專利名稱：一種新型卵黃抗體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于動保行業(yè)獸用生物制品領(lǐng)域，所提供卵黃抗體主要用于檢測、預(yù)防和治療多類禽流感病毒感染，以及因?yàn)槎局曜儺惗鸬那萘鞲忻庖呤 Ｇ萘鞲惺恰扒萘餍行愿忻啊钡暮喎Q，是由A型流感病毒引起的禽類烈性傳染病，又稱“真性雞瘟”或“歐洲雞瘟”。臨床主要表現(xiàn)為急性高致死性，產(chǎn)蛋量下降，輕度呼吸系統(tǒng)疾病等。禽流感是全世界范圍內(nèi)的禽類傳染病，因?qū)︷B(yǎng)禽業(yè)造成的毀滅性經(jīng)濟(jì)損失，而被視為嚴(yán)重威脅家禽養(yǎng)殖業(yè)的頭號傳染病，I Q Q多年來人類尚未發(fā)現(xiàn)有效的預(yù)防和治療方法。禽流感還是一種禽畜和人共感病，對人類健康存在巨大威脅。從2003年12月開始，由H5N1禽流感病毒引起的高致病性禽流感突襲亞洲，在不到2個月的時間內(nèi)，席卷了韓國、日本、越南、泰國、柬埔寨、老撾、中國和印度尼西亞等8個東亞和南亞國家。此次禽流感流行的規(guī)模之大、地理分布范圍之廣、破壞程度之深在人類養(yǎng)禽業(yè)歷史上均是史無前例的。當(dāng)前，禽流感在世界局部地區(qū)仍然活躍，疫情范圍呈繼續(xù)擴(kuò)大之勢。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，從2003年到現(xiàn)在，僅亞洲各國死亡或淘汰的禽只總數(shù)大約，15億只，全球已有超過1000人感染禽流感，因患禽流感死亡的人數(shù)已接近700人。當(dāng)前，已開發(fā)出多種治療禽流感的藥物，并制定出許多可行防控方案，且取得顯著效果。但禽流感病毒在傳染過程中，不斷發(fā)生變異，使許多之前的有效防控方案失效。本發(fā)明所提供的卵黃抗體含多種抗體，對多種禽流感毒株所引起的感染有效，可降低因?yàn)槎局曜儺惗鴮?dǎo)致防控失敗的機(jī)率。當(dāng)前卵黃抗體提取純化方法有乙二醇提取法、氯仿提取法、辛酸萃取法、鹽析法等，這些方法收率低、雜蛋白多、產(chǎn)品活性低。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種能有效防控禽流感的新型卵黃抗體以及精制生產(chǎn)工藝和用途。本發(fā)明采用提取純化方法，能最大限度將卵黃抗體從雜蛋白中分離出來，且純化濃縮過程不會對卵黃抗體產(chǎn)生破壞作用，不影響產(chǎn)品生物活性。一種新型卵黃抗體及其制備方法，其生產(chǎn)過程如下
1、挑選高品質(zhì)蛋雞雞苗進(jìn)行凈化飼養(yǎng)，為生產(chǎn)免疫蛋做準(zhǔn)備；
2、產(chǎn)蛋期開始后，給蛋雞按一定程序人工免疫特定抗原H5或H7、H9型禽流感弱化疫
苗；
3、收集免疫雞蛋并保存，為提取卵黃抗體做準(zhǔn)備；
4、收集蛋黃
按1:10的比例加入蒸餾水并攪拌30分鐘，配成均勻蛋黃液。調(diào)節(jié)蛋黃液PH值到5. 0，8°C靜置12小時，回收上清液；
5、將含卵黃抗體的蛋黃上清液進(jìn)行雙效超濾濃縮，收集卵黃抗體濃縮
將回收的卵黃上清液通過O. 45 μ m和O. 22 μ m的串聯(lián)過濾系統(tǒng)過濾，再將過濾液以
3.5L/min的流速經(jīng)過截留分子量分別為160KD和200KD的雙效超濾系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，待濃縮、液體積為1/20時回收濃縮液；
6、將卵黃濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，制成凍干粉
將回收的卵黃上清液通過0.45iim和0.22iim的串聯(lián)過濾系統(tǒng)過濾，再將過濾液以3. 5L/min的流速經(jīng)過截留分子量分別為160KD和200KD的雙效超濾系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，待濃縮液體積為1/20時回收濃縮液；
7、利用卵黃抗體凍干粉配制臨床適用的卵黃抗體制品
檢測卵黃濃縮液中抗體含量，分別按2. 5%,20%的含量加入普朗尼克、可溶性淀粉，混合均勻后無菌分裝到滅菌西林瓶，-40°C冷凍干燥，制成卵黃抗體凍干粉制劑。本方法利用蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)特性，通過沉降法將卵黃抗體與雜蛋白有效分離，且在純化濃縮過程中不破壞卵黃抗體的空間結(jié)構(gòu)，充分保護(hù)了卵黃抗體的生物活性。所生產(chǎn)的卵黃抗體純度高、活性強(qiáng)。本發(fā)明所提供的卵黃抗體含多種抗體，用于檢測、預(yù)防和治療多類禽流感病毒感染，以及由毒株變異而引起的禽流感免疫失敗。
實(shí)施例I :蛋雞的免疫
選擇健康蛋雞，在170日齡時進(jìn)行首免H5、H7、H9型禽流感弱化疫苗，接種方式為胸肌多點(diǎn)注射。并分別在首免14天和28天時進(jìn)行強(qiáng)化免疫。強(qiáng)化免疫后7天開始檢測免疫雞蛋中卵黃抗體水平，合格后開始收集免疫雞蛋。2:卵黃抗體的提取
使用蛋黃篩將蛋黃從免疫雞蛋中分離，按1:10的比例加入蒸餾水并攪拌30分鐘，配成均勻蛋黃液。調(diào)節(jié)蛋黃液PH值到5.0，8°C靜置12小時，回收上清液。3:卵黃抗體的純化
將回收的卵黃上清液通過0.45iim和0.22iim的串聯(lián)過濾系統(tǒng)過濾，再將過濾液以
3.5L/min的流速經(jīng)過截留分子量分別為160KD和200KD的雙效超濾系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，待濃縮液體積為1/20時回收濃縮液。4:卵黃抗體的干燥
檢測卵黃濃縮液中抗體含量，分別按2. 5%,20%的含量加入普朗尼克、可溶性淀粉，混合均勻后無菌分裝到滅菌西林瓶，-40°C冷凍干燥，制成卵黃抗體凍干粉制劑。以上實(shí)施例僅為了對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，而本發(fā)明的范圍不受所舉實(shí)施例的局限。部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告
一種新型卵黃抗體精制工藝及其用途的試驗(yàn)報(bào)告
選用臨床診斷為溫和性禽流感的病雞4200只，隨機(jī)挑選40只最為空白對照，其余平均分為A、B兩組。網(wǎng)上平養(yǎng)，保持干凈，及時通風(fēng)，做好記錄。飼料參考NRC肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，配制基礎(chǔ)日糧，自由采食，自由飲水，統(tǒng)一管理。A組添加本卵黃抗體凍干粉制劑，按1:100的比例兌水飲用；B組為黃芪多糖注射液(抗病毒I號注射液)，按每50ml兌水Ikg自由飲用；C組為空白對照組。表1A、B、C三組治療對比試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種新型卵黃抗體及其制備方法，其生產(chǎn)過程如下 (1)、挑選高品質(zhì)蛋雞雞苗進(jìn)行凈化飼養(yǎng)，為生產(chǎn)免疫蛋做準(zhǔn)備； (2)、產(chǎn)蛋期開始后，給蛋雞按一定程序人工免疫特定抗原H5或H7、H9型禽流感弱化疫苗； (3)、收集免疫雞蛋并保存，為提取卵黃抗體做準(zhǔn)備； (4)、收集蛋黃 按1:10的比例加入蒸餾水并攪拌30分鐘，配成均勻蛋黃液， 調(diào)節(jié)蛋黃液PH值到5.0，8°C靜置12小時，回收上清液； (5)、將含卵黃抗體的蛋黃上清液進(jìn)行雙效超濾濃縮，收集卵黃抗體濃縮 將回收的卵黃上清液通過0.45μπι和0.22μπι的串聯(lián)過濾系統(tǒng)過濾，再將過濾液以3. 5L/min的流速經(jīng)過截留分子量分別為160KD和200KD的雙效超濾系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，待濃縮液體積為1/20時回收濃縮液； (6)、將卵黃濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，制成凍干粉 將回收的卵黃上清液通過O. 45μπι和O. 22 μ m的串聯(lián)過濾系統(tǒng)過濾，再將過濾液以3.5L/min的流速經(jīng)過截留分子量分別為160KD和200KD的雙效超濾系統(tǒng)進(jìn)行濃縮，待濃縮液體積為1/20時回收濃縮液； (7)、利用卵黃抗體凍干粉配制臨床適用的卵黃抗體制品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述一種新型卵黃抗體，可將卵黃抗體制成粉劑、溶液劑、噴霧劑、注射液、注射用凍干粉等臨床適用劑型。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新型卵黃抗體及其制備方法屬于業(yè)獸用生物制品領(lǐng)域，本發(fā)明旨在提供一種能有效防控禽流感的新型卵黃抗體以及精制生產(chǎn)工藝和用途。本發(fā)明采用提取純化方法，能最大限度將卵黃抗體從雜蛋白中分離出來，且純化濃縮過程不會對卵黃抗體產(chǎn)生破壞作用，不影響產(chǎn)品生物活性；其方法包括蛋雞的免疫、卵黃抗體的提取、卵黃抗體的純化和卵黃抗體的干燥。所提供卵黃抗體主要用于檢測、預(yù)防和治療多類禽流感病毒感染，以及因?yàn)槎局曜儺惗鸬那萘鞲忻庖呤 ?br>
文檔編號C07K16/02GK102617732SQ201210071010
公開日2012年8月1日 申請日期2012年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月19日
發(fā)明者劉易通, 李振天, 王慶福 申請人:廣東紫金正天藥業(yè)有限公司