專利名稱：(z)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羥基苯基)丙烯酸及其合成方法和用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬藥物合成領域，具體涉及(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羥基苯基)丙烯酸 及其合成方法和在藥學上的應用。
背景技術：
丹參素(化學名"-(+)-(3-3，4-二羥基苯基乳酸)是中藥丹參中的一種主要有 效成分，已有大量藥理實驗證明丹參素有抑制血小板合成、聚集，抑制TXA2等 收縮血管物質的釋放，提高抗氧化酶活性，減少氧自由基的產生，增加冠脈血流 量等藥理作用。目前丹參素的來源主要是從中藥丹參中提取，以丹參素為主要成 分的多種中藥復合制劑如復方丹參注射液、復方丹參滴丸等已廣泛應用于臨床。
關于消旋丹參素的化學合成方法已有一些報道，例如薛芬等(薜芬，戴華娟，
丁麗蓉，J:塵第一度學腐學叛，1983， 70(2人133-136.)。由于丹參素結構中有兩個
極易被氧化的酚羥基，不宜利用直接拆分的方法對丹參素外消旋體進行手性拆分
來獲得天然的右旋丹參素。尋找新的丹參素的衍生物及其合成方法成為本領域研
究人員的關注熱點。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供新結構的化合物(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羥基苯基)丙 烯酸。
本發(fā)明的另一目的是提供(2)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羥基苯基)丙烯酸的合成 方法。
本發(fā)明提供的化合物(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羥基苯基)丙烯酸具有式(I ) 的結構<formula>formula see original document page 3</formula>
C I )
本發(fā)明還提供了上述化合物的合成方法。本發(fā)明按下述反應流程制備所述的化合物:
H。、、CHO+ ，訓
一+ Ahcoch3
步驟2
步驟1 H3C0C0^^^CHr:(p—C00H -I T "HC0CH3
上述步驟1: 3，4-二羥基苯甲醛、無水醋酐、無水醋酸鈉、iV-乙酰甘氨酸一 起加入反應瓶中，加熱至100°C反應2小時，倒入冷水中(Harington， C. R.; Randall, S.S.歷oc;zem.J 1931,25， 1028-1031.)，或，3，4-二羥基苯甲醛與無水醋酐、無水 醋酸鈉先在室溫下反應3小時，向反應液中加入W-乙酰甘氨酸，加熱至100°C 反應2小時，再倒入冷水中；
步驟2:步驟1所得產物在9。/。鹽酸中60。C反應3小時至24小時，反應溫 度為60。C 90。C，得產物(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羥基苯基)丙烯酸。
本發(fā)明的進一步目的是提供合成的(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羥基苯基)丙烯 酸對缺血缺氧心肌的保護作用。
按常規(guī)方法通過體外培養(yǎng)原代心肌細胞，建立心肌細胞缺氧模型，實驗分為 正常對照組不給于藥物干預，不缺氧缺糖；模型組不給于藥物干預，缺氧缺 糖5h;用藥組分別給予藥物10_8mol/L、 10_7mol/L、 10—6mol/L，缺氧缺糖， 檢測(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4二羥基苯基)丙烯酸對缺氧心肌細胞的保護作用；
通過急性和慢性大鼠心肌梗死模型，檢測(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羥基苯基) 丙烯酸對缺氧心肌的保護作用，
體內和體外的藥理實驗結果表明，本發(fā)明合成的化合物對缺血心肌具有保護 作用，可降低心肌細胞LDH漏出率，升高細胞內SOD活性，降低細胞內脂質過 氧化產物MDA的產生，并能夠影響bax、 bcl-2基因及蛋白的表達，具有抗凋亡 作用。本發(fā)明化合物可制備治療缺血性心臟病的藥物。
圖1是(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羥基苯基)丙烯酸的單晶結構圖。
4圖2是丹參素衍生物對缺氧心肌細胞乳酸脫氫酶(LDH)漏出率的影響。 圖3是丹參素衍生物對缺氧心肌細胞內超氧化物岐化酶(SOD)活性的影 響。
圖4是丹參素衍生物對缺氧心肌細胞內脂質過氧化產物丙二醛(MDA)含 量的影響。
圖5是丹參素衍生物對缺氧心肌細胞內抗凋亡蛋白bcl-2 mRNA表達的影 響。
圖6是丹參素衍生物對缺氧心肌細胞內促抗凋亡蛋白bax mRNA表達的影 響。
圖7是丹參素衍生物對缺氧心肌細胞內凋亡蛋白caspase-3 mRNA表達的影 響。
具體實施例方式
本發(fā)明通過下列各實施例更具體描述了本發(fā)明的化合物及其合成方法。
實施例1按下述反應流程，制備(2)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羥基苯基)丙烯酸
<formula>formula see original document page 5</formula>
在250 mL茄形瓶中加入3，4-二羥基苯甲醛10.8 g， 0.078 mol與無水醋酐30 mL， 32.4 g, 0.319 mol無水醋酸鈉6.4 g， 0.078 mol，室溫下反應3小時，以石油醚 /乙酸乙酉旨(P7F = 2:1)為展開劑，TLC顯示原料點(R^ 0.3)消失，出現新點(Rf-0.4)。繼續(xù)向反應液中加入W-乙酰甘氨酸(9.2 g， 0.0789mol)，加熱至100°C反應2 小時，TLC顯示產物點的Rf值仍為0.4，停止反應，將反應液趁熱倒入400 mL 冷水中，過夜，有黃色固體析出，將固體過濾后溶于乙酸乙酯重結晶，得到中間 體(l)黃色固體(Z)-2-乙酰氨基-3-(3,4-二乙酰氧基苯基)丙烯酸12.08 g，收率48%，mp 183-185 。C(文獻值186-187 °C) (Wong, H.1992, 793-797). ^ NMR (400 MHz CDC13) 3 2.08 (s, 3H， 2-NHCOCH3), 2.28 (2s, 6H, 3，-CH3COO， 4，-CH3COO)， 7.06 (s, 1H, 3-H)， 7.14 (m, 3H， 2，-H， 5，-H， 6，-H)， 8.01 (s， 1H， 2-NHCOCH3);
在250mL茄形瓶中加入中間體(l)(2g，0.012mo1)， 9。/。鹽酸50mL，加熱至 60°C，原料未全溶，反應3小時，反應液中有粉紅色固體析出，以乙酸乙酯/乙 酸()W)-8:1為展開劑，TLC顯示紫外燈下原料點(R產0,6灘失，出現新點(R產 0.5),浸磷鉬酸后新點能烤出藍色，原料點不能烤出藍色，停止反應，冷卻至室 溫，過濾得紅色固體(2)1.278，收率86%。紅色固體為本化合物，在水中反復重 結晶得無色片狀晶體。X線單晶衍射確證結構，，mp 229-230 °C. & NMR (400 MHz， CD3OD) <5 2.13(s, 3H， 2-OCOCH3)， 6.77 (d， 1H, /= 8.21 Hz， 5，鄰，6.96 (d, 1H, J= 8.41 Hz， 2'-H), 7.16 (d, 1H， ■/= 1,95 Hz， 6'-H)， 7.38 (s, 1H， 3-H). 13C而R (100 MHz, CD3OD) 5 22.58， 116.28， 117.55， 123.50， 124.89， 126.60， 137.09， 146.35, 148.81,168.68,173.46. MS (ESI) m/z: 238 (M,.
實施例2 (Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羥基苯基)丙烯酸單晶的培養(yǎng)及晶體結構 的測定
取所制得的化合物(2)，溶于水，室溫下靜置數天，析出無色片狀晶體，選 取大小為0.421 mm x 0.347 mm x 0.250 mm的化合物單晶，在Bruker Smart CCD 單晶衍射儀上，釆用石墨單色化的Mo尺a (義=0.071073 nm)輻射源，在20°C以 化2P掃描方式收集數據，確證其分子結構(圖l)。
分子式CuH10O6.分子量238.19.晶體屬單斜晶系.空間群為戶2(l)/c.晶 胞參數a = 1.05986 (13) nm， 6 = 0.93423 (11) nm,c= 1.19601 (15) nm. 7= 1.0751 (2)nm3.數據收集的0范圍從2.12到26.50。.Z-4.Dc^l.472g/cm3.F(000)-496. 優(yōu)化方法foil-matrix least-squares on F2. Goodness-of陽fit on F2: 1.075.最終偏離因 子R為[/> 2o"C0]: 0.0610， 0.1776. R(all data): 0.0700， 0.1858. Largest diff. peak and hole: 0.695 and -524 e/nm3。
實施例3 (Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羥基苯基)丙烯酸對缺氧心肌細胞的保護
實驗
按常規(guī)方法，通過原代培養(yǎng)新生大鼠心肌細胞，建立心肌細胞缺氧模型。實驗分為正常對照組不給于藥物干預，不缺氧缺糖；模型組不給于藥物干預， 缺氧缺糖5h:用藥組分別給予藥物10—8mol/L、 10—7mol/L、 l(T6mol/L,缺氧 缺糖。結果顯示，本發(fā)明中的化合物可降低缺氧心肌細胞LDH漏出率，正常對 照組細胞內LDH為100%,各用藥組與缺氧組細胞內LDH與正常對照組的差值 為LDH漏出率。與缺氧組比較，本化合物能降低細胞內LDH漏出率(圖2); 可提高細胞內超氧化物岐化酶(SOD)活性，與缺氧組比較，化合物2能升高細 胞內SOD活性(圖3);可抑制細胞內脂質過氧化產物(MDA)的產生，與缺氧 組比較，本化合物能降低細胞內MDA的含量(圖4);可促進抗凋亡基因bcl-2 的表達。與缺氧組比較，本化合物可升高細胞內抗調亡基因bcl-2 mRNA的表達 (圖5);可抑制促凋亡基因bax的表達，與缺氧組比較，本化合物可降低細胞 內促調亡基因baxmRNA的表達(圖6);可抑制凋亡基因caspase-3的表達，與 缺氧組比較，本化合物可降低細胞內調亡基因caspase-3 mRNA的表達(圖7)。
實施例4 (Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羥基苯基)丙烯酸對急性心肌梗死和慢性心衰 的保護實驗
成年健康SD大鼠，預給藥1周，麻醉后開胸，結扎左冠狀動脈前降支，制 備心肌梗死模型，術后繼續(xù)給藥兩天，處死，取血漿及心肌組織，檢測血漿中心 激酶如乳酸脫氫酶、肌酸激酶的活性，心肌組織勻漿，分別檢測梗死面積、炎性 因子、抗氧化、抗凋亡等蛋白的基因及蛋白表達水平；
成年健康SD大鼠，制備心肌梗死模型，術后兩天存活的大鼠，隨機分組， 連續(xù)給藥6周，處死，取血漿及心肌組織，檢測血漿中心激酶如乳酸脫氫酶、肌 酸激酶的活性，心肌組織勻漿，分別檢測炎性因子、抗氧化、抗凋亡等蛋白的基 因及蛋白表達水平；
結果表明，(Z)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羥基苯基)丙烯酸能夠減小梗死面積，降 低血清中心激酶活性，并具有抗炎、抗氧化、抗凋亡等作用，證實本發(fā)明化合物 對急性心肌梗死和慢性心衰有保護作用。
權利要求
1、式(I)結構的化合物，
2、 權利要求1所述的式(I )結構的化合物的合成方法，其特征是，從3,4-二 羥基苯甲醛出發(fā)，與無水醋酐、無水醋酸鈉和JV-乙酰甘氨酸加入反應瓶中， 加熱至100。C反應2小時，倒入冷水中，或3,4-二羥基苯甲醛與無水醋酐、無 水醋酸鈉先在室溫下反應3小時，向反應液中加入iV-乙酰甘氨酸，加熱至100eC 反應2小時，倒入冷水中，然后在9%鹽酸中60°(2水解3小時至24小時，反 應溫度為60°C至90°C，得產物。
3、 根據權利要求2的方法，其特征是所述的合成方法按下述反應流程，<image>image see original document page 2</image>
4、式(I )結構的化合物在制備治療缺血性心臟病藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬藥物合成領域，具體涉及式(I)結構的化合物(Z)-2-乙酰氧基-3-(3，4-二羥基苯基)丙烯酸及其合成方法和在藥學上的應用。本發(fā)明從3，4-二羥基苯甲醛出發(fā)，與無水醋酐、無水醋酸鈉和N-乙酰甘氨酸加熱反應后，在9％鹽酸中水解，反應溫度為60℃至90℃，得產物。本發(fā)明化合物通過體內體外的藥理實驗，結果表明，該類化合物均具有較好的保護缺氧心肌細胞的作用，可制備治療缺血性心臟病的藥物。
文檔編號C07C69/00GK101607897SQ20081003916
公開日2009年12月23日 申請日期2008年6月18日 優(yōu)先權日2008年6月18日
發(fā)明者朱依諄, 洋 王, 董村南 申請人:復旦大學