作為akt蛋白激酶抑制劑的羥基化嘧啶基環(huán)戊烷類的制作方法

專利名稱：作為akt蛋白激酶抑制劑的羥基化嘧啶基環(huán)戊烷類的制作方法
作為AKT蛋白激酶抑制劑的羥基化嘧啶基環(huán)戊烷類發(fā)明背景 發(fā)明領域本發(fā)明涉及絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(如AKT及相關激酶)的新型抑制劑、含有 所述抑制劑的藥物組合物以及這些抑制劑的制備方法。所述抑制劑可用于治療例如哺乳動 物的過度增生性疾病，例如癌癥和炎癥。
背景技術：
的說明蛋白激酶(PK)是通過從ATP上傳送末端(Y )磷酸來催化蛋白質(zhì)的酪氨酸、絲氨 酸和蘇氨酸殘基上的羥基發(fā)生磷酸化作用的酶。通過信號轉導途徑，這些酶調(diào)節(jié)細胞生 長、分化和增殖，即事實上細胞生命的所有方面無論如何都取決于PK活性(Hardie，G.和 Hanks, S. (1995)The Protein KinaseFacts Book. land II(蛋白激酶檔案I 和 II)， Academic Press, San Diego, CA) 0此外，在多種疾病中都涉及異常的PK活性，從相對不危 及生命的疾病比如銀屑病到極端惡性的疾病比如惡性膠質(zhì)瘤(腦癌)。蛋白激酶是治療性 調(diào)節(jié)的一類重要靴(Cohen, P. (2002)Nature Rev. Drug Discovery 1 :309)。值得注意的是，非典型蛋白磷酸化和/或表達常常被報道是癌癥中細胞異常增 殖、轉移和細胞存活的成因之一。其中包括Akt、VEGF, ILK、ROCK、p70S6K、Bel、PKA, PKC, Raf、Src, PDK1、ErbB2、MEK, IKK、Cdk, EGFR、BAD、CHK1、CHK2 禾口 GSK3 在內(nèi)的各種激酶的異 常調(diào)節(jié)和/或表達也已與癌癥特異性地相關聯(lián)。蛋白激酶包括兩種類型蛋白質(zhì)酪氨酸激酶(PTK)和絲氨酸-蘇氨酸激酶(STK)。 蛋白激酶B/Akt酶是一組絲氨酸/蘇氨酸激酶，在多種人類腫瘤中過表達。表征最為充分 的PI3K脂質(zhì)產(chǎn)物靶之一是信號轉導途徑中PI3K下游的57KD的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激 酶Akt(Hemmings，B. A. (1997)Science275 628 ；Hay N. (2005)Cancer Cell 8 :179_183)。 Akt是急性轉化性反轉錄病毒AKT8的原癌基因v-akt的人類同源物。由于其與蛋白激 酶A和C有高度序列同源性，Akt也被稱為蛋白激酶B(PKB)以及A和C相關物(Related to Aand C，RAC)。已知存在Akt的三種同種型，即Aktl、Akt2和Akt3，它們有80 %的 總體同源性(Staal, S. P. (1987)Proc. Natl. Acad. Sci. 84 5034 ；Nakatani, K. (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 257 906 ；Li 等人(2002) Current Topics in Med. Chem. 2 939-971 ；WO 2005/113762)。Akt同種型有共同的結構域組織，由在N末端的普列克底物 蛋白同源性結構域、激酶催化結構域、和在C末端的短調(diào)節(jié)區(qū)組成。另外，Akt2和Akt3 二 者都表現(xiàn)出有剪接變體。Akt被PtdInd (3，4，5) P3募集到細胞膜時，同種型Aktl (PKBa)、 Akt2 (PKB β )和 Akt3 (ΡΚΒ γ )被 PDKl 分別于 Τ308、Τ309 和 Τ305 以及分別于 S473、S474 和 S472磷酸化(活化)。這種磷酸化由一種尚未知曉的激酶(推定名為PDK2)進行，雖然已 表明 PDKl(Balendran，Α.，(1999) Curr. Biol. 9 :393)、自磷酸化(Toker, A. (2000) J. Biol. Chem. 275:8271)和整聯(lián)蛋白相關激酶(ILK) (Delcommenne, M. (1998)Proc. Natl. Acad. Sci. USA,95 11211)牽涉在該過程中。Akt活化要求在C末端疏水基序中殘基Ser 473 上磷酸化(Brodbeck 等人(1999) J. Biol. Chem. 274 :9133_9136 ；Coffer 等人(1991)Eur.
5J. Biochem. 201 :475_481 ；Alessi 等人(1997) Curr. Biol. 7 :261_269)。雖然 Akt 的一磷酸
化活化了該激酶，但其最大激酶活性則需要二磷酸化。認為AKT通過抑制細胞凋亡并增強血管生成和增殖而發(fā)揮其對癌癥的作用 (Toker等人(2006) Cancer Res. 66(8) 3963-3966)。AKT在許多形式的人類癌癥中過 表達，這些癌癥包括但不限于結腸癌(Zinda等人(2001)Clin. Cancer Res. 7 :2475)、 卵巢癌(Cheng 等人(1992)Proc. Natl. Acad. Sci. USA89 :9267)、腦癌(Haas Kogan 等人 (1998)Curr. Biol. 8 :1195)、肺癌(Brognard 等人(2001)Cancer Res. 61 :3986)、胰腺癌 (Bellacosa 等人(1995) Int. J. Cancer64 :280_285 ；Cheng 等人(1996)Proc. Natl. Acad. Sci. 93 3636-3641)、前列腺癌(Graff 等人(2000) J. Biol. Chem. 275 24500)和胃癌 (Staal 等人(1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84 :5034_5037)。為了靶向的小分子抑制劑治療，已經(jīng)研究了 PI3K/Akt/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白 (mammalian target of rapamycin,mT0R)途徑(Georgakis, G.禾口 Younes，A. (2006) Expert Rev. Anticancer Ther.6(1) 131-140 ；Granville φ 人(2006)Cl in. Cancer Res. 12(3) 679-689)。PI3K/Akt信號轉導的抑制引起凋亡并抑制具有升高的Akt水平的腫瘤細胞的 生長(Kim 等人(2005) CurrentOpinion in Investig. Drugs 6 (12) 1250-1258 ;Luo 等人 (2005)Molecular CancerTher. 4 (6) :977_986)。靶向異常調(diào)節(jié)的途徑并最終導致疾病的激酶抑制劑的開發(fā)，對于醫(yī)藥界具有巨大 的倫理和商業(yè)上的利益。作為獨立療法或與其它已接受方法聯(lián)合，抑制以下的化合物將成 為有價值的抗癌藥=(I)Akt募集到細胞膜，(2)由PDKl或PDK2活化，(3)底物磷酸化，或 (4) Akt下游靶之一。美國專利申請公開第2005/0130954除了其它以外，公開了作為AKT抑制劑的多種 化合物。據(jù)說這些化合物可用于治療過度增生性疾病如癌癥。發(fā)明概述本發(fā)明提供了抑制AKT蛋白激酶的新化合物。本發(fā)明化合物具有作為可通過抑制 AKT蛋白激酶來治療的疾病和疾患的治療劑的功用。更具體地，本發(fā)明包括具有通式I的化合物 和其藥學上可接受的鹽，其中R1、R2和R3如本文所定義。本發(fā)明還提供了包含式I化合物或其對映異構體、溶劑化物、代謝物、或藥學上可接受的鹽或前藥的藥物組合物。在又一個方面，本發(fā)明提供治療哺乳動物的AKT蛋白激酶介導的疾病或醫(yī)學狀況 的方法，包括向所述哺乳動物施用有效治療或預防所述疾病的量的一種或多種式I化合物 或其對映異構體、溶劑化物、代謝物、或藥學上可接受的鹽或前藥。可按照本發(fā)明方法治療 的AKT蛋白激酶介導的疾病包括但不限于炎性、過度增生性、心血管、神經(jīng)變性、婦科或皮 膚疾病和病癥。在進一步的方面，本發(fā)明提供抑制哺乳動物中AKT蛋白激酶產(chǎn)生的方法，該方法 包括向所述哺乳動物施用有效抑制AKT蛋白激酶產(chǎn)生的量的式I化合物或其對映異構體、 溶劑化物、代謝物、或藥學上可接受的鹽或前藥。在進一步的方面，本發(fā)明提供抑制AKT蛋白激酶活性的方法，包括使所述激酶與 式I化合物接觸。本發(fā)明化合物可以有利地與其它已知的治療劑聯(lián)合使用。因此，本發(fā)明還提供了 包含式I化合物或其對映異構體、溶劑化物、代謝物、或藥學上可接受的鹽或前藥聯(lián)合第二 治療劑的藥物組合物。本發(fā)明還提供了用作治療AKT蛋白激酶介導的疾患的藥物的式I化合物和其對映 異構體、溶劑化物、代謝物、和藥學上可接受的鹽以及前藥。本發(fā)明的另一方面是式I化合物或其對映異構體、溶劑化物、代謝物、或藥學上可 接受的鹽或前藥用于治療的用途。在一個實施方案中，所述治療包括治療AKT蛋白激酶介 導的疾患。本發(fā)明進一步提供了用于治療AKT蛋白激酶介導的疾病或病癥的藥盒，所述藥盒 包含式I化合物或其對映異構體、溶劑化物、代謝物、或藥學上可接受的鹽或前藥、容器、和 任選地指示治療的包裝說明書或者標簽。藥盒還可包含可用于治療所述疾病或病癥的第二 化合物或包含第二藥劑的制劑。本發(fā)明的另一方面提供式I化合物在治療過度增生性疾病中的用途。在本發(fā)明的 進一步方面，該過度增生性疾病是癌癥。本發(fā)明進一步包括此發(fā)明化合物的制備方法、分離方法和純化方法。本發(fā)明的其它優(yōu)點和新特征部分地將在下文的描述中分部敘述，部分在本領域技 術人員檢查下文描述時是明顯的，或者可以通過實施本發(fā)明而獲悉。本發(fā)明的優(yōu)點可以利 用所附權利要求書中具體指出的手段、組合、組合物和方法來實現(xiàn)和達到。發(fā)明詳述現(xiàn)在將參考本發(fā)明的某些實施方案進行詳述，其實施例圖解說明于隨后的結構和 結構式中。雖然本發(fā)明將結合例證實施方案進行描述，但是應當理解，并不意圖將本發(fā)明 限于那些實施方案。與此相反，本發(fā)明意圖涵蓋可以包括在如所附權利要求書所限定的本 發(fā)明范圍內(nèi)的所有替換方案、變型和等價物。本領域熟練技術人員應當認識到，可以將與在 此所述類似或者等價的多種方法和材料用于本發(fā)明實踐中。本發(fā)明并不僅僅限于所述的方 法和材料。在包含的一篇或者多篇文獻和類似材料不同于本申請或者與本申請沖突的情形 中，包括但不限于定義的術語、術語應用、描述的方法等等，以本申請為準。^X本文所用的術語“一”是指一種或多種。
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本文所用的術語“此發(fā)明化合物”、“本發(fā)明化合物”和“式I化合物”包括式I化
合物和其藥學上可接受的鹽。短語“有效量”是指當施用于需要所述治療的哺乳動物時，足以實現(xiàn)以下的化合物 的量⑴治療或者預防由一種或多種AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它絲氨酸/蘇氨酸激 酶、和/或雙特異性激酶的活性介導的具體疾病、疾患或者病癥，(ii)減輕、改善或者消除 所述具體疾病、疾患或者病癥的一種或者多種癥狀，或者(iii)預防或者延遲在此所述的 具體疾病、疾患或者病癥的一種或者多種癥狀的發(fā)作。在癌癥的情形中，有效量的藥物可以 降低癌細胞的數(shù)目；降低腫瘤大??；抑制(即，在一定程度上減緩和優(yōu)選地終止)癌細胞浸 潤到外周器官中；抑制(即，在一定程度上減緩和優(yōu)選地終止)腫瘤轉移；在一定程度上抑 制腫瘤生長；和/或在一定程度上緩解與癌癥相關的一種或者多種癥狀。在藥物可以阻止 生長和/或殺死已有癌細胞的程度上，它可以是抑制細胞的和/或細胞毒性的。對于癌癥 治療，效力可以通過，例如評價疾病發(fā)展的時間(time to disease progression,TTP)和/ 或確定響應速率(response rate, RR)來測量。“治療”意欲至少指哺乳動物如人類的疾病狀況的減輕，所述疾病狀況至少部分由 于一種或多種AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它絲氨酸/蘇氨酸激酶、和/或雙特異性激酶 的活性而而造成的。術語“治療(treat)”和“治療(treatment) ”涉及治療性治療和防患 性或者預防性措施，其中目的是預防或者延緩(減小)不期望的生理變化或者紊亂。對于 本發(fā)明的目的，有益或者期望的臨床結果包括但不限于癥狀的減輕、疾病程度的降低、穩(wěn)定 (即，未惡化)的疾病狀態(tài)、疾病發(fā)展的延遲或者減緩、疾病狀態(tài)的改善或者減輕和可檢測 或不可檢測的癥狀緩解(無論部分還是總體)?！爸委?treatment)”還可以表示同如果不 接受治療的預期存活相比，延長的存活期。需要治療的那些患者包括已經(jīng)患有疾患或者病 癥的那些，以及被發(fā)現(xiàn)傾向于患有疾病狀況但還未診斷為患有該疾病狀況的那些；調(diào)節(jié)和 /或抑制所述疾病狀況。術語“治療(treating)”、“治療(treat)”或“治療(treatment)” 包涵預防性即防患性治療和緩和性(palliative)治療二者。本文所用的術語“哺乳動物”是指患有本文所述疾病或處于發(fā)展本文所述疾病的 風險中的溫血動物，包括但不限于豚鼠、犬、貓、大鼠、小鼠、倉鼠和包括人類的靈長類。“化療劑”是可用于治療癌癥而不論其作用機制的化學化合物?；焺┌ㄓ糜?“靶向治療”和常規(guī)化療的化合物?；焺┑膶嵗òＡ_替尼(TARCEVA ，Genentech/OSI Pharm.)、硼替佐 米(VELCADE ，Millennium Pharm.)、氟維司群(FASLODEX , AstraZeneca)、索坦 (SU11248，Pfizer)、來曲唑(FEMARA , Novartis)、伊馬替尼甲磺酸鹽(GLEEVEC , Novartis)、PTK787/ZK 222584 (Novartis)、奧沙利鉬(Eloxatin , Sanof i)、5_FU(5_ 氟尿 嘧啶)、亞葉酸、雷帕霉素(西羅莫司，RAPAMUNE , Wyeth)、拉帕替尼(TYKERB , GSK572016, Glaxo SmithKline)、洛那法尼(SCH 66336)、索拉非尼(BAY43-9006，Bayer Labs)、伊立替康(CAMPTOSAR ，Pfizer)和吉非替尼(IRESSA , AstraZeneca)、 AG1478、AG1571(SU 5271 ；Sugen)、比如硫替派(thiot印a)和CYTOXAN 環(huán)磷酰胺的 烷基化劑；烷基磺酸酯類，比如白消安、英丙舒凡和派泊舒凡；氮丙啶類(aziridines)，比 如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌、美妥替派(meturedopa)和烏瑞替派(uredopa)；乙撐亞 胺類(ethylenimines)和甲基蜜胺類(methylamelamines)，包括六甲蜜胺、三亞乙基蜜胺、三亞乙基磷酰胺、三亞乙基硫代磷酰胺和三羥甲蜜胺；多聚乙酰類(特別是布拉他辛和布 拉他辛酮)；喜樹堿(包括合成類似物托泊替康)；苔蘚抑素；CallyStatin;CC-1065(包 括它的阿多來新、卡折來新和比折來新合成類似物)；隱藻素類(特別是隱藻素1和隱藻 素8)；多拉司他汀；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成類似物，KW-2189和CB1-TM1)；軟 珊瑚醇(eleutherobin)；水鬼蕉堿(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海綿 抑制素(spongistatin)；氮芥類，比如苯丁酸氮芥、萘氮芥、chlorophosphamide、雌氮芥、 異環(huán)磷酰胺、氮芥、氮芥氧化物鹽酸鹽(mechlorethamine oxide hydrochloride)、米爾法 蘭(melphalan)、新恩比興(novembichin)、膽留醇對苯乙酸氮芥(phenesterine)、松龍苯 芥、氯乙環(huán)磷酰胺、尿嘧啶氮芥；硝基脲類(nitrosureas)，比如亞硝脲氮芥(carmustine)、 吡葡亞硝脲(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、環(huán)己亞硝脲(Iomustine)、嘧啶 亞硝脲(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，比如烯二炔抗生素(例如， 卡奇霉素(calicheamicin)，特別是卡奇霉素Y II和卡奇霉素ω Il (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994)33 183-186)；達內(nèi)霉素(dynemicin)，包括達內(nèi)霉素A ；二碳磷酸鹽化合物 (bisphosphonate)，比如氯膦酸鹽(clodronate)；埃斯培拉霉素(esperamicin)；以及新制 癌菌素生色團和相關的色蛋白烯二炔抗生素生色團)、阿克拉霉素類(aclacinomysins)、 放線菌素、氨茴霉素(authramycin)、重氮絲氨酸(azaserine)、博來霉素、放線菌素C、卡 柔比星(carabicin)、洋紅霉素、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycinis)、 放線菌素D、道諾紅菌素、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、ADRIAMYCIN (阿霉素)、嗎啉代_阿霉素、氰基嗎啉代_阿霉素、2-吡咯烷子基_阿霉素和去氧阿霉 素)、表柔比星、依索比星、依達比星、麻西羅霉素、比如絲裂霉素C的絲裂霉素、霉酚酸、 諾加霉素、橄欖霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三鐵阿霉素、羅多比星、鏈黑菌素、鏈 脲霉素、殺結核菌素、烏苯美司、新制癌菌素、佐柔比星；抗代謝物，比如甲氨蝶呤和5-氟 尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，比如二甲葉酸、甲氨蝶呤、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙 (trimetrexate)；嘌呤類似物，比如氟達拉濱、6_巰基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似 物，比如環(huán)胞苷、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、雙脫氧尿苷(dideoxyuridine)、 去氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷；雄激素，比如二甲睪酮、屈他雄酮丙酸鹽、環(huán)硫雄醇、美雄 烷、睪內(nèi)酯；抗腎上腺類(anti-adrenals)，比如氨魯米特、米托坦、曲洛司坦；葉酸補充劑， 比如亞葉酸(frolinic acid)；醋葡醛內(nèi)酯；醛磷酰胺苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖 啶；bestrabucil ；比生群；依達曲沙(edatraxate) ；defofamine ；地美可辛；地吖醌；依氟 鳥氨酸(elfornithine)；依利醋銨；埃博霉素(印othilone)；乙環(huán)氧啶；硝酸鎵；羥基脲； 蘑菇多糖；氯尼達明(Ionidainine)；美登素類，比如美登素和美登木素；丙脒腙；米托蒽 醌；莫哌達醇(mopidanmol) ；nitraerine ；噴司他丁 ；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼 酸；2-乙胼；丙卡巴胼；PSK 多糖絡合物(JHSNatural Products, Eugene, OR)；雷佐生； 根霉素；西佐喃；鍺螺胺；細交鏈孢菌酮酸；三亞乙基亞胺萃醌；2，2’，2”_三氯三乙胺；單 端孢霉烯族毒素類(特別是T-2毒素、黏液霉素AGerracurin Α)、桿孢菌素A和蛇形菌 素)；尿烷；去乙酰長春酰胺；氮烯唑胺；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴衛(wèi)矛醇；哌泊溴烷； gacytosine ；阿糖胞苷(“Ara_C”)；環(huán)磷酰胺；硫替派；紫杉烷類，例如，TAXOL (紫杉 醇；Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N. J.) >ABRAXANE (Cremophor-free)、 白蛋白-設計的納米顆粒紫杉醇制劑(albumin-engineered nanoparticle formulationsof paclitaxel, AmericanPharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois)禾口 TAXOTERE (紫杉萜(doxetaxel) ；Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France)；苯丁酸 氮芥(chloranmbucil) ；GEMZAR (吉西他濱)；6_硫代鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲氨蝶呤； 鉬類似物，比如順氯氨鉬和卡鉬；長春花堿；依托泊苷(VP-16)；異環(huán)磷酰胺；米托蒽醌；長 春新堿；NAVELBINE (長春瑞濱)；諾安托；替尼泊苷；依達曲沙；道諾霉素；氨基蝶 呤；卡培他濱(XELODA );伊班膦酸鹽；CPT-Il ；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000 ；二氟甲基 鳥氨酸(DMFO)；類視黃醇(retinoids)，比如視黃酸；和任何上述物質(zhì)的藥學上可接受的 鹽、酸和衍生物。還包括在“化療劑”定義中的有(i)用于調(diào)節(jié)或者抑制激素對腫瘤的作用的 抗激素劑，比如抗雌激素和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(selectiveestrogen receptor modulator, SERM)，包括，例如他莫昔芬、(包括NOLVADEX ;枸櫞酸他莫昔芬)、雷 洛昔芬、屈洛昔芬、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬、鹽酸雷洛昔芬、LY117018、奧那司酮和 FARESTON (枸櫞酸托瑞米芬)；(ii)抑制芳香酶的芳香酶抑制劑，芳香酶調(diào)節(jié)腎上腺 中雌激素的形成，比如，例如，4(5)-咪唑類、氨魯米特(aminoglutethimide)、MEGASE (乙酸甲地孕酮)、AROMASIN (依西美坦；Pfizer)、福美司坦(formestanie)、法倔 唑、RIVISOR (伏氯唑)、FEMARA (來曲唑；Novartis)和ARIMIDEX (阿那 曲唑(anastrozole) ；AstraZeneca) ； (iii)抗雄激素類，比如氟他米特、尼魯米特、比卡魯 胺、亮丙立得(leuprolide)和戈舍瑞林；以及曲沙他濱(1，3-二氧戊環(huán)核苷胞嘧啶類似 物)；(iv)蛋白激酶抑制劑；(ν)脂類激酶抑制劑；(vi)反義寡核苷酸，特別是抑制與異 常細胞增殖相關的信號途徑中的基因的表達的那些，所述基因比如，例如PKC-α、Ralf和 H-Ras ； (vii)核酶，比如VEGF表達抑制劑(例如，ANGIOZYME )和HER2表達抑制劑； (viii)疫苗，比如基因療法疫苗，例如ALLOVECTIN 、LEUVECTIN 和VAXID ； PROLEUKIN rlL-2 ；拓撲異構酶 1 抑制劑，比如UJRTOTECAN ;ABARELIX rmRH ； (ix)抗血管生成劑，比如貝伐珠單抗(bevacizumab，AVASTIN ，Genentech)；和 (x)任何上述化療劑的藥學上可接受的鹽、酸和衍生物。還包括在“化療劑”定義中的有治療性抗體，比如阿侖珠單抗(alemtuzumab， Campath)、貝伐珠單抗(AVASTIN ,Genentech)；西妥昔單抗(ERBITUX , Imclone)； 帕木單抗(panitumumab，VECTIBIX , Amgen)、利妥昔單抗(RITUXAN , Genentech/ Biogen Idec)、培妥珠單抗(pertuzumab，OMNITARG , 2C4, Genentech)、曲妥單抗 (HERCEPTIN , Genentech)、托西莫單抗單抗(Bexxar，Corixia)和抗體藥物軛合物奧 吉妥珠單抗(gemtuzumab ozogamicin，MYLOTARG ，Wyeth)。具有作為聯(lián)合本發(fā)明 的PI3K抑制劑的化療劑的治療潛力的人源化單克隆抗體包括阿侖珠單抗、阿泊珠單抗 (apolizumab)、可塞珠單抗(aselizumab)、atlizumab、bapineuzumab、貝伐珠單抗、莫比 伐珠單抗(bivatuzumab mertansine)、莫坎妥珠單抗(cantuzumab mertansine)、西利珠 單抗(cedelizumab)、賽妥珠單抗(certolizumab pegol)、cidfusituzumab、cidtuzumab、 達克珠單抗(daclizumab)、依庫珠單抗(eculizumab)、依法珠單抗(efalizumab)、依帕珠 單抗(印ratuzumab)、厄利珠單抗(erlizumab)、泛維珠單抗(felvizumab)、芳妥珠單抗 (fontolizumab)、奧吉妥珠單抗、奧英妥珠單抗(inotuzumabozogamicin)、ipilimumab、 拉貝珠單抗(Iabetuzumab)、林妥珠單抗(Iintuzumab)、馬妥珠單抗(matuzumab)、
10美泊珠單抗(mepoIizumab)、莫維珠單抗(motavizumab)、motovizumab、那他珠單抗 (natalizumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、nolovizumab、numavizumab、ocrelizumab、 奧馬珠單抗(omalizumab)、帕利珠單抗(palivizumab)、帕考珠單抗(pascolizumab)、 pecfusituzumab> pectuzumab、i音胃_Uf[、i音胃_(pexelizumab) > ralivizumab> 雷珠單抗(ranibizumab)、瑞禾丨J珠單抗(reslivizumab)、瑞利珠單抗、resyvizumab、羅維 珠單抗(rovel izumab)、盧利珠單抗(ruplizumab)、西羅珠單抗(sibrotuzumab)、西利珠 單抗(siplizumab)、索土珠單抗(sontuzumab)、他珠單抗(tacatuzumab tetraxetan)、 tadocizumab、他禾Ij珠單抗(talizumab)、特非珠單抗(tefibazumab)、托珠單抗 (tocilizumab)、托禾丨J珠單抗(toralizumab)、曲司珠單抗(trastuzumab)、tucotuzumab 西莫白介素、tucusituzumab、umavizumab、烏珠單抗(urtoxazumab)禾口維西珠單抗 (visi 1izumab)。
AKT抑制劑本發(fā)明的式I化合物可用于抑制AKT蛋白激酶。這類化合物具有用作可通過抑制 AKT蛋白激酶信號轉導途徑以及酪氨酸和絲氨酸/蘇氨酸激酶受體途徑而得以治療的疾病 的治療劑的功用。尤其是，發(fā)現(xiàn)在環(huán)戊二烯并[d]嘧啶上具有7-羥基的式I化合物對AKT相對于蛋 白激酶A (PKA)的選擇性是至少50倍。例如，對AKT相對于PKA的選擇性是至少100倍，作 為進一步的實例，是至少150倍。超出PKA的選擇性是期望的，因為PKA牽涉在對于許多細 胞類型的正常功能和生理學重要的許多細胞過程中。另外，不認為PKA的抑制有助于AKT 抑制的抗增殖和促凋亡作用。因此，PKA的抑制可導致與AKT抑制無關的不良事件而無助 于AKT抑制的疾病修正益處。式I化合物還可用作除了 AKT以外的酪氨酸激酶以及絲氨酸和蘇氨酸激酶的抑制 劑。總之，本發(fā)明的一方面包括式I化合物和其藥學上可接受的鹽， 其中R1是具有一個OH取代的C1-C6烷基(alkyl)；R2是氫或F;且R3 是 Cl 或 CF3。
在某些實施方案中，R1是具有一個OH取代的C1-C6烷基。在某些實施方案中，R1是具有一個OH取代的C4烷基。在某些實施方案中，R1 是-CH2C (CH3) 20H。在某些實施方案中，R1 是-C (CH3) 2CH20H。在某些實施方案中，R2是氫。在某些實施方案中，R2是F。在某些實施方案中，R3是Cl。在某些實施方案中，R3是CF3。在某些實施方案中，R2是氫且R3是Cl。在某些實施方案中，R2是F且R3是CF3。在進一步的實施方案中，式I化合物具有式II的結構 其中R1、R2和R3如本文所定義。式I化合物包括這類化合物的鹽(包括藥學上可接受的鹽)。短語“藥學上可接受的”表示物質(zhì)或者組合物與構成制劑的其它成分和/或其所 治療的哺乳動物化學性質(zhì)和/或毒理學上相容。另外，本發(fā)明化合物可以形成鹽。鹽的實例包括通過使本發(fā)明化合物與無機酸或 有機酸或無機堿反應而制得的鹽，此類鹽包括但不限于硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫 酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、 碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙 炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、丁炔-1， 4-二酸鹽、己炔-1，6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯代苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、 輕基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、苯基乙酸鹽、苯基 丙酸鹽、苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、y -羥基丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、丙 磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽和扁桃酸鹽。因為本發(fā)明的單個化合物可能包括多于 一個酸部分或堿部分，本發(fā)明化合物可包括單個化合物的單鹽、二鹽或三鹽。在某些實施方案中，該鹽是“藥學上可接受的鹽”，除非另外指明，否則其包括保留 所指化合物的相應游離酸或堿的生物效力，并且不是生物學或其它方面不期望的鹽。式I化合物還包括這類化合物的不必是藥學上可接受的鹽的其它鹽，其可用作用 于制備和/或純化式I化合物和/或用于分離式I化合物的對映異構體的中間產(chǎn)物。
νο
HO
R2S
R3'
12
本發(fā)明還包括同位素標記的本發(fā)明化合物，除了一個或多個原子被具有與自然界 中通常發(fā)現(xiàn)的原子量或者質(zhì)量數(shù)不同的原子量或者質(zhì)量數(shù)的原子替換的事實以外，其等同 于在此所述的那些化合物。在本發(fā)明化合物和它們的用途的范圍內(nèi)，預期所述的任何具 體原子或者元素的所有同位素?？梢园诒景l(fā)明化合物中的例證性同位素包括氫、碳、 氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，比如 2η、3Η、"(:、13(:、14(:、13Ν、15Ν、15Ο、17Ο、18Ο、32Ρ、33Ρ、355、18Ρ、 36Cl、123I和125I。某些同位素標記的本發(fā)明化合物(例如，用3H和14C標記的那些)可以用 于化合物和/或底物組織分布測定中。由于易于制備和檢測，氚(3H)和碳_14(即14C)同 位素是有用的同位素。此外，由于具有更強的新陳代謝穩(wěn)定性(例如，延長的體內(nèi)半衰期或 者降低的劑量需要)，用重同位素(比如氘，即2H)取代可能會提供某些治療學優(yōu)點，并且因 此可能在一些情形下是優(yōu)選的。正電子發(fā)射同位素比如150、13N、"C和18F可以用于正電子 發(fā)射斷層成像(positron emission tomography, PET)研究中，從而檢測底物受體的占用 率。同位素標記的本發(fā)明化合物通?？梢酝ㄟ^與下文方案和/或實施例中公開的那些方法 類似的方法，通過用同位素標記的試劑替換非同位素標記的試劑進行制備。式I化合物的合成本發(fā)明化合物可以通過包括類似于化學領域熟知的那些方法的合成路線進行 合成，特別是根據(jù)在此包含的描述進行合成。原料通常由商業(yè)來源獲得，比如Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI)，或者利用本領域熟練技術人員熟知的方法輕易地制備(例 如，通過 Louis F. Fieser 禾口 Mary Fieser, Reagentsfor Organic Synthesis (有機合成 的試劑)，第 1-19 卷，Wiley, N. Y. (1967-1999 編輯))或者 Beilsteins Handbuch der organischen Chemie,4,Aufl編輯· Springer-Verlag,Berlin,包括其增刊中普遍描述的方 法制備)。式I化合物可單獨制備，或制備為包括至少2種，例如5至1，000種化合物、或10 至100種化合物的化合物文庫。式I化合物的文庫可用本領域技術人員公知的程序，通過 組合的‘分裂和混合(split and mix)’方法或通過利用液相化學反應或固相化學反應的多 重平行合成來制備。因此根據(jù)本發(fā)明的進一步方面，提供了包括至少2種式I化合物或其 鹽的化合物文庫。在制備式I化合物時，可能需要保護中間體的間接官能團(例如，伯胺或者仲胺 等等)。對所述保護的需要將取決于間接官能團的本性和制備方法的條件的變化而變化。 適宜的氨基保護基(NH-Pg)包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基(BOC)、芐氧羰基(CBz) 和9-芴基亞甲基氧基羰基(Fmoc)。本領域熟練技術人員可以輕易確定是否需要所述保 護。保護基的一般說明和它們的應用參見T.W.Greene，Protective Groups in Organic Synthesis (有機合成中的保護基團)，John Wiley & Sons，New York，1991。分離方法在用于制備式I化合物的任何合成方法中，可以有利地將反應產(chǎn)物彼此分離和/ 或與原料分離。通過本領域通用的工藝，將各個步驟或者系列步驟的期望產(chǎn)品分離和/或 純化成期望的均勻度。所述分離一般涉及多相萃取、從溶劑或者溶劑混合物中結晶、蒸餾、 升華或者色譜法。色譜法可以涉及多種方法，包括，例如反相和正相；尺寸排阻；離子交 換；高、中和低壓液相色譜法和裝置；小規(guī)模分析；模擬移動床(SMB)和制備薄層或者厚層 色譜法，以及小規(guī)模薄層和快速色譜法工藝。
另一類分離方法涉及用選擇的試劑處理反應混合物，從而結合期望的產(chǎn)品、未反 應原料、反應副產(chǎn)品等等或者使得期望的產(chǎn)品、未反應原料、反應副產(chǎn)品等等可分離。所述 試劑包括吸附劑或吸附劑，比如活性碳、分子篩、離子交換介質(zhì)等等。另外地，所述試劑可以 是在堿性材料的情形中，酸；在酸性材料的情形中，堿；結合試劑比如抗體；結合蛋白質(zhì)； 選擇性螯合劑比如冠醚；液體/液體離子提取試劑(“LIX”)等等。適當?shù)姆蛛x方法的選擇取決于所涉及物質(zhì)的性質(zhì)。例如，在蒸餾和升華中的沸點 和分子量，在色譜法中極性官能團的存在與否，在多相萃取中酸性和堿性介質(zhì)中的材料穩(wěn) 定性，等等。為了實現(xiàn)期望的分離，本領域熟練技術人員將應用最可能的工藝。非對映異構體混合物可以基于它們的物理化學差異，通過本領域熟練技術人員熟 知的方法分離成它們的單個非對映異構體，比如通過色譜法和/或分級結晶。對映異構體 可以通過以下方式得到分離，通過與適當?shù)墓鈱W活性化合物(例如，手性輔助劑，比如手性 醇或者Mosher’ s?；?反應將對映異構體混合物轉化為非對映異構體混合物，分離非對 映異構體和將單個非對映異構體轉化(例如，水解)為相應的純對映異構體。同時，一些本 發(fā)明化合物可以是阻轉異構體(例如，取代的聯(lián)芳基化合物)，這同樣認為是本發(fā)明的一部 分。對映異構體還可以通過利用手性HPLC柱進行分離?；旧喜缓牧Ⅲw異構體的單一立體異構體，例如對映異構體可以通過利用比 如使用光學活性拆分試劑形成非對映異構體的方法拆分外消旋混合物獲得(Eliel，Ε.和 ffilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds ( Wl/l^^iItl) " John Wiley & Sons，Inc.，New York, 1994 ；Lochmuller, C. H.，J. Chromatogr.，(1975) 113(3) 283-302)。本發(fā)明手性化合物的外消旋混合物可以通過任何適宜的方法進行分離和隔離， 包括(1)與手性化合物形成離子、非對映鹽和通過分級結晶或者其它方法進行分離，(2)與 手性衍生化試劑形成非對映化合物，分離非對映異構體和將其轉化成純立體異構體，和(3) 直接在手性條件下分離基本上純或者富集的立體異構體。參見^DrugStereochemistry， Analytical Methods and Pharmacology (藥物立體化學，分析方法禾口藥理學)，，Irving W. Wainer 編輯，Marcel Dekker, Inc.，New York (1993)。在方法(1)下，非對映的鹽通過使光學異構純的手性堿比如番木鱉堿、奎寧、麻黃 素、士的寧、α-甲基-β-苯乙胺(安非他明)及類似手性堿與帶有酸性官能團比如羧酸 和磺酸的不對稱化合物反應而形成。通過分級結晶或者離子色譜法，非對映的鹽可以得到 誘導分離。為了分離氨基化合物的旋光異構體，加入手性羧酸或者磺酸比如樟腦磺酸、酒石 酸、扁桃酸或者乳酸可以導致非對映的鹽的形成。另外地，通過方法(2)，意欲進行拆分的底物與手性化合物的一種對映異構 體反應，從而形成非對映異構體對(Ε.和Wilen，S. "Stereochemistry ofOrganic Compounds (有機化合物的立體化學)”，John Wiley & Sons, Inc.，1994，第 322 頁)。非 對映化合物可以通過以下方法形成使不對稱化合物與光學異構純的手性衍生化試劑比 如薄荷基衍生物反應，隨后分離非對映異構體和進行水解，從而得到純的或者富集的對映 異構體。確定光學純度的方法包括在堿存在下制備外消旋混合物的手性酯，比如薄荷酯， 例如(_)氯甲酸薄荷酯，或者Mosher酯，乙酸α -甲氧基-α-(三氟甲基)苯酯(Jacob III. J. Org. Chem.，(1982)47 :4165)，和分析1H NMR譜以確定兩種阻轉對映異構體或者非 對映異構體的存在。阻轉異構化合物的穩(wěn)定非對映異構體可以通過正相和反相色譜法，按照分離阻轉異構萘基-異喹啉的方法進行分離和隔離(W096/15111)。通過方法(3)，兩種 對映異構體的外消旋混合物可以使用手性固定相通過色譜法進行分離(“Chiral Liquid Chromatography (手相液體色譜法)”(1989)W. J. Lough編輯，Chapman and Hall,New York ； Okamoto, J. ofChromatogr. , (1990)513:375-378)。富集或者純化的對映異構體可以通過 用于區(qū)分其它具有不對稱碳原子的手性分子的方法進行區(qū)分，比如旋光性和圓二色性。式I化合物的治療方法本發(fā)明化合物可用作用于治療由AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它絲氨酸/蘇氨酸 激酶、和/或雙特異性激酶的調(diào)節(jié)或調(diào)整而介導的疾病或病癥的預防劑或治療劑?？砂凑?本發(fā)明方法治療的AKT蛋白激酶介導的疾病包括但不限于炎性、過度增生性、心血管、神經(jīng) 變性、婦科和皮膚疾病和病癥。在一個實施方案中，所述藥物組合物是為了治療過度增生性病癥，包括以下類別 的癌癥(1)心臟肉瘤(血管肉瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、橫紋肌瘤、 纖維瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；(2)肺支氣管癌(鱗狀細胞、未分化的小細胞、未分化的大細 胞、腺癌)、肺泡(細支氣管)癌、支氣管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、軟骨錯構瘤(chondromatous hamartoma)、間皮瘤、非小細胞肺癌、小細胞肺癌；(3)腸胃食道(鱗狀細胞癌、腺癌、平滑 肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(導管腺癌、胰島素瘤、胰高血糖素 瘤、胃泌素瘤、類癌瘤、舒血管腸肽瘤(vipoma))、小腸(腺癌、淋巴瘤、類癌瘤、卡波西肉瘤 (Karposi' s sarcoma)、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神經(jīng)纖維瘤、纖維瘤)、大腸(腺癌、管 狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、錯構瘤、平滑肌瘤)；(4)泌尿生殖道腎(腺癌、威爾姆斯瘤(Wilm' s tumor)[腎胚細胞瘤]、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鱗狀細胞癌、移行細胞癌、腺癌)、 前列腺(腺癌、肉瘤)、睪丸(精原細胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、絨毛膜癌、肉瘤、間 質(zhì)細胞癌、纖維瘤、纖維腺瘤、腺瘤樣瘤、脂肪瘤)；(5)肝臟肝癌(肝細胞癌)、膽管癌、肝 母細胞瘤、血管肉瘤、肝細胞腺瘤、血管瘤；(6)骨成骨肉瘤(骨肉瘤)、纖維肉瘤、惡性纖 維組織細胞瘤、軟骨肉瘤、尤因肉瘤、惡性淋巴瘤(網(wǎng)狀細胞肉瘤)、多發(fā)性骨髓瘤、惡性巨 細胞瘤、脊索瘤、骨軟骨瘤(osteochronfroma)(骨軟骨性外生骨疣)、良性軟骨瘤、成軟骨 細胞瘤、軟骨肌瘤樣纖維瘤、骨樣骨瘤和巨細胞瘤；(7)神經(jīng)系統(tǒng)頭骨(骨瘤、血管瘤、肉 芽腫、黃色瘤、畸形性骨炎)、腦脊膜(腦脊膜瘤、腦脊膜肉瘤(meningiosarcoma)、神經(jīng)膠 質(zhì)過多)、腦(星形細胞瘤、成神經(jīng)管細胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、室管膜瘤、生殖細胞瘤[松果體 瘤]、多形性成膠質(zhì)細胞瘤(glioblastoma multiform)、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)鞘瘤、視網(wǎng) 膜母細胞瘤、先天性腫瘤)、脊索神經(jīng)纖維瘤、腦膜瘤、膠質(zhì)瘤、肉瘤)；(8)婦科子宮(子 宮內(nèi)膜癌)、宮頸(宮頸癌、腫瘤前宮頸非典型增生)、卵巢(卵巢癌[漿液性囊腺癌、粘液 性囊腺癌、未分類癌]、粒層泡膜細胞瘤(granulosa-thecal cell tumor)、塞-萊細胞瘤 (Sertoli-Leydig cell tumor)、無性細胞瘤、惡性畸胎瘤)、外陰(鱗狀細胞癌、上皮內(nèi)癌、 腺癌、纖維肉瘤、黑素瘤)、陰道(透明細胞癌、鱗狀細胞癌、葡萄狀肉瘤(胚胎性橫紋肌肉 瘤)、輸卵管(癌)；(9)血液血液(髓細胞性白血病[急性和慢性]、急性成淋巴細胞性 白血病、慢性淋巴細胞性白血病、骨髓組織增生性疾病、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合 征)、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤[惡性淋巴瘤]；(10)皮膚晚期黑素瘤、惡性黑素瘤、基底 細胞癌、鱗狀細胞癌、卡波西肉瘤、胎塊發(fā)育不良性痣(moles dysplastic nevi)、脂肪瘤、 血管瘤、皮膚纖維瘤、瘢痕瘤、銀屑病；(11)腎上腺成神經(jīng)細胞瘤；(12)乳房轉移性乳癌；乳腺癌；(13)結腸；(14) 口腔；(15)毛細胞性白血??；(16)頭和頸；(17)和包括難治的 轉移性疾病；卡波西肉瘤；Bannayan帶狀瘡疹綜合征(Bannayan-Zonana syndrome)和考登 病或Lhermitte-Duclos病、以及其它類型的過度增生性病癥。本發(fā)明化合物和方法可用來治療疾病和病癥，如類風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、 克羅恩病(Chron’ s disease)、血管纖維瘤、眼病(如，視網(wǎng)膜血管形成、糖尿病性視網(wǎng) 膜病、與年齡相關的黃斑退行性改變(age-related macular degeneration)、黃斑變性 (macular degeneration)等等)、多發(fā)性硬化、肥胖癥、阿爾茨海默病、再狹窄、自身免疫疾 病、過敏癥、哮喘、子宮內(nèi)膜異位癥、動脈粥樣硬化、靜脈移植物狹窄、吻合周假體移植物狹 窄(peri-anastomaticprothetic graft stenosis)、前列腺增生、慢性阻塞性肺病、銀屑 病、組織修復所致神經(jīng)損傷的抑制、瘢痕組織形成(且可有助于傷口愈合)、多發(fā)性硬化、炎 性腸病、感染尤其是細菌感染、病毒感染、反轉錄病毒感染或寄生物感染(通過增加細胞凋 亡)、肺病、腫瘤、帕金森病、移植排斥(作為免疫抑制藥)、膿毒性休克等等。因此，本發(fā)明的另一方面提供了治療哺乳動物中AKT蛋白激酶介導的疾病或醫(yī)學 狀況的方法，該方法包括向所述哺乳動物施用有效治療或預防所述疾病的量的式I的一種 或多種化合物或其藥學上可接受的鹽或前藥。將與這樣的量符合的式I化合物的量將取決于多個因素而變化，比如具體化合 物、疾病狀況和其嚴重度、需要治療的哺乳動物的特性(如體重)，但仍然可由本領域技術 人員常規(guī)地確定。本發(fā)明還提供了用于治療AKT蛋白激酶介導的疾患的式I化合物。本發(fā)明的另一方面是式I化合物在制備用于治療，如用于治療或預防AKT蛋白激 酶介導的疾患的藥物中的用途。聯(lián)合治療本發(fā)明化合物可以與例如下文所述的一種或多種另外的藥物聯(lián)合應用。第二藥物 的劑量可以根據(jù)臨床應用的劑量適當?shù)剡x擇。本發(fā)明化合物和第二藥物的比率可以根據(jù)施 用主體、施用途徑、目標疾病、臨床病況、聯(lián)合用藥及其它因素來適當?shù)卮_定。在施用主體是 人類的情況下，例如，以每本發(fā)明化合物重量份計，第二藥物可以以0. 01至100重量份的量 使用。優(yōu)選藥物聯(lián)合制劑或者劑量給藥方案的第二化合物對本發(fā)明化合物具有補充活 性，從而使得它們不會不利地彼此影響。所述藥物適宜地以對預定目標有效的量組合存在。 相應地，本發(fā)明另一方面提供一種組合物，其包含本發(fā)明化合物并聯(lián)合第二藥物，例如本文 描述的。本發(fā)明化合物和另外的藥物活性劑可以在單一的藥物組合物中一起施用，或者分 別地施用，當分別施用時可以同時或以任何順序來順序施用。順序施用可以在時間上靠近 或者在時間上遠離。本發(fā)明化合物和第二藥物的量以及施用的相對時間將被選擇以便達到 希望的聯(lián)合治療效果。聯(lián)合治療可以提供“協(xié)同作用”和證實具有“協(xié)同性”，即當活性成分一起使用時 實現(xiàn)的作用大于分開使用所述化合物獲得的作用的和。當活性成分(1)被共同配制和在 聯(lián)合的、單位劑量制劑中同時施用或者遞送時；(2)作為分開的制劑交替或者平行遞送時； 或者(3)通過一些其它方案應用時，可以獲得協(xié)同作用。當在交替療法中遞送時，可以在化合物順序施用或者遞送時，例如通過在分開的注射器中進行分別注射時，獲得協(xié)同作用。通 常，在交替治療期間，各種活性成分的有效劑量被順序施用，即系列施用，而在聯(lián)合治療中， 兩種或者更多種活性成分的有效劑量被一起施用。施用涂徑本發(fā)明化合物可以通過任何適于待治療的疾患的途徑進行施用。適宜的途徑包括 口服、腸胃外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、真皮內(nèi)、鞘內(nèi)和硬膜外)、經(jīng)皮、直腸、鼻、局 部(包括口腔和舌下)、陰道、腹膜內(nèi)、肺內(nèi)和鼻內(nèi)途徑。應當理解，優(yōu)選的途徑可以隨著例 如受者的狀況的變化而變化。在化合物被口服施用時，可以與藥學上可接受的載體或者賦 形劑一起將其配制成丸劑、膠囊、片劑等等。當化合物被腸胃外施用時，其可以與藥學上可 接受的腸胃外媒介物(vehicle) —起配制和可以配制成可注射的單位劑量形式，如以下所 詳述。藥物制劑為了使用本發(fā)明化合物來治療性治療(包括預防性治療)包括人類在內(nèi)的哺乳動 物，通常按照標準制藥實踐將其配制為藥物組合物。按照本發(fā)明這一方面，提供包含本發(fā)明 化合物的藥物組合物。在某些實施方案中，藥物組合物包含式I化合物以及藥學上可接受 的稀釋劑或載體。本發(fā)明的藥物組合物將以與良好的醫(yī)療實踐相一致的方式進行配制、給藥和施 用，即施用的量、濃度、日程、過程、媒介物和途徑。在該上下文中考慮的因素包括治療的具 體病癥、進行治療的具體哺乳動物、個體患者的臨床狀況、病癥病因、藥劑的遞送部位、施用 方法、施用日程和醫(yī)師已知的其它因素。意欲施用的化合物的治療有效量將受所述考慮的 支配，該量是預防、改善或者治療病癥所需的最低量。一般將本發(fā)明化合物配制成藥物劑 型，從而提供易于控制的藥物劑量和使得患者順從處方方案。在本文使用的組合物優(yōu)選是無菌的。特別是，用于體內(nèi)施用的制劑必須是無菌的。 通過例如濾過無菌過濾膜，所述滅菌可以得到輕易實現(xiàn)。通?？梢詫⒒衔镔A存為固體組 合物、凍干制劑或者水溶液。本發(fā)明化合物的藥物制劑可以制備用于多種施用途徑和類型。例如，具有期望純 度的本發(fā)明化合物可以以凍干制劑、磨碎粉末或者水溶液的形式任選地與藥學上可接受的 稀釋劑、載體、賦形劑或者穩(wěn)定劑混合(Remington，s Pharmaceutical Sciences(雷氏藥 學)(1980)第16版，0sol，A.編輯)。配制可以在環(huán)境溫度下，在適當?shù)膒H和期望的純度 下，通過與生理學可接受的載體即在使用的劑量和濃度下對受者無毒的載體混合來進行。 制劑的PH主要取決于具體應用和化合物的濃度，但是可以為約3至約8。在pH 5的乙酸鹽 緩沖液中配制是適宜的實施方案。所述制劑可以利用常規(guī)的溶解和混合方法制備。例如， 在一種或者多種賦形劑存在下，將大量藥物(即，本發(fā)明化合物或者化合物的穩(wěn)定形式(例 如，與環(huán)糊精衍生物或者其它已知的絡合劑的絡合物)溶于適宜的溶劑中。使用的具體載體、稀釋劑或者賦形劑將取決于本發(fā)明化合物意欲應用的方式和目 的。溶劑通?；诒绢I域技術人員認可的對施用哺乳動物安全(GRAS)的溶劑進行選擇。 通常，安全溶劑是無毒含水溶劑，比如水和其它可溶于水中或者與水混溶的無毒溶劑。適宜 的含水溶劑包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如，PEG 400、PEG 300)等等及其混合物。 可接受的稀釋劑、載體、賦形劑和穩(wěn)定劑在使用的劑量和濃度下對受者無毒，并且包括緩沖劑，比如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和蛋氨酸；防腐劑(比如 十八烷基二甲基芐基氯化銨；六甲氯化銨；苯扎氯銨、氯化芐乙氧銨；苯酚、丁醇或者芐醇； 對羥苯甲酸烷基酯，比如對羥苯甲酸甲酯或者對羥苯甲酸丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環(huán)己 醇；3_戊醇；和間甲酚；低分子量(小于約10個殘基)多肽；蛋白質(zhì)，比如血清白蛋白、明膠 或者免疫球蛋白；親水聚合物，比如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，比如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬 酰胺、組氨酸、精氨酸或者賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或者 糊精；螯合劑，比如EDTA ；糖類，比如蔗糖、甘露醇、海藻糖或者山梨醇；形成鹽的抗衡離子， 比如鈉；金屬絡合物(例如，Zn-蛋白質(zhì)絡合物)；和/或非離子表面活性劑，比如TWEEN 、 PLUR0NICS 或者聚乙二醇(PEG)。所述制劑還可以包含一種或者多種穩(wěn)定劑、表面活性劑、 潤濕劑、潤滑劑、乳化劑、助懸劑、防腐劑、抗氧化劑、遮光劑、助流劑、加工輔劑、著色劑、甜 味劑、香料、芳香劑和其它已知提供藥物(即，本發(fā)明化合物或者其藥物組合物)優(yōu)雅外觀 或者有助于藥物產(chǎn)品(即，藥物)制造的添加劑。還可以將活性藥物成分截留在通過例如 凝聚工藝或者界面聚合制備的微膠囊分別例如羥甲基纖維素或者明膠_微膠囊和聚_(甲 基丙烯酸甲酯)微膠囊中、在膠質(zhì)藥物遞送系統(tǒng)(例如，脂質(zhì)體、白蛋白微球、微乳劑、納 米顆粒和納米膠囊)或者在大乳劑中。所述工藝公開在Remington，s Pharmaceutical Sciences (雷氏藥學)第16版，0sol，A.編輯(1980)。“脂質(zhì)體”是可以用于向哺乳動物遞 送藥物(比如式I化合物和，任選地其它治療劑)的由多種脂類、磷脂和/或表面活性劑組 成的小囊泡。脂質(zhì)體的組分通常構造成雙層形式，與生物膜的脂構造類似。可以制備本發(fā)明化合物的緩釋制品。緩釋制品的適宜實例包括含有式I化合物的 固體疏水聚合物的半滲透性基體，所述基體為成形制品例如薄膜或者微膠囊的形式。緩釋 基體的實例包括聚酯、水凝膠(例如，聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)或者聚(乙烯醇))、 聚交酯(美國專利第3，773，919號)、L-谷氨酸和Y -乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降 解的亞乙基-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-羥乙酸共聚物比如LUPRON DEPOT (由乳酸-羥 乙酸共聚物和乙酸亮丙立得組成的可注射微球)和聚-D-(-)-3-羥基丁酸。本發(fā)明化合物的藥物組合物可以為無菌可注射制品的形式，比如無菌的可注射含 水或者含油混懸劑。所述混懸劑可以利用上述的適宜分散劑或者潤濕劑和助懸劑根據(jù)本領 域已知的方法進行配制。無菌可注射制品也可以是無毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的 無菌可注射溶液劑或混懸劑，如1，3-丁二醇中的溶液劑，或制備為凍干粉末。在可接受的 溶媒和溶劑中，可以使用的為水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，通?？梢詫o菌不 揮發(fā)油類用作溶劑或者懸浮介質(zhì)?；谏鲜瞿康模魏螠睾偷牟粨]發(fā)油都可以使用，包括合 成單甘油酯或者二甘油酯。此外，比如油酸的脂肪酸同樣可以用于制備可注射劑。適于腸胃外施用的制劑包括含水和無水無菌注射溶液，其可以含有抗氧化劑、緩 沖液、殺菌劑和使得制劑與預期受者的血液等滲的溶質(zhì)；和含水和無水無菌混懸劑，其可以 包括助懸劑和增稠劑。本發(fā)明的組合物可采用適于口服應用(如片劑、糖錠劑、硬膠囊劑或軟膠囊劑、水 性或油性混懸劑、乳劑、可分散粉劑或顆粒劑、糖漿劑或酏劑)、局部應用(如乳膏劑、軟膏 劑、凝膠劑、或水性或油性溶液劑或混懸劑)、吸入施用(如作為細微粉劑或液體氣霧劑)、 吹入施用(如作為細微粉劑)。片劑制劑用的適宜的藥學上可接受的賦形劑包括例如惰性稀釋劑，如乳糖、碳
18酸鈉、磷酸鈣或碳酸鈣；制粒劑和崩解劑，如玉米淀粉或藻酸(algenic acid)；粘合劑，如 淀粉；潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石；防腐劑，如對羥基苯甲酸乙酯或丙酯；和抗氧化 劑，如抗壞血酸。片劑制劑可以是未包衣的，或包衣以改變其崩解作用和隨后活性成分在胃 腸道的吸收、或者改進其穩(wěn)定性和/或外觀，在任何情況下，采用本領域熟知的常規(guī)包衣材 料和方法進行包衣?？诜媒M合物可采用硬明膠膠囊的形式，其中活性成分與惰性固體稀釋劑如碳酸 鈣、磷酸鈣或高嶺土混合，或者可作為軟明膠膠囊，其中活性成分與水或諸如花生油、液體 石蠟或橄欖油等的油混合。水性混懸劑一般含有細粉形式的活性成分與一種或多種下述物質(zhì)助懸 劑，如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃 蓍膠和阿拉伯膠；分散劑或潤濕劑，如卵磷脂或烯化氧與脂肪酸的縮合產(chǎn)物(如聚 氧乙烯硬脂酸酯)、或環(huán)氧乙烷與長鏈脂族醇的縮合產(chǎn)物如十七碳乙烯氧基十六醇 (h印tadecaethyleneoxycetanol)、或環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的縮合產(chǎn) 物如聚氧乙烯山梨醇單油酸酯、或環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和脫水己糖醇衍生的偏酯的縮合產(chǎn) 物(如聚乙烯脫水山梨醇單油酸酯)。水性混懸劑也可含有一種或多種防腐劑(如對羥基 苯甲酸乙酯或丙酯)、抗氧化劑(如抗壞血酸)、著色劑、芳香劑和/或甜味劑(如蔗糖、糖 精或阿司帕坦)。通過將活性成分懸浮于植物油(如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)或礦物油 (如液體石蠟)中，可配制油性混懸劑。油性混懸劑也可含有增稠劑，如蜂蠟、固體石蠟或鯨 蠟醇。也可加入甜味劑如上述甜味劑和芳香劑，以提供適口的口服制品。這些組合物可通 過加入抗氧化劑如抗壞血酸來防腐。適用于通過加入水而制備水性混懸劑的可分散粉劑和顆粒劑一般含有活性成分 和分散劑或潤濕劑、助懸劑和一種或多種防腐劑。適宜的分散劑或潤濕劑和助懸劑的實例 為上文已經(jīng)提及的分散劑、潤濕劑和助懸劑。其它賦形劑如甜味劑、芳香劑和著色劑也可存在。本發(fā)明的藥物組合物也可采用水包油型乳劑。油相可以是植物油如橄欖油或花生 油或礦物油如液體石蠟或這些油中任何油的混合物。適宜的乳化劑可以是例如天然樹膠如 阿拉伯膠或黃蓍膠、天然磷脂如大豆卵磷脂、由脂肪酸和脫水己糖醇衍生的酯或偏酯(如 脫水山梨醇單油酸酯)以及所述偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物如聚氧乙烯脫水山梨醇單油 酸酯。乳劑還可含有甜味劑、芳香劑和防腐劑。糖漿劑和酏劑可用甜味劑如甘油、丙二醇、山梨醇、阿司帕坦或蔗糖來配制，也可 含有緩和劑(demulcent agent)、防腐劑、芳香劑和/或著色劑。栓劑制劑可通過將活性成分與合適的無刺激賦形劑混合來配制，該賦形劑在常溫 下為固體，但在直腸溫度下為液體，因而在直腸中融化而釋放藥物。適宜的賦形劑包括例如 可可脂和聚乙二醇。適于陰道施用的制劑可以以陰道栓劑、棉塞、乳膏劑、凝膠劑、糊劑、泡 沫或者噴霧劑制劑的形式存在，所述制劑中除了活性成分之外，還含有本領域已知的適當 載體。諸如乳膏劑、軟膏劑、凝膠劑和水性或油性溶液劑或混懸劑的局部制劑一般可通 過采用本領域熟知的常規(guī)方法，將活性成分與常規(guī)局部可接受的溶媒或稀釋劑配制在一起而制得。經(jīng)皮施用的組合物可以是本領域技術人員公知的那些經(jīng)皮貼片的形式。適于肺內(nèi)或者經(jīng)鼻施用的制劑的粒徑例如在0. 1至500微米的范圍內(nèi)(包括以微 米遞增的在0. 1至500微米之間的粒徑，比如0. 5、1、30微米、35微米等等)，其通過迅速吸 入鼻通道或者通過吸入口腔從而達到肺泡小囊進行施用。適宜的制劑包括活性成分的水性 或油性溶液。適于氣霧劑或者干粉施用的制劑可以根據(jù)常規(guī)方法制備，并且可以與其它治 療劑一起遞送，比如如下所述的迄今用于病癥治療或者預防中的化合物。取決于用于施用藥物的方法，可以以多種方式對應用的藥物組合物(或者制劑) 進行包裝。例如，用于分配的制品可包括其中已經(jīng)沉積有適當形式的藥物制劑的容器。適宜 的容器是本領域熟練技術人員熟知的，包括比如瓶(塑料和玻璃)、小袋、安瓿、塑料袋、金 屬圓筒等等材料。所述容器還可以含有防干擾組件，從而防止輕易接觸包裝中的物質(zhì)。此 外，容器在其表面上放置有描述容器中內(nèi)含物的標簽。該標簽還可以包括適當?shù)木妗Ｋ?述制劑可以被包裝在單位劑量或者多劑量容器中，例如密封的安瓿和小瓶中，并且可以貯 存在凍干(冷凍干燥)條件下，使得在即時使用之前僅僅需要加入無菌液體載體例如，水以 用于注射。即時注射溶液和混懸劑可以由先前所述種類的無菌粉末、顆粒和片劑制備。優(yōu) 選的單位劑量制劑是含有以上所述的每日劑量或者每日亞劑量單位的活性成分或者其適 當部分的制劑。本發(fā)明進一步提供了獸醫(yī)學組合物，其包含至少一種如上所定義的活性成分與由 此的獸醫(yī)學載體。獸醫(yī)學載體是可以用于施用組合物目的的材料，并且可以是惰性或者在 獸醫(yī)學領域可接受的并且與活性成分相容的固體、液體或者氣體材料。這些獸醫(yī)學組合物 可以腸胃外、口服或者通過任何其它期望的途徑施用。與一種或多種賦形劑組合產(chǎn)生單一劑型的本發(fā)明化合物的量，將根據(jù)所治療的受 治療者、病癥或疾患的嚴重程度、施用速率、化合物的分布和處方醫(yī)師的判斷而必要地變 化。在一個實施方案中，向需要其的哺乳動物施用適當量的本發(fā)明化合物。在一個實施方案 中，施用以每天約0. OOlmg/kg體重至約60mg/kg體重的量發(fā)生。在另一個實施方案中，施 用以每天約0. 5mg/kg體重至約40mg/kg體重的量發(fā)生。在一些情況中，低于前述范圍的下 限的劑量水平可能是足夠的，而在其它情況中，可能采用更大劑量而不造成任何有害的副 作用，只要這樣的更大劑量首先分成整天施用的若干小劑量。有關施用途徑和劑量方案的 進一步的信息，參見ComprehensiveMedicinal Chemistry (綜合藥物化學)第5卷第25. 3 章(Corwin Hansch ；編委會主席)，Pergamon Press 1990，其通過引用具體地并入本文。MMl在本發(fā)明的另一實施方案中，提供了含有可以用于治療如上所述的病癥的物質(zhì)的 制品或者“藥盒(kit) ”。在一種實施方案中，所述藥盒包括含有本發(fā)明化合物的容器。適宜 的容器包括，例如瓶、小瓶、注射器、泡罩包裝等等。所述容器可以由多種材料形成，比如玻 璃或者塑料。所述容器可以裝有有效治療疾患的本發(fā)明化合物或者其制劑，并且可以具有 無菌入口(例如，容器可以為帶有可被皮下注射針刺穿的塞子的靜脈內(nèi)溶液袋或者小瓶)。所述藥盒還可以包括在容器上的或者容器附隨的標簽或者包裝說明書。術語“包 裝說明書”用于指通常包含在治療產(chǎn)品的商業(yè)包裝中的說明書，其包含關于適應癥、應用、 劑量、施用、禁忌癥和/或關于所述治療產(chǎn)品的應用警告的信息。在一個實施方案中，標簽或者包裝說明書說明包含本發(fā)明化合物的組合物可用于治療例如由AKT激酶介導的病癥。 標簽或者包裝說明書還可說明該組合物可用于治療其它病癥。在某些實施方案中，藥盒適宜遞送本發(fā)明化合物的固體口服形式，比如片劑或者 膠囊。優(yōu)選所述藥盒包括多個單位劑量。所述藥盒可以包括按它們預期的應用順序定向的 劑量的卡片。所述藥盒的實例為“泡罩包裝”。泡罩包裝在包裝工業(yè)中是公知的，并且廣泛 用于包裝藥物單位劑型。如果期望，可以提供記憶輔助工具，例如號碼、字母或者其它標記 的形式，或者可以提供有表明在治療時間表中可以施用劑量的日期的日歷插頁。根據(jù)另一種實施方案，藥盒可以包括(a)具有包含在其中的本發(fā)明化合物的第一 容器；和(b)具有包含在其中的第二藥物制劑的第二容器，其中所述第二藥物制劑包括可 用于治療AKT激酶介導的病癥的第二化合物。替代或者另外地，藥盒還可以包括含有藥學 上可接受的緩沖液比如注射用抑菌水(bacteriostatic water for injection，BWFD、磷酸 緩沖鹽水、林格氏溶液和葡萄糖溶液的第三容器。還可以包括從銷售和用戶立場而言需要 的其它物質(zhì)，包括其它緩沖液、稀釋劑、過濾器、針頭和注射器。藥盒還可以包括施用本發(fā)明化合物和如果存在的第二藥物制劑的指導。例如，如 果藥盒包括含有本發(fā)明化合物的第一組合物和第二藥物制劑，藥盒還可以包括將第一藥物 組合物和第二藥物組合物同時、順序或者分別地施用于需要其的患者的說明。在其中藥盒包含本發(fā)明組合物和第二治療劑的某些其它實施方案中，藥盒可以包 括含有分別的組合物的容器比如分開的瓶或者分開的箔片包裹，然而，分別的組合物還可 以包含在單獨的、未分開的容器中。在某些實施方案中，藥盒包括施用分別的組分的說明。 當分別的組分優(yōu)選以不同的劑型(例如，口服或者腸胃外)施用時，在不同的劑量時間間隔 施用時，或者當處方醫(yī)師期望組合的單一組分滴定時，藥盒形式是特別有利的。因此，本發(fā)明的進一步方面提供治療由Akt激酶介導的病癥或疾病的藥盒，其中 所述藥盒包含a)包含本發(fā)明化合物或其藥學上可接受的鹽的第一藥物組合物；和b)使用 說明書。在某些實施方案中，藥盒還包含(C)第二藥物組合物，其中所述第二藥物組合物 包含適于治療由Akt激酶介導的病癥或疾病的第二化合物。在包含第二藥物組合物的某些 實施方案中，藥盒還包含向需要其的患者同時、順序或分別施用所述第一藥物組合物和第 二藥物組合物的說明。在某些實施方案中，所述第一藥物組合物和第二藥物組合物容納在 不同容器中。在其它實施方案中，所述第一藥物組合物和第二藥物組合物容納在同一容器 中。雖然式I化合物主要作為用于哺乳動物的治療劑是有價值的，但它們也可用于需 要控制AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它絲氨酸/蘇氨酸激酶、和/或雙特異性激酶的任何 情況。因此，它們可用作供開發(fā)新的生物測試和尋找新的藥理學藥劑用的藥理學標準物?？梢栽隗w外、體內(nèi)或在細胞系內(nèi)測試本發(fā)明化合物對AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、 其它絲氨酸/蘇氨酸激酶、和/或雙特異性激酶的活性。體外測定包括確定對激酶活性抑 制作用的測定?？蛇x的體外測定定量確定抑制劑與激酶結合的能力，并且可以通過放射性 標記該抑制劑、然后結合、分離抑制劑/激酶復合物并確定結合的放射性標記的量來測量， 或者通過進行競爭實驗來測量，其中將新抑制劑與已知的放射性配體一起溫育。這些和其 它有用的體外和細胞培養(yǎng)物測定是本領域技術人員眾所周知的。
雖然已描述了本發(fā)明，并且在某種程度上作出了具體闡述，但應理解，本發(fā)明所公 開的內(nèi)容僅僅作為示例，本領域技術人員在不背離本發(fā)明的精神和不偏離本發(fā)明要求保護 的范圍的情況下，可以對各部分的組合和排列作出多種變化。生物學實施例AKT-I激酶測定本發(fā)明所述化合物的活性可采用下述激酶測定確定該測定采用市售IMAP試劑 盒，通過熒光極化測量全長人類重組活性AKT-I對熒光標記肽的磷酸化。測定材料從IMAP AKT測定散裝試劑盒(IMAP AKT Assay Bulk Kit)獲得，產(chǎn)品號 為R8059，得自Molecular Devices, Sunnyvale, CA。該試劑盒的材料包括IMAP反應緩沖 液(5X)。經(jīng)稀釋的 IXIMAP 反應緩沖液含有 IOmMTris-HCl (pH 7. 2) UOmM MgCl2^O. 1% BSA、0. 05% NaN3。臨用前常規(guī)加入DDT至ImM的終濃度。也包括IMAP結合緩沖液(5X) 和IMAP結合試劑。結合溶液以IMAP結合試劑在1 X IMAP結合緩沖液中的1 400稀釋液 來制備。熒光素標記的AKT 底物(Crosstide)具有(Fl)-GRPRTSSFAEG 的序列。在 1 X IMAP 反應緩沖液中制備20 μ M的貯液。所用的板包括Costar 3657 (382孔，由聚丙烯制成，具有白色ν形底)，該板用于化 合物稀釋和制備化合物-ATP混合物。測定板為PaCkardPrOXyPlateTM-384F。所用的AKT-I由用PDKl和MAP激酶2活化的全長人類重組AKT-I制備。為了進行測定，制備DMSO中IOmM的化合物貯液。在DMSO中以1 2連續(xù)稀釋貯 液和對照化合物(10 μ L化合物+10 μ L DMS0) 9次，得到所需劑量范圍內(nèi)的50 X稀釋液系 列。然后，將2. 1 μ L等份的化合物的DMSO溶液轉移至Costar 3657板上，該板含有50 μ L 含ImM DTT的1 X IMAP反應緩沖液中的10. 4 μ M ATP。在充分混合后，將2. 5- μ L等份液體 轉移至 ProxyPlate -384F 板上。通過加入含200nM熒光標記肽底物和4nM AKT-I的2. 5_μ L等份溶液起動該測定。 將板以IOOOg離心1分鐘，并于環(huán)境溫度下溫育60分鐘。然后加入15 μ L結合溶液猝滅反 應，再次離心，于環(huán)境溫度下再溫育30分鐘，然后在配置的Victor 1420Multilabel HTS計 數(shù)器上讀數(shù)，以測量熒光極化。在以上測定中檢驗實施例1-3的化合物，發(fā)現(xiàn)其具有小于500nM的IC5(1。制備實施例為了說明本發(fā)明而包括下述實施例。然而，應當理解，這些實施例并不限制本發(fā) 明，僅僅用來提出實施本發(fā)明的方法。本領域技術人員會認識到，可容易地改變所述的化學 反應以制備式I的大量其它化合物，且用于制備本發(fā)明化合物的替代方法視為落入本發(fā)明 范圍內(nèi)。例如，根據(jù)本發(fā)明的非示例性化合物的合成可采用對于本領域技術人員明顯的改 進方法成功地進行，例如通過適當保護干擾基團，利用本領域已知的除本申請所述試劑之 外的其它合適試劑，和/或對反應條件進行常規(guī)改進。或者，本文公開的或本領域已知的其 它反應也視為能用于制備本發(fā)明的其它化合物。以下實施例中，除非另有說明，否則所有溫度均以攝氏度記載。試劑購自商業(yè)供應 商，如 Aldrich Chemical Company、Lancaster、TCI 或 Maybridge，并且無需進一步純化而 使用，除非另有說明。四氫呋喃(THF)、二氯甲烷(DCM)、甲苯和二噁烷以安全密封瓶購自Aldrich，按照收到時的狀態(tài)使用。以下敘述的反應一般在氮氣或氬氣正壓下、或者在無水溶劑中用干燥管(除非另 有說明)進行，反應燒瓶通常配有橡膠隔片以供通過注射引入底物和試劑。玻璃器皿經(jīng)烘 箱干燥和/或加熱干燥。1H NMR譜在以400MHz操作的Varian儀器上記錄。用四甲基硅烷(0. OOppm)或殘 余溶劑(CDCl3 7. 25ppm ；CD3OD 3. 3Ippm ；D2O 4. 79ppm ；d6_DMS0 2. 50ppm)作為參比標準， 以CDC13、CD3OD, D2O或d6-DMS0溶液(以ppm報告)得到1H NMR譜。當報告峰多重性時， 使用以下縮寫s(單峰)、d(雙峰)、t(三重峰)、m(多重峰)、br(寬峰)、dd(雙雙峰)、 dt (雙三重峰)。當提供偶合常數(shù)時，以赫茲(Hz)報告。實施例1 (S) -2- (4-氯苯基)-3- (2-羥基 _2_ 甲基丙基氨基)(4- ((5R, 7R) 羥 基-5-甲基-6,7- 二氫-5H-環(huán)戊二烯并「dl嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮步驟1 將2-(4-氯苯基)乙酸甲酯(36. 7g，199mmol)和多聚甲醛(6. 27g， 209mmol)溶解/懸浮在DMSO (400mL)中并用NaOMe (537mg，9. 94mmol)處理。允許在室溫攪 拌混合物2小時，此時通過TLC分析粗產(chǎn)物確定反應完全。將反應物倒入冰冷的水(700mL ； 乳液)并通過加入IM HCl溶液來中和。用乙酸乙酯(3X)萃取水層，合并有機物。用水 (2X)、鹽水(IX)洗滌有機層，分離，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并在真空中濃縮，獲得作為油的粗 產(chǎn)物。將殘余物上樣到具有硅膠的大號砂心濾器(large fritted filtered)上，用9 1 己烷乙酸乙酯和隨后的1 1己烷乙酸乙酯洗脫，獲得作為油的2-(4_氯苯基)-3_羥 基丙酸甲酯(39. 4g,92% )0步驟2 將2-(4_氯苯基)-3_羥基丙酸甲酯(39. 4g，184mmol)溶解在DCM(500mL) 中，并用 TEA(64.0mL，459mmol)處理。將溶液冷卻到 0°C。然后用 MsCl (15. 6mL，202mmol) 緩慢地處理溶液，并允許攪拌30分鐘。用INHCl溶液將溶液分層，用DCM萃取水層一次。 再次用IN HCl溶液洗滌合并的有機層，分離，用稀NaHCO3溶液洗滌，并分離。經(jīng)MgSO4干燥 有機層，過濾并在真空中濃縮，獲得油，將其上樣到帶有硅膠塞的大號砂心濾器，用9 1己 烷乙酸乙酯洗脫，獲得作為油的2-(4_氯苯基)丙烯酸甲酯(30.8g，85%)。步驟3 將1-氨基-2-甲基-丙-2-醇(0. 408g,4. 58mmol)加到2_(4_氯苯基) 丙烯酸甲酯(0. 300g, 1. 52mmol)的四氫呋喃(3. 84mL)溶液中。允許反應在室溫攪拌過夜，
23產(chǎn)生粗的2-(4-氯苯基)-3-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)丙酸甲酯(436mg, 100%)o LCMS M+1286. 5。步驟4:將三甲基硅醇鉀(0. 228g，1.60mmOl)加到2-(4_氯苯基)-3-(2_羥 基-2-甲基丙基氨基)丙酸甲酯(0. 436g，1. 52mmol)的四氫呋喃(3. 5mL)溶液中。在 室溫攪拌混合物過夜。在減壓下除去THF。通過手性柱色譜純化粗材料，獲得兩種產(chǎn)物 (S)-2-(4-氯苯基)-3-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)丙酸(43mg，10.4%)和(R)-2-(4-氯 苯基)-3-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)丙酸(46mg，11.2% )。LCMS :M+1272. 5。步驟5 使用干冰-異丙醇浴將乙酸乙酯(“Et0Ac”;900mL)中的普累根酸乙酯 (Ethyl pulegenate) (130g, 662mmol)冷卻到_78°C。對該混合物進行臭氧分解直到反應的 顏色變成紫色。此時，臭氧的產(chǎn)生終止，將反應從干冰浴移出。向反應混合物通氧，直到變 成黃色。真空下濃縮反應混合物，將所得的殘余物溶解到冰乙酸(400mL)中。將溶液冷卻 到0°C，經(jīng)30分鐘分批地加入Zn粉(65g，993mmol)。然后允許反應攪拌2小時，此時將反 應混合物濾過硅藻土墊以除去鋅粉。用NaOH和NaHCO3水溶液將乙酸中和到pH 7，用乙醚 萃取(3X800mL)。用鹽水、MgSO4干燥合并的有機物并濃縮以獲得作為液體的(2R)_2_甲 基-5-氧代環(huán)戊烷羧酸乙酯(107g，95%)。步驟6 將水(60mL)中的 KOH (8. 3g，147. 9mmol)加到(2R)_2_ 甲基 ~5~ 氧代環(huán)戊 烷羧酸乙酯(20g，117. 5mmol)與硫脲(9. 2g，120. 9mmol)混合物的乙醇(IOOmL)溶液。將 混合物回流10小時。冷卻后，除去溶劑。用濃HCl(12mL)在0°C中和所得的殘余物，然后 用DCM萃取(3X150mL)。除去溶劑，通過硅膠色譜純化所得的殘余物，以己烷/乙酸乙酯 (2 1)洗脫獲得(R)-2-巰基-5-甲基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶_4_醇(12g， 56% )。MS(APCI+) [M+H]+1830步驟7 將阮內(nèi)鎳(15g)和NH4OH (20mL)加到(R) _2_巰基-5-甲基-6，7- 二 氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-醇(12g，65.8mm0l)在蒸餾水(IOOmL)中的懸液。將混 合物回流3小時然后過濾。濃縮濾液獲得(R)-5-甲基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧 啶-4-醇(9. 89g,99% )。MS(APCI+) [M+H]+151。步驟8和9描述從(R)-2-甲基-5-氧代環(huán)戊烷羧酸乙酯開始，合成(R)_5_甲 基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-醇的替代方案。步驟8 將乙酸銨(240g，3114mmol)加到(R)-2-甲基_5_氧代環(huán)戊烷羧酸乙酯 (106. Og, 622. 8mmol)的MeOH(1. 2L)溶液中。在室溫在氮氣下攪拌反應混合物20小時，由 TLC和HPLC確定反應完全。濃縮反應混合物以除去MeOH。將所得的殘余物溶解在DCM中，用 H20(2X)、鹽水(IX)洗滌，干燥(Na2SO4),過濾并濃縮以獲得作為油的(R)_2_氨基-5-甲 基環(huán)戊-1-烯羧酸乙酯(102g，97%產(chǎn)率)。LC/MS(APCI+)m/z 170[M+H]+。步驟9 將甲酰胺(303. 5mL,7640mmol)中的含有(R)_2_氨基-5-甲基環(huán)戊烯 羧酸乙酯(161.6g,955mmol)和甲酸銨(90. 3g, 1433mmol)的溶液加熱到內(nèi)部溫度為150°C 并攪拌17小時。冷卻反應混合物，轉移到2L單萃取燒瓶(single nextracted flask)。然后 通過高真空蒸餾除去過量甲脒。在甲脒停止餾出后，將蒸餾釜中剩余的油溶解在DCM中并 用鹽水洗滌(3X200mL)。用DCM萃取合并的水相洗液。將合并的有機萃取物干燥(Na2SO4)， 過濾并濃縮。將所得的油溶解在少量DCM中，使用分液漏斗將該溶液加到乙醚的攪拌溶液 (相對于DCM溶液約5倍體積的乙醚)，導致形成一些沉淀。通過濾過中等砂心漏斗(mediumfrit funnel)除去這些沉淀，用乙醚沖洗并丟棄。濃縮濾液，從乙醚研磨重復兩次。然后 在高真空管道中干燥產(chǎn)物，獲得作為漿狀固體的(R)-5-甲基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并 [d]嘧啶-4-醇(93. 23g，65. 0%產(chǎn)率)。LC/MS(APCI_)m/z 149.2。步驟10 通過滴液漏斗將純POCl3(463. 9mL, 5067mmol)緩慢地加到(R)-5-甲 基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-醇(152. 2g, 1013mmol)在 DCE(1.2L)中的 0°C 溶液。完成加入后，將反應混合物升溫到室溫，然后在攪拌下加熱到回流70分鐘。通過HPLC 確定反應完成。將反應混合物冷卻到室溫，如下以4部分猝滅過量POCl3 將反應混合物轉 移到分液漏斗并滴到含有冰和在冰浴中冷卻的飽和NaHCO3溶液的燒杯中。完成加入每一 部分的反應混合物后，攪拌猝滅的混合物30分鐘以確保在轉移到分液漏斗之前完全破壞 POCl30將混合物轉移到分液漏斗并用DCM萃取(2X)。將合并的萃取液干燥(Na2SO4)，過 濾并濃縮。在硅膠上如下純化粗產(chǎn)物將硅膠(Ikg)在9 1己烷乙酸乙酯中漿化在3L 砂心漏斗上，真空下沉積硅土，蓋上沙。將粗產(chǎn)物用DCM/己烷混合物上樣，使用IL側臂燒 瓶在真空下洗脫化合物。首先洗脫高Rf的副產(chǎn)物，然后是作為油的(R)-4-氯-5-甲基-6， 7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶(104.48，61.09%產(chǎn)率)。將三乙胺(93. 0mL,534mmol) 和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(34. 8g，187mmol)加到(R) -4-氯-5-甲基-6，7- 二氫-5H-環(huán)戊二 烯并[d]嘧啶(30. Og，178mmol)的n-Bu0H(250mL)溶液。在氮氣下將反應混合物加熱到回 流并攪拌過夜(17小時)，之后在旋轉蒸發(fā)器(rotavap)上濃縮。將所得的油溶解在DCM 中，用H2O洗滌，干燥(Na2SO4),過濾并濃縮。在硅膠上純化所得的油，首先以2 1己烷 乙酸乙酯洗脫，直到清澈地洗脫產(chǎn)物，然后以1 1至1 5DCM 乙酸乙酯的梯度洗脫獲 得作為粉末的(R)-4-(5-甲基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶_4_基)哌嗪-1-羧 酸叔丁酯(42. 0g，74. 產(chǎn)率)。LC/MS(APCI+)m/z 319·1[Μ+Η]+。步驟11 將固態(tài)77% max.間氯過苯甲酸(“m-CPBA” ；23. 9g，107mmol)分批加 到(R)-4-(5-甲基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶_4_基)哌嗪羧酸叔丁酯 (20. Og,62. 8mmol)在CHCl3(310mL)中的0°C溶液中。攪拌反應混合物5分鐘，然后升溫到 室溫并攪拌另外90分鐘。7. 5小時后HPLC看起來相似。將反應混合物冷卻到0°C，然后加 Λ NaHCO3(13. 2g，157mmol)和另外0. 5當量的m-CPBA0攪拌反應混合物過夜(14小時)。 將反應混合物冷卻到0°C，通過滴液漏斗逐滴加入Na2S2O3 (29. 8g，188mmol)的H20(50mL) 溶液。隨后通過滴液漏斗加入Na2C03(24. 6g，232mmOl) &H20(70mL)溶液(混合物變得同 質(zhì))。攪拌反應混合物30分鐘，然后用CHCl3萃取混合物(3 X 150mL)。將合并的萃取液干 燥(Na2SO4),過濾并濃縮以獲得(R)-4-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪基)_5_甲基-6，7-二 氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶 1-氧化物(21. Og, 100% ) ο LC/MS (APCI+)m/z 335. 1[M+H]+。步驟12 將 Ac2O (77. 0mL,816mmol)力Π 到(R)-4-(4-(叔丁氧基羰基)哌 嗪-1-基)-5_甲基-6，7-二氫-5Η-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶1-氧化物(21.0g，62. 8mmol) 中。在氮氣下在90°C沙浴中加熱反應混合物并攪拌100分鐘。將反應混合物冷卻到室 溫，通過旋轉蒸發(fā)除去過量乙酸酐。將所得的油溶解在DCM中，然后小心地將其倒入冰飽 和Na2C03。用DCM萃取混合物，將合并的萃取液干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮獲得作為泡沫的 (5R)-4-(7-乙酰氧基-5-甲基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶_4_基)哌嗪-1-羧 酸叔丁酯(23. 6g, 100% ) ο LC/MS(APCI+)m/z 377·1[Μ+Η]+。步驟13 將 LiOH-H2O(6. 58g, 157mmol)加至Ij (5R)~4~(7~ 乙酰氧基 _5_ 甲基 _6，
257-二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(23.6g，62.69mmol)在 2 ITHF H20(320mL)中的0°C溶液。攪拌反應混合物10分鐘，然后升溫到室溫。LC/MS 在3小時和4. 5小時時看起來相同。將反應混合物冷卻到0°C，然后將飽和NH4Cl加到混合 物。攪拌混合物5分鐘，通過旋轉蒸發(fā)除去大部分THF。用EtOAc萃取混合物(3X250mL)， 將合并的萃取液干燥(Na2SO4),過濾并濃縮。將粗產(chǎn)物在Biotage 65M 4 IDCM 乙酸 乙酯、然后梯度至1 1到1 4DCM 乙酸乙酯上進行快速色譜。洗脫產(chǎn)物后，然后將乙 酸乙酯沖洗過柱。然后用30 IDCM MeOH洗脫剩余的產(chǎn)物(8. 83g)。將混合的級分用 Biotage 40M使用相同條件進行再次快速色譜以獲得另一部分(2. 99g)，這獲得作為泡沫 的(5R)-4-(7-羥基-5-甲基-6，7- 二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸 叔丁酯(11. 82g，56. 38%產(chǎn)率)的組合產(chǎn)生。LC/MS(APCI+)m/z 335. 1[M+H]+。步驟14 將DMSO(5. 45mL, 76. 8mmol)的DCM(50mL)溶液通過滴液漏斗逐滴加到 草酰氯(3. 35mL，38.4mmol)在DCM(150mL)中的_78°C溶液。攪拌反應混合物35分鐘，然 后通過滴液漏斗緩慢加入(5R)-4-(7-羥基-5-甲基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧 啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(9. 17g，27.4mmol)的DCM(80mL)溶液。在_78°C將反應 混合物攪拌另外1小時，然后將純?nèi)野?18. OmL，129mmol)加到混合物。然后允許反應 混合物升溫到室溫，然后攪拌30分鐘。加入H20。用DCM萃取混合物(3X200mL)，將合并 的萃取液干燥(Na2SO4),過濾并在真空濃縮。在硅膠(Biotage 65M)上純化粗產(chǎn)物用大約 800mL的4 IDCM EtOAc、然后梯度至1 IDCM 乙酸乙酯沖洗柱直到產(chǎn)物洗脫，然后用 1 4DCM EtOAc洗脫產(chǎn)物獲得作為泡沫的(R)-4-(5-甲基-7-氧代-6，7-二氫-5H-環(huán) 戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7.58，82.3%產(chǎn)率)。從DCM/己烷濃縮 (3X)泡沫，這也獲得泡沫。HPLC >95%面積。LC/MS(APCI+)m/z 333[M+H]+。步驟15:將三乙胺(4.33mL，31. Immol ；使用前用氮氣脫氣30分鐘)和甲酸 (1.36mL，36. Immol ；使用前用氮氣脫氣30分鐘)加到(R) _4_(5-甲基-7-氧代-6，7-二 氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(9. 75g，29. 3mmol)的DCM(210mL ； 使用前用氮氣脫氣30分鐘)溶液中。攪拌混合物5分鐘，然后加入Ru催化劑(0. 0933g, 0. 147mmol)。在正氮壓下攪拌反應過夜(18小時)。將反應混合物濃縮至干燥并在高真空 干燥。將不純的材料在上樣有1 IDCM 乙酸乙酯500mL沖洗、然后1 4DCM 乙酸乙酯 直到產(chǎn)物出現(xiàn)(第2個點)、然后梯度至純乙酸乙酯的Biotage 65M上進行快速色譜，然后 用25 IDCM MeOH洗脫剩余產(chǎn)物。合并各級分并在旋轉蒸發(fā)器上濃縮。再次從DCM/己 烷濃縮剩余物，獲得作為泡沫的4- ((5R，7R) -7-羥基-5-甲基-6，7- 二氫-5H-環(huán)戊二烯并 [d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(大量)和4-((5札75)-7-羥基-5-甲基-6，7-二 氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(少量)(9. 35g，95. 3%產(chǎn)率) 的混合物。LC/MS(APCI+)m/z 335[M+H]+。1H NMR(CDCl3)顯示并入次甲基甲醇(carbinol methine)的88%的非對映立體選擇性。步驟16 將 4-硝基苯甲酰氯(4. 27g,23. Ommol)加到 4_ ((5R，7R) _7_ 羥基 _5_ 甲 基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7. Og, 20. 9mmol)和 三乙胺(4. 38mL，31.4mm0l)在DCM(IlOmL)中的0°C溶液。在室溫攪拌反應混合物過夜，然 后加入飽和NaHC03。攪拌混合物10分鐘，然后用DCM萃取。將合并的萃取液干燥(Na2SO4), 過濾并濃縮。將粗產(chǎn)物在Biotage 65M上進行快速色譜(用3 1己烷乙酸乙酯上樣粗產(chǎn)物，然后2 1己烷乙酸乙酯洗脫4-((5R，7R)-5-甲基-7-(4-硝基苯甲酰氧基)-6， 7- 二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯和一些混合的級分)。然 后使用1 2己烷乙酸乙酯洗脫4-((5R，7S)-5-甲基-7-(4-硝基苯甲酰氧基)-6，7-二 氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。通過旋轉蒸發(fā)濃縮帶有產(chǎn)物 的部分，獲得作為泡沫的4- ((5R，7R) -5-甲基-7- (4-硝基苯甲酰氧基)_6，7- 二氫-5H-環(huán) 戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(8. 55g，84. 5%產(chǎn)率)。LC/MS (APCI+)m/z 484[M+H]+。1H NMR(⑶Cl3)顯示單種非對映體)。通過旋轉蒸發(fā)濃縮帶有其它非對映體的 級分，獲得作為泡沫的4- ((5R，7S) -5-甲基-7- (4-硝基苯甲酰氧基)_6，7- 二氫-5H-環(huán)戊 二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0. 356g，3. 52%產(chǎn)率)。LC/MS(APCI+)m/z 484[M+H]+。步驟17描述從(5R)-4_(7-羥基-5-甲基-6，7_ 二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧 啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(步驟13)制備4-((5札7幻-5-甲基-7-(4-硝基苯甲酰氧 基)-6，7_ 二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯和4-((5R，7R)-5-甲 基-7-(4-硝基苯甲酰氧基)-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪羧酸 叔丁酯的替代方案。步驟17 將4-硝基苯甲酰氯(15. 78g,85. 03mmol)加到(R)-4-(7-羥基-5-甲 基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(25. 85g，77. 30mmol) 和NEt3(ll. 73g, 16. 16mL, 115. 9mmol)在DCM(400mL)中的0°C溶液。攪拌反應混合物5分鐘。 然后將混合物升溫到室溫并攪拌過夜(17小時)，然后加入飽和NaHC03。攪拌反應混合物10 分鐘并轉移到分液漏斗。收集有機層，用DCM洗滌水相萃取物(2X)。將合并的有機萃取物 干燥(Na2SO4),過濾并濃縮。將粗產(chǎn)物在上樣有7 1己烷乙酸乙酯的硅土上進行快速色 譜(梯度5 1己烷乙酸乙酯至2 1己燒乙酸乙酯至1 1己燒乙酸乙酯)。分 離了 一些透明的4- ((5R，7R) -5-甲基-7- (4-硝基苯甲酰氧基)_6，7- 二氫-5H-環(huán)戊二烯并 [d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯級分、一些透明的4- ((5R，7S) -5-甲基-7- (4-硝基 苯甲酰氧基)-6，7_ 二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯級分和一 些混合的級分。將混合的級分再次過柱，并與此前分離的材料合并，獲得4-((5R，7R)-5-甲 基-7- (4-硝基苯甲酰氧基)_6，7- 二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔 丁酯(14. 27g,38% )和 4-((5R，7S)-5-甲基 _7_(4-硝基苯甲酰氧基)-6，7-二氫-5H-環(huán) 戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(12.58g，34%)。已顯示，使用4-溴苯甲 酰氯提供略微更好的異構體分離。步驟18 將 Li0H-H20(0· 499g，11. 9mmol)力口至Ij 4-((5R，7R)-5-甲基-7_(4_ 硝基 苯甲酰氧基)-6，7_ 二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2. 30g, 4. 76mmol)在2 ITHF H20(40mL)中的0°C溶液。將反應混合物升溫到室溫并攪拌1小 時。通過旋轉蒸發(fā)除去THF。然后加入飽和NaHCO3，用乙酸乙酯萃取混合物。用飽和NaHCO3 洗滌(IX)合并的萃取液，干燥(Na2SO4),過濾并濃縮，獲得作為泡沫的4-((5R，7R)-7-羥 基-5-甲基-6，7- 二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1. 59g， 100. 0%產(chǎn)率)。對流程正產(chǎn)物(workup just product)的HPLC獲得大于98%面積的純。 LC/MS(APCI+)m/z 335[M+H]+。步驟19:將 4M HCl/二噁烷(11. 2mL，44. 9mmol)加到 4-((5R，7R)-7-羥基-5-甲基-6，7- 二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0. 600g, 1. 79mmol) 的二噁烷(15mL)溶液中。在室溫在氮氣下攪拌反應混合物過夜(20小時)。將混合物濃縮 至干燥并在高真空管道中干燥。將粗產(chǎn)物懸浮在乙醚中，超聲處理，并攪拌5分鐘。通過在 氮壓力下濾過中等砂心漏斗而分離固體，用乙醚沖洗，在氮氣壓下干燥，并進一步在高真空 管道干燥，獲得作為粉末的(5R，7R) -5-甲基-4-(哌嗪-1-基)-6，7- 二氫-5H-環(huán)戊二烯 并[d]嘧啶-7-醇二鹽酸化物(0. 440g，79. 8%產(chǎn)率)。LC/MS(APCI+)m/z 235。步驟20 將0_(苯并三唑-1-基)-N，N, N，，N，-四甲基六氟磷酸脲(0. IOOg, 0. 265mmol)加入(5R，7R)_5_ 甲基 _4_ (哌嗪-1-基)-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧 啶-7-醇(31mg，0. 13mmol)、N，N-二異丙基乙胺(0. 231mL, 1. 32mmol)禾Π (S)-2-(4-氯苯 基)-3-(2-羥基-2-甲基丙基氨基)丙酸(43mg，0. 16mmol)的二氯甲烷(1. 2mL，19mmol) 溶液。在室溫攪拌混合物1小時，然后用飽和NH4Cl水溶液猝滅反應。用DCM(3 X IOmL)萃 取混合物。將合并的有機萃取物干燥(Na2SO4),過濾并濃縮。通過反相HPLC純化粗產(chǎn)物， 獲得(S) -2- (4-氯苯基)-3- (2-羥基-2-甲基丙基氨基)-1-(4- ((5R，7R) -7-羥基-5-甲 基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮(33mg，51% )。 1Hnmr(Cdci3AOOmHz) δ 8. 59 (S，1H)，7. 50 (d，J = 8· 5Ηζ，2Η)，7· 33(d，J = 8·5Ηζ，2Η)， 5. 06 (m, 1H)，4. 48 (m, 1H)，3. 92 (m, 2H)，3. 15 (m, 2H)，2. 94 (m, 2H)，2. 02 (m, 2H)，1. 19 (m, 6H)， 1.06 (d,3H). LCMS M+1488. 3。實施例2 (S) -2- (4-氯苯基)-3-(l-羥基-2-甲基丙 基氨基)土(4- ((5R, 7R)土 羥 基-5-甲基-6,7- 二氫-5H-環(huán)戊二烯并「dl嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮(S) -2- (4-氯苯基)-3- (1-羥基 _2_ 甲基丙 _2_ 基氨基)(4_ ((5R，7R) _7_ 羥 基-5-甲基-6，7- 二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮根據(jù)實 施例1描述的方案制備，用2-氨基-2-甲基丙-1-醇代替1-氨基-2-甲基-丙-2-醇。 1HNMR(CDCl3, 500ΜΗζ) δ 8. 42 (s, 1H) ,7. 39 (d, J = 8. 6Hz,2H) ,7. 33 (d, J = 8·6Ηζ，2Η)， 4. 82 (m, 1Η)，4. 37 (m, 1Η) ,4. 31 (m, 2Η)，4. 07 (m, 1H)，3. 77 (m, 2H)，3. 68-3. 43 (m, 6H)， 1. 97-1. 89(m，2H)，1. 04(s，3H)，1. 03(s,3H) ,0. 88 (d，3H). LCMS M+1488. 2。實施例3 (S)-2-(3-氟_4-(三氟甲基)苯基)-3-(1_羥基-2-甲基丙_2_基氨 基)-l-(4-((5R,7R)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并「dl嘧啶-4-基)哌 嗪-1-基)丙-ι-酮(S)-2-(3-氟_4-(三氟甲基)苯基)-3-(1_羥基_2_甲基丙_2_基氨 基)-l-(4-((5R，7R)-7-羥基-5-甲基-6，7-二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶_4_基)哌 嗪-1-基)丙-1-酮根據(jù)實施例1描述的方案制備，用2- (3-氟-4-三氟甲基苯基)乙酸甲 酯代替 2-(4-氯苯基)乙酸甲酯。1Hnmr(Cdci3JOOmHz) δ 8. 58 (s, m) ,7. 86(t, J = 7. 9Hz, 1H)，7. 50 (d，J = 8. 5Hz，1H)，7. 37 (d，J = 7. 9Hz，1H)，5. 04 (m, 1H)，4. 50 (m, 2H)，3. 93 (m, 2H)，3. 07 (m, 2H)，2. 01 (m, 2H)，1. 23 (s, 3H)，1. 22 (s, 3H)，1. 06 (d, 3H). LCMS M+1540. 3。上述說明被認為僅僅是本發(fā)明原理的例證說明。此外，多種變型和變體對于本領 域熟練技術人員都是明顯的，因此并不希望將本發(fā)明限于如上所述的確切結構和方法。據(jù) 此，應當認為所有的適宜變型和等價體都落入以下權利要求書所限定的本發(fā)明范圍內(nèi)。詞語“包含”(comprise)、“包含”(comprising)、“包括”(include)、“包 括”(including)和“包括”(includes)當用于本說明書和所附權利要求書中時，旨在具體 限定存在所述的特征、整數(shù)、組分或步驟，但不排除存在或加入一個或多個其它特征、整數(shù)、 組分、步驟或組別。
權利要求
式I的化合物和其鹽其中R1是具有一個OH取代的C1 C6烷基；R2是氫或F；且R3是Cl或CF3。FSB00000298692900011.tif
2.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其具有式II的結構
3.根據(jù)權利要求1或2所述的化合物，其中R1是具有一個OH取代的C4烷基。
4.根據(jù)權利要求1至3中任一項所述的化合物，其中R1是-CH2C(CH3) 20H。
5.根據(jù)權利要求1至3中任一項所述的化合物，其中R1是-C(CH3)2CH20H。
6.根據(jù)權利要求1至5中任一項所述的化合物，其中R2是氫。
7.根據(jù)權利要求1至5中任一項所述的化合物，其中R2是F。
8.根據(jù)權利要求1至7中任一項所述的化合物，其中R3是Cl。
9.根據(jù)權利要求1至7中任一項所述的化合物，其中R3是CF3。
10.根據(jù)權利要求1至5中任一項所述的化合物，其中R2是氫且R3是Cl。
11.根據(jù)權利要求1至5中任一項所述的化合物，其中R2是F且R3是CF3。
12.根據(jù)權利要求4所述的化合物，其中R2是氫且R3是Cl。
13.根據(jù)權利要求5所述的化合物，其中R2是氫且R3是Cl。
14.根據(jù)權利要求5所述的化合物，其中R2是F且R3是CF3。
15.一種化合物，其選自以下結構
16.
17.
18.根據(jù)權利要求15所述的化合物，其具有以下結構
19.(S) -2- (4-氯苯基)-3- (2-羥基-2-甲基丙基氨基)(4- ((5R，7R) -7-羥基-5-甲 基-6，7- 二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮。
20.⑶-2-(4-氯苯基)-3- (1-羥基-2-甲基丙-2-基氨基)-1- (4- ((5R，7R) -7-羥 基-5-甲基-6，7- 二氫-5H-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮。
21.(S)-2-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-3-(1_羥基-2-甲基丙-2-基氨 基)-1-(4-((5札710-7-羥基-5-甲基-6，7-二氫-5!1-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶_4_基)哌 嗪-ι-基)丙-ι-酮。
22.—種藥物組合物，包含權利要求1至21所述的化合物。
23.一種治療哺乳動物中AKT介導的疾病或病癥的方法，所述方法包括向所述哺乳動 物施用治療有效量的權利要求1至21所述的化合物。
24.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中所述疾病或病癥是炎性疾病或病癥、過度增生 性疾病或病癥、心血管疾病或病癥、神經(jīng)變性疾病或病癥、婦科疾病或病癥或皮膚疾病或病癥。
25.—種抑制哺乳動物中AKT蛋白激酶產(chǎn)生的方法，該方法包括向所述哺乳動物施用 有效量的權利要求1至21所述的化合物。
26.—種抑制哺乳動物中AKT蛋白激酶活性的方法，該方法包括使所述激酶與權利要 求1至21所述的化合物接觸。
27.權利要求1至21所述的化合物，其用作治療AKT蛋白激酶介導的疾患的藥物。
28.權利要求1至21所述的化合物在制備用于治療的藥物中的用途。
29.權利要求1至21所述的化合物在治療過度增生性疾病中的用途。
30.權利要求1至21所述的化合物在治療癌癥中的用途。
31.一種用于治療AKT蛋白激酶介導的疾患的藥盒，其中所述藥盒包含含有權利要求1 至21所述的化合物的第一藥物組合物。
32.根據(jù)權利要求31所述的藥盒，還包含使用說明書。
全文摘要
本發(fā)明提供了包含式I的化合物，包括其藥學上可接受的鹽，還提供了使用本發(fā)明化合物作為AKT蛋白激酶抑制劑的方法和治療過度增生性疾病如癌癥的方法。
文檔編號C07D239/70GK101932564SQ200980101901
公開日2010年12月29日 申請日期2009年1月9日 優(yōu)先權日2008年1月9日
發(fā)明者伊恩·S·米切爾, 克里斯廷·沙博, 史蒂文·多, 基思·L·斯潘塞, 尼古拉斯·C·卡蘭, 布賴恩·薩菲納, 張碧榮, 徐睿, 校登明, 梁軍, 約瑟夫·R·本西克, 詹姆斯·F·布拉克 申請人:陣列生物制藥公司;健泰科生物技術公司