專利名稱：：一種多肽固相合成法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種多肽固相合成法，尤其涉及一種利用數(shù)字化模式確定工藝條件的固相合成多肽的方法。
背景技術(shù)：
：目前多肽的合成工藝主要有兩種，分別為液相合成法和固相合成法，多肽液相合成基于將單個(gè)N-a保護(hù)氨基酸反復(fù)加到生長(zhǎng)的氨基成份上。多肽固相合成一般以樹脂為起始原料，逐個(gè)連接氨基酸得到多肽粗品，為了防止副反應(yīng)的發(fā)生，參加反應(yīng)的氨基酸的側(cè)鏈都是被保護(hù)的。而反應(yīng)物的羧基端是游離的，并且在反應(yīng)之前必須活化?，F(xiàn)階段本領(lǐng)域多采用固相合成法，其優(yōu)點(diǎn)主要表現(xiàn)在最初的反應(yīng)物和產(chǎn)物都是連接在固相載體上，因此可以在一個(gè)反應(yīng)容器中進(jìn)行所有的反應(yīng)，便于自動(dòng)化操作，加入過量的反應(yīng)物可以獲得高產(chǎn)率的產(chǎn)物，同時(shí)產(chǎn)物很容易分離。在多肽固相合成中，氨基酸的極性以及空間位阻和縮合位置都會(huì)對(duì)多肽的合成難易程度造成影響。一般情況下，在縮合位置相同的條件下，氨基酸極性越大，縮合難度越小，空間位阻越大，縮合難度越大；氨基酸極性越小，縮合難度越大，空間位阻越小，縮合難度越小。同一個(gè)氨基酸縮合位置越靠后，縮合難度越大；縮合位置越靠前，縮合難度越小。因此在多肽合成過程中，要充分綜合考慮氨基酸的極性以及空間位阻和縮合位置。在縮合反應(yīng)過程中，反應(yīng)時(shí)間和反應(yīng)溫度決定著最終產(chǎn)物的純度和收率。反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)，氨基酸鏈會(huì)從固相樹脂中脫落，導(dǎo)致收率降低。反應(yīng)時(shí)間過短，又不能達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)，導(dǎo)致最終產(chǎn)物純度降低。反應(yīng)溫度過低，也會(huì)造成反應(yīng)到不了終點(diǎn)，反應(yīng)溫度過高，很易發(fā)生消旋副反應(yīng)。雖然目前多肽固相合成技術(shù)已采用全自動(dòng)多肽合成儀來完成多肽固相合成反應(yīng)程序，但如何根據(jù)不同反應(yīng)物質(zhì)所具有的不同極性參數(shù)、空間位阻和縮合位置來確定其合成反應(yīng)過程中的反應(yīng)時(shí)間和反應(yīng)溫度現(xiàn)已成為多肽固相合成反應(yīng)中的一個(gè)尚待解決的問題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種多肽固相合成法，其縮合反應(yīng)時(shí)間和溫度可依據(jù)多肽固相合成反應(yīng)中待反應(yīng)的氨基酸的極性參數(shù)、空間位阻和縮合位置來確定。按照所得到的反應(yīng)溫度及時(shí)間利用全自動(dòng)多肽合成儀進(jìn)行多肽的合成，可提升產(chǎn)物收率，并降低了副反應(yīng)發(fā)生率。本發(fā)明提供的全自動(dòng)多肽合成儀的縮合反應(yīng)溫度和縮合反應(yīng)時(shí)間是如下設(shè)定的首先，將由表一得到的待反應(yīng)氨基酸的極性參數(shù)、空間位阻和縮合位置參數(shù)代入公式d=a+b+0.017n中求得d值，式中a為極性參數(shù)，b為空間位阻，0.017n為縮合位置參數(shù)，d為綜合縮合參數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>脯氨酸的縮合時(shí)間為180-240分鐘，縮合溫度為30-35°C。本發(fā)明所提供的多肽固相合成法，采用了數(shù)字化模式，將反應(yīng)物的極性以及空間位阻標(biāo)示成參數(shù)，根據(jù)多次實(shí)驗(yàn)總結(jié)的經(jīng)驗(yàn)公式c^a+b+0.017n，計(jì)算出反應(yīng)物的綜合縮合參數(shù)d;再根據(jù)多次試驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出的表二，得到反應(yīng)所需的反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間。按照所得到的反應(yīng)溫度及時(shí)間利用全自動(dòng)多肽合成儀進(jìn)行多肽的合成，提升了產(chǎn)物收率，降低了副反應(yīng)發(fā)生率。利用數(shù)字化模式進(jìn)行固相合成得到的多肽，經(jīng)過常規(guī)方法的分離、純化，收率與常規(guī)方法相比提升10%以上，產(chǎn)品起始純度提高5%。圖1示出本發(fā)明的多肽固相合成法所合成的生長(zhǎng)抑素的HPLC數(shù)據(jù)；圖2示出常規(guī)多肽固相合成法所合成的生長(zhǎng)抑素的HPLC數(shù)據(jù)。具體實(shí)施例方式下面將通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。應(yīng)當(dāng)理解，這里描述的實(shí)施例只用于舉例說明，并不用于限制本發(fā)明。實(shí)施例l、生長(zhǎng)抑素的固相合成法本發(fā)明所述的固相合成法實(shí)施例Al將樹脂裝入全自動(dòng)多肽合成儀的肽反應(yīng)瓶中，將第一個(gè)經(jīng)過羧基活化的氨基酸溶液加入全自動(dòng)多肽合成儀的肽反應(yīng)瓶中，根據(jù)下述表一計(jì)算綜合縮合參數(shù)d，根據(jù)綜合縮合參數(shù)d對(duì)照下述表二在控制程序中輸入相應(yīng)的反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間，進(jìn)行縮合。按以上方法依次進(jìn)行后面氨基酸的縮合，直到最后一個(gè)第14位氨基酸的縮合結(jié)束，得到帶全保護(hù)基的樹脂，洗滌全側(cè)鏈保護(hù)的肽樹脂后取出，自然干燥。加入切肽試劑進(jìn)行切肽后進(jìn)行減壓濃縮、洗滌，通入純氧，氧化后濃縮、過濾、純化。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>具體操作為配料(1)稱取H-Cys(Trt)-2-C1-Trt-Resin樹脂20g裝于全自動(dòng)固相合成儀(美國(guó)SCBio公司，型號(hào)CS936S)的反應(yīng)瓶中，加入二甲基甲酰胺(DMF)適量，溶脹2小時(shí)。(2)氨基酸縮合液的配制稱取Fmoc-Ser(tBu)-OH11.50g，F(xiàn)moc-Thr(tBu)-OHU.93g，F(xiàn)moc陽Phe陽OH11.63g，F(xiàn)moc-Thr(tBu)-OH11.93g，F(xiàn)moc-Lys(Boc)-OH14.06g，F(xiàn)moc-Trp-OH12.80g，F(xiàn)moc匿Phe陽OH11.63g，F(xiàn)moc-Phe-OH11.63g，F(xiàn)moc-Asn(Trt)-OH17.90g，F(xiàn)moc-Lys(Boc)-OH14.06g，F(xiàn)moc—Cys(Trt)-OH17.58g，F(xiàn)moc—GIy-OH8.93g，F(xiàn)moc-Ala-OH9.34g并分別裝入于13個(gè)三角瓶中，再向每個(gè)三角瓶中分別加入二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和DMF溶解，濾去沉淀，將濾液加入全自動(dòng)合成儀儲(chǔ)備瓶中，備用。(3)配制30%哌啶DMF溶液、DMF(分析純)、二氯甲烷(DCM)(分析純)，分別加入全自動(dòng)合成儀原料儲(chǔ)備瓶中。2、縮合在上述表一中查到所述各種氨基酸的極性參數(shù)，空間位阻及縮合位置，計(jì)算出綜合縮合參數(shù)d，再根據(jù)d在上述表二中査出相應(yīng)的反應(yīng)溫度和時(shí)間。所述各種氨基酸(按順序)參數(shù)d及相應(yīng)的反應(yīng)溫度及時(shí)間詳見下表三表三各種氨基酸參數(shù)d及相應(yīng)的反應(yīng)溫度及時(shí)間表<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>將表三中計(jì)算好的數(shù)據(jù)輸入全自動(dòng)化固相合成儀的控制系統(tǒng)的SOM(生長(zhǎng)抑素)2號(hào)程序中，運(yùn)行SOM2號(hào)程序脫除9-芴甲氧羰基(Fmoc-)，縮合完后用配制好的DMF和DCM洗滌6次，當(dāng)縮合進(jìn)行到距理論反應(yīng)結(jié)束時(shí)間還差十分鐘時(shí)，用茚三酮乙醇溶液檢測(cè)是否達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)。若反應(yīng)達(dá)到終點(diǎn)時(shí)，用30%哌啶DMF溶液洗滌1次，再用DMF洗滌3次。重復(fù)以上縮合步驟進(jìn)入下一個(gè)氨基酸的縮合程序。直到所述13個(gè)氨基酸均縮合完畢，關(guān)閉固相合成儀。3、切肽所述14個(gè)氨基酸反應(yīng)縮合完畢后，80%的三氟乙酸(TFA)水溶液中加入5%苯酚配制為切肽試劑，按每10ml切肽試劑中加入精確稱量的lg全保護(hù)的生長(zhǎng)抑素樹脂的比例加入切肽試劑和生長(zhǎng)抑素樹脂，反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后將切肽后所得溶液裝入三角瓶，加入乙醚，收集沉淀，晾干。4、檢測(cè)精確量取上述所得沉淀lg置于100ml容量瓶中，加入醋酸(分析純)定容到100ml，搖勻，用分析型高效液相色譜儀檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖l所示。5、結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>由圖1可得使用本發(fā)明所述的固相合成法合成的生長(zhǎng)抑素峰面積為236.375，歸一化法主峰面積百分比為76.70%(不含溶劑峰)。實(shí)施例A2在本實(shí)施例中，除縮合時(shí)間及縮合溫度外，其余反應(yīng)步驟及其反應(yīng)條件均與實(shí)施例Al相同。本實(shí)施例縮合時(shí)間及溫度按表四確定表四各種氨基酸參數(shù)d及相應(yīng)的反應(yīng)溫度及時(shí)間表<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)施例A3在本實(shí)施例中，除縮合時(shí)間及縮合溫度外，其余反應(yīng)步驟及其反應(yīng)條件均與實(shí)施例Al相同。本實(shí)施例縮合時(shí)間及溫度按表五確定表五各種氨基酸參數(shù)d及相應(yīng)的反應(yīng)溫度及時(shí)間表<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)施例A4在本實(shí)施例中，除縮合時(shí)間及縮合溫度外，其余反應(yīng)步驟及其反應(yīng)條件均與實(shí)施例Al相同。本實(shí)施例縮合時(shí)間及溫度按表六確定表六各種氨基酸參數(shù)d及相應(yīng)的反應(yīng)溫度及時(shí)間表<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>精確量取上述所得沉淀lg置于100ml容量瓶中，加入20%醋酸溶液(w/w)定容到100ml，搖勻，用分析型高效液相色譜儀檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖2所示。5、結(jié)果:縮合前樹脂重縮合后樹脂增重20.0g43.03g由圖2可得使用常規(guī)縮合法合成生長(zhǎng)抑素峰面積為197.935，歸一化法主峰面積百分比為69.53%(不含溶劑峰)。實(shí)施例Al-A5實(shí)驗(yàn)所得的合成生長(zhǎng)抑素峰面積和歸一化法主峰面積百分比均大于B法所得數(shù)據(jù)，由此得出Al-A5方法得到的生長(zhǎng)抑素的收率和純度均超過常規(guī)技術(shù)所得。以下以實(shí)施例A1的數(shù)值與B法做比較來驗(yàn)證該結(jié)論比較A1、B兩種方法得到的生長(zhǎng)抑素的收率和純度在兩種方法下運(yùn)用的樹脂量和各氨基酸的量均相同的條件下，由圖1和圖2給出的數(shù)據(jù)可看出，A法合成生長(zhǎng)抑素峰面積為236.375，歸一化法主峰面積百分比為76.70%(不含溶劑峰)；B法合成生長(zhǎng)抑素峰面積為197.935，歸一化法主峰面積百分比為69.53%(不含溶劑峰)。因此，A法比B法在合成生長(zhǎng)抑素上純度提高76.70%-69.53%=7.17%。合成工序純度的提高將有利于后續(xù)的分離工序，并直接影響到最終成品的質(zhì)量并最終有利于成品質(zhì)量。A法比B法在合成生長(zhǎng)抑素上收率提高(236.375*40.01-197.935*43.03)/(197.935*43.03)=11.04%。本發(fā)明所述的多肽固相合成法合成而得的生長(zhǎng)抑素?zé)o論在產(chǎn)品收率還是在純度上，都明顯的優(yōu)于常規(guī)合成法合成而得的生長(zhǎng)抑素。另外，從縮合時(shí)間上來看，用常規(guī)合成法合成生長(zhǎng)抑素共需26小時(shí)，而使用本發(fā)明所述的多肽固相合成法合成生長(zhǎng)抑素只需22小時(shí)35分鐘。因此，本發(fā)明所述的多肽固相合成法在生長(zhǎng)抑素合成方面的運(yùn)用可大大提高合成效率、產(chǎn)品純度及收率，是一種具有很高優(yōu)越性的新型多肽固相合成方法。實(shí)施例2、降鈣素的固相合成法實(shí)施例C1將樹脂裝入全自動(dòng)多肽合成儀的反應(yīng)瓶中，將一氨基酸溶液加入全自動(dòng)多肽合成儀的反應(yīng)瓶中，根據(jù)前述表一計(jì)算綜合縮合參數(shù)d，根據(jù)綜合縮合參數(shù)d對(duì)照前述表二在控制程序中輸入相應(yīng)的反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間，進(jìn)行縮合。按以上方法將其余氨基酸逐個(gè)進(jìn)行縮合，直到最后一個(gè)氨基酸的縮合結(jié)束，得到帶全保護(hù)基的樹脂，將全側(cè)鏈保護(hù)的肽樹脂洗滌后取出，紅外燈下干燥。加入切肽試劑進(jìn)行切肽后再進(jìn)行減壓濃縮、洗滌，加入濃氨水調(diào)至弱堿性后室溫下攪拌，調(diào)至酸性后濃縮、過濾、純化。具體操作如下配料(1)稱取4-甲苯氫胺樹脂(MBHAResinx型樹脂)10g裝于全自動(dòng)固相合成儀(美國(guó)SCBio公司，型號(hào)CS936S)反應(yīng)瓶中，加入DMF適量，溶脹2小時(shí)。(2)氨基酸縮合液的配制稱取Fmoc-L-Pro9.177g，F(xiàn)moc-Thr(tBu)-OH10.812g,Fmoc-Gly-OH10.108g，F(xiàn)moc-Ser(tBu)-OH10.428g，F(xiàn)moc-Gly-OH8.087g，F(xiàn)moc-Thr&Bu)-OH10.812g,Fmoc-Asn(Trt)-OH16.230g,Fmoc-Thr(tBu)-OH10.812g，F(xiàn)moc-Arg(pbf)-OH17.646g,Fmoc-L-Pro9.177g，F(xiàn)moc-Tyr(tBu;-OH12.498g,Fmoc-Thr(tBu)-OH10.812g,Fmoc-Gln(Trt)-OH16.61lg,Fmoc-Leu9.612g，F(xiàn)moc-Lys(Boc;OH12.744g，F(xiàn)moc-His(Trt)-OH16.856g,Fmoc-Leu9.612g,Fmoc陽Glu(OtBu)-OH11.573g,Fmoc—Gln(Trt)陽OH16.61lg，F(xiàn)moc—Ser(tBu)陽OH10.428g，F(xiàn)moc—Leu9.612g，F(xiàn)moc-Lys(Boc)陽OH12.744g，F(xiàn)moc-Gly陽OH8.087g，F(xiàn)moc-Leu9.612g，F(xiàn)moc-Val-OH9.232g，F(xiàn)moc-Cys(Trt)隱OH15.93lg，F(xiàn)moc-Thr(tBu)-OH10.812g，F(xiàn)moc-Ser(tBu)-OH10.428g，F(xiàn)moc-Leu9.612g，F(xiàn)moc漏Asn(Trt)-OH16.230g，F(xiàn)moc-Ser(tBu)-OH10.428g，F(xiàn)moc-Cys(Trt)-OH15.931g，分別裝入三角瓶中，再向所述各個(gè)三角瓶中分別加入DCC和DMF溶解，濾去沉淀，將濾液加入全自動(dòng)合成儀儲(chǔ)備瓶中，備用。(3)配制30%哌啶DMF溶液、DMF溶液(請(qǐng)給出濃度)、DCM溶液(請(qǐng)給出濃度)分別加入全自動(dòng)合成儀的原料儲(chǔ)備瓶中。2、縮合在前述表一中查到各氨基酸的極性參數(shù)，空間位阻及縮合位置，計(jì)算出綜合縮合參數(shù)d，再根據(jù)綜合縮合參數(shù)d在前述表二中查出相應(yīng)的反應(yīng)溫度和時(shí)間。各氨基酸(按順序)參數(shù)d及相應(yīng)的反應(yīng)溫度及時(shí)間詳見下表表八各氨基酸參數(shù)d及相應(yīng)的反應(yīng)溫度及時(shí)間表氨基酸名稱綜合縮合參數(shù)d縮合時(shí)間(分鐘)縮合溫度(°C)FmoC"L-Pro不符合本公式24034Fmoc-Thr(tBu)-OH0.5347531Fmoc-Gly-OH0.4515527Fmoc-Ser(tBu)-OH0.5687529Fmoc-Gly-OH0.4855529Fmoc-Thr(tBu)-OH0.6029033Fmoc-Asn(Trt)-OH0.71912033<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>將表五中計(jì)算好的數(shù)據(jù)輸入全自動(dòng)化固相合成儀的控制系統(tǒng)的c(ffi素)l號(hào)程序中，運(yùn)行C1號(hào)程序，固相合成儀按照程序開始進(jìn)入第一個(gè)氨基酸的縮合。脫除9-芴甲氧羰基(Fmoc-)縮合完后用配制好的DMF和DCM洗滌6次，當(dāng)縮合進(jìn)行到距理論反應(yīng)結(jié)束時(shí)間還有十分鐘時(shí)，用茚三酮乙醇溶液檢測(cè)是否達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)。若經(jīng)檢測(cè)反應(yīng)已達(dá)到終點(diǎn)，用307。哌啶DMF溶液洗滌1次，再用DMF洗滌3次。重復(fù)以上縮合步驟進(jìn)入下一個(gè)氨基酸的縮合程序。直到所述32個(gè)氨基酸均縮合完畢，關(guān)閉固相合成儀。3、切肽所述32個(gè)氨基酸反應(yīng)縮合完畢后，將鮭魚降鈣素樹脂取出洗滌后，紅外燈下晾干。用80%的TFA水溶液中加入5%苯酚配制為切肽試劑，按每10ml切肽試劑中加入精確稱量的lg全保護(hù)的鮭魚降鈣素樹脂的比例加入切肽試劑和鮭魚降鈣素樹脂，反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后將切肽后所得溶液裝入三角瓶，加入乙醚，收集沉淀。4、檢測(cè)精確稱量上述所得沉淀lg置于100ml容量瓶中，加入醋酸(分析純)定容到100ml，搖勻，用分析型高效液相色譜儀檢測(cè)。5、結(jié)果本發(fā)明所述的多肽固相合成法合成的鮭魚降鈣素的產(chǎn)品收率和純度如下表所示:<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>實(shí)施例C2在本實(shí)施例中，除縮合時(shí)間及縮合溫度外，其余反應(yīng)步驟及其反應(yīng)條件均與實(shí)施例Cl相同。本實(shí)施例縮合時(shí)間及溫度按表九確定表九各種氨基酸參數(shù)d及相應(yīng)的反應(yīng)溫度及時(shí)間表<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>實(shí)施例C3在本實(shí)施例中，除縮合時(shí)間及縮合溫度外，其余反應(yīng)步驟及其反應(yīng)條件均與實(shí)施例C1相同。本實(shí)施例縮合時(shí)間及溫度按表十確定表十各種氨基酸參數(shù)d及相應(yīng)的反應(yīng)溫度及時(shí)間表<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>權(quán)利要求1.一種多肽固相合成方法，其特征在于，利用多肽合成儀進(jìn)行多肽合成時(shí)，其縮合反應(yīng)溫度和縮合反應(yīng)時(shí)間是如下設(shè)定的首先，將由表一得到的待反應(yīng)氨基酸的極性參數(shù)、空間位阻和縮合位置參數(shù)代入公式d＝a+b+0.017n中求得d值，式中a為極性參數(shù)，b為空間位阻，0.017n為縮合位置參數(shù)，d為綜合縮合參數(shù)表一氨基酸名稱極性參數(shù)空間位阻縮合位置參數(shù)甘氨酸GlyG0.350.05實(shí)際縮合過程絲氨酸SerS0.200.30實(shí)際縮合過程丙氨酸AlaA0.350.10實(shí)際縮合過程蘇氨酸ThrT0.200.30實(shí)際縮合過程纈氨酸ValV0.300.40實(shí)際縮合過程異亮氨酸IleI0.250.35實(shí)際縮合過程亮氨酸LeuL0.240.35實(shí)際縮合過程酪氨酸TyrY0.150.40實(shí)際縮合過程苯丙氨酸PheF0.220.40實(shí)際縮合過程組氨酸HisH0.150.35實(shí)際縮合過程脯氨酸ProP不符合本公式不符合本公式不符合本公式天冬氨酸AspD0.150.40實(shí)際縮合過程甲硫氨酸MetM0.20.40實(shí)際縮合過程谷氨酸GluE0.10.35實(shí)際縮合過程色氨酸TrpW0.250.45實(shí)際縮合過程賴氨酸LysK0.100.40實(shí)際縮合過程半胱氨酸CysC0.150.40實(shí)際縮合過程精氨酸ArgR0.10.40實(shí)際縮合過程天冬酰胺AsnN0.20.40實(shí)際縮合過程谷氨酰胺GlnQ0.180.45實(shí)際縮合過程然后，根據(jù)所得的綜合縮合參數(shù)d，由表二得到相應(yīng)縮合反應(yīng)的縮合反應(yīng)時(shí)間及縮合反應(yīng)溫度表二綜合縮合參數(shù)縮合時(shí)間(分鐘)縮合溫度(℃)0.0-0.120-2520-240.1-0.220-2521-250.2-0.330-3521-250.3-0.435-4025-290.4-0.555-6025-290.5-0.675-8029-330.6-0.790-9530-340.7-0.8120-12533-370.8-0.9200-20535-390.9-1.0200-20540-442.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，根據(jù)所得的綜合縮合參數(shù)d，由表十三得到相應(yīng)縮合反應(yīng)的縮合反應(yīng)時(shí)間及縮合反應(yīng)溫度<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table>3.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述待反應(yīng)氨基酸為脯氨酸時(shí)，其縮合時(shí)間為180-600分鐘，縮合溫度為30-35°C。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述合成的多肽為2-50個(gè)氨基酸組成的多肽。5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述合成的多肽為14肽或32肽。6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述合成的14肽為生i《卬素。7.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述合成的32肽為P^丐素。全文摘要本發(fā)明涉及一種多肽固相合成法，尤其涉及一種利用數(shù)字化模式確定工藝條件的固相合成多肽的方法。本發(fā)明的多肽固相合成法可提升產(chǎn)物收率，并降低了副反應(yīng)發(fā)生率。文檔編號(hào)C07K1/04GK101531699SQ20091013613公開日2009年9月16日申請(qǐng)日期2009年4月30日優(yōu)先權(quán)日2009年4月30日發(fā)明者馮樸純,濤賴申請(qǐng)人:昆明積大制藥有限公司