專利名稱：微波輔助連續(xù)流大規(guī)模多肽合成方法與裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種多肽合成方法及其裝置，特別是一種微波輔助連續(xù)流大規(guī)模多肽合成方 法及其裝置，屬于有機(jī)化學(xué)和藥物化學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
多肽是涉及生物體內(nèi)各種細(xì)胞功能的生物活性物質(zhì)，人工方法合成多肽已有百年的歷史 。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，多肽在醫(yī)藥領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，如多肽疫苗、抗腫瘤多肽、抗病 毒多肽、多肽導(dǎo)向藥物、細(xì)胞因子模擬肽、抗拒活性肽等。多肽不僅作為新藥開發(fā)目標(biāo)，同 時(shí)也成為開發(fā)其它藥物的篩選目標(biāo)。因此，多肽的合成成為各國學(xué)者研究的重要課題。
多肽合成的方法可分為液相合成法和固相合成法。自Merrifield創(chuàng)立并發(fā)展了固相合 成多肽的方法，使多肽合成領(lǐng)域取得了重大突破，對(duì)化學(xué)、生化、醫(yī)藥、免疫及分子微生物 學(xué)等領(lǐng)域也都起了巨大的推動(dòng)作用。目前，人工合成多肽主要以固相合成為主。
微波是指頻率大于無線電波而小于紅外光的電磁波，其頻率范圍在300腿z 30GHz，相 應(yīng)的波長lm lcm范圍。大量研究結(jié)果表明，經(jīng)由微波照射可以大幅度提升許多反應(yīng)的反應(yīng) 速率，大大縮短反應(yīng)時(shí)間，產(chǎn)率也有所提高。目前研究涉及的反應(yīng)包括Diels-Alder反應(yīng)、 Claisen重排、氧化反應(yīng)、酯化反應(yīng)、自由基反應(yīng)、水解反應(yīng)、親核取代反應(yīng)等液相反應(yīng)。 此外，微波照射應(yīng)用在固相合成反應(yīng)和酶催化的反應(yīng)上，也可以很好地促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行( J. Z. Carrillo-Munoz， D. Bouvet， E. Guibe-Jampel ， J. Org. Chem.， 1996， 61-7746)
Wang等的研究指出，在使用微波照射的條件下，使用固相合成儀器合成目標(biāo)多肽，一 方面使偶聯(lián)反應(yīng)的時(shí)間縮短在6min內(nèi)(常規(guī)的液相合成這一多肽大約需要3h)，另一方面偶 聯(lián)效率也大大提高(比液相合成法大約提高了16%) (H.M.Yu， S.T.Chen， K. T. Wang ， J. Org. Chem. ， 1992， 57-1781)。據(jù)此，美國CEM公司生產(chǎn)出Liberty微波多肽合成儀，使多肽 合成的時(shí)間由過去以小時(shí)為單位計(jì)算的歷史改寫為以分鐘為單位計(jì)算。此外，中國發(fā)明專利 CN1298732C公開了一種多肽微波固相合成法，將微波技術(shù)用于多肽的固相合成，取得了一 定的成果。
但是，目前國內(nèi)多肽合成企業(yè)的產(chǎn)量較低，大部分僅達(dá)到克級(jí)水平，而國外已經(jīng)有很多企業(yè)的生產(chǎn)水平已經(jīng)達(dá)到公斤級(jí)甚至幾十公斤級(jí)，但是合成的效率及得率都不是很高。因此 ，開發(fā)一種可以高效率的大規(guī)模合成多肽的方法和裝置，對(duì)于促進(jìn)我國多肽藥物的發(fā)展，實(shí) 現(xiàn)高效低成本多肽的合成具有積極意義。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)上述不足之處，提供一種微波輔助連續(xù)流大規(guī)模多肽合成方法及其 裝置，將多肽的產(chǎn)量提高到公斤級(jí)甚至幾十公斤級(jí)，從而實(shí)現(xiàn)了多肽的大規(guī)模生產(chǎn)。 本發(fā)明為達(dá)到以上目的，是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
一種微波輔助連續(xù)流大規(guī)模多肽合成裝置，包括反應(yīng)釜和微波反應(yīng)中心，微波反應(yīng)中心 設(shè)有出樣孔和進(jìn)樣孔；反應(yīng)釜的上端設(shè)有加料口和回流進(jìn)口，回流進(jìn)口與微波反應(yīng)中心的出
樣孔通過管路連接，反應(yīng)釜的下端設(shè)有出料口和回流出口，回流出口與微波反應(yīng)中心的進(jìn)樣 孔通過管路連接，在反應(yīng)釜和微波反應(yīng)中心的連接管路上設(shè)有在線檢測裝置和動(dòng)力裝置。此 微波輔助連續(xù)流大規(guī)模多肽合成裝置可以在短時(shí)間里，化學(xué)合成任何肽鏈長度的多肽以及多 肽化合物，合成的多肽化合物可以方便地經(jīng)在線檢測裝置檢測。微波反應(yīng)中心所采用的微波
發(fā)射為單模形式，所用的微波頻率可以是915腿z、 2450腿z、 5800腿z或22125腿z，其中較為 常用的是2450 MHz。經(jīng)由微波輻射，大幅度提升了整個(gè)合成反應(yīng)的反應(yīng)速率，大大縮短反應(yīng) 時(shí)間，產(chǎn)率也有所提高。
本發(fā)明的動(dòng)力裝置優(yōu)選泵，通過調(diào)節(jié)泵的流速可以很好地控制反應(yīng)物質(zhì)流經(jīng)微波反應(yīng)中 心的時(shí)間，使反應(yīng)更為充分。
作為優(yōu)選，反應(yīng)釜和微波反應(yīng)中心設(shè)有自動(dòng)調(diào)節(jié)速度的攪拌裝置，該攪拌裝置為外接機(jī) 械攪拌或磁力攪拌。
作為優(yōu)選，微波反應(yīng)中心設(shè)有紅外測溫裝置、壓力檢測裝置和冷卻裝置，冷卻裝置優(yōu)選 為冷凝回流裝置。紅外測溫裝置、壓力檢測裝置和冷卻裝置可以更好的控制反應(yīng)過程，使合 成反應(yīng)較為充分。
作為優(yōu)選，加料口設(shè)有多通道的閥門，與原料罐、試劑罐和洗脫液罐連接；出料口設(shè)有 兩通道閥門，分別與樣品收集器和廢液罐連接；所述的出料口還設(shè)有篩網(wǎng)，能有效地將固體 反應(yīng)基質(zhì)與反應(yīng)溶劑分離。
作為優(yōu)選，在線檢測裝置選用紫外檢測器、紅外檢測器、拉曼光譜儀中的一個(gè)或兩個(gè)以上。
作為優(yōu)選，反應(yīng)釜由耐酸、耐堿、耐有機(jī)溶劑的材料制成，更為理想的材料是高密度聚 丙烯。本發(fā)明裝置可設(shè)置閥門控制、各種溫度和壓力控制及各種動(dòng)力系統(tǒng)的控制，將其連接到 工作站，達(dá)到自動(dòng)化控制的目的。
此方法并不只局限于Fmoc、 t-Boc或NSC化學(xué)合成法。
此方法并不只局限于多肽的合成，也可以用于其它分子，如碳水化合物、蛋白質(zhì)化合物 等的大規(guī)模合成。
本發(fā)明使用的專用術(shù)語名稱以及多肽載體的制備，多肽的偶聯(lián)合成反應(yīng)以及多肽偶聯(lián)反 應(yīng)的監(jiān)測方法都是本領(lǐng)域中為人熟知和常用的，除非有另外不同的定義，本文所使用的技術(shù) 與科學(xué)術(shù)語與本發(fā)明所屬領(lǐng)域一般技術(shù)人員通常所理解的一樣。但是關(guān)于本發(fā)明的實(shí)施或?qū)?驗(yàn)，現(xiàn)對(duì)以下術(shù)語予以定義，并對(duì)本發(fā)明中的設(shè)計(jì)與材料加以描述。
多肽反應(yīng)載體反應(yīng)載體是一種具有硬性或半硬性表面，但同時(shí)具有功能鏈團(tuán)的高分子 材料。 一般以聚苯乙烯或聚乙烯為基本骨架，通過化學(xué)修飾，氨基酸可連接到反應(yīng)載體上。 反應(yīng)載體的孔徑一般為100 200目或70目，如此可以保持在過濾時(shí)反應(yīng)載體與溶劑的徹底分 離。
多肽合成反應(yīng)指按照多肽的自然序列，通過化學(xué)合成的方法將多種氨基酸連接起來。 多肽合成需要反應(yīng)釜、反應(yīng)載體、洗脫試劑、偶聯(lián)試劑等。本發(fā)明將反應(yīng)物通過微波反應(yīng)中 心的微波輻射來提升整個(gè)多肽合成反應(yīng)的反應(yīng)速率，縮短反應(yīng)時(shí)間。本發(fā)明的反應(yīng)載體是氨 基酸樹脂。
常用氨基酸雖然本發(fā)明可適用于任何保護(hù)氨基酸、小分子化合物的固相合成，但本發(fā) 明僅采取L-型常用保護(hù)氨基酸作為實(shí)例。
使用該合成裝置來大規(guī)模合成多肽的操作過程如下
① 取適量氨基酸-樹脂復(fù)合物投入反應(yīng)釜，加入脫保護(hù)基試劑，在微波反應(yīng)中心的微波 輻射下脫除氨基保護(hù)基，之后濾掉脫保護(hù)基試劑，用試劑DMF洗滌樹脂；根據(jù)多肽序列，向 反應(yīng)釜中加入下一個(gè)預(yù)先活化的帶保護(hù)基氨基酸和偶聯(lián)試劑，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下 進(jìn)行氨基酸偶聯(lián)反應(yīng)，之后濾掉殘留的氨基酸與試劑液體，用試劑DMF洗滌樹脂；
② 按照氨基酸從羧基端到氨基端的順序，更換氨基酸，重復(fù)步驟①，合成所需的多肽；
③ 多肽完成所有的序列與反應(yīng)后，加入切割試劑，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下進(jìn)行切 割，得到多肽粗品。
本發(fā)明中所述的在微波反應(yīng)中心的微波輻射下脫除氨基保護(hù)基和進(jìn)行氨基酸偶聯(lián)反應(yīng)的 時(shí)間可以根據(jù)實(shí)際情況和需要進(jìn)行調(diào)節(jié)。
作為優(yōu)選，脫除氨基保護(hù)基的反應(yīng)時(shí)間為1 15分鐘，洗滌后采用通氮?dú)獾姆椒撘海?br>
6重復(fù)洗滌、脫液操作3 5次；多肽偶聯(lián)反應(yīng)的時(shí)間為1 15分鐘，洗滌后采用通氮?dú)獾姆椒?脫液，重復(fù)洗滌、脫液操作2 3次。通氮脫液的方法使固液分離更為充分，減少了洗滌的次數(shù)。
本發(fā)明的方法使用能夠吸收微波的溶劑如二甲基甲酰胺(DMF)為介質(zhì)，將微波技術(shù)應(yīng) 用在多肽合成中，利用微波的特殊效應(yīng)，降低反應(yīng)的活化能，提高反應(yīng)速度。
本發(fā)明通過使反應(yīng)物質(zhì)在反應(yīng)釜和微波反應(yīng)中心之間的循環(huán)流動(dòng)，來達(dá)到在反應(yīng)體系局 部加入微波輻射的目的，縮短了反應(yīng)時(shí)間，實(shí)現(xiàn)了目標(biāo)產(chǎn)物的大規(guī)?？焖俸铣?。本發(fā)明不僅 提高了反應(yīng)效率，減少了副反應(yīng)的產(chǎn)生，而且提高了合成收率，將多肽的產(chǎn)量提高到公斤級(jí) 或幾十公斤級(jí)，同時(shí)降低了多肽的生產(chǎn)成本，有效解決了多肽生產(chǎn)成本高、合成周期長等問 題，具有顯著的社會(huì)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)效益。
圖l是本發(fā)明的微波輔助連續(xù)流大規(guī)模多肽合成裝置示意圖。
標(biāo)號(hào)說明l反應(yīng)釜，2微波反應(yīng)中心，3動(dòng)力裝置，4在線檢測裝置，5加料口， 6出料口 ，7回流出口， 8回流進(jìn)口， 9出樣口， IO進(jìn)樣口， ll原料罐，12試劑罐，13洗脫液罐，14廢 液罐，15樣品收集器。
具體實(shí)施例方式
以下通過具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
由圖1所示，本發(fā)明的大規(guī)模多肽合成裝置包括反應(yīng)釜1和微波反應(yīng)中心2。微波反應(yīng)中 心2設(shè)有出樣孔9和進(jìn)樣孔10。微波反應(yīng)中心2外部設(shè)有微波發(fā)生裝置，所采用的微波發(fā)射為 單模形式，微波頻率為2450腿，也可以是915腿z、 5800腿z或22125腿z。微波反應(yīng)中心設(shè)有 紅外測溫裝置、壓力檢測裝置及冷卻回流裝置。紅外測溫裝置和壓力檢測裝置能監(jiān)控整個(gè)化 學(xué)反應(yīng)的溫度和壓力，使整個(gè)化學(xué)反應(yīng)在最佳反應(yīng)溫度下進(jìn)行，以達(dá)到最佳的合成得率，并 最大限度地減少副反應(yīng)。冷卻回流裝置能保證微波反應(yīng)中心溫度過高時(shí)調(diào)節(jié)至化學(xué)反應(yīng)最佳 的溫度。
反應(yīng)釜1的上端設(shè)有加料口5和回流進(jìn)口8，回流進(jìn)口8與微波反應(yīng)中心2的出樣孔9通過管 路連接，反應(yīng)釜1的下端設(shè)有出料口6和回流出口7，回流出口7與微波反應(yīng)中心2的進(jìn)樣孔10 通過管路連接。加料口5接有多通道的閥門，分別與原料罐ll、試劑罐12和洗脫液罐13連接 。為方便固態(tài)物料的加入，可以設(shè)置開口較大的加料口；也可以在反應(yīng)釜l上端加設(shè)可密封 的蓋子，固態(tài)物料通過蓋子加入，之后使其密封。出料口6接有兩通道閥門，分別與樣品收 集器15和廢液罐14連接。出料口蓋有篩網(wǎng)，以防止排液時(shí)固態(tài)物料隨廢液流出。可以根據(jù)需要設(shè)置多個(gè)原料罐，放置合成目標(biāo)肽所需要的各種氨基酸，根據(jù)肽序列設(shè)計(jì) 進(jìn)樣順序。試劑罐也可以根據(jù)需要設(shè)置，以保證整個(gè)化學(xué)反應(yīng)能夠順利完成，洗脫罐也可以 根據(jù)化學(xué)反應(yīng)的需要來設(shè)計(jì)。
在反應(yīng)釜1和微波反應(yīng)中心2的連接管路上設(shè)有在線檢測裝置4和動(dòng)力裝置3。在線檢測裝 置4為紫外檢測器，也可以選用紅外檢測器和拉曼光譜儀中的一個(gè)或兩個(gè)。動(dòng)力裝置3為泵， 通過調(diào)節(jié)泵的流速可以很好地控制反應(yīng)物質(zhì)流經(jīng)微波反應(yīng)中心2的時(shí)間，使反應(yīng)更為充分。 反應(yīng)釜1和微波反應(yīng)中心2均設(shè)有自動(dòng)調(diào)節(jié)速度的攪拌裝置，使反應(yīng)物混合均勻。
反應(yīng)釜由高密度聚丙烯制成，也可以由其它耐酸、耐堿、耐有機(jī)溶劑的材料制成。本裝 置的連接管路均為耐酸、耐堿、耐有機(jī)溶劑的材料制成。本發(fā)明的裝置可設(shè)置閥門控制、各 種溫度和壓力控制及各種動(dòng)力系統(tǒng)的控制，將其連接到工作站，達(dá)到自動(dòng)化控制的目的。
一般的Fmoc固相合成的技術(shù)與步驟均適用于這里。雖然所有的氨基酸(包括D-型)在這 里都適用，此實(shí)施例僅選用L-型的保護(hù)氨基酸。所有的氨基酸載體取代度控制在0.4mmol/g 左右。所用溶劑如DMF、偶聯(lián)劑如HBTU等為常規(guī)用法。
實(shí)施例l 胸腺五肽的制備
① 取5. 25kg取代度O. 4 mmol/g的Fmoc-Tyr (tBu) -Wang樹脂投入反應(yīng)釜，加入脫保護(hù)基 試劑30L，啟動(dòng)泵使反應(yīng)物在微波反應(yīng)中心與反應(yīng)釜間循環(huán)流動(dòng)，同時(shí)開啟微波反應(yīng)中心的 微波發(fā)生裝置使其產(chǎn)生微波，微波設(shè)置在7CTC， 1.2MPa。反應(yīng)物經(jīng)過微波反應(yīng)中心時(shí)，在 微波輻射下加速了脫除氨基保護(hù)基的反應(yīng)。5分鐘后，關(guān)閉泵并停止微波輻射，濾掉脫保護(hù) 基試劑，加入試劑DMF 10.5L洗滌樹脂3次，通氮?dú)馀乓骸８鶕?jù)多肽序列，向反應(yīng)釜中加入預(yù) 先活化的Fmoc-Val-OH和偶聯(lián)試劑HBTU，所用試劑的摩爾比為原料樹脂
:Fmoc-Val-0H:HBTU=1:3: 3，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下偶聯(lián)氨基酸，5分鐘后，濾掉殘 留的氨基酸與試劑液體，用試劑DMF洗滌樹脂2次。
② 按照胸腺五肽中氨基酸從右往左的順序(H-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH)，更換氨基酸 ，氨基酸和偶聯(lián)試劑的用量和Fmoc-Val-OH相同，重復(fù)步驟①，合成胸腺五肽。
③ 向制備好的胸腺五肽中加入三氟乙酸50L，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下進(jìn)行切割， 得到多肽粗品1.2kg。用液相色譜測得其純度為91.6%，產(chǎn)率為84%。
實(shí)施例2胸腺五肽的制備
本實(shí)施例要合成的多肽和操作與實(shí)施例l完全相同，僅采用的工藝條件有所不同。 ①微波輻射的時(shí)間為20分鐘，濾掉脫保護(hù)基試劑后洗滌樹脂5次，濾掉殘留的氨基酸與 試劑液體后洗滌樹脂3次，其余同實(shí)施例l。②、③步驟同實(shí)施例1。得到多肽粗品1.38kg。用液相色譜測得其純度為92. 5%，產(chǎn)率為
96%。
實(shí)施例3 胰高血糖素樣肽-1 (Glucagon-Like P印tide I)的制備
① 取1.26kg取代度0. 4mmol/g的Fmoc-Arg (Pbf) -Amide樹脂投入反應(yīng)釜，加入脫保護(hù) 基試劑10L，啟動(dòng)泵使反應(yīng)物在微波反應(yīng)中心與反應(yīng)釜間循環(huán)流動(dòng)，同時(shí)開啟微波反應(yīng)中心 的微波發(fā)生裝置使其產(chǎn)生微波，微波設(shè)置在7CTC， 1.2MPa。反應(yīng)物經(jīng)過微波反應(yīng)中心時(shí)， 在微波輻射下加速了脫除氨基保護(hù)基的反應(yīng)。l分鐘后，關(guān)閉泵并停止微波輻射，濾掉脫保 護(hù)基試劑，加入試齊IJDMF 12.6L洗滌樹脂3次，通氮?dú)馀乓?。根?jù)多肽序列，向反應(yīng)釜中加入 預(yù)先活化的Fmoc-Gly-OH和偶聯(lián)試劑HBTU，試劑的摩爾比為原料樹脂
:Fmoc-Gly-0H:HBTU=1:3: 3，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下偶聯(lián)氨基酸，l分鐘后，濾掉殘 留的氨基酸與試劑液體，用試劑DMF洗滌樹脂2次。
② 按照胰高血糖素樣肽-l中氨基酸從右往左的順序
(His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gin-Ala-Ala-Lys -Glu-Phe-lie-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2)，更換氨基酸，氨基酸和偶聯(lián)試劑的用 量和Fmoc-Gly-0H相同，重復(fù)步驟①合成胰高血糖素樣肽-1 。
③ 向制備好的胰高血糖素樣肽-l中加入三氟乙酸12. 6L，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下 進(jìn)行切割，得到多肽粗品1.5kg。用液相色譜測得其純度為86. 4%，純化后產(chǎn)率為90%。
實(shí)施例4 胸腺肽(Thymosin Alpha 1)的制備
① 取13.4kg取代度0.3mmol/g的Fmoc-Asn (trt) -Wang樹脂投入反應(yīng)釜，加入脫保護(hù)基 試劑134L，啟動(dòng)泵使反應(yīng)物在微波反應(yīng)中心與反應(yīng)釜間循環(huán)流動(dòng)，同時(shí)開啟微波反應(yīng)中心的 微波發(fā)生裝置使其產(chǎn)生微波，微波設(shè)置在7CTC， 1.2MPa。反應(yīng)物經(jīng)過微波反應(yīng)中心時(shí)，在 微波輻射下加速了脫除氨基保護(hù)基的反應(yīng)。10分鐘后，關(guān)閉泵并停止微波輻射，濾掉脫保護(hù) 基試劑，加入試劑DMF 134L洗滌樹脂3次，通氮?dú)馀乓?。根?jù)多肽序列，向反應(yīng)釜中加入預(yù) 先活化的Fmoc-Glu(tBu)-OH和偶聯(lián)試劑HBTU，所用試劑的摩爾比為原料樹脂
:Fmoc-Glu-0H:HBTU=1:3: 3，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下偶聯(lián)氨基酸，10分鐘后，濾掉殘 留的氨基酸與試劑液體，用試劑DMF洗滌樹脂2次。
② 按照胸腺肽中氨基酸從右往左的順序 (Ac—Ser—Asp—Ala—Ala—Val—Asp—Thr—Ser—Ser—Glu—Ile—Thr—Thr—Lys—Asp—Leu—Lys—Glu—Lys— Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn)更換氨基酸，氨基酸和偶聯(lián)試劑的用量和 Fmoc-Glu-0H相同，重復(fù)步驟①，合成胸腺肽。
9③向制備好的胸腺肽中加入三氟乙酸134L，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下進(jìn)行切割，得 到多肽粗品11.3kg。用液相色譜測得其純度為88. 1%，產(chǎn)率為91%。
以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說明，不能認(rèn)定本發(fā)明 的具體實(shí)施只局限于這些說明。實(shí)施例中所述的在微波反應(yīng)中心的微波輻射下脫除氨基保護(hù) 基和進(jìn)行氨基酸偶聯(lián)反應(yīng)的時(shí)間可以根據(jù)實(shí)際情況和需要進(jìn)行調(diào)節(jié)。對(duì)于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng) 域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，做出的若干簡單推演或替換，都應(yīng) 當(dāng)視為屬于本發(fā)明所提交的權(quán)利要求書確定的專利保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種微波輔助連續(xù)流大規(guī)模多肽合成裝置，包括反應(yīng)釜，其特征在于本裝置還包括微波反應(yīng)中心，微波反應(yīng)中心設(shè)有出樣孔和進(jìn)樣孔；所述反應(yīng)釜的上端設(shè)有加料口和回流進(jìn)口，回流進(jìn)口與微波反應(yīng)中心的出樣孔通過管路連接，反應(yīng)釜的下端設(shè)有出料口和回流出口，回流出口與微波反應(yīng)中心的進(jìn)樣孔通過管路連接；在反應(yīng)釜和微波反應(yīng)中心的連接管路上設(shè)有在線檢測裝置和動(dòng)力裝置。
2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的合成裝置，其特征在于所述的反應(yīng)釜和微 波反應(yīng)中心設(shè)有自動(dòng)調(diào)節(jié)速度的攪拌裝置，該攪拌裝置為外接機(jī)械攪拌或磁力攪拌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的合成裝置，其特征在于所述的微波反 應(yīng)中心設(shè)有紅外測溫裝置、壓力檢測裝置和冷卻裝置。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的合成裝置，其特征在于所述的加料口 設(shè)有多通道的閥門，與原料罐、試劑罐和洗脫液罐連接；所述的出料口設(shè)有兩通道閥門，分 別與樣品收集器和廢液罐連接；所述的出料口還設(shè)有篩網(wǎng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的合成裝置，其特征在于所述的加料口設(shè)有 多通道的閥門，與原料罐、試劑罐和洗脫液罐連接；所述的出料口設(shè)有兩通道閥門，分別與 樣品收集器和廢液罐連接；所述的出料口還設(shè)有篩網(wǎng)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的合成裝置，其特征在于所述在線檢測 裝置是紫外檢測器、紅外檢測器、拉曼光譜儀中的一個(gè)或兩個(gè)以上。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的合成裝置，其特征在于在線檢測裝置是紫 外檢測器、紅外檢測器、拉曼光譜儀中的一個(gè)或兩個(gè)以上。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的合成裝置，其特征在于所述的反應(yīng)釜 由耐酸、耐堿、耐有機(jī)溶劑的材料制成。
9. 一種利用權(quán)利要求l所述的合成裝置來大規(guī)模合成多肽的方法，其 操作過程如下①取適量氨基酸-樹脂復(fù)合物投入反應(yīng)釜，加入脫保護(hù)基試劑，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下脫除氨基保護(hù)基，之后濾掉脫保護(hù)基試劑，用試劑DMF洗滌樹脂；根據(jù)多肽序列，向 反應(yīng)釜中加入下一個(gè)預(yù)先活化的帶保護(hù)基氨基酸和偶聯(lián)試劑，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下 偶聯(lián)氨基酸，之后濾掉殘留的氨基酸與試劑液體，用試劑DMF洗滌樹脂；② 按照氨基酸從羧基端到氨基端的順序，更換氨基酸，重復(fù)步驟①，合成所需的多肽③ 多肽完成所有的序列與反應(yīng)后，加入切割試劑，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下進(jìn)行 切割，得到多肽粗品。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的大規(guī)模合成多肽的方法，其特征在于所 述脫除氨基保護(hù)基的反應(yīng)時(shí)間為1 15分鐘，洗滌后采用通氮?dú)獾姆椒撘?，重?fù)洗滌、脫 液操作3 5次；多肽偶聯(lián)反應(yīng)的時(shí)間為1 15分鐘，洗滌后采用通氮?dú)獾姆椒撘?，重?fù)洗 滌、脫液操作2 3次。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種微波輔助連續(xù)流大規(guī)模多肽合成方法與裝置，該裝置主要包括反應(yīng)釜、微波反應(yīng)中心以及連接管路，在反應(yīng)釜和微波反應(yīng)中心的連接管路上設(shè)有在線檢測裝置和動(dòng)力裝置。本發(fā)明通過使反應(yīng)物質(zhì)在反應(yīng)釜和微波反應(yīng)中心之間的循環(huán)流動(dòng)，來達(dá)到在反應(yīng)體系局部加入微波輻射的目的，縮短了反應(yīng)時(shí)間，實(shí)現(xiàn)了目標(biāo)產(chǎn)物的大規(guī)?？焖俸铣?，將多肽的產(chǎn)量提高到公斤級(jí)或幾十公斤級(jí)。
文檔編號(hào)C07K1/00GK101538310SQ20091030105
公開日2009年9月23日 申請日期2009年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月13日
發(fā)明者卜遠(yuǎn)波, 琪 徐, 湘 李 申請人:杭州中肽生化有限公司