專利名稱：一種牛蒡子苷的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然藥物的制備方法，具體的說是涉及牛蒡子苷(又名牛蒡子苷，英 文名Arctiin)的制備方法。
背景技術(shù)：
牛蒡(Arctium lappa L.)系菊科牛蒡?qū)僦参?，為傳統(tǒng)藥用植物，其果實(牛蒡 子)、葉和根入藥，牛蒡根在日本和歐洲兼作蔬菜。牛蒡子是一味常用的藥食兩用中藥，有 辛涼解表、疏風散熱和清熱解毒的功效，用于風熱感冒、咳嗽多痰和麻疹等癥，古代的中醫(yī) 藥文獻和歷版《中國藥典》均有記載，作為方劑成分用于治療風熱性感冒、咽喉腫痛、斑疹 不透、癰腫瘡毒等病癥。牛蒡子苷是牛蒡子中的一種主要活性物質(zhì)，其含量在牛蒡子中達 8. 4%左右，中國藥典(2005年版)牛蒡子項下規(guī)定牛蒡子苷的含量應(yīng)達到藥材質(zhì)量的5% 以上。藥理研究表明，牛蒡子苷具有顯著的抗腫瘤、抗病毒、抗氧化等生理活性，已引起人們 的廣泛重視。由于牛蒡子苷的含量比牛蒡子中的另一種活性成分牛蒡子苷元的含量高很 多，人們也利用化學(xué)水解和生物轉(zhuǎn)化的方法將牛蒡子苷轉(zhuǎn)化成所需的活性物質(zhì)。因此，牛蒡 子苷除了本身的藥物利用價值外，也是一種重要的藥物原料，
牛蒡子苷溶于水、乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯等多種溶劑。傳統(tǒng)的制備方法 是將其用有機溶劑提取而后進行多步的萃取和柱層析等過程，最后才得到純化的牛蒡子 苷。專利ZL 200610046797. 4報道了一種通過聚酰胺柱從牛蒡子提取物液中分離純化牛 蒡子苷及其苷元的方法，這種方法首先利用有機溶劑如石油醚脫脂，而后用高濃度的乙 醇(50-95% )提取，提取液再經(jīng)過過濾、減壓濃縮除去有機溶劑后過聚酰胺樹脂柱吸附和 解析。盡管經(jīng)過前述的多步提取分離過程，但最后得到的提取物中牛蒡子苷及苷元才為 40-95% ο Xiao Wang 等(Journal of Chromatography A 2005，1063，247)報道了一種利用 逆流色譜純化牛蒡子苷的方法，其所用的溶劑體系是乙酸乙酯_正丁醇_乙醇_水組成，體 積比為5 0.5 1 5。盡管這種溶劑可以制備出較純的牛蒡子苷，但對于連續(xù)的重復(fù)制 備，這種溶劑卻不容易被回收利用，增加了經(jīng)濟成本。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有牛蒡子苷分離制備過程中分離流程長、分離自動化程度 不高、所用溶劑系統(tǒng)不易回收利用等缺陷，而提供一種提取分離簡單、可連續(xù)化操化、溶劑 便于回收利用的制備高純度牛蒡子苷的方法。本發(fā)明的牛蒡子苷的制備方法，包括以下步驟(1)將牛蒡子粉碎后，放入水或質(zhì)量濃度0-40%的乙醇或質(zhì)量濃度0-40%的異丙 醇的水溶液中浸提或回流提取或超聲提取，水溶液的重量為牛蒡子重量的5-20倍；(2)將所得的提取液直接進入吸附柱進行吸附和富集，而后依次用水、質(zhì)量濃度 0-30 %的甲醇或乙醇和質(zhì)量濃度50 % -100 %的有機溶劑進行洗脫并收集洗脫液，減壓濃縮得到牛蒡子苷的流分；(3)將所得到的牛蒡子苷流分用單一有機溶劑_鹽的水溶液形成的兩相體系進行 逆流色譜分離，得到含鹽的牛蒡子苷流分；(4)將含鹽的牛蒡子苷流分直接用大孔吸附樹脂或離子交換樹脂吸附除去鹽，得 到牛蒡子苷。上述步驟(2)中所述的有機溶劑是乙醇、異丙醇、水飽和的乙酸乙酯或水飽和的
正丁醇。步驟(2)中所述的吸附柱是大孔吸附樹脂、具有大孔吸附特征的離子交換樹脂或 活性炭；大孔吸附樹脂優(yōu)選HP-20、HP100等大孔吸附樹脂。具有大孔吸附特征的離子交換 樹脂可以是CT151樹脂。步驟(3)中所述的單一有機溶劑-鹽的水溶液形成的兩相體系是乙酸乙酯-質(zhì)量 濃度1-15%氯化鈉水溶液或正丁醇-質(zhì)量濃度0. 5-5%氯化鈉水溶液體系。本發(fā)明的有益效果在于(1)本發(fā)明制備過程中得到的牛蒡子提取液可不經(jīng)濃縮而直接進行吸附柱吸附而 不影響回收率，節(jié)省了能耗，同時便于自動化生產(chǎn)；(2)當吸附有牛蒡子苷的色譜柱用水飽和的乙酸乙酯或水飽和的正丁醇進行洗脫 時，可良好地實現(xiàn)柱色譜和逆流色譜的連用，便于自動化生產(chǎn)；(3)采用單一有機溶劑_鹽的水溶液兩相體系進行逆流色譜分離，不僅可實現(xiàn)高 純度的逆流色譜制備，而且便于溶劑的回收和循環(huán)利用，這些溶劑本身都是綠色的環(huán)境友 好的溶劑體系，不會對生產(chǎn)環(huán)境產(chǎn)生不利的影響；(4)本發(fā)明制備過程可以在線連續(xù)進行，提高單位時間的生產(chǎn)效率，同時也降低能 耗；也可以重復(fù)進行，提高逆流色譜的利用率。
圖1是HPLC分析實例1中大孔吸附樹脂吸附后的各洗脫液的組分，(圖中，峰1為 牛蒡子苷)。其中圖(A)為水提取物；圖(B)為水洗脫液；圖(C)為質(zhì)量濃度30%乙醇洗脫 液；圖(D)為質(zhì)量濃度60%乙醇洗脫液；圖(E)為質(zhì)量濃度95%乙醇洗脫液。圖2是純化的牛蒡子苷的液相色譜分析，其中圖(A)為乙酸乙酯-8%氯化鈉鹽水 溶液體系；圖(B)為正丁醇-1%氯化鈉鹽水溶液體系。
具體實施例方式下面通過實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步的描述。實施例1將50g牛蒡子粉碎成60目的粗粉后，加10倍量的水回流提取2h兩次，合并濾液。將所得的提取液直接進入HP-20大孔吸附樹脂吸附柱進行吸附和富集，而后依 次用水、質(zhì)量濃度分別為30%、60%、95%乙醇四個梯度進行洗脫，洗脫液用高效液相色譜 (HPLC)進行分析。HPLC 檢測柱型號Zorbax SB-C18, 250mmX 4. 6mm I.D.，5μπι 和預(yù)柱型 號IOmmX4. 6mm I.D.，5μπι。分析條件為流動相為㈧甲醇，⑶質(zhì)量分數(shù)為0.5%的醋 酸。梯度洗脫在0-25分鐘內(nèi)，流動相(A)的體積分數(shù)從30%到90%;流動相(B)的體積分數(shù)從70%到10%。流速0.8毫升/分鐘；紫外光吸收波長280nm;柱溫30°C。結(jié)果表明 (如圖1)當用水和30%的乙醇洗脫時，牛蒡子苷不能洗出，直到用60%乙醇洗脫時才被洗 出，而當用95%乙醇洗脫時，洗出液僅含有極少量的牛蒡子苷。收集含牛蒡子苷的60 %乙 醇洗脫液，濃縮后作為進一步逆流色譜分離的樣品。將所得到的含牛蒡子苷的60%乙醇洗脫液用乙酸乙酯氯化鈉的水溶液的兩 相體系為溶劑體系進行逆流色譜分離，以乙酸乙酯為上相，8%氯化鈉的水溶液為下相。開啟(第一維)逆流色譜(900轉(zhuǎn)/分鐘，柱體積270mL)，進樣，待牛蒡子苷洗脫峰 開始出現(xiàn)時切換至(第二維)大孔吸附樹脂柱中進行樣品吸附和在線的脫鹽，出峰結(jié)束時 先用水沖洗兩個柱體積，并用質(zhì)量濃度95%乙醇溶液進行解析。收集質(zhì)量濃度95%乙醇洗 脫液，濃縮后得到牛蒡子苷(如圖2A)，該牛蒡子苷的純度為97. 9%。實施例2 將50g牛蒡子粉碎成60目的粗粉后，加15倍量的水回流提取2h兩次，合并濾液。將所得的提取液直接進入HP-20大孔吸附樹脂吸附柱進行吸附和富集，而后依次 用水、質(zhì)量濃度分別為30%、60%、95%甲醇四個梯度進行洗脫，洗脫液用HPLC進行分析。 HPLC 檢測柱型號Zorbax SB-C18, 250mmX 4. 6mm I. D.，5 μ m 和預(yù)柱型號IOmmX 4. 6mm I.D.，5μπι。分析條件為流動相為(A)甲醇，(B)質(zhì)量分數(shù)為0.5%的醋酸。梯度洗脫在 0-25分鐘內(nèi)，流動相(A)的體積分數(shù)從30 %到90 % ；流動相(B)的體積分數(shù)從70 %到10 %。 流速0. 8毫升/分鐘；紫外光吸收波長280nm ；柱溫30°C。收集含牛蒡子苷的60%甲醇 洗脫液，濃縮后作為進一步逆流色譜分離的樣品。將所得到的含牛蒡子苷的60%甲醇洗脫液用正丁醇-1%氯化鈉的水溶液的兩相 體系為溶劑體系進行逆流色譜分離，以正丁醇為上相，氯化鈉的水溶液為下相。開啟(第一維)逆流色譜(1000轉(zhuǎn)/分鐘，柱體積270mL)，進樣，待牛蒡子苷洗脫 峰開始出現(xiàn)時切換至(第二維)大孔吸附樹脂柱中進行樣品吸附和在線的脫鹽，出峰結(jié)束 時先用水沖洗兩個柱體積，并用質(zhì)量濃度95%乙醇溶液進行解析。收集質(zhì)量濃度95%乙醇 洗脫液，濃縮后得到牛蒡子苷(如圖2B)，該牛蒡子苷的純度為99. 0%。實施例3將50g牛蒡子粉碎成60目的粗粉后，加10倍量的水回流提取2h兩次，合并濾液。將所得的提取液直接進入HP-20大孔吸附樹脂吸附柱進行吸附和富集，先用水和 30%乙醇洗脫，再用水飽和的乙酸乙酯洗脫液，切換六通閥，將水飽和的乙酸乙酯洗脫液切 換至逆流色譜中的樣品環(huán)。將所得到的含牛蒡子苷的60%乙醇洗脫液用乙酸乙酯氯化鈉的水溶液的兩 相體系為溶劑體系進行逆流色譜分離，以乙酸乙酯為上相，6 %氯化鈉的水溶液為下相。開啟逆流色譜(900轉(zhuǎn)/分鐘，柱體積270mL)，進樣，待牛蒡子苷洗脫峰開始出現(xiàn) 時切換至大孔吸附樹脂柱中進行樣品吸附和在線的脫鹽，出峰結(jié)束時先用水沖洗兩個柱體 積，并用質(zhì)量濃度95%乙醇溶液進行解析。收集質(zhì)量濃度95%乙醇洗脫液，濃縮后得到牛 蒡子苷，其純度為98%。
權(quán)利要求
一種牛蒡子苷的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)將牛蒡子粉碎后，放入水或質(zhì)量濃度0-40％的乙醇或質(zhì)量濃度0-40％的異丙醇的水溶液中浸提或回流提取或超聲提取，水溶液的重量為牛蒡子重量的5-20倍；(2)將所得的提取液直接進入吸附柱進行吸附和富集，而后依次用水、質(zhì)量濃度0-30％的甲醇或乙醇和質(zhì)量濃度50％-100％的有機溶劑進行洗脫并收集洗脫液，減壓濃縮得到牛蒡子苷的流分；(3)將所得到的牛蒡子苷流分用單一有機溶劑-鹽的水溶液形成的兩相體系進行逆流色譜分離，得到含鹽的牛蒡子苷流分；(4)將含鹽的牛蒡子苷流分直接用大孔吸附樹脂或離子交換樹脂吸附除去鹽，得到牛蒡子苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛蒡子苷的制備方法，其特征在于步驟(2)所述的有機溶劑 是乙醇、異丙醇、水飽和的乙酸乙酯或水飽和的正丁醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛蒡子苷的制備方法，其特征在于步驟(2)所述的吸附柱是 大孔吸附樹脂、具有大孔吸附特征的離子交換樹脂或活性炭。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛蒡子苷的制備方法，其特征在于步驟(3)所述的單一有 機溶劑_鹽的水溶液形成的兩相體系是乙酸乙酯_質(zhì)量濃度1-15%氯化鈉水溶液或正丁 醇_質(zhì)量濃度0. 5-5%氯化鈉水溶液體系。
全文摘要
本發(fā)明公開的牛蒡子苷的制備方法，其步驟如下將牛蒡子粉碎用水或醇溶液提??；提取液直接進入吸附柱進行吸附和富集，而后依次用水和醇溶液進行洗脫，減壓濃縮得到牛蒡子苷的流分；將牛蒡子苷流分用單一有機溶劑-鹽的水溶液形成的兩相體系進行逆流色譜分離，得到含鹽的牛蒡子苷流分，然后用大孔吸附樹脂或離子交換樹脂吸附除去鹽，即可。本發(fā)明方法工藝簡單、可連續(xù)化操化、便于自動化；溶劑便于回收和循環(huán)利用，適應(yīng)于工廠化的規(guī)?；a(chǎn)。
文檔編號C07H15/26GK101863937SQ20101020098
公開日2010年10月20日 申請日期2010年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月11日
發(fā)明者吳世華, 郭夢喆 申請人:浙江大學(xué)