專利名稱：高純度氯化兩面針堿的制備及其質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種天然藥物領(lǐng)域，具體涉及一種高純度氯化兩面針堿的制備及其質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
兩面針(Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC.),屬蕓香科兩面針植物的干燥根,是我國南方的特有植物，是《中華人民共和國藥典》收載的常用中藥，為廣西大宗主產(chǎn)優(yōu)勢藥材之一，具有良好的行氣止痛、活血化瘀、祛風(fēng)通絡(luò)作用，是醫(yī)藥家首選常用之藥物，廣泛應(yīng)用于中醫(yī)處方、中成藥及精細(xì)化工產(chǎn)品中。近年來年需求量日益增加，使用兩面針?biāo)幉淖髟系漠a(chǎn)品有全國著名品牌“兩面針中藥牙膏”、“三九胃泰”、“金雞膠囊”、“復(fù)方兩面針含片”、“兩面針鎮(zhèn)痛片”、“正骨水”、“中華跌打丸”、“活絡(luò)止痛丸”等多個品種。兩面針為廣西特色藥材，其性味辛、苦、微溫，小毒，具有祛風(fēng)通絡(luò)、勝濕止痛、消腫解毒等作用，現(xiàn)代研究證明兩面針具有消腫止痛、抗菌等活性，對于心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)以及平滑肌等都有顯著的藥理作用；同時又在抗癌方面有開發(fā)價值。廣西兩面針產(chǎn)業(yè)年銷售收入曾達(dá)10多億元，兩面針產(chǎn)品已成為振興地方經(jīng)濟(jì)的特色產(chǎn)業(yè)之一。氯化兩面針堿是兩面針活性成分之一，是《中華人民共和國藥典》規(guī)定的指標(biāo)性成分，氯化兩面針堿作為兩面針及其產(chǎn)品的化學(xué)對照品，是質(zhì)量控制的技術(shù)關(guān)鍵，眾多企業(yè)、科研和檢驗(yàn)部門都需要高純度的氯化兩面針堿對照品，其市場需求很大，由于氯化兩面針堿在兩面針?biāo)幉闹械暮亢艿?，提取分離技術(shù)要求很高、難度很大。本發(fā)明進(jìn)行氯化兩面針堿中藥化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品制備及其質(zhì)量控制技術(shù)，解決高純度氯化兩面針堿化學(xué)對照品的問題，對中藥現(xiàn)代化的作用是顯而易見的，具有重大的實(shí)際意義和學(xué)術(shù)價值。公開文獻(xiàn)報道了許多氯化兩面針堿提取的方法，如:1.題名陽離子樹脂純化兩面針中氯化兩面針堿作者盧凌春方琳喬龍盛京，廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院刊名時珍國醫(yī)國藥，2010,21 (11):2779 - 2781.`文摘目的篩選富集純化氯化兩面針堿的最佳樹脂及最佳工藝。方法通過靜態(tài)吸附-解吸的方法，以氯化兩面針堿和總生物堿的吸附率和解吸率為指標(biāo)，綜合評判確定最佳純化工藝。結(jié)果Ls006樹脂對氯化兩面針堿的分離效果最好。通過Ls006樹脂分離純化后，終產(chǎn)品中氯化兩面針堿的純度大于90%，保留率達(dá)到56.84%。結(jié)論采用Ls006陽離子樹脂分離純化兩面針中氯化兩面針堿，操作簡單，純化效果突出。
2.題名正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選兩面針的提取工藝作者雷鵬劉韶李新中戴智勇黃曉亮，中南大學(xué)湘雅學(xué)院刊名中醫(yī)藥導(dǎo)報，2005，11 (5):71-74.文摘采用正交實(shí)驗(yàn)法，以氯化兩面針堿轉(zhuǎn)移率為評價指標(biāo)，對兩面針的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。發(fā)現(xiàn)用水提取兩面針，氯化兩面針堿的轉(zhuǎn)移率相當(dāng)?shù)?，不?0%，而用乙醇提取，氯化兩面針堿的轉(zhuǎn)移率可達(dá)70%，故確定提取溶媒用乙醇。選擇乙醇濃度、溶媒用量、提取時間3個因素，每個因素設(shè)3個水平。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，最佳提取工藝條件為兩面針?biāo)幉挠?0%乙醇提取兩次，第一次9倍量，提取2h，第二次7倍量，提取1.5h。3.題名兩面針提取工藝研究作者呂潔盧曉慧黃韻然梁美宜周毅生，廣東藥學(xué)院刊名廣東藥學(xué)院學(xué)報，2011,27 (2):133 — 136.文摘目的優(yōu)選兩面針?biāo)幉牡淖罴烟崛」に?。方法采用正交試?yàn)，以乙醇體積分?jǐn)?shù)、乙醇用量、提取次數(shù)、和提取時間作為優(yōu)選因素，以出膏率和氯化兩面針堿轉(zhuǎn)移率為綜合指標(biāo)，確定合理的醇提取工藝。結(jié)果最佳提取工藝條件是:乙醇體積分?jǐn)?shù)是70%，乙醇用量為8倍，提取4次，每次1.5h。結(jié)論優(yōu)化得到的提取工藝穩(wěn)定可行，為生產(chǎn)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。題名兩面針抗腫瘤有效成分的研究作者黃治勛李志和，廣西醫(yī)藥研究所刊名化學(xué)學(xué)報，1980，38 (6):535 — 542.文摘兩面針根用95%乙醇在60°C溫提取四次，每次4h，過濾，合并濾液，減壓回收乙醇得浸膏。此膏用5%乙酸反復(fù)捏溶，靜置濾液，析出沉淀，減壓濾去沉淀，沉淀用95%乙醇洗滌，得青黃色沉淀。將此沉淀溶于溫水中，氨水氨化，氯仿萃取。回收氯仿，殘留物溶于鹽酸中，放置一段時間析出粗結(jié)晶。將粗結(jié)晶溶于熱甲醇，活性碳脫色，水浴回流后趁熱過濾，濾液置·于60°C保溫瓶中結(jié)晶，析出黃色針狀結(jié)晶。濾取結(jié)晶，經(jīng)甲醇重結(jié)晶，得氯化兩面針堿，得率為0.149%。題名兩面針化學(xué)成分的研究1:具有抗癌活性生物堿的分離和生物堿丙的結(jié)構(gòu)研究作者王馨玫刊名中山醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1980，
I(4):342.文摘用甲醇熱回流提取，減壓回收甲醇得浸膏。用氯仿反復(fù)研磨浸膏，所得沉淀用甲醇溶解，加鹽酸至PH為2，放置后析出淡綠色針狀結(jié)晶，為氯化兩面針堿，得率為
0.2% — 0.3%ο目前雖然人們研究提取氯化兩面針堿的方法較多，各種方法不一樣，但是很多提取氯化兩面針堿的方法存在著純度低、收率低或生產(chǎn)成本高的不足之處，純度均未達(dá)到中藥化學(xué)對照品的要求，即純度大于98%，且沒有氯化兩面針堿純度與質(zhì)量控制方法，無法滿足高純度氯化兩面針堿化學(xué)對照品的需要。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的正是針對上述現(xiàn)有技術(shù)中所存在的不足而專門研制的一種高純度氯化兩面針堿的制備方法及質(zhì)量控制方法，該制備方法不僅能提高氯化兩面針堿純度，且能降低生產(chǎn)成本，得到的氯化兩面針堿純度大于98%、質(zhì)量好，可以作為化學(xué)對照品或標(biāo)準(zhǔn)品，保證質(zhì)量控制。本發(fā)明是從蕓香科花椒屬植物兩面針(Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC.)的干燥根中經(jīng)提取、分離、精制、純化而制得的氯化兩面針堿，其化學(xué)名、分子式、結(jié)構(gòu)式如下:
中文名:氯化兩面針堿
化學(xué)名:2，3—二甲氧基一12 —甲基一(1,3)—苯并二惡茂并(5,6 — C)菲唳氯化物(2，3-dimethoxy-12-methyl-[I, 3]benzodioxolo[5, 6-c]phenanthridin-12_iumchloride)
英文名:Nitidine chloride 分子式=C21H18NO4Cl 結(jié)構(gòu)式:
權(quán)利要求
1.一種高純度氯化兩面針堿制備方法，其特征在于:包括以下工藝過程:以粉碎后的兩面針根為原料，加酸性乙醇溶液回流提取三次，第一次加酸性乙醇10 - 15倍量，加熱回流2 — 5小時；第二次和第三次加酸性乙醇5 - 8倍量，分別加熱回流2 - 5小時；合并酸醇提取液，回收乙醇，繼續(xù)濃縮至稠膏狀，用氯仿反復(fù)研磨，所得沉淀用甲醇溶解，加鹽酸至pH調(diào)節(jié)為2 - 3，放置后析出淡黃綠色針狀結(jié)晶，用甲醇重結(jié)晶，即可得到氯化兩面針堿粗結(jié)晶，再用甲醇溶解，超聲30 - 60分鐘，加熱至80 - 100°C，趁熱過濾，濾液放冷，靜置24小時重結(jié)晶，析出純度90 - 95%淡黃色細(xì)針狀結(jié)晶，再將粗結(jié)晶用制備高效液相色譜法分尚純化，色譜柱為C 一 18柱，利用乙臆一 0.1% 二氟乙酸為流動相洗脫，流速為5 — 10 mL/min，檢測波長為271nm，柱溫為25 — 35 V ;收集氯化兩面針堿組分，并對所收集的每一份洗脫液利用HPLC檢測，合并保留時間相同而且純度在90% - 98%之間和純度大于98%以上的氯化兩面針堿組分，減壓濃縮，得到純度90% - 98%之間以及大于98%以上的氯化兩面針堿； 所述的酸性乙醇的鹽酸重量含量為10 - 30%鹽酸，乙醇重量含量為40 - 80%, pH=3 一4。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度氯化兩面針堿制備方法，其特征在于:所述的乙腈一0.1%三氟乙酸流動相洗脫重量配比為20:80 40:60。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度氯化兩面針堿制備方法，其特征在于:所述的HPLC檢測為:色譜柱:C 一 18柱；流動相:乙腈:0.1%三氟乙酸；檢測波長:271nm ;流速:0.6 mL/min 1.5mT,/mi η η
4.一種高純度氯化兩面針堿的質(zhì)量控制方法，其特征在于:采用薄層色譜分析方法和HPLC分析方法。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高純度氯化兩面針堿的質(zhì)量控制方法，其特征在于:所述的薄層色譜分析方法是:薄層板:硅膠G — 0.8%羧甲基纖維素鈉，三種展開劑系統(tǒng):系統(tǒng)(I)氯仿-甲醇比例(12:1 - 6:1);系統(tǒng)(2)氯仿-乙醇比例(10:1 - 5:1);系統(tǒng)(3)乙酸乙酯-乙醇比例(15:1 — 8:1),點(diǎn)樣:在同一板上，按20mg、40mg、60mg、80mg、IOOmg不同的濃度梯度點(diǎn)樣，置展開缸飽和15min,分別展開,展距:15cm,定位:噴以10%硫酸乙醇溶液,在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光(365nm)下檢視，在薄層色譜中，三種展開劑系統(tǒng)，五個不同濃度的梯度點(diǎn)樣，均為單一斑點(diǎn)，未見雜質(zhì)斑點(diǎn)。
6.根據(jù)權(quán)利要求4和5所述的高純度氯化兩面針堿的質(zhì)量控制方法，其特征在于:所述的HPLC分析方法:色譜條件:C - 18柱，4.6X 25cm ;流速:0.6-1.5ml/min ;進(jìn)樣量:，10 - 20ml ;面積歸一化法定量；系統(tǒng)(I)流動相:乙腈:0.1%三氟乙酸溶液比例(33:67 —，20:80);檢測波長:27Inm;系統(tǒng)(2)流動相:乙腈:0.1%三氟乙酸比例(33:67 - 20:80)；檢測波長:254nm;系統(tǒng)條件(3)流動相:甲醇:0.1%三氟乙酸比例(50:50 — 30:70);檢測波長:27 Inm ； 含量與純度測定:精密稱取于105°C干燥至恒重的對照品適量，加流動相制成每Iml含Img的溶液，在測定條件下，注入液相色譜儀，用兩個流動相溶劑系統(tǒng)分別記錄色譜圖至主成分的出峰保留時間的2.5倍以上，用面積歸一化法計(jì)算含量，結(jié)果測定對照品含量均在，98%以上.雜質(zhì)檢查，除溶劑峰外，雜質(zhì)峰面積總和結(jié)果均小于2.0% ； 所述的峰純度檢測:取對照品適量，按系統(tǒng)(1)，在高效液相色譜儀上，用二極管陣列DAD檢測器進(jìn)行峰純度檢查，HPLC色譜圖(>98%)，其色譜峰的紫外吸收光譜圖、三維圖譜以及5點(diǎn)光譜圖完全重 合，表明為單一純物質(zhì)峰。
全文摘要
一種高純度氯化兩面針堿的制備及其質(zhì)量控制方法，其特征在于是先將兩面針根粉碎，用酸性乙醇加熱回流提取，乙醇提取物經(jīng)氯仿反復(fù)研磨，所得沉淀用甲醇溶解，鹽酸調(diào)pH，重結(jié)晶，得到氯化兩面針堿粗結(jié)晶，再用甲醇重結(jié)晶，進(jìn)一步提高純度，用反相硅膠C－18柱制備高效液相色譜法分離，對所收集的每一份洗脫液利用分析型高效液相色譜儀檢測，合并保留時間相同而且純度在90%～98%之間和98%以上的氯化兩面針堿組分，減壓濃縮，即可分別得到純度在90%～98%之間的氯化兩面針堿和純度大于98%的氯化兩面針堿組分，并采用薄層色譜分析方法和液相色譜分析方法進(jìn)行質(zhì)量控制。該方法不僅能提高氯化兩面針堿純度，而且能降低生產(chǎn)成本。
文檔編號C07D491/056GK103087070SQ20121004070
公開日2013年5月8日 申請日期2012年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月22日
發(fā)明者劉布鳴, 黃艷, 賴茂祥, 莫建光, 柴玲, 林霄, 陳明生 申請人:廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院