專利名稱：一種丹酚酸b的超聲波提取方法
技術領域：
本發(fā)明屬于天然產物的提取與分離純化技術領域，涉及一種丹酚酸B的 提取方法，特別涉及一種丹酚酸B的超聲波提取方法。
背景技術：
丹參(6b/v/"脂加or^^abunge)是唇形科鼠尾草屬植物，是中國傳統(tǒng)的 中草藥，臨床主要用來治療胸腹刺痛，熱痹疼痛，瘡瘍腫痛，心煩不眠，肝 脾腫大，心絞痛等癥。丹參中含有兩大類化合物， 一類是脂溶性的丹參酮類， 另一類是水溶性的丹參分酸類。丹參的酚酸類化合物具有抗血栓形成的作用， 對小鼠腦缺血再灌注引起的腦損傷有保護作用(Chen等，2000)，其中丹酚酸 B具有很強的清除自由基和抗氧化作用，其抗氧化作用比Ve強上千倍(黃詒森 等，1992)。
目前，丹酚酸B的傳統(tǒng)提取方法多為加熱、煮沸和回流提取。由于回流提 取會導致酚類化合物在熱提取的過程中由于電離、水解和氧化作用而損失 (Wu等，2001; Li等，2005)，并且浪費提取溶劑和時間(Melecchi等，2006)。 同時，丹酚酸B在熱提取過程中還會水解生成丹參素而導致產率降低(毛聲俊 等，2003)。 參考文獻
Chen Y.H., Du G.H., Zhang J.T.. Protective effects of salvianolic acid B against the brain injuries induced by ischemia reperfusion. Sino Acta Pharmacal, 2000,5: 81-84.
黃詒森，張均田.丹參中三種水溶性成分的體外抗氧化作用.藥學學報,1992,27(2):96-100.
Wu J., Lin L., Chau F. (2001). Ultrasound-assisted extraction of ginseng saponins from ginseng roots and cultured ginseng cells.Ultrasonics Sonochemistry, 8(4), 347—352.
Li H.， Chen B., Yao S.Z. Application of ultrasonic technique for extracting chlorogenic acid from Eucommia ulmodies Oliv. (E. ulmodies), Ultrason. Sonochem. 12(2005)295—300.
Melecchi M丄S., P6res V.F., Dariva C. d a/. Optimization of the sonication extraction method of Hibiscus tiliaceus L. flowers, Ultrason. Sonochem. 13 (2006) 242-250.
毛聲俊，侯世祥，唐昌炯.丹參素在加溫條件下的含量變化規(guī)律研究.中國 中藥雜志，2003， 28 (3): 220-222.
發(fā)明內容
針對上述現有技術中存在的問題與缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種工藝 簡單、成本低、提取時間短、提取效率高的超聲波提取丹酚酸B的方法。該 方法克服了傳統(tǒng)回流提取方法由于丹酚酸B受熱分解而造成的提取效率不高 和提取得率低的問題，適宜工業(yè)化大規(guī)模生產丹酚酸B。
實現上述發(fā)明目的的技術解決方案是 一種丹酚酸B的超聲波提取方法， 具體包括以下步驟
1) 將干丹參粉碎成10 80目的粉末，裝載于可以密封的容器中，加入 體積重量比為5 30倍40% 80%的乙醇，在0 60。C、 30 80kHz的條件下 超聲波提取5 40min，得到粗提液；
2) 將粗提液在減壓條件下過濾，在30 4(TC條件下減壓濃縮，將濃縮物在30 40。C條件下真空低溫干燥，得到粗提物；
3) 在粗提物中加入體積重量比為2 5倍量的冷水，充分攪拌均勻，減壓 條件下過濾，收集濾液，在40 60。C條件下減壓濃縮轉溶液至體積重量比為 干丹參的0.01 1倍量，將濃縮液用10Q/。的鹽酸調節(jié)pH值至2 5，再用乙酸乙 酯或正丁醇萃取3 8次；
4) 合并萃取液，揮干有機溶劑，即可得到丹酚酸B。 本發(fā)明的提取方法中影響產品得率的因素主要有提取溫度、提取溶劑、
超聲波頻率、提取時間和提取的料液比；影響純化過程的因素主要為得到粗 提物后進一步用冷水(4°C)轉溶的加水量、水轉溶液的pH值和萃取時所用 的萃取溶劑種類。其中提取的溫度控制、超聲波的頻率和提取所用的溶劑是 影響丹酚酸B提取得率的關鍵因素，水轉溶液的pH值和萃取時所用的溶劑是 影響丹酚酸B純化效果的關鍵因素。在提取時，提取的溫度應小于6(TC，高 于6(TC導致丹酚酸B分解，得率下降；由于高頻率超聲波的主要作用是使細 胞隔膜軟化從而使細胞變得更有延伸性，低頻率的超聲波對于細胞隔膜具有 較強的機械作用而導致細胞結構完全被破壞，使提取溶劑擴散到細胞中而將 化學成分溶解出來，因此，提取丹酚酸B時超聲波的頻率應低于80kHz而高 于30kHz，過大和過小均不合適；由于化學成分提取時所遵循的原理是"相 似相溶"，其提取率在很大程度上取決于提取溶劑的極性，不同的化學成分由 于極性的不同在不同的溶劑中具有不同溶解性而導致其溶出效果有差異，因 此，提取丹酚酸B所用的溶劑應為40。/。 80。/。的乙醇水溶液，濃度過高和過 低均導致得率下降；溶劑用量是提取過程中影響提取得率的一個重要因素， 用量過小，會損失大量的有效成分而導致提取率低，但溶劑用量過大，則會 給后續(xù)的濃縮工作帶來負擔，同時也造成溶劑的浪費，因此，提取丹酚酸B的液料比應控制在提取液的重量為材料重量的5~30倍，再大則會導致溶劑的 浪費；當植物材料細胞內外化學成分濃度未達到平衡時，提取率會隨著提取 時間的延長而增加，但是當細胞內外化學成分擴散達到平衡以后，延長提取 時間提取率不會再增加，提取丹酚酸B的時間應大于5 min而小于40min，
時間過長則會導提取致得率下降，提取效率降低。將粗提物用冷水轉溶后， 轉溶液濃縮后的體積和pH值是決定分離效果的關鍵因素，轉溶液濃縮后的體 積為提取用原材料(丹參干藥材)重量的0.01 1倍量(體積重量比，升/公 斤)較為適宜；萃取前調整轉溶液的pH應在2 5之間，pH值過大，丹酚酸 B電離，導致萃取失敗。
與現有技術相比較，本發(fā)明的效果和益處是工藝過程簡單、提取時間短、 易于操作、成本低、效率高，完全避免了傳統(tǒng)回流提取方法由于丹酚酸B受 熱分解而造成的提取效率不高和提取得率低的問題，適合于大規(guī)模工業(yè)化生
圖1為采用本發(fā)明的方法提取的丹酚酸B的高效液相色譜圖。 圖2為本方法與傳統(tǒng)回流提取法的效果比較曲線圖。
具體實施例方式
以下結合發(fā)明人給出的具體實施例，進一步對本發(fā)明的技術方案做一個 詳細說明。 實施例l
稱取100g過IO目的丹參干藥材粉末，裝載于2000ml的燒瓶中，用塑 料薄膜封口 ，然后加入500 ml 40%的乙醇，在頻率為30 kHz的超聲波中以50°C 提取10min。提取完成后，將粗提液過濾，減壓下回收溶劑至干(控制濃縮溫度不超過4(TC)，得到粗提物。然后用4'C的冷水轉溶，過濾轉溶液，減壓 下濃縮至體積為10ml，用10。/。的鹽酸酸化至pH2，用乙酸乙酯萃取3 8次。 合并萃取液，揮干乙酸乙酯，即可得到純度大于40。/。的丹酚酸B6.6g。 實施例2
稱取100g過30目的丹參干藥材粉末，裝載于2000ml的燒瓶中，用塑 料薄膜封口，然后加入1000ml50。/。的乙醇，在頻率為40kHz的超聲波中以 2(TC提取20min。提取完成后，將粗提液過濾，減壓下回收溶劑至干(控制 濃縮溫度不超過4(TC)，得到粗提物。然后用4"C的冷水轉溶，過濾轉溶液， 減壓下濃縮至體積為20ml，用10。/。的鹽酸酸化至pH3，用正丁醇取3 8次。 合并萃取液，揮正丁醇，即可得到純度大于40n/。的丹酚酸B6.6g。
實施例3
稱取100g過50目的丹參干藥材粉末，裝載于5000ml的燒瓶中，用塑 料薄膜封口，然后加入150Oml60。/。的乙醇，在頻率為50kHz的超聲波中以 3(TC提取25min。提取完成后，將粗提液過濾，減壓下回收溶劑至干(控制 濃縮溫度不超過4(TC)，得到粗提物。然后用4。C的冷水轉溶，過濾轉溶液， 減壓下濃縮至體積為30 ml，用10。/。的鹽酸酸化至pH4，用乙酸乙酯萃取3 8 次。合并萃取液，揮干乙酸乙酯，即可得到純度大于40。/。的丹酚酸B6.6g。
實施例4
稱取100g過60目的丹參干藥材粉末，裝載于5000ml的燒瓶中，用塑 料薄膜封口，然后加入2000ml 70%的乙醇，在頻率為60kHz的超聲波中以 4(TC提取30min。提取完成后，將粗提液過濾，減壓下回收溶劑至干(控制 濃縮溫度不超過4(TC)，得到粗提物。然后用4'C的冷水轉溶，過濾轉溶液， 減壓下濃縮至體積為40ml，用10。/o的鹽酸酸化至pH4，用正丁醇萃取3 8次。合并萃取液，揮干正丁醇，即可得到純度大于40M的丹酚酸B6.6g。 實施例5
稱取100g過80目的丹參干藥材粉末，裝載于2000ml的燒瓶中，用塑 料薄膜封口，然后加入3000ml 80%的乙醇，在頻率為80kHz的超聲波中以 6(TC提取40min。提取完成后，將粗提液過濾，減壓下回收溶劑至干(控制 濃縮溫度不超過4(TC)，得到粗提物。然后用4'C的冷水轉溶，過濾轉溶液， 減壓下濃縮至體積為80 ml，用10。/。的鹽酸酸化至pH5，用乙酸乙酯萃取3 8 次。合并萃取液，揮干乙酸乙酯，即可得到純度大于40Q/。的丹酚酸B6.6g。
采用本發(fā)明的方法，提取20min，丹酚酸B的提取率為34.4 g/kg，比傳 統(tǒng)回流法提取60 120min的提取率(28.7g/kg)高5.2 g/kg，見圖2。
權利要求
1. 一種丹酚酸B的超聲波提取方法，其特征在于，包括以下步驟1)將干丹參粉碎成10～80目的粉末，裝載于可以密封的容器中，加入體積重量比為5～30倍40％～80％的乙醇，在0～60℃、30～80kHz的條件下超聲波提取5～40min，得到粗提液；2)將粗提液在減壓條件下過濾，在30～40℃條件下減壓濃縮，將濃縮物在30～40℃條件下真空低溫干燥，得到粗提物；3)在粗提物中加入體積重量比為2～5倍量的冷水，充分攪拌均勻，減壓條件下過濾，收集濾液，在40℃～60℃下減壓濃縮轉溶液至體積重量比為干丹參的0.01～1倍量，將濃縮液用10％的鹽酸調節(jié)pH值至2～5，再用乙酸乙酯或正丁醇萃取3～8次；4)合并萃取液，揮干有機溶劑，即可得到丹酚酸B。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種丹酚酸B的超聲波提取方法，將干丹參粉碎成10～80目的粉末，加入體積重量比為5～30倍40％～80％的乙醇，在0～60℃、30～80kHz的條件下超聲波提取5～40min，得到粗提液；將粗提液過濾、濃縮，干燥，得到粗提物；在粗提物中加入體積重量比為2～5倍量的冷水，充分攪拌均勻，過濾，收集濾液，減壓濃縮轉溶液至體積重量比為干丹參的0.01～1倍量，將濃縮液用10％的鹽酸調節(jié)pH值至2～5，再用乙酸乙酯或正丁醇萃取3～8次；合并萃取液，揮干有機溶劑，即得。該方法工藝簡單、提取時間短、成本低、效率高，適合于大規(guī)模工業(yè)化生產。
文檔編號C07D307/86GK101544625SQ20091002237
公開日2009年9月30日 申請日期2009年5月6日 優(yōu)先權日2009年5月6日
發(fā)明者梁宗鎖, 王渭玲, 董娟娥 申請人:西北農林科技大學