專利名稱：倍半萜醉魚草定a的提取純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域，涉及倍半萜醉魚草定A的提取純化方法。
背景技術(shù)：
醉魚草定A(Buddledin Α),分子式為 C17H24O3,分子量 276. 38,mp. 94-95°C，為無色片晶，是從醉魚草科(Buddlejaceae)大葉醉魚草Buddleja davidii Franch.根皮和日本醉魚草^/i/i/ZeJa japonica Hemsl.根中分離得到的倍半萜化合物。藥理研究表明，醉魚草定A具有毒魚活性。李順舉等研究發(fā)現(xiàn)不同濃度的大葉醉魚草乙醇提取液對(duì)蝗蟲的喂毒強(qiáng)度不同，乙醇提取液濃度越高，作用越強(qiáng)烈，效果越好。目前，醉魚草定A主要采用常壓反復(fù)硅膠柱層析進(jìn)行分離，得率低，不但對(duì)操作人員人身造成危害，而且有毒溶劑消耗較大。中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?01010554164. 0公開的“一種醉魚草定A的制備方法”采用多級(jí)逆流萃取與大孔吸附樹脂柱層析結(jié)合制備醉魚草定A，該方法分離效果較差，產(chǎn)品純度較低。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在克服上述技術(shù)缺陷，提供一種分離效果好、收率高、產(chǎn)品純度好，適合工業(yè)化生產(chǎn)的醉魚草定A的提取純化方法。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案
倍半萜醉魚草定A的提取純化方法，其特征在于將大葉醉魚草用有機(jī)溶劑加熱提取后，減壓濃縮得粗提取物，將粗提取物懸溶于水，用2-3倍體積量的乙酸乙酯或乙醚萃取， 萃取3-6次，減壓濃縮得萃取有機(jī)溶劑層，取萃取有機(jī)溶劑進(jìn)行高壓硅膠柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，收集各洗脫部分，然后進(jìn)行薄層層析收集含醉魚草定A的組分，濃縮成浸膏后用甲醇分散，經(jīng)制備液相色譜進(jìn)行純化，甲醇-水或乙腈-水進(jìn)行洗脫，濃縮相應(yīng)組分，結(jié)晶即得。所述提取所用有機(jī)溶劑可選80-95%乙醇、甲醇、丙酮，提取方法可選回流或超聲提取。所述高壓硅膠柱的柱壓為2. 2-3. 3MPa，柱內(nèi)徑為150_250mm，層析柱徑高比為 1:12-20，硅膠目數(shù)為100-400目。所述制備液相流動(dòng)相中甲醇的體積百分比濃度為20-70%，乙腈的體積百分比濃度為 20-50%ο所述結(jié)晶溶劑為二氯甲烷-甲醇、石油醚-乙酸乙酯或二氯甲烷-乙酸乙酯組合中的任意一種。本發(fā)明的有益效果是
1、本發(fā)明方法通過提取、萃取、柱層析及制備液相分離、結(jié)晶等步驟制備醉魚草定A，耗時(shí)短，得率高，操作簡(jiǎn)單，易于工業(yè)化生產(chǎn)。2、使用特制高壓柱層析，上樣量大，周期短，分離度好，產(chǎn)品純度高。3、本發(fā)明為醉魚草定A的進(jìn)一步開發(fā)利用提供藥理原料、理論和實(shí)踐支持。
本發(fā)明內(nèi)容通過以下的實(shí)施例作進(jìn)一步的闡述，但并不限制本發(fā)明的范圍。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
取大葉醉魚草5kg按質(zhì)量比1:4加入85%的乙醇，80°C條件下加熱回流提取1. 5小時(shí)， 提取3次，過濾，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水懸溶于水，用乙醚(800ml)萃取6次，減壓濃縮得乙醚層85g，將乙醚層85g用甲醇溶解濕法上樣至填料200-300目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為2. 9MPa，柱內(nèi)徑為150mm，層析柱徑高比為1:18，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100:1、100:2、100:5、100:20洗脫，分段收集各流分，將含醉魚草定A流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，經(jīng)高效制備液相分離得到醉魚草定A粗品， 制備液相色譜條件是流動(dòng)相乙腈-水(45:55)，流速15ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm。將醉魚草定A粗品用石油醚-乙酸乙酯(5:1)進(jìn)一步結(jié)晶純化，得純度為98. 9%的無色結(jié)晶產(chǎn)品 15g。實(shí)施例2:
取大葉醉魚草5kg按質(zhì)量比1:6加入80%的丙酮，85 °C條件下加熱回流提取2小時(shí)，提取2次，過濾，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水懸溶于水，用乙酸乙酯 (1200ml)萃取4次，減壓濃縮得乙醚層83g，將乙醚層83g用甲醇溶解濕法上樣至填料 100-200目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為3. 3MPa，柱內(nèi)徑為250mm，層析柱徑高比為 1:20,以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100 1、1002、1005、10020洗脫，分段收集各流分，將含醉魚草定A流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，經(jīng)高效制備液相分離得到醉魚草定A粗品，制備液相色譜條件是流動(dòng)相甲醇-水(70:30)，流速20ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nmo將醉魚草定A粗品用二氯甲烷-甲醇(6 1)進(jìn)一步結(jié)晶純化，得純度為98. 7% 的無色結(jié)晶產(chǎn)品18g。實(shí)施例3:
取大葉醉魚草IOkg按質(zhì)量比1 4加入90%的乙醇，75°C條件下超聲提取1. 5小時(shí)，提取 3次，過濾，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水懸溶于水，用乙酸乙酯(2000ml) 萃取3次，減壓濃縮得乙醚層182g，將乙醚層182g用甲醇溶解濕法上樣至填料300-400目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為2. 2MPa，柱內(nèi)徑為200mm，層析柱徑高比為1:15，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100:1、100:2、100:5、100:20洗脫，分段收集各流分，將含醉魚草定A流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，經(jīng)高效制備液相分離得到醉魚草定A 粗品，制備液相色譜條件是流動(dòng)相甲醇-水(60:40)，流速35ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm。 將醉魚草定A粗品用石油醚-乙酸乙酯(3:1)進(jìn)一步結(jié)晶純化，得純度為98. 8%的無色結(jié)晶產(chǎn)品3知。實(shí)施例4:
取大葉醉魚草IOkg按質(zhì)量比1:5加入95%的甲醇，80°C條件下超聲提取1小時(shí)，提取 2次，過濾，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水懸溶于水，用乙醚(1600ml)萃取5 次，減壓濃縮得乙醚層176g，將乙醚層176g用甲醇溶解濕法上樣至填料200-300目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為2. 6MPa，柱內(nèi)徑為220mm，層析柱徑高比為1:17，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100:1、100:2、100:5、100:20洗脫，分段收集各流分，將含醉魚草定A流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，經(jīng)高效制備液相分離得到醉魚草定A粗品，制備液相色譜條件是流動(dòng)相乙腈-水(27:73)，流速50ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm。將醉魚草定A粗品用二氯甲烷-乙酸乙酯(4:1)進(jìn)一步結(jié)晶純化，得純度為98. 6%的無色結(jié)晶產(chǎn)品 36g。
權(quán)利要求
1.倍半萜醉魚草定A的提取純化方法，其特征是將大葉醉魚草用有機(jī)溶劑加熱提取后，減壓濃縮得粗提取物，將粗提取物懸溶于水，用2-3倍體積量的乙酸乙酯或乙醚萃取， 萃取3-6次，減壓濃縮得萃取有機(jī)溶劑層，取萃取有機(jī)溶劑進(jìn)行高壓硅膠柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，收集各洗脫部分，然后進(jìn)行薄層層析收集含醉魚草定A的組分，濃縮成浸膏后用甲醇分散，經(jīng)制備液相色譜進(jìn)行純化，甲醇-水或乙腈-水進(jìn)行洗脫，濃縮相應(yīng)組分，結(jié)晶即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的倍半萜醉魚草定A的提取純化方法，其特征在于所述提取所用有機(jī)溶劑可選80-95%乙醇、甲醇、丙酮，提取方法可選回流或超聲提取。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的倍半萜醉魚草定A的提取純化方法，其特征在于所述高壓硅膠柱的柱壓為2. 2-3. 3MPa，柱內(nèi)徑為150_250mm，層析柱徑高比為1 12-20，硅膠目數(shù)為 100-400 目。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的倍半萜醉魚草定A的提取純化方法，其特征在于所述制備液相流動(dòng)相中甲醇的體積百分比濃度為20-70%，乙腈的體積百分比濃度為20-50%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的倍半萜醉魚草定A的提取純化方法，其特征在于所述結(jié)晶溶劑為二氯甲烷-甲醇、石油醚-乙酸乙酯或二氯甲烷-乙酸乙酯組合中的任意一種。
全文摘要
本發(fā)明涉及倍半萜醉魚草定A的提取純化方法，其特征是大葉醉魚草用有機(jī)溶劑提取后，減壓濃縮得粗提取物，將粗提取物懸溶于水，用乙酸乙酯或乙醚萃取，減壓濃縮得萃取有機(jī)溶劑層，取萃取有機(jī)溶劑進(jìn)行高壓硅膠柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，收集各洗脫部分，然后進(jìn)行薄層層析收集含醉魚草定A的組分，濃縮成浸膏后用甲醇分散，經(jīng)制備液相色譜進(jìn)行純化，甲醇-水或乙腈-水進(jìn)行洗脫，濃縮相應(yīng)組分，結(jié)晶即得。本發(fā)明制備方法簡(jiǎn)單，制備量大、收率高、產(chǎn)品純度好，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07C69/145GK102311340SQ201110187429
公開日2012年1月11日 申請(qǐng)日期2011年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月6日
發(fā)明者蘇劉花 申請(qǐng)人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司