專利名稱：用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化學(xué)物質(zhì)或藥品的制造方法，具體涉及以硫酸長(zhǎng)春堿為 原料，合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法。
背景技術(shù)：
長(zhǎng)春花Catharanthus roseus (L).G.Don是夾竹桃科長(zhǎng)春花屬重要的藥 用植物，它含有長(zhǎng)春花質(zhì)堿、文多靈堿、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、環(huán)氧長(zhǎng)春 堿等100余種生物堿成分，其中多數(shù)具有生物活性，長(zhǎng)春堿與長(zhǎng)春新堿 是目前應(yīng)用最廣泛的天然植物抗腫瘤藥物之一。但是，由于這兩種生物 堿對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)及注射局部正常組織刺激較大，限制了其在臨床上的應(yīng)用。 因而通過(guò)化學(xué)合成等方法得到抗腫瘤效果更好、毒性更低的新的生物堿 已經(jīng)成為必需。目前已經(jīng)問(wèn)世并且大面積使用的新一代抗癌藥物長(zhǎng)春瑞 濱及長(zhǎng)春氟寧等，就是在植物提取得到的生物堿的基礎(chǔ)上，通過(guò)化學(xué)半 合成而得到的。
長(zhǎng)春瑞濱(商品名Navelbing)是一種新型的半合成長(zhǎng)春堿類抗癌 藥物，化學(xué)名稱3',4'-二去氫-4'-去氧-8'-去甲長(zhǎng)春花堿。主要通過(guò)抑制著 絲點(diǎn)微管蛋白的聚合，使細(xì)胞分裂停止于有絲分裂的中期，是一細(xì)胞周 期特異性的藥物。其在結(jié)構(gòu)上的改變，具有強(qiáng)而專一的抗有絲分裂特性， 并且表現(xiàn)出比其它長(zhǎng)春堿類抗癌藥物神經(jīng)毒性低，抗腫瘤活性強(qiáng)的特性。 但是，由于長(zhǎng)春瑞濱本身結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，使得其合成的產(chǎn)率低，并且受 到傳統(tǒng)分離純化制備技術(shù)的限制，得到的長(zhǎng)春瑞濱的純度較低。
目前得到脫水長(zhǎng)春堿，主要采用SOCl2或POCyDMF試劑脫水，但 是副反應(yīng)多，所得產(chǎn)物的純度也不高；目前分離長(zhǎng)春瑞濱多以多次硅膠及氧化鋁柱分離為主，繁瑣且效率低下，嚴(yán)重影響了總收率。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法，解決 現(xiàn)有合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽方法副反應(yīng)多、所得產(chǎn)物純度不高以及效率 低下的問(wèn)題。
本發(fā)明的一種用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法，包括
(1) 脫水反應(yīng)步驟；以硫酸長(zhǎng)春堿為原料，以強(qiáng)路易斯酸為脫水劑， 在非離子弱堿性溶劑中，進(jìn)行脫水反應(yīng)得到含脫水長(zhǎng)春堿和6'-Nb-OXide-leurosine的溶液；
(2) 純化處理步驟；將含脫水長(zhǎng)春堿和6，-Nb-oxide- leurosine的溶 液進(jìn)行純化處理，得到脫水長(zhǎng)春堿和副產(chǎn)物6，-Nb-oxide- leurosine;
(3) 溴代縮環(huán)一體化反應(yīng)步驟；對(duì)脫水長(zhǎng)春堿加入溴代穩(wěn)定劑，在 溴代反應(yīng)劑的作用下進(jìn)行溴代反應(yīng)合成中間產(chǎn)物溴代脫水長(zhǎng)春堿，反應(yīng) 結(jié)束后，再加入縮環(huán)試劑，進(jìn)行縮環(huán)反應(yīng)得到長(zhǎng)春瑞濱粗產(chǎn)物；
(4) 分離步驟；對(duì)長(zhǎng)春瑞濱粗產(chǎn)物采用硅膠干柱分離后，再進(jìn)行反 相柱分離，得到含量大于98%的長(zhǎng)春瑞濱；
(5) 精制步驟；對(duì)含量大于98%的長(zhǎng)春瑞濱采用Sephadex LH-20 柱精制，與酒石酸進(jìn)行成鹽反應(yīng)，得到99.5%的長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽；
(6) 副產(chǎn)物加工步驟；將所述步驟(2)得到的副產(chǎn)物6'-Nb-oxide-leurosine，在Zn粉及三甲基氯硅烷構(gòu)成的催化劑作用下，反應(yīng)得到 6，-Nb-oxide-leurosine的脫水產(chǎn)物，然后在(CF3CO)20與NaBH4的共同作 用下得到長(zhǎng)春瑞濱粗產(chǎn)物。
所述的用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法，其特征在于
所述脫水反應(yīng)步驟中，所述強(qiáng)路易斯酸為BF3， SOCl2， POCl3， C202C12其中的一種或其中兩種的混合物；所述非離子弱堿性溶劑為吡啶、二甲 基甲酰胺、三乙醇胺、N，N-二甲苯胺其中的一種或其中兩種的混合物；
所述脫水反應(yīng)溫度為4 30°C，反應(yīng)時(shí)間6 12小時(shí)。
所述的用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法，其特征在于 所述純化處理步驟的過(guò)程為將含脫水長(zhǎng)春堿和6，-Nb-oxide- leurosine的 溶液加入3 5倍體積的冰水，調(diào)節(jié)pH值為8.5 11，用有機(jī)溶劑萃取 后再進(jìn)行結(jié)晶；其中萃取用有機(jī)溶劑為二氯甲烷、三氯甲垸、乙醚及正 己烷中的一種或其中兩種的混合物；產(chǎn)物經(jīng)過(guò)萃取、蒸干后，將蒸干物 在40 6(TC下溶解于由甲醇和水組成的溶劑，所述溶劑體積比為甲醇水 =5: 1 2: 1，在0 6'C結(jié)晶，過(guò)濾所得固體物為脫水長(zhǎng)春堿；濾液蒸干
后溶解于結(jié)晶溶劑，在一IO 一3(TC冷凍結(jié)晶，過(guò)濾所得固體物為副產(chǎn) 物6，-Nb-oxide- leurosine 。
所述的用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法，其特征在于 所述純化處理步驟中，所述結(jié)晶溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、乙腈中的一 種。
所述的用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法，其特征在于 所述溴代縮環(huán)一體化反應(yīng)步驟中，所述溴代反應(yīng)在無(wú)水二氯甲烷溶劑中 進(jìn)行，所述溴代反應(yīng)劑為溴代琥珀酰亞胺與三氟乙酸的混合物，溴代琥 珀酰亞胺與脫水長(zhǎng)春堿的化學(xué)當(dāng)量比為1.2~1: 1，三氟乙酸的用量為每 升無(wú)水二氯甲烷中加乂 10 30ml;所述溴代穩(wěn)定劑為吡啶、乙二胺、 二乙胺、三乙胺、二甲基甲酰胺、三乙醇胺中的一種或其中兩種的混合 物；溴代穩(wěn)定劑與三氟乙酸的化學(xué)當(dāng)量比為0.6 1.4: 1;溴代反應(yīng)溫度為
一50 _80°C，反應(yīng)0.5 1.5小時(shí)；溴代反應(yīng)結(jié)束后，加入含有四氟硼銀的四氫呋喃水溶液進(jìn)行縮環(huán)反應(yīng)，四氫呋喃水溶液由體積比1: 2 3: 1的四氫呋喃和水組成，四氫呋喃水溶液與二氯甲烷溶劑體積比為2: l 4: 1，四氟硼銀與脫水長(zhǎng)春堿的化學(xué)當(dāng)量比為1 4: 1，縮環(huán)反應(yīng)在30
6(TC下進(jìn)行，反應(yīng)2 5小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束，蒸干四氫呋喃后，調(diào)節(jié)溶液pH 值為8.5 10.0，用三氯甲烷萃取得到長(zhǎng)春瑞濱粗產(chǎn)物。
所述的用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法，其特征在于
所述分離步驟中，所述硅膠干柱分離，洗脫條件甲醇和正己垸體積比為
90: 10 98: 2，溶劑到達(dá)硅膠干柱底端時(shí)停止洗脫，取出比移值Rf二0.4 0.8的硅膠段，用二氯甲垸洗滌3 5次，蒸干有機(jī)相得到硅膠分離產(chǎn)物；
所述反相柱分離采用反相C!8填料或反相聚苯乙烯填料分離，洗脫條件甲
醇和水體積比為6: 4 9: 1，收集正組分，蒸干所得產(chǎn)物于50 60'C下 溶解于70% 100%甲醇中，在一IO 一30。C結(jié)晶，過(guò)濾所得固體物為含 量大于98%的長(zhǎng)春瑞濱。
所述的用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法，其特征在于 所述精制步驟中，將含量大于98%的長(zhǎng)春瑞濱，利用Sephadex LH-20柱 精制，洗脫條件甲醇和水體積比為6: 1 3: 1;收集正組分蒸干，將得
到的蒸干物溶解于丙酮中，加入含有酒石酸的丙酮溶液，其中酒石酸的
含量至少大于2倍長(zhǎng)春瑞濱蒸干物物質(zhì)的量，攪拌進(jìn)行成鹽反應(yīng)，反應(yīng) 后過(guò)濾，濾液中加入乙醚，0 6。C下結(jié)晶，過(guò)濾得到晶體為純度大于99.5% 的長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽。
所述的用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法，其特征在于， 所述副產(chǎn)物加工步驟過(guò)程為將6'-Nb-oxide-leurosine溶解于二氯甲烷， 制備6，-Nb-oxide-leurosine溶液；將經(jīng)過(guò)活化的Zn粉加入二氯甲烷中，降溫到一20 一30。C，再加入三甲基氯硅烷構(gòu)成催化劑；在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，
向催化劑中滴加6，-Nb-oxide-leurosine溶液，催化劑中Zn粉、三甲基氯硅 烷與6，-Nb-oxide-leurosine化學(xué)當(dāng)量比為卜3:2~3:1;攪拌反應(yīng)20 40min 后過(guò)濾，取有機(jī)相蒸干得到6'-Nb-oxide-leurosine的脫水產(chǎn)物；將 6'-Nb-oxide-leurosine的脫水產(chǎn)物溶解于二氯甲烷中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，降溫 到一30 _60°C，滴加含有(CF3CO)20的二氯甲垸溶液，攪拌反應(yīng)40 80min后，滴加含有NaBH4的二氯甲垸溶液，攪拌5 20 min后過(guò)濾， 蒸干有機(jī)相得到長(zhǎng)春瑞濱粗產(chǎn)物；(CF3CO)20 、 NaBH4與 6'-Nb-oxide-leurosine物質(zhì)的量之比為9 lh 2 4: 1。
本發(fā)明采用強(qiáng)路易斯酸為脫水劑，在特定的弱堿性系統(tǒng)中進(jìn)行脫水 反應(yīng)，大大提高了反應(yīng)的效率。而針對(duì)溴代反應(yīng)由于具有多個(gè)活性中心， 溴代產(chǎn)物不穩(wěn)定而造成后續(xù)反應(yīng)效率較低的問(wèn)題，本發(fā)明采用溴代縮環(huán) 一體化反應(yīng)，并加入溴代穩(wěn)定劑，提高目標(biāo)溴代產(chǎn)物的穩(wěn)定性，使得溴 代縮環(huán)的收率有所提高。并且在合成脫水長(zhǎng)春堿的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)其主要 副產(chǎn)物6，-Nb-oxide-leurosine經(jīng)過(guò)兩步化學(xué)修飾同樣能得到長(zhǎng)春瑞濱，充 分利用該副產(chǎn)物能大大提高原料的利用率，有效的提高工藝的總收率
傳統(tǒng)的分離純化長(zhǎng)春瑞濱的方法多常用多次硅膠及氧化鋁柱層析的 方法，但是此方法繁瑣，且效率低下。本發(fā)明純化處理步驟應(yīng)用硅膠干 柱與反相柱結(jié)合的分離技術(shù)，然后采用高收率的Sephadex LH-20柱精制 得到純度大于99.5%的長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽，大大提高了分離的效率。結(jié)合 副產(chǎn)物加工步驟，將工藝的總收率提高到36%，比其它工藝均大大提高。
圖1為脫水反應(yīng)步驟示意圖2為溴代縮環(huán)一體化反應(yīng)步驟示意圖；圖3為副產(chǎn)物加工步驟示意圖。
具體實(shí)施例方式
圖1為脫水反應(yīng)步驟示意圖；以硫酸長(zhǎng)春堿為原料，以強(qiáng)路易斯酸 為脫水劑，在非離子弱堿性溶劑中，進(jìn)行脫水反應(yīng)得到含脫水長(zhǎng)春堿和 6，-Nb-oxide- leurosine的溶液。
圖2為溴代縮環(huán)一體化反應(yīng)步驟示意圖；對(duì)脫水長(zhǎng)春堿加入溴代穩(wěn)
定劑，在溴代反應(yīng)劑的作用下進(jìn)行溴代反應(yīng)合成中間產(chǎn)物溴代脫水長(zhǎng)春 堿，反應(yīng)結(jié)束后，再加入縮環(huán)試劑，進(jìn)行縮環(huán)反應(yīng)得到長(zhǎng)舂瑞濱粗產(chǎn)物。
其中NBS為溴代琥珀酰亞胺、TFA為三氟乙酸、AgBF4為四氟硼銀、 THF為四氫呋喃。
圖3為副產(chǎn)物加工步驟示意圖；將副產(chǎn)物6'-Nb-oxide- leurosine，在 Zn粉及三甲基氯硅烷構(gòu)成的催化劑作用下，反應(yīng)得到6，-Nb-0Xide-leurosine的脫水產(chǎn)物，然后在0^300)20與NaBH4的共同作用下得到長(zhǎng) 春瑞濱粗產(chǎn)物。
實(shí)施例l
(1) 脫水反應(yīng)步驟
在250 ml的反應(yīng)瓶中加入C2O2Cl2 20.0 ml，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，降溫到 0°C，攪拌下，滴加60ml的三乙醇胺溶液后，加入含有硫酸長(zhǎng)春堿16g
(硫酸長(zhǎng)春堿65%， HPLC檢測(cè))的三乙醇胺溶液70ml，升溫到30。C， 反應(yīng)12小時(shí)，得到含脫水長(zhǎng)春堿和6'-Nb-oxide- leurosine的溶液。
(2) 純化處理步驟
步驟(1)結(jié)束后，所得溶液加入750 ml的冰水(反應(yīng)液的5倍體積)， 氨水調(diào)節(jié)pH值為11，三氯甲烷萃取三次后，合并有機(jī)相，有機(jī)相濃縮 至干。將得到的脫水產(chǎn)物在40。C下溶解在甲醇水=5: 1 (V/V)的溶液中，0"C冰箱冷凍析晶，過(guò)濾，得到脫水硫酸長(zhǎng)春堿8.96 g (脫水硫酸 長(zhǎng)春堿純度75%， HPLC檢測(cè))。同時(shí)取濾液，蒸千后，殘余物用甲醇溶 解，—30。C下結(jié)晶，過(guò)濾得到6，-Nb-oxide-leurosine 2.54 g。
(3) 溴代縮環(huán)一體化反應(yīng)步驟 將1.81g溴代琥珀酰亞胺(其與脫水長(zhǎng)春堿的化學(xué)當(dāng)量比為1.2: 1)
溶解在50 ml無(wú)水二氯甲垸溶液中，加入含有6.0 ml三氟乙酸(其用量為 每升無(wú)水二氯甲烷中加入30ml)的無(wú)水二氯甲烷溶液30ml，混合得到 溴代反應(yīng)劑。
將步驟(2)中得到的脫水硫酸長(zhǎng)春堿8.96 g溶解在100 ml的無(wú)水二 氯甲垸中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，降溫到一5(TC，.滴加上述的溴代反應(yīng)液，保 持此溫度，加入含有吡啶9.1 ml為溴代穩(wěn)定劑的無(wú)水二氯甲垸溶液20 ml (溴代穩(wěn)定劑與三氟乙酸的化學(xué)當(dāng)量比為1.4: 1)，攪拌反應(yīng)1.0小時(shí)。 反應(yīng)結(jié)束后，在該體系中立即加入含有四氟硼銀6.6g (四氟硼銀與脫水
長(zhǎng)春堿的化學(xué)當(dāng)量比為4: 1)的四氫呋喃水=1: 2的四氫呋喃水溶液
800ml (四氫呋喃水溶液與二氯甲垸溶劑體積比為4: 1)，逐漸升溫到30 °C，避光，攪拌反應(yīng)5小時(shí)，反應(yīng)液過(guò)濾，蒸干四氫呋喃，10%碳酸鈉溶 液調(diào)節(jié)pH10.0，三氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)相，有機(jī)相蒸干得到長(zhǎng)春 瑞濱粗產(chǎn)物5.86g (長(zhǎng)春瑞濱純度72%， HPLC檢測(cè))。
(4) 分離步驟
將步驟(3)中得到的瑞濱粗產(chǎn)物5.86 g，上硅膠干柱分離，甲醇 正己烷=90: 10 (V/V)洗脫至柱底端時(shí)停止洗脫，取出Rf二0.4 0.8段 硅膠，二氯甲烷振蕩浸提3次，離心取有機(jī)相，蒸干，得到硅膠分離產(chǎn) 物3.85g (長(zhǎng)春瑞濱純度85%， HPLC檢測(cè))。
得到的硅膠分離產(chǎn)物，用甲醇溶解，上反相C18柱分離，甲醇水 =6: 4 (V/V)洗脫，得到正組分，蒸干后，50°。下用70%甲醇溶解，一 l(TC下冷凍結(jié)晶，過(guò)濾得到含量大于98%的長(zhǎng)春瑞濱3.0 g。(5) 精制步驟
將步驟(4)中得到的產(chǎn)品，溶解于甲醇中，上SephadexLH-20柱， 甲醇水=6: 1 (V/V)洗脫，收集正組分，蒸干，將產(chǎn)品溶解在20ml 丙酮溶液中，加入含有酒石酸1.73 g的丙酮50 ml溶液(酒石酸的含量為 3倍長(zhǎng)春瑞濱蒸干物物質(zhì)的量)，攪拌反應(yīng)后過(guò)濾，濾液中加入100ml乙 醚，6t:下結(jié)晶，過(guò)濾得到長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽3.84g (長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽 純度>99.5%， HPLC檢測(cè))。
(6) 副產(chǎn)物加工步驟
取0.6g經(jīng)過(guò)活化過(guò)的Zn粉于15ml的二氯甲烷中，降溫到一20。C， 加入1.2 ml的三甲基氯硅烷構(gòu)成催化劑，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，緩慢加入含有2.54 g 6，-Nb-oxide-leurosine的二氯甲烷溶液，攪拌反應(yīng)20 min后過(guò)濾，殘余 物用二氯甲烷洗滌，合并有機(jī)相后，蒸干得到6'-Nb-oxide-脫水長(zhǎng)春堿。
其中，Zn粉、三甲基氯硅烷與6，-Nb-oxide-leurosine化學(xué)當(dāng)量比為3: 3: 1。
將得到的6'-Nb-oxide-脫水長(zhǎng)春堿溶解于120 ml的二氯甲烷中，氮?dú)?保護(hù)下，降溫到一45'C，緩慢加入含有4.77 ml (CF3CO)20的二氯甲垸 60.0 ml，保持該反應(yīng)條件，攪拌反應(yīng)80min后，在此溫度下緩慢加入含 有0.47 gNaBH4的二氯甲垸溶液30 ml，攪拌10min后，過(guò)濾，殘余物 用二氯甲烷洗滌，合并有機(jī)相后，蒸干得到VNR粗品1.32 g，純度54%。 所得產(chǎn)物按照步驟(4)、 (5)的方法進(jìn)行分離及精制，得到長(zhǎng)春瑞濱酒 石酸鹽0.64g (長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽純度>99.5%， HPLC檢測(cè))。
其中(CF3CO)20、 NaBH4與6，-Nb-oxide-leurosine物質(zhì)的量之比為11: 4: 1。
步驟(1) ~ (5)的總收率為30.1%,加上步驟(6)的副產(chǎn)物加工 步驟，工藝的總收率達(dá)到36.33%。實(shí)施例2
(1) 脫水反應(yīng)步驟
在250ml的反應(yīng)瓶中加入BF3 24ml，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，降溫到O'C， 攪拌下，滴加60ml的吡啶溶液后，加入含有硫酸長(zhǎng)春堿16g (硫酸長(zhǎng)春 堿65°/。， HPLC檢測(cè))的吡啶溶液76ml，升溫到4。C，反應(yīng)6小時(shí)，得 到含脫水長(zhǎng)春堿和6'-Nb-oxide- leurosine的溶液。
(2) 純化處理步驟
步驟(1)結(jié)束后，所得溶液加入480 ml的冰水(反應(yīng)液的3倍體積)， 氨水調(diào)節(jié)pH值為8.5，正己烷萃取三次后，合并有機(jī)相，有機(jī)相濃縮至 干。將得到的脫水產(chǎn)物在6(TC下溶解在甲醇水=4: 1 (V/V)的溶液 中，6。C冰箱冷凍析晶，過(guò)濾，得到脫水硫酸長(zhǎng)春堿8.33 g (脫水硫酸長(zhǎng) 春堿純度74%， HPLC檢測(cè))。同時(shí)取濾液，蒸干后，殘余物用丙酮溶解， 一 10°C下結(jié)晶，過(guò)濾得到6，-Nb-oxide- leurosine 2.36 g。
(3) 溴代縮環(huán)一體化反應(yīng)步驟
將1.38g溴代琥珀酰亞胺(其與脫水長(zhǎng)春堿的化學(xué)當(dāng)量比為1.0: 1) 溶解在50ml無(wú)水二氯甲烷溶液中，加入含有2.0ml三氟乙酸(其用量為 每升無(wú)水二氯甲烷中加入10ml)的無(wú)水二氯甲垸溶液30ml，混合得到溴 代反應(yīng)劑。
將步驟(2)中得到的脫水硫酸長(zhǎng)春堿8.33 g溶解在100 ml的無(wú)水二 氯甲垸中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，降溫到一8(TC，滴加上述的溴代反應(yīng)液，保 持此溫度，加入含有三乙醇胺2.1 ml為溴代穩(wěn)定劑的無(wú)水二氯甲烷溶液 20ml (溴代穩(wěn)定劑與三氟乙酸的化學(xué)當(dāng)量比為0.6: 1)，攪拌反應(yīng)1.5小 時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，在該體系中立即加入含有四氟硼銀1.51 g (四氟硼銀與
脫水長(zhǎng)春堿的化學(xué)當(dāng)量比為1: 1)的四氫呋喃水二3: 1的四氫呋喃水
溶液400ml(四氫呋喃水溶液與二氯甲烷溶劑體積比為2: 1)，逐漸升溫 到40"C，避光，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，反應(yīng)液過(guò)濾，蒸干四氫呋喃，10%碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為8.5，三氯甲垸萃取三次，合并有機(jī)相，有機(jī)相蒸 干得到長(zhǎng)春瑞濱粗產(chǎn)物5.42g (長(zhǎng)春瑞濱純度70%， HPLC檢測(cè))。
(4) 分離步驟
將步驟(3)中得到的瑞濱粗產(chǎn)物5.42 g，上硅膠干柱分離，甲醇 正己烷二95: 5 (V/V)洗脫至柱底端時(shí)停止洗脫，取出Rf=0.4 0.8段 硅膠，二氯甲垸振蕩浸提5次，離心取有機(jī)相，蒸干，得到硅膠分離產(chǎn) 物3.11g (長(zhǎng)春瑞濱純度85%， HPLC檢測(cè))。
得到的硅膠分離產(chǎn)物，用甲醇溶解，上反相聚苯乙烯柱分離，甲醇 水=5: 1 (V/V)洗脫，得到正組分，蒸干后，60匸下用90%甲醇溶解， 一2(TC下冷凍結(jié)晶，過(guò)濾得到含量大于98%的長(zhǎng)春瑞濱2.54 g。
(5) 精制步驟
將步驟(4)中得到的產(chǎn)品，溶解于甲醇中，上SephadexLH-20柱， 甲醇水=4: l洗脫，收集正組分，蒸干，將產(chǎn)品溶解在20ml丙酮溶液 中，加入含有酒石酸1.76 g的丙酮50 ml溶液(酒石酸的含量為3倍長(zhǎng)春 瑞濱蒸千物物質(zhì)的量)，攪拌反應(yīng)后過(guò)濾，濾液中加入100ml乙醚，0°C 下結(jié)晶，過(guò)濾得到長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽3.25 g (長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽純度 >99.5%， HPLC檢測(cè))。
(6) 副產(chǎn)物加工步驟
取0.37 g經(jīng)過(guò)活化過(guò)的Zn粉于15 ml的二氯甲烷中，降溫到一3(TC， 加入0.73 ml的三甲基氯硅烷構(gòu)成催化劑，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，緩慢加入含有2.36 g 6'-Nb-oxide-leurosine的二氯甲烷溶液，攪拌反應(yīng)40 min后過(guò)濾，殘余 物用二氯甲烷洗滌，合并有機(jī)相后，蒸干得到6，-Nb-oxide-脫水長(zhǎng)春堿。
其中，Zn粉、三甲基氯硅烷與6，-Nb-oxide-leurosine化學(xué)當(dāng)量比為2: 2: 1。
將得到的產(chǎn)物溶解于120ml的二氯甲烷中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，降溫到一 30°C，緩慢加入含有3.63 ml (CF3CO)20的二氯甲烷60.0 ml，保持該反應(yīng)條件，攪拌反應(yīng)40min后，在此溫度下緩慢加入含有0.22 g NaBHj的 二氯甲烷溶液30ml，攪拌20min后，過(guò)濾，殘余物用二氯甲烷洗滌，合 并有機(jī)相后，蒸干得到VNR粗品1.20g，純度55%。所得產(chǎn)物按照步驟 (4)、 (5)的方法進(jìn)行分離及精制，得到長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽0.59g (長(zhǎng)春 瑞濱酒石酸鹽純度>99.5%， HPLC檢測(cè))。
其中(CF3CO)20、 NaBH4與6，-Nb-oxide-leurosine物質(zhì)的量之比為9: 2: 1。
步驟(1) ~ (5)的總收率為26.4%,加上步驟(6)的副產(chǎn)物加工 步驟，工藝的總收率達(dá)到31.1%。
實(shí)施例3
(1) 脫水反應(yīng)步驟
在150 ml的反應(yīng)瓶中加入SOCl2 12.0 ml，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，降溫到0 °C，攪拌下，滴加36 ml的二甲基甲酰胺溶液后，加入含有硫酸長(zhǎng)春堿 10 g (硫酸長(zhǎng)春堿65%， HPLC檢測(cè))的二甲基甲酰胺溶液32ml，升溫 到20°C，反應(yīng)10小時(shí)，得到含脫水長(zhǎng)春堿和6'-Nb-oxide- leurosine的溶液。
(2) 純化處理步驟
步驟(1 )結(jié)束后，所得溶液加入320 ml的冰水(反應(yīng)液的4倍體積)， 氨水調(diào)節(jié)pH值為10， 二氯甲烷萃取三次后，合并有機(jī)相，有機(jī)相濃縮 至干。將得到的脫水產(chǎn)物在5(TC下溶解在甲醇水=2: 1 (V/V)的溶 液中，4"C冰箱冷凍析晶，過(guò)濾，得到脫水硫酸長(zhǎng)春堿5.62 g (脫水硫酸 長(zhǎng)春堿純度75%， HPLC檢測(cè))。同時(shí)取濾液，蒸干后，殘余物用乙腈溶 解，一20。C下結(jié)晶，過(guò)濾得到6，-Nb-oxide-leurosine 1.50 g。
(3) 溴代縮環(huán)一體化反應(yīng)步驟 將1.04g溴代琥珀酰亞胺(其與脫水長(zhǎng)春堿的化學(xué)當(dāng)量比為1.1: 1)溶解在30 ml無(wú)水二氯甲烷溶液中，加入含有3.0 ml三氟乙酸(其用量為 每升無(wú)水二氯甲垸中加入20ml)的無(wú)水二氯甲垸溶液20ml，混合得到 溴代反應(yīng)劑。
將步驟(2)中得到的脫水硫酸長(zhǎng)春堿5.62g溶解在80ml的無(wú)水二 氯甲垸中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，降溫到一65。C，滴加上述的溴代反應(yīng)液，保 持此溫度，加入含有乙二胺2.7 ml為溴代穩(wěn)定劑的無(wú)水二氯甲烷溶液20 ml (溴代穩(wěn)定劑與三氟乙酸的化學(xué)當(dāng)量比為1.0: 1)，攪拌反應(yīng)0.5小時(shí)。 反應(yīng)結(jié)束后，在該體系中立即加入含有四氟硼銀3.1 g (四氟硼銀與脫水
長(zhǎng)春堿的化學(xué)當(dāng)量比為3: 1)的四氫呋喃水=2: 1的四氫呋喃水溶液
450ml (四氫呋喃水溶液與二氯甲垸溶劑體積比為3: 1)，逐漸升溫到60 °C，避光，攪拌反應(yīng)4小時(shí)，反應(yīng)液過(guò)濾，蒸干四氫呋喃，10%碳酸鈉溶 液調(diào)節(jié)pH 9.0，三氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)相，有機(jī)相蒸干得到長(zhǎng)春 瑞濱粗產(chǎn)物3.68g (長(zhǎng)春瑞濱純度72%， HPLC檢測(cè))。
(4) 分離步驟
將步驟(3)中得到的瑞濱粗產(chǎn)物3.68 g,上硅膠干柱分離，甲醇 正己烷=98: 2 (V/V)洗脫至柱底端時(shí)停止洗脫，取出Rf=0.4 0.8段 硅膠，二氯甲垸振蕩浸提4次，離心取有機(jī)相，蒸干，得到硅膠分離產(chǎn) 物2.50g (長(zhǎng)春瑞濱純度85%， HPLC檢測(cè))。
得到的硅膠分離產(chǎn)物，用甲醇溶解，上反相C18柱分離，甲醇水 =9: 1 (V/V)洗脫，得到正組分，蒸干后，55。C下用100%甲醇溶解， 一3(TC下冷凍結(jié)晶，過(guò)濾得到含量大于98%的長(zhǎng)春瑞濱1.91 g。
(5) 精制步驟
將步驟(4)中得到的產(chǎn)品，溶解于甲醇中，上SephadexLH-20柱， 甲醇水二3: 1 (V/V)洗脫，收集正組分，蒸干，將產(chǎn)品溶解在15ml 丙酮溶液中，加入含有酒石酸1.08 g的丙酮30 ml溶液(酒石酸的含量為 3倍長(zhǎng)春瑞濱蒸干物物質(zhì)的量)，攪拌反應(yīng)后過(guò)濾，濾液中加入80 ml乙醚，4"C下結(jié)晶，過(guò)濾得到長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽2.40 g (長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽 純度>99.5%， HPLC檢測(cè))。 — (6)副產(chǎn)物加工步驟
取0.12 g經(jīng)過(guò)活化過(guò)的Zn粉于10 ml的二氯甲垸中，降溫到一25°C， 加入0.58ml的三甲基氯硅烷構(gòu)成催化劑，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，緩慢加入含有1.50 g 6，-Nb-oxide-leurosine的二氯甲烷溶液，攪拌反應(yīng)30 min后過(guò)濾，殘余 物用二氯甲烷洗滌，合并有機(jī)相后，蒸千得到6'-Nb-oxide-脫水長(zhǎng)春堿。
其中，Zn粉、三甲基氯硅烷與6'-Nb-oxide-leurosine化學(xué)當(dāng)量比為1: 2.5: 1。
將得到的6'-Nb-oxide-脫水長(zhǎng)春堿溶解于80 ml的二氯甲烷中，氮?dú)?保護(hù)下，降溫到一6(TC，緩慢加入含有2.56ml(CF3CO)20的二氯甲烷40 ml，保持該反應(yīng)條件，攪拌反應(yīng)60 min后，在此溫度下緩慢加入含有0.21 gNaBH4的二氯甲垸溶液20ml，攪拌5min后，過(guò)濾，殘余物用二氯甲 垸洗滌，合并有機(jī)相后，蒸干得到VNR粗品0.70g，純度52%。所得產(chǎn) 物按照步驟(4)、 (5)的方法進(jìn)行分離及精制，得到長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽 0.34 g (長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽純度>99.5%， HPLC檢測(cè))。
其中(CF3CO)20、 NaBH4與6，-Nb-oxide-leurosine物質(zhì)的量之比為10: 3: 1。
步驟(1) ~ (5)的總收率為31.4%,加上步驟(6)的副產(chǎn)物加工 步驟，工藝的總收率達(dá)到35.85%。
實(shí)施例4
(1)脫水反應(yīng)步驟
在150 ml的反應(yīng)瓶中加入POCl3 12.0 ml，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，降溫到0 °C，攪拌下，滴加36 ml的N，N-二甲苯胺溶液后，加入含有硫酸長(zhǎng)春堿 10g (硫酸長(zhǎng)春堿65%， HPLC檢測(cè))的N,N-二甲苯胺溶液32ml，升溫到10°C，反應(yīng)8小時(shí)，得到含脫水長(zhǎng)春堿和6，-Nb-oxide- leurosine的溶液。
(2) 純化處理步驟
步驟(1)結(jié)束后，所得溶液加入400 ml的冰水(反應(yīng)液的5倍體積)， 氨水調(diào)節(jié)pH值為9.0，乙醚萃取三次后，合并有機(jī)相，有機(jī)相濃縮至干。 將得到的脫水產(chǎn)物在6(TC下溶解在甲醇水=3: 1 (V/V)的溶液中，0 'C冰箱冷凍析晶，過(guò)濾，得到脫水硫酸長(zhǎng)春堿5.66g (脫水硫酸長(zhǎng)春堿純 度74%， HPLC檢測(cè))。同時(shí)取濾液，蒸干后，殘余物用乙醇溶解，一30 °C下結(jié)晶，過(guò)濾得到6，-Nb-oxide- leurosine 1.54 g。
(3) 溴代縮環(huán)一體化反應(yīng)步驟
將1.13g溴代琥珀酰亞胺(其與脫水長(zhǎng)春堿的化學(xué)當(dāng)量比為1.2: 1) 溶解在30ml無(wú)水二氯甲烷溶液中，加入含有2.25ml三氟乙酸(其用量 為每升無(wú)水二氯甲烷中加入15 ml)的無(wú)水二氯甲垸溶液20ml，混合得 到溴代反應(yīng)劑。
將步驟(2)中得到的脫水硫酸長(zhǎng)春堿5.66g溶解在80ml的無(wú)水二 氯甲垸中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，降溫到一7(TC，滴加上述的溴代反應(yīng)液，保 持此溫度，加入含有二乙胺3.76 ml為溴代穩(wěn)定劑的無(wú)水二氯甲烷溶液20 ml (溴代穩(wěn)定劑與三氟乙酸的化學(xué)當(dāng)量比為1.2: 1)，攪拌反應(yīng)1.5小時(shí)。 反應(yīng)結(jié)束后，在該體系中立即加入含有四氟硼銀4.11 g (四氟硼銀與脫水 長(zhǎng)春堿的化學(xué)當(dāng)量比為4: 1)的四氫呋喃水二l: 1的四氫呋喃水溶液 600 ml (四氫呋喃水溶液與二氯甲垸溶劑體積比為4: 1 )，逐漸升溫到50 °C，避光，攪拌反應(yīng)3小時(shí)，反應(yīng)液過(guò)濾，蒸干四氫呋喃，10%碳酸鈉溶 液調(diào)節(jié)pH10.0，三氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)相，有機(jī)相蒸干得到長(zhǎng)春 瑞濱粗產(chǎn)物3.62g (長(zhǎng)春瑞濱純度74%， HPLC檢測(cè))。
(4) 分離步驟
將步驟(3)中得到的瑞濱粗產(chǎn)物3.62 g，上硅膠干柱分離，甲醇 正己烷=96: 4 (V/V)洗脫至柱底端時(shí)停止洗脫，取出Rf=0.4 0.8段硅膠，二氯甲烷振蕩浸提5次，離心取有機(jī)相，蒸干，得到硅膠分離產(chǎn)
物2.54 g (長(zhǎng)春瑞濱純度85%， HPLC檢測(cè))。
得到的硅膠分離產(chǎn)物，用甲醇溶解，上反相C18柱分離，甲醇水 =7: 3 (V/V)洗脫，得到正組分，蒸干后，6(TC下用100%甲醇溶解， 一3(TC下冷凍結(jié)晶，過(guò)濾得到含量大于98%的長(zhǎng)春瑞濱1.95 g。
(5) 精制步驟
將步驟(4)中《導(dǎo)到的產(chǎn)品，溶解于甲醇中，上SephadexLH-20柱， 甲醇水=4: 1 (V/V)洗脫，收集正組分，蒸干，將產(chǎn)品溶解在15 ml 丙酮溶液中，加入含有酒石酸1.10g的丙酮30ml溶液(酒石酸的含量為 3倍長(zhǎng)春瑞濱蒸干物物質(zhì)的量)，攪拌反應(yīng)后過(guò)濾，濾液中加入80 ml乙 醚，0匸下結(jié)晶，過(guò)濾得到長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽2.45 g (長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽 純度>99.5%， HPLC檢測(cè))。
(6) 副產(chǎn)物加工步驟
取0.37 g經(jīng)過(guò)活化過(guò)的Zn粉于10 ml的二氯甲烷中，降溫到一3(TC， 加入0.48 ml的三甲基氯硅烷構(gòu)成催化劑，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，緩慢加入含有1.54 g 6，-Nb-oxide-leurosine的二氯甲垸溶液，攪拌反應(yīng)40 min后過(guò)濾，殘余 物用二氯甲烷洗滌，合并有機(jī)相后，蒸干得到6，-Nb-oxide-脫水長(zhǎng)春堿。
其中，Zn粉、三甲基氯硅烷與6，-Nb-oxide-leurosine化學(xué)當(dāng)量比為3: 2: 1。
將得到的6'-Nb-oxide-脫水長(zhǎng)春堿溶解于80 ml的二氯甲烷中，氮?dú)?保護(hù)下，降溫到一3(TC，緩慢加入含有2.89ml(CF3CO)20的二氯甲垸40 ml;保持該反應(yīng)條件，攪拌反應(yīng)80 min后，在此溫度下緩慢加入含有0.14 gNaBH4的二氯甲垸溶液20ml，攪拌15min后，過(guò)濾，殘余物用二氯甲 烷洗滌，合并有機(jī)相后，蒸干得到VNR粗品0.72g，純度54%。所得產(chǎn) 物按照步驟(4)、 (5)的方法進(jìn)行分離及精制，得到長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽 0.36 g (長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽純度>99.5%， HPLC檢測(cè))。其中(CF3CO)20、 NaBH4與6，-Nb-oxide-leurosine物質(zhì)的量之比為11: 2: 1。
步驟(1) (5)的總收率為31.8%，加上步驟(6)的副產(chǎn)物加工 步驟，工藝的總收率達(dá)到36.45%。
實(shí)施例5
(1) 脫水反應(yīng)步驟同實(shí)施例1
(2) 純化處理步驟同實(shí)施例1
(3) 溴代縮環(huán)一體化反應(yīng)步驟 將1.81g溴代琥珀酰亞胺(其與脫水長(zhǎng)春堿的化學(xué)當(dāng)量比為1.2: 1)
溶解在50 ml無(wú)水二氯甲烷溶液中，加入含有6.0 ml三氟乙酸(其用量為 每升無(wú)水二氯甲烷中加入30ml)的無(wú)水二氯甲烷溶液30ml，混合得到 溴代反應(yīng)劑。
將步驟(2)中得到的脫水硫酸長(zhǎng)春堿8.96 g溶解在100 ml的無(wú)水二 氯甲烷中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，降溫到一5(TC，滴加上述的溴代反應(yīng)液，保 持此溫度，加入含有三乙胺8.2 ml和二甲基甲酰胺4.4 ml為溴代穩(wěn)定劑 的無(wú)水二氯甲垸溶液20 ml (溴代穩(wěn)定劑與三氟乙酸的化學(xué)當(dāng)量比為1.4: 1)，攪拌反應(yīng)1.0小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，在該體系中立即加入含有四氟硼銀 6.6g(四氟硼銀與脫水長(zhǎng)春堿的化學(xué)當(dāng)量比為4: l)的四氫呋喃水=1: 2的四氫呋喃水溶液800 ml(四氫呋喃水溶液與二氯甲垸溶劑體積比為4: 1)，逐漸升溫到3(TC，避光，攪拌反應(yīng)5小時(shí)，反應(yīng)液過(guò)濾，.蒸干四氫 呋喃，10Q/。碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH 10.0，三氯甲垸萃取三次，合并有機(jī)相， 有機(jī)相蒸干得到長(zhǎng)春瑞濱粗產(chǎn)物5.45 g(長(zhǎng)春瑞濱純度73%， HPLC檢測(cè))。
(4) 分離步驟
將步驟(3)中得到的瑞濱粗產(chǎn)物5.45 g，上硅膠干柱分離，甲醇-正己烷二97: 3 (V/V)洗脫至柱底端時(shí)停止洗脫，取出Rf=0.4 0.8段硅膠，二氯甲垸振蕩浸提3次，離心取有機(jī)相，蒸干，得到硅膠分離產(chǎn)
物3.46g (長(zhǎng)春瑞濱純度85%， HPLC檢測(cè))。
得到的硅膠分離產(chǎn)物，用甲醇溶解，上反相C18柱分離，甲醇水 =8: 1 (V/V)洗脫，得到正組分，蒸干后，5(TC下用100%甲醇溶解， —2(TC下冷凍結(jié)晶，過(guò)濾得到含量大于98%的長(zhǎng)春瑞濱2.84 g。
(5) 精制步驟
將步驟(4)中得到的產(chǎn)品，溶解于甲醇中，上SephadexLH-20柱， 甲醇水=5: 1 (V/V)洗脫，收集正組分，蒸干，將產(chǎn)品溶解在20ml 丙酮溶液中，加入含有酒石酸1.64 g的丙酮50 ml溶液(酒石酸的含量為 3倍長(zhǎng)春瑞濱蒸干物物質(zhì)的量)，攪拌反應(yīng)后過(guò)濾，濾液中加入100ml乙 醚，6。C下結(jié)晶，過(guò)濾得到長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽3.62g (長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽 純度>99.5%， HPLC檢測(cè))。
(6) 副產(chǎn)物加工步驟同實(shí)施例l。
步驟(1) ~ (5)的總收率為29.36%，加上步驟(6)的副產(chǎn)物加工 步驟，工藝的總收率達(dá)到34.55%。
實(shí)施例6
(1) 脫水反應(yīng)步驟
在150 ml的反應(yīng)瓶中加入C202C12與POCl3各6.0 ml，在氮?dú)獗Ｗo(hù) 下，降溫到O'C，攪拌下，滴加36ml體積比為l: l的吡啶與二甲基甲 酰胺溶液后，加入含有硫酸長(zhǎng)春堿10g (硫酸長(zhǎng)春堿65%， HPLC檢測(cè)) 的體積比為l: 1的吡啶與二甲基甲酰胺溶液32ml，升溫到20'C，反應(yīng) 12小時(shí)，得到含脫水長(zhǎng)春堿和6'-Nb-oxide- leurosine的溶液。
(2) 純化處理步驟
步驟(1)結(jié)束后，所得溶液加入400 ml的冰水(反應(yīng)液的5倍體積)， 氨水調(diào)節(jié)pH值為9.0，用體積比為1: 1的二氯甲烷和乙醚的混合溶劑 萃取三次后，合并有機(jī)相，有機(jī)相濃縮至干。將得到的脫水產(chǎn)物在60°C下溶解在甲醇水=5: 1 (V/V)的溶液中，4t冰箱冷凍析晶，過(guò)濾，
得到脫水硫酸長(zhǎng)春堿5.02 g (脫水硫酸長(zhǎng)春堿純度74%， HPLC檢測(cè))。 同時(shí)取濾液，蒸干后，殘余物用乙醇溶解，一3(TC下結(jié)晶，過(guò)濾得到 6，-Nb-oxide- leurosine 1.29 g。
(3) 溴代縮環(huán)一體化反應(yīng)步驟
將1.00g溴代琥珀酰亞胺(其與脫水長(zhǎng)春堿的化學(xué)當(dāng)量比為1.2: 1) 溶解在30ml無(wú)水二氯甲烷溶液中，加入含有2.25ml三氟乙酸(其用量 為每升無(wú)水二氯甲垸中加入15 ml)的無(wú)水二氯甲烷溶液20 ml，混合得 到溴代反應(yīng)劑。
將步驟(2)中得到的脫水硫酸長(zhǎng)春堿5.02g溶解在80ml的無(wú)水二 氯甲烷中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，降溫到一7(TC，滴加上述的溴代反應(yīng)液，保 持此溫度，加入含有二乙胺1.88 ml和乙二胺1.22 ml為溴代穩(wěn)定劑的無(wú) 水二氯甲烷溶液20ml (溴代穩(wěn)定劑與三氟乙酸的化學(xué)當(dāng)量比為1.2: 1)， 攪拌反應(yīng)1.5小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，在該體系中立即加入含有四氟硼銀3.65
g (四氟硼銀與脫水長(zhǎng)春堿的化學(xué)當(dāng)量比為4: 1)的四氫呋喃水=1: 1
的四氫呋喃水溶液600 ml (四氫呋喃水溶液與二氯甲垸溶劑體積比為4: 1)，逐漸升溫到5(TC，避光，攪拌反應(yīng)5小時(shí)，反應(yīng)液過(guò)濾，蒸干四氫 呋喃，10。/。碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH10.0，三氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)相， 有機(jī)相蒸干得到長(zhǎng)春瑞濱粗產(chǎn)物3.20 g(長(zhǎng)春瑞濱純度74%， HPLC檢測(cè))。
(4) 分離步驟
將步驟(3)中得到的瑞濱粗產(chǎn)物3.20 g,上硅膠干柱分離，甲醇 正己烷二94: 6 (V/V)洗脫至柱底端時(shí)停止洗脫，取出Rf=0.4 0.8段 硅膠，二氯甲烷振蕩浸提5次，離心取有機(jī)相，蒸干，得到硅膠分離產(chǎn) 物2.26 g (長(zhǎng)春瑞濱純度85%， HPLC檢測(cè))。
得到的硅膠分離產(chǎn)物，用甲醇溶解，上反相聚苯乙烯柱分離，甲醇: 水二9: 1 (V/V)洗脫，得到正組分，蒸干后，6(TC下用100%甲醇溶解，一30。C下冷凍結(jié)晶，過(guò)濾得到含量大于98%的長(zhǎng)春瑞濱1.74 g。
(5) 精制步驟
將步驟(4)中得到的產(chǎn)品，溶解于甲醇中，上SephadexLH-20柱， 甲醇水=6: 1 (V/V)洗脫，收集正組分，蒸千，將產(chǎn)品溶解在15 ml 丙酮溶液中，加入含有酒石酸1.00g的丙酮30ml溶液(酒石酸的含量為 3倍長(zhǎng)春瑞濱蒸干物物質(zhì)的量)，攪拌反應(yīng)后過(guò)濾，濾液中加入80 ml乙 醚，4"C下結(jié)晶，過(guò)濾得到長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽2.18 g (長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽 純度>99.5%, HPLC檢測(cè))。
(6) 副產(chǎn)物加工步驟
取0.31 g經(jīng)過(guò)活化過(guò)的Zn粉于10 ml的二氯甲烷中，降溫到一30°C， 加入0.40 ml的三甲基氯硅烷構(gòu)成催化劑，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，緩慢加入含有1.29 g 6，-Nb-oxide-leurosine的二氯甲烷溶液，攪拌反應(yīng)40 min后過(guò)濾，殘余 物用二氯甲烷洗滌，合并有機(jī)相后，蒸干得到6'-Nb-oxide-脫水長(zhǎng)春堿。
其中，Zn粉、三甲基氯硅垸與6'-Nb-oxide-leurosine化學(xué)當(dāng)量比為3: 2: 1。
將得到的6，-Nb-oxide-脫水長(zhǎng)春堿溶解于80 ml的二氯甲烷中，氮?dú)?保護(hù)下，降溫到一3(TC，緩慢加入含有2.42 ml (CF3CO)20的二氯甲烷40 ml，保持該反應(yīng)條件，攪拌反應(yīng)80min后，在此溫度下緩慢加入含有0.12 gNaBH4的二氯甲烷溶液20ml，攪拌15min后，過(guò)濾，殘余物用二氯甲 垸洗滌，合并有機(jī)相后，蒸干得到VNR粗品0.61g，純度54%。所得產(chǎn) 物按照步驟(4)、 (5)的方法進(jìn)行分離及精制，得到長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽 0.31 g (長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽純度>99.5%， HPLC檢測(cè))。
其中(CF3CO)20、 NaBH4與6，-Nb-oxide-leurosine物質(zhì)的量之比為11: 2: 1。
步驟(1) ~ (5)的總收率為28.3%，加上步驟(6)的副產(chǎn)物加工 步驟，工藝的總收率達(dá)到32.3%。
權(quán)利要求
1. 一種用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法，包括(1)脫水反應(yīng)步驟；以硫酸長(zhǎng)春堿為原料，以強(qiáng)路易斯酸為脫水劑，在非離子弱堿性溶劑中，進(jìn)行脫水反應(yīng)得到含脫水長(zhǎng)春堿和6’-Nb-oxide-leurosine的溶液；(2)純化處理步驟；將含脫水長(zhǎng)春堿和6’-Nb-oxide-leurosine的溶液進(jìn)行純化處理，得到脫水長(zhǎng)春堿和副產(chǎn)物6’-Nb-oxide-leurosine；(3)溴代縮環(huán)一體化反應(yīng)步驟；對(duì)脫水長(zhǎng)春堿加入溴代穩(wěn)定劑，在溴代反應(yīng)劑的作用下進(jìn)行溴代反應(yīng)合成中間產(chǎn)物溴代脫水長(zhǎng)春堿，反應(yīng)結(jié)束后，再加入縮環(huán)試劑，進(jìn)行縮環(huán)反應(yīng)得到長(zhǎng)春瑞濱粗產(chǎn)物；(4)分離步驟；對(duì)長(zhǎng)春瑞濱粗產(chǎn)物采用硅膠干柱分離后，再進(jìn)行反相柱分離，得到含量大于98％的長(zhǎng)春瑞濱；(5)精制步驟；對(duì)含量大于98％的長(zhǎng)春瑞濱采用Sephadex LH-20柱精制，與酒石酸進(jìn)行成鹽反應(yīng)，得到99.5％的長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽；(6)副產(chǎn)物加工步驟；將所述步驟(2)得到的副產(chǎn)物6’-Nb-oxide-leurosine，在Zn粉及三甲基氯硅烷構(gòu)成的催化劑作用下，反應(yīng)得到6’-Nb-oxide-leurosine的脫水產(chǎn)物，然后在(CF3CO)2O與NaBH4的共同作用下得到長(zhǎng)春瑞濱粗產(chǎn)物。
2.如權(quán)利要求1所述的用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方 法，其特征在于所述脫水反應(yīng)步驟中，所述強(qiáng)路易斯酸為BF3， SOCl2，POCl3， C202Cl2其中的一種或其中兩種的混合物；所述非離子弱堿性溶劑為吡啶、二甲基甲酰胺、三乙醇胺、N,N-二甲苯胺其中的一種或其中 兩種的混合物；所述脫水反應(yīng)溫度為4 3(TC，反應(yīng)時(shí)間6 12小時(shí)。
3. 如權(quán)利要求1所述的用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法， 其特征在于:所述純化處理步驟的過(guò)程為將含脫水長(zhǎng)春堿和6，-Nb-OXide-leurosine的溶液加入3 5倍體積的冰水，調(diào)節(jié)pH值為8.5 11，用有機(jī) 溶劑萃取后再進(jìn)行結(jié)晶；其中萃取用有機(jī)溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、 乙醚及正己烷中的一種或其中兩種的混合物；產(chǎn)物經(jīng)過(guò)萃取、蒸干后， 將蒸干物在40 6(TC下溶解于由甲醇和水組成的溶劑，所述溶劑體積比為 甲醇水=5: 1 2: 1，在0 6'C結(jié)晶，過(guò)濾所得固體物為脫水長(zhǎng)春堿；濾液蒸干后溶解于結(jié)晶溶劑，在一10 一3(TC冷凍結(jié)晶，過(guò)濾所得固體 物為副產(chǎn)物6'-Nb畫oxide畫leurosine。
4. 如權(quán)利要求3所述的用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法， 其特征在于所述純化處理步驟中，所述結(jié)晶溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、 乙腈中的一種。
5. 如權(quán)利要求1所述的用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法，其特征在于所述溴代縮環(huán)一體化反應(yīng)步驟中，所述溴代反應(yīng)在無(wú)水二氯甲烷溶劑中進(jìn)行，所述溴代反應(yīng)劑為溴代琥珀酰亞胺與三氟乙酸的混合物，溴代琥珀酰亞胺與脫水長(zhǎng)春堿的化學(xué)當(dāng)量比為1.2~1: 1，三氟乙 酸的用量為每升無(wú)水二氯甲烷中加入10 30ml;所述溴代穩(wěn)定劑為吡啶、乙二胺、二乙胺、三乙胺、二甲基甲酰胺、三乙醇胺中的一種或其中兩種的混合物；溴代穩(wěn)定劑與三氟乙酸的化學(xué)當(dāng)量比為0.6~1.4: 1;溴 代反應(yīng)溫度為一50 一80°C，反應(yīng)0.5 1.5小時(shí)；溴代反應(yīng)結(jié)束后，加 入含有四氟硼銀的四氫呋喃水溶液進(jìn)行縮環(huán)反應(yīng)，四氫呋喃水溶液由體 積比l: 2 3: l的四氫呋喃和水組成，四氫呋喃水溶液與二氯甲烷溶劑 體積比為2: 1 4: 1，四氟硼銀與脫水長(zhǎng)春堿的化學(xué)當(dāng)量比為1 4: 1，縮環(huán)反應(yīng)在30 6(TC下進(jìn)行，反應(yīng)2 5小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束，蒸干四氫呋喃后，調(diào)節(jié)溶液pH值為8.5 10.0，用三氯甲烷萃取得到長(zhǎng)春瑞濱粗產(chǎn)物。
6. 如權(quán)利要求1所述的用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法， 其特征在于所述分離步驟中，所述硅膠干柱分離，洗脫條件甲醇和正 己烷體積比為90: 10 98: 2，溶劑到達(dá)硅膠干柱底端時(shí)停止洗脫，取出 比移值R產(chǎn)0.4 0.8的硅膠段，用二氯甲烷洗滌3 5次，蒸干有機(jī)相得 到硅膠分離產(chǎn)物；所述反相柱分離采用反相d8填料或反相聚苯乙烯填料 分離，洗脫條件甲醇和水體積比為6: 4 9: 1，收集正組分，蒸干所得 產(chǎn)物于50 60°0下溶解于70% 100%甲醇中，在一10 一30。C結(jié)晶，過(guò) 濾所得固體物為含量大于98%的長(zhǎng)春瑞濱。
7. 如權(quán)利要求1所述的用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法， 其特征在于所述精制步驟中，將含量大于98%的長(zhǎng)春瑞濱，利用 SephadexLH-20柱精制，洗脫條件甲醇和水體積比為6: 1 3: 1;收集 正組分蒸干，將得到的蒸干物溶解于丙酮中，加入含有酒石酸的丙酮溶 液，其中酒石酸的含量至少大于2倍長(zhǎng)春瑞濱蒸干物物質(zhì)的量，攪拌進(jìn) 行成鹽反應(yīng)，反應(yīng)后過(guò)濾，濾液中加入乙醚，0 6'C下結(jié)晶，過(guò)濾得到 晶體為純度大于99.5%的長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽。
8. 如權(quán)利要求1所述的用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法， 其特征在于，所述副產(chǎn)物加工步驟過(guò)程為將6，-Nb-oxide-leurosine溶解 于二氯甲垸，制備6'-Nb-oxide-leurosine溶液；將經(jīng)過(guò)活化的Zn粉加入二 氯甲烷中，降溫到一20 一3(TC，再加入三甲基氯硅烷構(gòu)成催化劑；在 氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向催化劑中滴加6，-Nb-oxide-leurosine溶液，催化劑中Zn 粉、三甲基氯硅烷與6，-Nb-oxide-leurosine化學(xué)當(dāng)量比為1 3: 2~3: 1; 攪拌反應(yīng)20 40min后過(guò)濾，取有機(jī)相蒸干得到6，-Nb-oxide-脫水長(zhǎng)春堿； 將6'-Nb-oxide-脫水長(zhǎng)春堿溶解于二氯甲烷中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，降溫到_30 —60°C，滴加含有(CF3CO)20的二氯甲垸溶液，攪拌反應(yīng)40 80 min后， 滴加含有NaBH4的二氯甲烷溶液，攪拌5 20 min后過(guò)濾，蒸干有機(jī)相 得到長(zhǎng)春瑞濱粗產(chǎn)物；(CF3CO)20、 NaBH4與6'-Nb-oxide-leurosine物質(zhì) 的量之比為9 11: 2 4: 1。
全文摘要
用硫酸長(zhǎng)春堿合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽的方法，屬于化學(xué)物質(zhì)或藥品的制造方法，解決現(xiàn)有合成長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽方法副反應(yīng)多、所得產(chǎn)物純度不高以及效率低下的問(wèn)題。本發(fā)明包括脫水反應(yīng)步驟、純化處理步驟、溴代縮環(huán)一體化反應(yīng)步驟、分離步驟、精制步驟和副產(chǎn)物加工步驟。本發(fā)明純化處理步驟應(yīng)用硅膠干柱與反相柱結(jié)合的分離技術(shù)，然后采用高收率的Sephadex LH-20柱精制得到純度大于99.5％的長(zhǎng)春瑞濱酒石酸鹽，大大提高了分離的效率，結(jié)合副產(chǎn)物加工步驟，將工藝的總收率提高到36％。
文檔編號(hào)C07D519/00GK101284842SQ20081004778
公開(kāi)日2008年10月15日 申請(qǐng)日期2008年5月19日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月19日
發(fā)明者余龍江, 吳澤強(qiáng), 碩 李, 茵 熊, 趙春芳 申請(qǐng)人:華中科技大學(xué)