專利名稱：一種生產(chǎn)紫杉醇的工藝方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)紫杉醇的工藝方法，具體的說是一種適用于工業(yè)上大批量生 產(chǎn)紫杉醇的工藝方法。
背景技術(shù)：
紫杉醇作為治療晚期惡性癌癥的新途徑，單獨(dú)使用或與其它藥物聯(lián)合使用，可以 對(duì)卵巢癌、子宮頸癌、乳腺癌、睪丸胚胎癌、食管癌、肺癌、胃癌、喉癌等多種晚期癌癥有一定 的療效，效率為12% -30%。因此我們需要實(shí)現(xiàn)紫杉醇工業(yè)化的大批量生產(chǎn)以滿足臨床治 療的要求。目前，關(guān)于紫杉醇的提取純化方法有很多，但大多方法，單一使用效果不好，純度 不高。用單一的溶劑浸提方法，提取時(shí)間太長，提取物容易轉(zhuǎn)化。雖不少方法在實(shí)驗(yàn)室中效 果不錯(cuò)，但如何在大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)中，在滿足高生產(chǎn)效率和低生產(chǎn)成本的同時(shí)，保證高純 度還是亟待解決的問題。傳統(tǒng)方法把紅豆杉枝葉或者樹皮經(jīng)過高溫干燥后再提取，這樣大 大降低了回收率，造成資 源浪費(fèi)和成本升高。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述背景技術(shù)的不足之處，提供一種生產(chǎn)紫杉醇的工 藝方法，該方法能夠適用于工業(yè)上大批量生產(chǎn)紫杉醇，其簡單方便，回收率高，成本低，成品 含量高，使用本方法制備的紫杉醇含量> 99. 6%。本發(fā)明提供的一種生產(chǎn)紫杉醇的工藝方法，依次包括以下步驟(1)選取紅豆杉新鮮樹葉或樹皮；(2)對(duì)未經(jīng)干燥的新鮮樹葉或樹皮進(jìn)行有機(jī)溶劑低溫超聲萃取，獲取浸提液使 用V(乙酸乙酯)V(丙酮)=1 1的溶劑在20-30°C低溫超聲條件下進(jìn)行浸提；(3)用活性炭處理浸提液脫除色素在浸提液中加8%粉末活性炭220，密塞，振搖 15分鐘后放置70°C恒溫水浴鍋中脫色，過濾，除去濾渣，收集濾液；(4)用硅膠_氧化鋁層析柱分離純化步驟(3)中產(chǎn)生的濾液，洗脫速度控制在 l-3ml/分鐘，收集洗脫液；(5)抽濾洗脫液，真空減壓干燥得紫杉醇半成品；(6)將紫杉醇半成品經(jīng)TLC (薄層色譜法)檢測(cè)，紫杉醇的Rf值為0.58-0. 62，按 此分段，合并組分相同的流分，濃縮；(7)HPLC(高效液相色譜法)進(jìn)一步分離濃縮液，并測(cè)定其含量，得紫杉醇含量 彡99. 6%成品。在上述技術(shù)方案中，步驟⑷中所述的硅膠-氧化鋁層析柱為用堿性氧化鋁，流動(dòng) 相為含水0. 03%，甲醇1. 5%，即IOOml流動(dòng)相中，含水0. 03ml，含甲醇1. 5ml，其他為氧化
O在上述技術(shù)方案中，步驟(5)中真空減壓干燥的條件為溫度70°C，真空度93. 3-98. 6KPa。在上述技術(shù)方案中，步驟(6)中的TLC檢測(cè)方式為使用V(氯仿)V(甲醇)= 12 1的展開劑，V(茴香醛)V(硫酸)V(乙醇)=1:3: 50的顯色劑，放置干燥 箱內(nèi)烘干，在紫外檢測(cè)器下觀察。在上述技術(shù)方案中，步驟(7)中的HPLC分離測(cè)定方式為采用 250mmX4. 60mmX5iim 色譜柱 Pheno menex C18，流動(dòng)相為 V (甲醇)V(水)=65 35， 進(jìn)樣量10 u L，流量為0. 8ml/分鐘，檢測(cè)波長為227nm，柱溫25°C，采用外標(biāo)峰面積法進(jìn)行定
量分析。本發(fā)明方法與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)1.直接使用紅豆杉新鮮枝葉或者樹皮，不經(jīng)過干燥處理，能節(jié)約成本同時(shí)防止紫 杉烷類化合物的損失。2.萃取中使用超聲技術(shù)，大大縮短初級(jí)萃取的時(shí)間，僅需要0.5-1小時(shí)。而一般方 法所需時(shí)間長達(dá)24-48小時(shí)。3.在低溫條件下進(jìn)行浸提，避免了紫杉醇在高溫下轉(zhuǎn)化為其它物質(zhì)而回收率降 低。4.用活性炭處理浸提液脫除其中的色素，為后續(xù)分離工作減輕負(fù)擔(dān)。5.用硅膠_氧化鋁層析柱進(jìn)行分離純化，氧化鋁硅膠能夠使糖基化的紫杉醇轉(zhuǎn) 化為紫杉醇，從而增加紫杉醇的總量回收率大大提高，通過用氧化鋁除雜，使紫杉醇得到了 較好的富集，去除了大量葉綠素和其他脂溶性成分，減少了 HPLC中雜質(zhì)峰對(duì)紫杉醇峰的干 擾，同時(shí)減少了對(duì)色譜柱的污染。6.用真空減壓干燥紫杉醇，速度快，時(shí)間短，回收率高，避免紫杉醇在高溫下干燥 而轉(zhuǎn)化為其它物質(zhì)，同時(shí)還可以節(jié)約成本。說明書附1是本發(fā)明一種生產(chǎn)紫杉醇的工業(yè)方法的步驟流程圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖
和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明方法作進(jìn)一步的描述。本實(shí)施例提供的一種生產(chǎn)紫杉醇的工藝方法，依次包括以下步驟(1)直接用紅豆杉新鮮枝葉或者樹皮，不經(jīng)過干燥處理，用V(乙酸乙酯)V(丙 酮)=1 1在20-30°C低溫超聲條件下，浸提0.5-1小時(shí)。試驗(yàn)證明此條件下提取量最 高，效果為最好，同時(shí)，能大大縮短初級(jí)萃取的時(shí)間，節(jié)約成本，避免了紫杉醇在高溫下轉(zhuǎn)化 為其它物質(zhì)而造成回收率降低。由于直接使用新鮮枝葉或者樹皮，其中會(huì)富含較多的葉綠
o(2)用活性炭處理浸提液脫除色素在浸提液中加8%粉末活性炭220，密塞，振搖 15分鐘后放置恒溫水浴鍋中脫色，溫度70°C，時(shí)間30分鐘，過濾，除去濾渣，收集濾液。采 用上述方法可有效去除步驟(1)中因使用新鮮枝葉或者樹皮產(chǎn)生的較多葉綠素。脫色后的 溶液采用定性濾紙過濾，以蒸餾水作為空白對(duì)照，用分光光度計(jì)在波長420nm下測(cè)定脫色 后的溶液透光率，透光率可達(dá)92.8%，脫色效果較好。(3)用硅膠_氧化鋁層析柱分離純化步驟(2)中產(chǎn)生的濾液用堿性氧化鋁，流動(dòng)相中含水0. 03%,甲醇1.5%即IOOml流動(dòng)相中，含水0. 03，含甲醇1.5，其他為氧化鋁，反 應(yīng)時(shí)間在30分鐘左右，其洗脫速度控制在l_3ml/分鐘之間時(shí)效果最好，紫杉醇的回收率可 達(dá)到170%，收集洗脫液。通過用氧化鋁除雜，使紫杉醇得到了較好的富集，去除了大量葉綠 素和其他脂溶性成分，減少了 HPLC中雜質(zhì)峰對(duì)紫杉醇峰的干擾，同時(shí)減少了對(duì)色譜柱的污
^fe ο(4)抽濾洗脫液，真空減壓干燥，獲得紫杉醇半成品，條件為溫度70°C，真空度 93. 3-98. 6KPa (700-740mmHg)烘數(shù)小時(shí)。(5)將紫杉醇半成品經(jīng)TLC檢測(cè)，分段合并濃縮將抽濾真空減壓干燥得到的紫 杉醇半成品，4°C低溫離心后棄上清，沉淀溶解在甲醇中進(jìn)行薄層板點(diǎn)樣檢測(cè)，使用V(氯 仿)V (甲醇)=12 1的展開劑，V (茴香醛)V (硫酸)V (乙醇)=1 3 50的 顯色劑，放置干燥箱內(nèi)烘干，10分鐘后在紫外檢測(cè)器下觀察，紫杉醇的Rf值為0. 58-0. 62， 按此分段，合并組分相同的流分，濃縮。(6)HPLC進(jìn)一步分離濃縮液，并測(cè)定其含量，得紫杉醇含量彡 99. 6%成品其條件 為采用250mmX 4. 60mmX5 μ m色譜柱Phenomenex C18，流動(dòng)相為V(甲醇)V(水)= 65 35，進(jìn)樣量10 μ L，流量為0. 8ml/分鐘，檢測(cè)波長為227nm，柱溫25°C，采用外標(biāo)峰面積 法進(jìn)行定量分析。
權(quán)利要求
一種生產(chǎn)紫杉醇的工藝方法，該方法依次包括以下步驟(1)選取紅豆杉新鮮樹葉或樹皮；(2)對(duì)未經(jīng)干燥的新鮮樹葉或樹皮進(jìn)行有機(jī)溶劑低溫超聲萃取，獲取浸提液使用V(乙酸乙酯)∶V(丙酮)＝1∶1的溶劑在20-30℃低溫超聲條件下進(jìn)行浸提；(3)用活性炭處理浸提液脫除色素在浸提液中加8％粉末活性炭220，密塞，振搖15分鐘后放置70℃恒溫水浴鍋中脫色，過濾，除去濾渣，收集濾液；(4)用硅膠-氧化鋁層析柱分離純化步驟(3)中產(chǎn)生的濾液，洗脫速度控制在1-3ml/分鐘，收集洗脫液；(5)抽濾洗脫液，真空減壓干燥得紫杉醇半成品；(6)將紫杉醇半成品經(jīng)TLC檢測(cè)，紫杉醇的Rf值為0.58-0.62，按此分段，合并組分相同的流分，濃縮；(7)HPLC進(jìn)一步分離濃縮液，并測(cè)定其含量，得紫杉醇含量≥99.6％成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種生產(chǎn)紫杉醇的工藝方法，其特征是步驟(4)中所述的硅 膠-氧化鋁層析柱為用堿性氧化鋁，流動(dòng)相為含水0. 03%,甲醇1. 5%，即IOOml流動(dòng)相中， 含水0. 03ml，含甲醇1.5ml，其他為氧化鋁。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種生產(chǎn)紫杉醇的工藝方法，其特征是步驟(5)中真空減壓 干燥的條件為溫度70°C，真空度93. 3-98. 6KPa。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種生產(chǎn)紫杉醇的工藝方法，其特征是步驟(6)中的TLC檢 測(cè)方式為使用V(氯仿)V(甲醇)=12 1的展開劑，V(茴香醛)V(硫酸)V(乙 醇)=1 3 50的顯色劑，放置干燥箱內(nèi)烘干，在紫外檢測(cè)器下觀察。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種生產(chǎn)紫杉醇的工藝方法，其特征是步驟(7)中的HPLC 分離測(cè)定方式為采用250mmX4. 60mmX5ym色譜柱Pheno menex C18，流動(dòng)相為V(甲 醇)V(水)=65 35，進(jìn)樣量10yL，流量為0.8ml/分鐘，檢測(cè)波長為227nm，柱溫25°C， 采用外標(biāo)峰面積法進(jìn)行定量分析。
全文摘要
一種生產(chǎn)紫杉醇的工藝方法，該方法包括以下步驟選取紅豆杉新鮮樹葉或樹皮；對(duì)未經(jīng)干燥的新鮮樹葉或樹皮進(jìn)行有機(jī)溶劑低溫超聲萃取，獲取浸提液；用活性炭處理浸提液脫除色素，過濾，除去濾渣，收集濾液；用硅膠-氧化鋁層析柱分離純化上述濾液，收集洗脫液；抽濾洗脫液，真空減壓干燥得紫杉醇半成品；將紫杉醇半成品經(jīng)TLC檢測(cè)，合并組分相同的流分，濃縮；HPLC進(jìn)一步分離濃縮液，并測(cè)定其含量，得紫杉醇含量≥99.6％成品。該方法能夠適用于工業(yè)上大批量生產(chǎn)紫杉醇，其簡單方便，回收率高，成本低，成品含量高，使用本方法制備的紫杉醇含量≥99.6％。
文檔編號(hào)C07D305/14GK101830870SQ20101010380
公開日2010年9月15日 申請(qǐng)日期2010年1月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月26日
發(fā)明者徐薇, 成傳鋒, 沈素紅, 袁金玉, 陶兵林 申請(qǐng)人:武漢茂發(fā)科技有限公司