專利名稱：一種從蜂花粉中提取核酸及純化的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種從蜂花粉中提取核酸及純化的方法。本產(chǎn)品所用原料蜂花粉來自大興安嶺的原始森林之中。這里地處北緯50度一 53度之間，是一塊天然凈土，晝夜溫差大，適合山野花的生長。這里植被繁茂，物種豐富。在8.4萬平方公里的土地上，有上千種野生植物，其中:蜜、粉、膠源植物有5.985萬畝，蜂產(chǎn)品年儲(chǔ)量可達(dá)84萬噸。本產(chǎn)品原料都符合歐盟有機(jī)食品認(rèn)證組織有機(jī)食品生產(chǎn)、加工標(biāo)準(zhǔn)，是安全的功能性營養(yǎng)食品。
背景技術(shù)：
蜂花粉是由許許多多橢圓形的蜂花粉團(tuán)組成，其主要組成物質(zhì)是蜂花粉粒。蜂花粉粒是植物精華之所在， 它包含著孕育一個(gè)新生命的全部營養(yǎng)物質(zhì)，所以被人們譽(yù)為“濃縮的營養(yǎng)庫” “濃縮的微型天然藥劑” “完全營養(yǎng)食品”等，蜂花粉的營養(yǎng)成分主要集中在蜂花粉粒的內(nèi)含物中，目前已知含有200多種營養(yǎng)成分。蛋白質(zhì)、氨基酸類:蜂花粉中含有8% 40%的蛋白質(zhì)和氨基酸。蜂花粉中的蛋白質(zhì)平均含量大約為20%，它是生命的基本物質(zhì)。蜂花粉中含有20多種氨基酸，在某種意義上說是氨基酸的濃縮物質(zhì)，其中所含人體必需氨基酸約為牛肉、雞蛋的5 7倍。糖類:蜂花粉中的糖類物質(zhì)占25% 48%，主要包括葡萄糖、果糖和淀粉，還有纖維素和半纖維互等碳水化合物。其中最有開發(fā)前景的是蜂花粉多糖，它具有很強(qiáng)的免疫功能，具有明顯的防癌功效。脂類:蜂花粉中含脂類物質(zhì)5%左右，其中60% 91%為不飽和和脂肪酸，它為人體內(nèi)不能合成而又不可缺乏的營養(yǎng)成分，對(duì)大腦及神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育具有極為重要的作用。酶類:蜂花粉中有上百種酶和輔酶，是影響細(xì)胞代謝的重要物質(zhì)，參與人體中的一切生化過程，對(duì)營養(yǎng)成分的分解、合成、消化吸收起到催化作用，如超氧化物歧化酶(SOD)即有抗衰老作用。維生素類:蜂花粉中含有多種維生素，不僅種類十分齊全，而且含量很高，是天然維生素的濃縮物。主要有維生素A、B1' B2、B3、B4、B5、B6、B” C、D、E、P等。常量和微量元素:蜂花粉含有豐富的鈣、磷、氯、鉀、鈉、鎂、硫、硅等常量元素和鐵、碘、銅、鍶、鋅、錳、鉆、鑰、鉻、鎳、錫、硒、釩、鋁、鋇、鈦等多種微量元素。這些元素對(duì)維護(hù)和保持人體的生命活動(dòng)起著重要作用。核酸:蜂花粉中含有約2%的核酸，是人們公認(rèn)的富含核酸食物雞肝、蝦米的5 10倍。核酸的存在，大大提高了蜂花粉的醫(yī)療保健價(jià)值，可用于免疫功能低下和腫瘤病人的治療，因?yàn)楹怂嵊写龠M(jìn)細(xì)胞再生和延緩衰老的功能。黃酮類化合物:每100克蜂花粉中黃酮類化合物含量高達(dá)2549.9毫克，能起到抗動(dòng)脈硬化、降低膽固醇、解疼和抗輻射的作用。其它有效成分:蜂花粉中還含有一些激素，如促性腺激素、吲哚乙酸(生長素)、赤霉素、乙烯、色素、多種有機(jī)酸和一些尚未弄清的成分，有待進(jìn)一步分析研究。
總之，蜂花粉被營養(yǎng)學(xué)家譽(yù)為當(dāng)代世界的營養(yǎng)之冠，是人類的一個(gè)重要營養(yǎng)源。但是目前還沒有有效的開發(fā)和利用，直接食用或沖服，有效成分溶出量很少，人體吸收利用率很低，且部分人群還會(huì)產(chǎn)生過敏現(xiàn)象。因此開發(fā)蜂花粉高營養(yǎng)型產(chǎn)品是亟待解決的問題。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供使人體更多地吸收蜂花粉營養(yǎng)成分，解決核酸提取率不高，有害物質(zhì)殘留量大，應(yīng)用范圍不廣，日常膳食不能滿足人體需求的一種方法。本發(fā)明是以大興安嶺純天然有機(jī)苕條蜂花粉為原料，采用超細(xì)微粉碎、超聲萃取、離心分離、離子交換層析及真空冷凍干燥的技術(shù)相結(jié)合從蜂花粉中提取核酸及純化的一種方法。本發(fā)明的提取方法是:將經(jīng)過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進(jìn)行超細(xì)微粉碎，粒度達(dá)到20-60目，加入重量比1: 8-10的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻漿，通過差速離心法使細(xì)胞器分離，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1: 6-8的lmol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質(zhì)和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質(zhì)復(fù)合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉(zhuǎn)化為溶解度小的鉀鹽而同時(shí)沉淀，反復(fù)提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純?nèi)芤?，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質(zhì)。據(jù)《中華本草》記載:蜂花粉含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，是全面營養(yǎng)食品。食用蜂花粉對(duì)于快速消除疲勞、便秘、營養(yǎng)肌膚、美容養(yǎng)顏，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌具有明顯的保健作用。特別是對(duì)糖尿病、心腦血管疾病、腫瘤、前列腺炎還具有輔助治療作用。本發(fā)明是一種從蜂花粉中提取核酸的方法，其優(yōu)點(diǎn)在于:1、提取率高，可以達(dá)到40-50% ;2、生產(chǎn)周期短，成本相對(duì)較低，不添加有害的化學(xué)試劑，不會(huì)污染環(huán)境；3、應(yīng)用范圍廣，可以在食品、醫(yī)藥中添`加，補(bǔ)充人體日常膳食達(dá)不到每天約1500毫克的核酸量。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:本發(fā)明的提取方法是:將經(jīng)過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進(jìn)行超細(xì)微粉碎，粒度達(dá)到40-60目，加入重量比1: 8-10的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻漿，通過差速離心法使細(xì)胞器分離，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1: 6-8的lmol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質(zhì)和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質(zhì)復(fù)合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉(zhuǎn)化為溶解度小的鉀鹽而同時(shí)沉淀，反復(fù)提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純?nèi)芤?，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質(zhì)。實(shí)施例2:本發(fā)明的提取方法是:將經(jīng)過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進(jìn)行超細(xì)微粉碎，粒度達(dá)到20-40目，加入重量比1: 8-10的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻漿，通過差速離心法使細(xì)胞器分離，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1: 6-8的lmol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質(zhì)和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質(zhì)復(fù)合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉(zhuǎn)化為溶解度小的鉀鹽而同時(shí)沉淀，反復(fù)提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純?nèi)芤?，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質(zhì)。實(shí)施例3:本發(fā)明的提取方法是:將經(jīng)過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進(jìn)行超細(xì)微粉碎，粒度達(dá)到20-60目，加入重量比1: 10-12的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻漿，通過差速離心法使細(xì)胞器分離，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1: 6-8的lmol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質(zhì)和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質(zhì)復(fù)合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉(zhuǎn)化為溶解度小的鉀鹽而同時(shí)沉淀，反復(fù)提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純?nèi)芤?，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質(zhì) 。實(shí)施例4:本發(fā)明的提取方法是:將經(jīng)過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進(jìn)行超細(xì)微粉碎，粒度達(dá)到20-60目，加入重量比1: 6-8的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻漿，通過差速離心法使細(xì)胞器分離，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1: 6-8的lmol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質(zhì)和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質(zhì)復(fù)合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉(zhuǎn)化為溶解度小的鉀鹽而同時(shí)沉淀，反復(fù)提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純?nèi)芤?，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質(zhì)。實(shí)施例5:本發(fā)明的提取方法是:將經(jīng)過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進(jìn)行超細(xì)微粉碎，粒度達(dá)到20-60目，加入重量比1: 8-10的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻漿，通過差速離心法使細(xì)胞器分離，并在20-30千赫茲超聲20-30分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1: 8-9的lmol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲20-30分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質(zhì)和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質(zhì)復(fù)合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉(zhuǎn)化為溶解度小的鉀鹽而同時(shí)沉淀，反復(fù)提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純?nèi)芤?，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質(zhì)。實(shí)施例6:本發(fā)明的提取方法是:將經(jīng)過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進(jìn)行超細(xì)微粉碎，粒度達(dá)到20-60目，加入重量比1: 8-10的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻漿，通過差速離心法使細(xì)胞器分離，并在20-30千赫茲超聲40-50分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1: 5-6的lmol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲40-50分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質(zhì)和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質(zhì)復(fù)合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉(zhuǎn)化為溶解度小的鉀鹽而同時(shí)沉淀，反復(fù)提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純?nèi)芤?，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質(zhì)。`
權(quán)利要求
1.本發(fā)明屬于生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，其特征是一種采用超細(xì)微粉碎、超聲萃取、離心分離、離子交換層析及真空冷凍干燥的技術(shù)相結(jié)合從蜂花粉中提取核酸及純化的方法，提取率達(dá)到40-50%。具體是:將經(jīng)過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進(jìn)行超細(xì)微粉碎，粒度達(dá)到20-60目，加入重量比1: 8-10的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻衆(zhòng)，通過差速離心法使細(xì)胞器分離，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1: 6-8的lmol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質(zhì)和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質(zhì)復(fù)合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉(zhuǎn)化為溶解度小的鉀鹽而同時(shí)沉淀，反復(fù)提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純?nèi)芤?，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質(zhì)。
2.如權(quán)利要求1所述的 方法，其特征是在于除了蜂花粉之外，還可以用核酸含量高的糧食、菌類等原料，采用該方法制備核酸及純化。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，是一種從蜂花粉中提取核酸及純化的方法。本發(fā)明的具體提取方法是將經(jīng)過篩選、去雜、干燥后的蜂花粉冷凍進(jìn)行超細(xì)微粉碎，粒度達(dá)到20-60目，加入重量比1∶8-10的0.14mol/L氯化鈉溶液，勻漿，通過差速離心法使細(xì)胞器分離，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到DNA-蛋白，然后加入重量比1∶6-8的1mol/L氯化鈉溶液，勻漿，并在20-30千赫茲超聲30-40分鐘，使之裂解得到RNA-核蛋白，加入適量十二烷基磺酸鈉使蛋白質(zhì)和核酸分開，加入濃醋酸鉀，使十二烷基磺酸鈉-蛋白質(zhì)復(fù)合物沉淀，并使多余的十二烷基磺酸鈉轉(zhuǎn)化為溶解度小的鉀鹽而同時(shí)沉淀，反復(fù)提取，采用超離心或是離子交換層析的方法得到核酸純?nèi)芤?，采用真空冷凍干燥得到核酸純物質(zhì)。
文檔編號(hào)C07H1/08GK103102378SQ201110377240
公開日2013年5月15日 申請(qǐng)日期2011年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月15日
發(fā)明者徐春華, 孟慶生 申請(qǐng)人:大興安嶺綠源蜂業(yè)有限公司