專利名稱：利用高速逆流色譜法純化一枝蒿酮酸和金腰素乙的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及利用高速逆流色譜法，從含酮酸和金腰素乙的天然植 物中分離和制備高純度酮酸和金腰素乙的方法。
背景技術(shù)：
近20年來發(fā)展起來的高速逆流色譜技術(shù)(High-speed counter—current chromatography, HSCCC)是——禾中沒有固態(tài)支撐體 的液一液分配色譜技術(shù)，以輕巧的聚四氟乙烯螺旋管作為分離柱，固 定相和流動相都是液態(tài)，螺旋管自轉(zhuǎn)的同時,繞一平行于自轉(zhuǎn)軸的外 部軸線做公轉(zhuǎn)運(yùn)動，借以獲得足夠強(qiáng)的離心力場，在兩相中的一相得 以保留的前提下，形成固定相與流動相的兩相分割趨勢和對流趨勢， 這種分割和對流的過程是連續(xù)進(jìn)行的，如果把要分離的樣品從螺旋管 柱的入口注入，連續(xù)的分配傳遞過程就會在管柱里進(jìn)行，從而實(shí)現(xiàn)連 續(xù)的、高效的液一液分配過程。HSCCC分離效率高；操作簡單，樣品 不需嚴(yán)格的預(yù)處理；可從極復(fù)雜的粗制樣品中一步分離得到高純度的 組分；分析/分離粘度較高和易被固定相吸附的樣品方面具有明顯優(yōu) 勢；可以分析/分離黃酮、生物堿、醌類、類脂等小分子化合物，也 可分析/分離多肽、多糖、蛋白質(zhì)等高分子化合物，適用范圍比較廣 泛；能夠明確表達(dá)中藥材這種復(fù)雜體系中不同批次間的差異，穩(wěn)定性 和重現(xiàn)性好；其儀器及耗材完全國產(chǎn)化，成本明顯低于高效液相色譜。 隨著天然藥物的蓬勃發(fā)展HSCCC的主要研究領(lǐng)域集中于天然藥物的 分離純化，已從幾十種天然原料中分離得到數(shù)百種高純度的單體化合 物。非常適合于維藥化學(xué)對照品的制備。
維藥歷史悠久，在其形成和發(fā)展的過程中，采阿拉伯、古希臘等
民族醫(yī)藥之所長，并受到中醫(yī)藥學(xué)的影響，是我國民族醫(yī)藥的獨(dú)立分 支，歷史上為西域各族人民的繁衍和昌盛做出過重要貢獻(xiàn)。新疆自治
區(qū)有維藥600余種，較常用的360種左右，其中本地產(chǎn)資源約160種， 占維藥總數(shù)的27%。已收入《中華人民共和國》藥典的藥品有202 種，其中藥材115種，成方制劑87種，屬于民族專用的約有30種， 毛菊苣和一枝蒿是非常有代表性的藥材。
維藥有著獨(dú)特的治病理念，是中國民族藥的重要組成部分，但其 應(yīng)用基本局限在新疆自治區(qū)的范圍內(nèi)，在全國范圍及世界各地的推廣 速度緩慢。導(dǎo)致這種情況的主要原因 一是生產(chǎn)工藝離現(xiàn)代醫(yī)藥工業(yè) 優(yōu)質(zhì)化生產(chǎn)要求還有很大差距；二是原藥材的主要活性成分是次生代 謝物，對后天的生長環(huán)境依賴性很強(qiáng)，原料藥來自天然，又多為人工 分散采收、加工，受天氣、地域差別及人為因素影響很大，原料、中 間體及最終產(chǎn)品離規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化管理還有很大差距，缺乏嚴(yán)格的質(zhì) 量監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)和良好的監(jiān)控方法，很難保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性；三是維 藥產(chǎn)品的療效缺乏采用現(xiàn)代藥物臨床研究常用的"隨機(jī)分組"、"對 照"、"雙盲"、"多點(diǎn)觀察"等科學(xué)實(shí)驗(yàn)方法獲得的科學(xué)數(shù)據(jù)說明，難 為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)工作者和管理機(jī)構(gòu)所信服。維藥現(xiàn)代化是維藥產(chǎn)業(yè)可持續(xù) 發(fā)展的根本出路。維藥原料和成藥(片劑、顆粒劑、口服液、注射劑) 的質(zhì)量監(jiān)控是維藥現(xiàn)代化進(jìn)程中迫切需要解決的關(guān)鍵問題之一。而標(biāo) 準(zhǔn)對照品是質(zhì)量監(jiān)控的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，可供原藥材種植基地監(jiān)控氣 候、地域、采收期及人為因素等對藥材質(zhì)量的影響，指導(dǎo)種植；可供 成藥生產(chǎn)廠家指導(dǎo)藥材的合理勾兌，控制中間體及最終產(chǎn)品的質(zhì)量， 建立相關(guān)企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)；為指紋圖譜中重要指標(biāo)成分的標(biāo)定及譜效關(guān)系建 立提供基礎(chǔ)。
而無論是維藥還是中藥的研究與開發(fā)，都嚴(yán)重缺乏高純度的標(biāo)準(zhǔn) 對照品，這是制約標(biāo)準(zhǔn)制訂與實(shí)施的關(guān)鍵因素之一。目前國家質(zhì)量技 術(shù)監(jiān)督局正在建立各種國家實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)，天然藥物的標(biāo)準(zhǔn)品是其中的重 要內(nèi)容。
新疆一枝蒿(Artemisia r叩estris L.)系菊科植物，產(chǎn)于新疆 維吾爾自治區(qū)境內(nèi)的天山及阿爾泰山山脈，是新疆民族藥常用藥材， 具有解毒、抗過敏、抗菌、抗病毒及保肝等功效。臨床用于肝炎、感 冒、咽炎、扁桃體炎、眼炎的治療。 一枝蒿中含有黃酮類、半倍萜類、 氨基酸類、甙類、多糖類、揮發(fā)油、多肽、生物堿等化合物。
本發(fā)明針對化學(xué)對照品嚴(yán)重缺乏的問題，在己有的維藥藥效學(xué)研 究基礎(chǔ)上，采用近年來發(fā)展迅速的高速逆流色譜技術(shù)，同時制備一枝 蒿酮酸和金腰素乙等兩種代表性化學(xué)成分的方法，并采用該方法獲得 了高純度(純度95%上)的一枝蒿酮酸和金腰素乙的單體化合物；并 建立以高速逆流色譜為核心技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)對照品制備平臺，為維藥化合 物庫的建立及國家實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)的申請打下基礎(chǔ)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種利用高速逆流色譜法純化一枝蒿酮 酸和金腰素乙的方法，該方法是將分離溶劑系統(tǒng)置于分液漏斗中充分 振搖后靜置分層，取上相作為固定相，下相作為流動相，取一枝蒿提 取物溶解于上相和下相的混合溶液中，再將固定相用泵灌滿色譜分離 柱，然后將柱的首端與進(jìn)樣閥相接，待流動相開始流出色譜柱時，收 集分離物，將不同成分分別收集、濃縮、干燥，分離得到95%以上 的酮酸和金腰素乙的單體化合物。
本發(fā)明所述的利用高速逆流色譜法純化一枝蒿酮酸和金腰素乙 的方法其特征在于按下列步驟進(jìn)行
a、 取一枝蒿全草，粉碎后用70%乙醇回流提取，合并提取液減 壓濃縮成浸膏，用水混懸，分別用石油醚和乙酸乙酯萃取；
b、 萃取液濃縮至干，得乙酸乙酯部分干燥粉末，將粉末溶于二 氯甲垸，超聲溶解，過濾，合并，濃縮得粗樣品；
c、 采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑系統(tǒng)由正己垸、乙酸
乙酯、甲醇和水組成，其體積比為2-5:4-6:2-5:4-6;
d、 將溶劑系統(tǒng)配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上 相作為固定相，下相作為流動相，取步驟b提取粗樣品溶于上層和下 層的混合溶劑中，使高速逆流色譜儀柱子中充滿固定相，然后使其主 機(jī)轉(zhuǎn)動，再將流動相泵入柱，再由進(jìn)樣閥進(jìn)入粗樣品溶于上層和下層 的混合溶劑，根據(jù)檢測器譜圖接收目標(biāo)成分；
e、 將高速逆流色譜分離得到的樣品利用高效液相檢測，色譜條 件為C18 column (4,6mmL D. X 250mm， 5um)，柱溫35。C,流動 相:A (甲醇);B (0. 2%甲酸);梯度洗脫程序0-40min， A:B (30:70， v/v)到A:B (70:30， v/v) ， 60min時，A:B (70:30， v/v);流速 1.0 ml min-l ，檢測波長245 nm。
步驟d在高速逆流色譜中一枝蒿酮酸的保留時間為260-400分 鐘， 一枝蒿金腰素乙的保留時間為560-720分鐘。
步驟d使用的高速逆流色譜儀流速范圍為l-3ml/min，轉(zhuǎn)速范圍 為750-900轉(zhuǎn)數(shù)。
本方法適用于對含有酮酸和金腰素乙的任意一種植物的提取。
本發(fā)明所述的利用高速逆流色譜法純化一枝蒿酮酸和金腰素乙 的方法，為實(shí)現(xiàn)該方法本發(fā)明采取了以下設(shè)計(jì)方案
樣品的制備
新疆一枝蒿全草500g (干重)，粉碎后用70%乙醇回流提取，合 并提取液減壓濃縮成浸膏，用水混懸，分別用石油醚、乙酸乙酯萃取。 萃取液濃縮至干，得乙酸乙酯部分干燥粉末95.394 g，粉末溶于1L 二氯甲烷(5次)，超聲溶解，過濾，合并，濃縮得粗樣品5. 1289g， 該樣品用于高速逆流色譜法(HSCCC)的分離；
溶劑系統(tǒng)的篩選
取5mg粗樣品溶于10 ml溶劑系統(tǒng)中，連續(xù)震蕩5分鐘，靜置， 分層，分層時間少于30秒，分開兩相后置于試管中，干燥后重新溶
解于lml甲醇中，通過HPLC對樣品進(jìn)行分析，目標(biāo)化合物上相峰面 積與下相峰面積的比值即為該化合物在兩相溶劑中的分配系數(shù)(K)， 溶劑系統(tǒng)正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水2-5:4-6:2-5:4-6 v/v，優(yōu)選體 積比3:5:3:5，目標(biāo)化合物一枝蒿酮酸和金腰素乙的K分別為2. 49、 5.98;
樣品溶液的制備.-
將500毫克粗樣品溶于10ml等體積的上下相溶液中，超聲使其 溶解，濾去不溶物；
高速逆流色譜(HSCCC)分離過程
首先用固定相充滿"色譜柱"，開啟逆流色譜儀，轉(zhuǎn)數(shù)為 800rpm/min，以1. 5ml/min的流速注入流動相后，進(jìn)10ml樣品溶液。 流出液通過紫外檢測器檢測，檢測波長254nm，根據(jù)峰型手動收集流 出液；
高效液相(HPLC)檢測高速逆流色譜(HSCCC)的原料和產(chǎn)品 粗樣品和高速逆流色譜(HSCCC)分離得到的樣品通過高效液相 (HPLC)檢觀lJ，色譜條件為C18 column(4. 6腿I.D. X 250,， 5um)， 柱溫35°C，流動相A (甲醇)；B (0. 2%甲酸)；梯度洗脫程序0-40min， A:B (30:70， v/v)到A:B (70:30， v/v) ， 60min時，A:B (70:30， v/v)， 流速l.Omlmin—1 ，檢測波長245 nm， 一枝蒿酮酸和金腰素乙的 保留時間分別為30min、 37. 5min。
高速逆流色譜(HSCCC)分離得到的單體通過MS、麗R鑒定結(jié)構(gòu)。
圖1為本發(fā)明高速逆流色譜分離一枝蒿酮酸和金腰素乙的圖，其 中1為一枝蒿酮酸，2為金腰素乙。
圖2為本發(fā)明高速逆流色譜分離前的總樣品圖，其中1為一枝蒿 酮酸，2為金腰素乙。
圖3為本發(fā)明高效液相檢測一枝蒿酮酸圖，其中1為酮酸。
圖4為本發(fā)明該校液相檢測金腰素乙圖，其中2為金腰素乙。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1 樣品的制備
a、 取新疆一枝蒿全草500g(干重)，粉碎后用70%乙醇回流提取， 合并提取液減壓濃縮成浸膏，用水混懸，分別用石油醚和乙酸乙酯萃 ??；
b、 萃取液濃縮至干，得乙酸乙酯部分干燥粉末95.394 g，將粉 末溶于1L二氯甲烷(5次)，超聲溶解，過濾，合并，濃縮得粗樣品 5. 1289g，該樣品用于高速逆流色譜(HSCCC)的分離；
c、 采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑系統(tǒng)由正己垸、乙酸 乙酯、甲醇和水組成，其體積比為2:6:2:6;
d、 將溶劑系統(tǒng)配置于分液落斗中，充分振搖后靜置分層，取上 相作為固定相，下相作為流動相，取步驟b粗樣品150mg溶于3ml上 層和3ml下層的混合溶劑中，使高速逆流色譜儀柱子中充滿固定相， 然后將柱的首端與六通進(jìn)樣閥相接，開啟速度控制器，使其主機(jī)轉(zhuǎn)動， 轉(zhuǎn)速達(dá)到750r/min，開始以1. Oml/min流速泵入流動相，再由進(jìn)樣閥 進(jìn)入步驟b粗樣品150毫克的混合溶劑，待流動相開始流出色譜柱時， 收集分離物，在高速逆流色譜中一枝蒿酮酸的保留時間為260分鐘， 一枝蒿金腰素乙的保留時間為560分鐘，根據(jù)檢測器自外譜圖接收目 標(biāo)成分，分離得到的酮酸和金腰素乙的純度都在95%以上；
e、 將高速逆流色譜分離得到的樣品利用高效液相檢測，色譜條 件為C18 column (4.6腿I.D. X 250mm， 5um)，柱溫35。C，流動 相A(甲醇)；B(0.2呢甲酸)；梯度洗脫程序0-40min， A:B (30:70， v/v)到A:B (70:30， v/v) ， 60min時，A:B (70:30， v/v)，流速 1. 0 ml min-1 ，檢測波長245 nm。
實(shí)施例2
a、取新疆一枝蒿全草500g(干重)，粉碎后用70%乙醇回流提取， 合并提取液減壓濃縮成浸膏，用水混懸，分別用石油醚和乙酸乙酯萃
??；
b、 萃取液濃縮至干，得乙酸乙酯部分干燥粉末95.394 g，將粉 末溶于1L二氯甲烷(5次)，超聲溶解，過濾，合并，濃縮得粗樣品 5. 1289g，該樣品用于高速逆流色譜(HSCCC)的分離；
c、 采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑系統(tǒng)由正己垸、乙酸 乙酯、甲醇和水組成，其體積比為3:6:3:6;
d、 將溶劑系統(tǒng)配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上 相作為固定相，下相作為流動相，取步驟b提取粗樣品500mg溶于 10ml上層和10ml下層的混合溶劑中，使高速逆流色譜儀柱子中充滿 固定相，然后將柱的首端與六通進(jìn)樣閥相接，開啟速度控制器，使其 主機(jī)轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速達(dá)到900r/min，開始以3ml/min流速泵入流動相，由 進(jìn)樣閥進(jìn)入步驟b提取粗樣品500mg的混合溶劑，待流動相開始流出 色譜柱時，收集分離物，在高速逆流色譜中一枝蒿酮酸的保留時間為 320分鐘， 一枝蒿金腰素乙的保留時間為600分鐘，根據(jù)檢測器自外 譜圖接收目標(biāo)成分，分離得到的酮酸和金腰素乙的純度都在95%以 上；
e、 將高速逆流色譜分離得到的樣品利用高效液相檢測，色譜條 件為C18 column (4.6mml.D. X 250讓，5um)，柱溫35。C，流動 相A(甲醇)；B(0.2。/q甲酸);梯度洗脫程序0-40min， A:B (30:70， v/v)到A:B (70:30， v/v) ， 60min時，A:B (70:30， v/v)。流速 1.0 ml min-1 ，檢測波長245 nm。
本方法適用于對含有酮酸和金腰素乙的任意一種植物的提取。 實(shí)施例3
a、 取新疆一枝蒿全草500g(干重)，粉碎后用70%乙醇回流提取， 合并提取液減壓濃縮成浸膏，用水混懸，分別用石油醚和乙酸乙酯萃 ??；
b、 萃取液濃縮至干，得乙酸乙酯部分干燥粉末95.394 g，將粉
末溶于1L二氯甲烷(5次)，超聲溶解，過濾，合并，濃縮得粗樣品 5. 1289g，該樣品用于高速逆流色譜(HSCCC)的分離；
c、 采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑系統(tǒng)由正己烷、乙酸 乙酯、甲醇和水組成，其體積比為4:5:4:5;
d、 將溶劑系統(tǒng)配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上 相作為固定相，下相作為流動相，取步驟b提取粗樣品200mg溶于 5ml上層和5ml下層的混合溶劑中，使高速逆流色譜儀柱子中充滿固 定相，然后將柱的首端與六通進(jìn)樣閥相接，開啟速度控制器，使其主 機(jī)轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速達(dá)到800r/min，開始以2.0ml/min流速泵入流動相，再 將流動相泵入柱，由進(jìn)樣閥進(jìn)入步驟b提取粗樣品200mg的混合溶劑，
待流動相開始流出色譜柱時，收集分離物，在高速逆流色譜中一枝蒿 酮酸的保留時間為300分鐘，一枝蒿金腰素乙的保留時間為620分鐘，
根據(jù)檢測器譜圖接收目標(biāo)成分，分離得到的酮酸和金腰素乙的純度都 在95%以上；
e、 將高速逆流色譜分離得到的樣品利用高效液相檢測，色譜條 件為C18 column (4.6腿I.D. X 250咖，5um)，柱f顯35。C，流動 相A(甲醇)'；B(0.2。/。甲酸)；梯度洗脫程序0-40min， A:B (30:70， v/v)到A:B (70:30， v/v) ， 60min時，A:B (70:30， v/v)，流速 1. 0 ml min-1 ，檢測波長245 nm。
本方法適用于對含有酮酸和金腰素乙的任意一種植物的提取。 實(shí)施例4
a、 取新疆一枝蒿全草500g(干重)，粉碎后用70%乙醇回流提取， 合并提取液減壓濃縮成浸膏，用水混懸，分別用石油醚和乙酸乙酯萃 ??；
b、 萃取液濃縮至干，得乙酸乙酯部分干燥粉末95.394 g，將粉 末溶于1L二氯甲烷(5次)，超聲溶解，過濾，合并，濃縮得粗樣品 5. 1289g，該樣品用于高速逆流色譜(HSCCC)的分離；
C、采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑系統(tǒng)由正己垸、乙酸
乙酯、甲醇和水組成，其體積比為3:5:3:5;
d、 將溶劑系統(tǒng)配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上 相作為固定相，下相作為流動相，取步驟b提取粗樣品300mg溶于 4ml上層和4ml下層的混合溶劑中，使高速逆流色譜儀柱子中充滿固 定相，然后將柱的首端與六通進(jìn)樣閥相接，開啟速度控制器，使其主 機(jī)轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速達(dá)到880r/min，開始以2.5ml/min流速泵入流動相，再 將流動相泵入柱，由進(jìn)樣閥進(jìn)入步驟b提取粗樣品300mg的混合溶劑， 待流動相開始流出色譜柱時，收集分離物，在高速逆流色譜中一枝蒿 酮酸的保留時間為380分鐘，一枝蒿金腰素乙的保留時間為700分鐘，
根據(jù)檢測器譜圖接收目標(biāo)成分，分離得到的酮酸和金腰素乙的純度都 在95%以上；
e、 將高速逆流色譜分離得到的樣品利用高效液相檢測，色譜條 件為C18 column (4.6mml. D. X 250mm, 5um)，柱〗溫35。C，流動 相A (甲醇)；B (0. 2%甲酸)；梯度洗脫程序0-40min， A:B (30:70， v/v)到A:B (70:30， v/v) ， 60min時，A:B (70:30， v/v)。流速 1.0 ml min-l ，檢測波長245 nm。
本方法適用于對含有酮酸和金腰素乙的任意一種植物的提取。 實(shí)施例5
a、 取新疆一枝蒿全草500g(干重)，粉碎后用70%乙醇回流提取， 合并提取液減壓濃縮成浸膏，用水混懸，分別用石油醚和乙酸乙酯萃 ??；
b、 萃取液濃縮至干，得乙酸乙酯部分干燥粉末95.394 g，將粉 末溶于1L二氯甲垸(5次)，超聲溶解，過濾，合并，濃縮得粗樣品 5. 1289g，該樣品用于高速逆流色譜(HSCCC)的分離；
c、 采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑系統(tǒng)由正己垸、乙酸 乙酯、甲醇和水組成，其體積比為5:6:5:6;
d、 將溶劑系統(tǒng)配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上
相作為固定相，下相作為流動相，取步驟b提取粗樣品350mg溶于 6ml上層和6ml下層的混合溶劑中，使高速逆流色譜儀柱子中充滿固 定相，然后將柱的首端與六通進(jìn)樣閥相接，開啟速度控制器，使其主 機(jī)轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速達(dá)到850r/min，開始以1.5ml/min流速泵入流動相，再 將流動相泵入柱，由進(jìn)樣閥進(jìn)入步驟b提取粗樣品350mg的混合溶劑， 待流動相開始流出色譜柱時，收集分離物，在高速逆流色譜中一枝蒿 酮酸的保留時間為400分鐘， 一枝蒿金腰素乙的保留時間為720分鐘， 根據(jù)檢測器譜圖接收目標(biāo)成分，分離得到的酮酸和金腰素乙的純度都 在95%以上；
e、 將高速逆流色譜分離得到的樣品利用高效液相檢測，色譜條 件為C18 column (4.6mml. D. X 250mm， 5um)，柱溫35。C，流動 相:A (甲醇);B (0. 2%甲酸);梯度洗脫程序0-40min， A:B (30:70， v/v)到A:B (70:30， v/v) ， 60min時，A:B (70:30， v/v)。流速 1.0 ml min-l ，檢測波長245 nm。
本方法適用于對含有酮酸和金腰素乙的任意一種植物的提取。 本發(fā)明提供了一種從天然產(chǎn)物粗提取物中同時分離得到兩種化 合物的高速逆流色譜方法(HSCCC)，該方法主要用于在制備高純度化 學(xué)對照品和化學(xué)樣品的制備，具有高效，低成本，樣品無損失，樣品 分離量大等特點(diǎn)。
權(quán)利要求
1、一種利用高速逆流色譜法純化一枝蒿酮酸和金腰素乙的方法其特征在于按下列步驟進(jìn)行a、取一枝蒿全草，粉碎后用70％乙醇回流提取，合并提取液減壓濃縮成浸膏，用水混懸，分別用石油醚和乙酸乙酯萃取；b、萃取液濃縮至干，得乙酸乙酯部分干燥粉末，將粉末溶于二氯甲烷，超聲溶解，過濾，合并，濃縮得粗樣品；c、采用高速逆流色譜儀，色譜儀分離溶劑系統(tǒng)由正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水組成，其體積比為2-5∶4-6∶2-5∶4-6；d、將溶劑系統(tǒng)配置于分液漏斗中，充分振搖后靜置分層，取上相作為固定相，下相作為流動相，取步驟b提取粗樣品溶于上層和下層的混合溶劑中，使高速逆流色譜儀柱子中充滿固定相，然后使其主機(jī)轉(zhuǎn)動，再將流動相泵入柱，再由進(jìn)樣閥進(jìn)入粗樣品溶于上層和下層的混合溶劑，根據(jù)檢測器譜圖接收目標(biāo)成分；e、將高速逆流色譜分離得到的樣品利用高效液相檢測，色譜條件為C18 column，4.6mmI.D.×250mm，5μm；柱溫35℃，流動相A甲醇；B 0.2％甲酸；梯度洗脫程序0-40min，A∶B＝30∶70-70∶30，v/v，60min時，A∶B＝70∶30，v/v，流速1.0ml min-1，檢測波長245nm。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟d在高速逆流 色譜中一枝蒿酮酸的保留時間為260-400分鐘， 一枝蒿金腰素乙的保 留時間為560-720分鐘。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟d使用的高速 逆流色譜儀流速范圍為l-3ml/min，轉(zhuǎn)速范圍為750-900轉(zhuǎn)數(shù)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于本方法適用于對含 有酮酸和金腰素乙的任意一種植物的提取和前處理方法。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種利用高速逆流色譜法純化一枝蒿酮酸和金腰素乙的方法，該方法是將分離溶劑系統(tǒng)置于分液漏斗中充分振搖后靜置分層，取上相作為固定相，下相作為流動相，取一枝蒿提取物溶解于上相和下相的混合溶液中，再將固定相用泵灌滿色譜分離柱，然后將柱的首端與進(jìn)樣閥相接，待流動相開始流出色譜柱時，收集分離物，將不同成分分別收集、濃縮、干燥，分離得到95％以上的酮酸和金腰素乙的單體化合物。
文檔編號C07C51/42GK101337882SQ20081007293
公開日2009年1月7日 申請日期2008年8月7日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月7日
發(fā)明者義 楊, 趙永昕, 阿不力米提·伊力, 阿吉艾克拜爾·艾薩 申請人:中國科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所