試驗燈盞乙素回收率為67. 9%。
實施例2
燈盞花素上樣液制備將6g精氨酸溶解在20mL沸水中供調(diào)pH使用。稱取15g燈盞花素粗品(純度80%),加入600mL沸水,攪拌均勻,慢慢滴加精氨酸溶液,控制pH為8. 0,使樣品溶解完全,定容至750mL,趁熱膜過濾后備用。燈盞花乙素的純化采用49X460 mm玻璃柱,蘇州納微生物科技有限公司生產(chǎn)的Uni PMM40-500樹脂為層析填料,裝柱體積867mL,用3倍柱體積的超純水以每小時4倍柱體積的流速平衡色譜柱。取按配制的燈盞花素上樣液433 mL,以每小時4倍柱體積的流速連續(xù)流過樹脂柱上樣,上樣結(jié)束后繼續(xù)用去離子水洗脫,然后以4倍柱體積每小時的速度洗脫,根據(jù)UV檢測情況分管收集,檢測純度。將純度合格的收集液合并,得到收集液共285mL,添加冰醋酸,使收集液PH為2-3,靜止沉淀,過濾,將濾餅在60°C下烘干,得到燈盞乙素干品5. 7g,HPLC檢測純度為99. 51%,本次試驗燈盞乙素回收率為70%。
權(quán)利要求
1.一種高純度燈盞花乙素的制備方法,其特征在于按照下述步驟進(jìn)行 (1)色譜柱平衡裝柱完成后,用超純水以f4倍柱體積每小時的流速平衡色譜柱; (2)樣品制備稱取燈盞花乙素粗品加入到沸水,攪拌均勻,慢慢滴加精氨酸溶液,控制pH為6. O 9. O之間,使樣品溶解完全,定各后趁熱用濾紙過濾后備用; (3)上樣將步驟(2)得到的樣品液,以f4倍柱體積每小時的流速連續(xù)流過樹脂柱 ,所用樹脂體積(L)和樣品的重量(g)比為100: f 100:3 ; (4)洗脫上樣結(jié)束后繼續(xù)用去離子水洗脫,然后以f4倍柱體積每小時的速度洗脫,根據(jù)UV檢測情況分管收集,檢測純度;將純度合格的收集液合并,得到收集液,減壓濃縮得到浸膏; (5)干燥將所得浸膏冷凍干燥得到燈盞花乙素,其純度大于99%。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種高純度燈盞花乙素的制備方法,其特征在于其中步驟(O中優(yōu)選為2倍柱體積每小時的流速的流速平衡色譜柱。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種高純度燈盞花乙素的制備方法,其特征在于其中步驟(2)中pH值為8.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種高純度燈盞花乙素的制備方法,其特征在于其中步驟(2)中所述的燈盞花乙素粗品純度80、2%,其中步驟(2)中所述的燈盞花乙素粗品的濃度為l(Tl00mg/ml,其中步驟(2)中以2倍柱體積每小時的流速連續(xù)流過樹脂柱。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種高純度燈盞花乙素的制備方法,其特征在于其中步驟(3)中所述的樹脂為UniPMM系列交聯(lián)聚甲基丙烯酸酯均粒微球樹脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種高純度燈盞花乙素的制備方法,其特征在于其中步驟(4)中以2倍柱體積每小時的速度洗脫。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高純度燈盞花乙素的制備方法,屬于天然產(chǎn)物化學(xué)領(lǐng)域。其采用均粒聚甲基丙烯酸酯系列樹脂為層析填料,使用去離子水做流動相,即可實現(xiàn)對燈盞花乙素的純化,得到的終產(chǎn)品純度大于99%。該樹脂做為柱層析填料時具有機(jī)械強(qiáng)度高,分離效果好等優(yōu)點,且其流動相為去離子水,與常規(guī)柱層析所用有機(jī)溶劑相比更加經(jīng)濟(jì),環(huán)保。
文檔編號C07H1/06GK102659872SQ201210103239
公開日2012年9月12日 申請日期2012年4月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月11日
發(fā)明者萬水昌, 吳俊成, 江必旺, 裘金明, 陳榮姬 申請人:蘇州納微生物科技有限公司