專利名稱：白花蛇舌草懸浮細(xì)胞培養(yǎng)制備半乳糖醇的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于半乳糖醇的制造方法，更具體地說，是關(guān)于從白花蛇舌草懸浮細(xì)胞系培養(yǎng) 液中制備半乳糖醇的方法。
背景技術(shù)：
半乳糖醇屬于生化試劑，主要用于細(xì)菌鑒別,培養(yǎng)基配方方面，是微生物研究防病治病必不 可少的重要糖類，半乳糖醇注射液是治療類風(fēng)濕必不可少的重要藥物，將半乳糖醇與溴化氫作 用，可以制造1，6-二溴-1,6-二脫氧半乳糖醇，它是一種極好的細(xì)胞抑制劑,治療脊髓白血病時, 優(yōu)于傳統(tǒng)的1,6-二溴-1，6-二脫氧甘露糖醇,而且有效劑量明顯少，它還可以用于藥品賦形劑,明 顯提高藥品的外觀片與穩(wěn)定性。
目前，半乳糖醇主要由兩種方法制備， 一種是由半乳糖加氫制得，由于自然界中半乳糖 量比較少，而且總是與其它糖混合在一起，半乳糖與其他糖類的分離與提取難度較大，半乳 糖醇的生產(chǎn)與制備難度比較大；另一種是從部分中藥中提??；最近禹城福田藥業(yè)從木糖醇母 液中模擬流動床分離得到半乳糖醇無色單斜柱狀晶體。無論哪種方法，半乳糖醇的純化均比 較困難，收率低，造成市場價格較高，尚不能工業(yè)化生產(chǎn)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是從白花蛇舌草懸浮細(xì)胞系培養(yǎng)液中制備得到半乳糖醇，具有分離簡單，純度高 的優(yōu)點(diǎn)，可以顯著克服現(xiàn)有半乳糖醇制備方法的缺點(diǎn)。白花蛇舌草懸浮細(xì)胞系已公開發(fā)表在 《海峽藥學(xué)》2006年第18巻6期132-134頁論文《白花蛇舌草細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的建立與條件優(yōu) 化》中。
本發(fā)明通過下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)將白花蛇舌草懸浮細(xì)胞系培養(yǎng)液4000rpm離心20分 鐘，取沉淀，用原培養(yǎng)液體積1/3的水10 20分鐘超聲溶解，濃縮至2 3ml濃縮液/300ml， 用3 5倍濃縮液體積的丙酮沉淀離心,沉淀加1 3倍濃縮液體積的氯仿溶解,-4'C冷藏放置 過夜，得到的白色細(xì)小碎結(jié)晶即為半乳糖醇。
所述水提液最好經(jīng)超聲10 20分鐘，丙酮沉淀體積最好為3 5倍濃縮液體積，氯仿體 積l倍濃縮液體積即可，結(jié)晶溫度為-4'C。
下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明專利進(jìn)一步說明。 圖l是從白花蛇舌草懸浮細(xì)胞系培養(yǎng)液中制備半乳糖醇流程圖。 圖2是半乳糖醇結(jié)構(gòu)圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的描述
將白花蛇舌草懸浮細(xì)胞培養(yǎng)液4000rpm離心20分鐘，取沉淀，用1/3倍培養(yǎng)液體積的水 10 20分鐘超聲溶解，濃縮至2 3ml濃縮液/300ml培養(yǎng)液，用3 5倍濃縮液體積的丙酮沉 淀，離心后取沉淀加1 3倍濃縮液體積的氯仿溶解,-4'C冷藏放置過夜，得到的白色細(xì)小碎 結(jié)晶即為半乳糖醇。
上述工藝條件不需再進(jìn)行進(jìn)一步純化，所得半乳糖醇為色譜純，如想進(jìn)一步精制，可用 氯仿洗。
下面是制備半乳糖醇的實(shí)施例。通過實(shí)施例可以了解不同制備工藝條件對半乳糖醇純度 及含量的影響。
實(shí)施例l:
取白花蛇舌草懸浮細(xì)胞培養(yǎng)液4000rpm離心20分鐘，取沉淀，用1/3倍培養(yǎng)液體積的水 IO分鐘超聲溶解，濃縮至2 3ml濃縮液/300ml培養(yǎng)液，用3倍濃縮液體積的丙酮沉淀，離 心后取沉淀加1倍濃縮液體積的氯仿溶解,_4°0冷藏放置過夜，半乳糖醉得率為0. 2g/L培養(yǎng) 液左右。
實(shí)施例2:
取白花蛇舌草懸浮細(xì)胞培養(yǎng)液4000rpm離心20分鐘，取沉淀,用1/3倍培養(yǎng)液體積的水 20分鐘超聲溶解，濃縮至2 3ml濃縮液/300ml培養(yǎng)液，用4倍濃縮液體積的丙酮沉淀，離 心后取沉淀加2倍濃縮液體積的氯仿溶解,-4°0冷藏放置過夜，半乳糖醇得率為0. 3g/L培養(yǎng) 液左右。
實(shí)施例3:取白花蛇舌草懸浮細(xì)胞培養(yǎng)液4000rpm離心20分鐘，取沉淀,用1/3倍培養(yǎng)液體積的水 20分鐘超聲溶解，濃縮至2 3ml濃縮液/300ml培養(yǎng)液，用5倍濃縮液體積的丙酮沉淀，離
心后取沉淀加3倍濃縮液體積的氯仿溶解,-4'C冷藏放置過夜，半乳糖醇得率為0. 5g/L培養(yǎng)
液左右。
權(quán)利要求
1.一種半乳糖醇的制備方法，其特征是以白花蛇舌草懸浮細(xì)胞系為原料，經(jīng)如下加工工藝過程制備而成的1)水提粗品將白花蛇舌草懸浮細(xì)胞系細(xì)胞培養(yǎng)液離心，得沉淀物，用原培養(yǎng)液體積1/3的水超聲溶解，然后濃縮至2～3ml濃縮液/300ml培養(yǎng)液；2)精制將濃縮液用丙酮沉淀后離心，取沉淀用氯仿溶解，冷藏過夜即得結(jié)晶。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述制造半乳糖醇的方法，其特征在于，水提液濃縮至2 3ml濃縮液/300ml 培養(yǎng)液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求l所述制造半乳糖醇的方法，其特征在于，用3 5倍體積丙酮沉淀。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l所述制造半乳糖醇的方法，其特征在于在氯仿中得白色細(xì)小碎結(jié)晶。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從白花蛇舌草懸浮細(xì)胞系培養(yǎng)液中制備半乳糖醇的方法，利用本方法可以顯著提高半乳糖醇純度，且具有分離步驟簡單，原料可再生的優(yōu)點(diǎn)，可以顯著克服現(xiàn)有半乳糖醇制備方法的缺點(diǎn)。白花蛇舌草懸浮細(xì)胞系已公開發(fā)表在《海峽藥學(xué)》2006年第18卷6期132-134頁論文《白花蛇舌草細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的建立與條件優(yōu)化》中。本發(fā)明通過下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)將白花蛇舌草懸浮細(xì)胞系培養(yǎng)液4000rpm離心20分鐘，取沉淀，用原培養(yǎng)液體積1/3的水10～20分鐘MHz超聲溶解，濃縮至2～3ml濃縮液/300ml，用3～5倍濃縮液體積的丙酮沉淀離心，沉淀加1～3倍濃縮液體積的氯仿溶解，-4℃冷藏放置過夜，得到的白色細(xì)小碎結(jié)晶即為半乳糖醇。
文檔編號C07C31/26GK101289370SQ20081002550
公開日2008年10月22日 申請日期2008年5月7日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月7日
發(fā)明者于瑞蓮, 沈文斌, 旻 王 申請人:中國藥科大學(xué)