專利名稱：一種純化制備愛啡肽的新工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥化工領(lǐng)域，具體涉及一種應(yīng)用高速離心分離色譜法
(FCPC)制備高純度愛啡肽的新工藝。
背景技術(shù)：
愛啡肽(Eptifibatide)是一種含有巰基丙酰及六個(gè)氨基酸殘基的環(huán) 狀多肽，分子式為C32H49N 09S2 ，是血小板糖蛋白GPIIb/nia受體拮抗劑， 可阻斷由各種激活劑引起的血小板聚集反應(yīng)，是已知最強(qiáng)的特異性血小板 聚集抑制劑，主要用于防止心肌供氧動脈閉塞，心臟病發(fā)作，不穩(wěn)定性心 絞痛、無Q波心肌梗塞、冠脈介入治療引起的猝死。
該多肽經(jīng)過多步合成、氧化、裂解工序，帶有大量的難溶性雜質(zhì)，使 得該產(chǎn)品粗品前處理非常的困難，人工合成粗品的溶解性非常差，制約了 反相純化時(shí)的上樣量，合成的裂解工藝中使用了大量的TFA，在純化中必須 去除，在樣品前處理時(shí)如果加入大量的有機(jī)溶劑，反相純化多肽樣品難于 吸附上固定相，達(dá)不到分離的目的。
目前采用的純化制備方法是用反相高壓液相色譜法分離純化得到的。 該方法優(yōu)點(diǎn)是簡單、通用，適合于大多數(shù)的多肽純化，但缺點(diǎn)是不容易實(shí) 現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)，且生產(chǎn)設(shè)備十分昂貴，投入非常的大。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供了一種應(yīng)用高速離心分離色譜法(FCPC)制備 高純度愛啡肽的新工藝，不需要固體填料，采用兩相互不混溶的溶劑體系 在色譜柱管中的接觸，由于離心力的作用，其中一相停留在色譜柱內(nèi)，成 為固定相，另一相被泵到色譜柱中，稱之為流動相。待分離的組分由于在 兩相里不同的分配系數(shù)K'，達(dá)到分離的目的。由于不使用類似反相HPLC的 固體硅膠填料，因而沒有不可逆吸附，具有樣品無損失，無污染，快速高 效和適合大規(guī)模生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明的實(shí)現(xiàn)方法是在樣品前處理時(shí)可加入多種的有機(jī)溶劑，其溶 劑體系由A、 B、 C三個(gè)組分組成，A組分可以是氯仿、二氯甲垸、四氯化碳、
乙酸乙酯、石油醚；B組分可以為甲醇、乙醇、乙腈、丙酮；C組分為水，
體積比為2-4: 1-3: 2-6。經(jīng)過一次分離，有70%的目標(biāo)肽色譜純度大于98%，
剩下純度不夠的經(jīng)再次回收純化。
經(jīng)過高速離心分離色譜法(FCPC)制備的愛啡肽以TFA鹽的形式存在， 還需要將其轉(zhuǎn)換成醋酸，TFA在經(jīng)過離子交換樹脂時(shí)得以去除。其工藝步驟 為
a、 將人工合成的愛啡肽粗品用選定的溶劑溶解；
b、 將溶解好的愛啡肽粗品經(jīng)過高速離心分離色譜(FCPC)分離純化， 紫外檢測器于230nm處監(jiān)測，分段收集目的峰；
c、 將收集的餾分用HPLC檢測，純度大于98%的餾分合并，待下一步 處理，純度小于98%的餾分再次回收純化；
d、 將純度合格的熘分經(jīng)過離子交換，去除三氟乙酸(TFA)，轉(zhuǎn)換成 醋酸愛啡肽，達(dá)到藥用級標(biāo)準(zhǔn)。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于
1、 用高速離心分離色譜法(FCPC)分離純化愛啡肽，由于沒有使用小 顆粒的反相硅膠填料，溶解樣品可以加入有機(jī)溶劑，降低了樣品前處理難 度，更有利于工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)。
2、 由于沒有硅膠的吸附，減少了樣品的損失及被污染的幾率。
3、 應(yīng)用離子交換樹脂去除TFA的同時(shí)轉(zhuǎn)換成了醋酸鹽，方便，快捷， TFA的殘留低于0. 25%。
具體實(shí)施例方式
下面以實(shí)例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明 實(shí)施例一
采用Pilot-Scale制備型高速離心分離色譜儀(FCPC)，溶劑選用二氯
甲烷-乙腈-水體系制備愛啡肽。首先以2: 1: 3的體積比將上述溶劑體系 配置于分液漏斗中，搖均后靜置分層。將上下層分開，取上相為固定相， 下相為流動相。取愛啡肽粗品100克，溶解在1升上述混合體系中，用0. 45um 的有機(jī)相濾膜過濾，待純化。采用法國Kromaton制備型高速離心分離色譜 儀，轉(zhuǎn)子體積5升，先用固定相充滿整個(gè)柱子，調(diào)節(jié)主機(jī)轉(zhuǎn)速到1000rpm， 以150ml的流速將流動相泵入柱內(nèi)。待整個(gè)體系平衡后，通過泵將溶解好 的樣品注入色譜柱內(nèi)，然后根據(jù)檢測器紫外譜圖分段接收目標(biāo)成分。收集 餾分經(jīng)過HPLC檢測，純度大于98%的餾分合并，待下一步處理，純度小于 98%的餾分需要再次回收處理。
將純度合格的愛啡肽餾分用醋酸調(diào)節(jié)pH為4-5，經(jīng)過離子交換柱處理， TFA的殘留量可以控制在0. 25%以下。將經(jīng)過離子交換層析的愛啡肽溶液減 壓濃縮，冷凍干燥，得到合格的愛啡肽產(chǎn)品。
實(shí)施例二
采用Pilot-Scale制備型高速離心分離色譜儀(FCPC)，溶劑選用乙酸 乙酯-乙腈-水(3: 1: 3)體系制備愛啡肽。上樣量為150克，方法同實(shí)施例一。
實(shí)施例三
采用Pilot-Scale制備型高速離心分離色譜儀(FCPC)，溶劑選用乙酸 乙酯-甲醇-水(3: 1: 3)體系制備愛啡肽。上樣量為150克，方法同實(shí)施例一。
權(quán)利要求
1.一種純化制備愛啡肽的新工藝，其特征在于它包括以下步驟A、將人工合成的愛啡肽粗品用選定的A、B、C三個(gè)組分的溶劑溶解；b、將溶解好的愛啡肽粗品經(jīng)過高速離心分離色譜(Fast Centrifugal；Partition Chromatograph FCPC)分離純化，紫外檢測器于230nm處監(jiān)測，分段收集目的峰；c、將收集的餾分用HPLC檢測，純度大于98％的餾分合并，待下一步處理，純度小于98％的餾分再次回收純化；d、將純度合格的餾分經(jīng)過離子交換，去除三氟乙酸(TFA)，轉(zhuǎn)換成醋酸愛啡肽，達(dá)到藥用級標(biāo)準(zhǔn)。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種純化制備愛啡肽的新工藝，其特征在 于運(yùn)用高速離心分離色譜分離純化得到高純度的愛啡肽，其溶劑體系由A、 B、 C三個(gè)組分組成，A組分可以是氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、乙酸乙酯、 石油醚；B組分可以為甲醇、乙醇、乙腈、丙酮；C組分為水，體積比為2-4: 1-3: 2-6。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種純化制備愛啡肽的新工藝，其特征在 于純化愛啡肽，選擇合適的離子交換樹脂，在適合的緩沖溶液體系下，能 最大限度的去除對人體有害的物質(zhì)TFA，并做成愛啡肽的醋酸鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種純化制備愛啡肽的新工藝。目前人們采用反相高壓液相色譜法分離純化生產(chǎn)愛啡肽。但不易實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)，設(shè)備昂貴。本發(fā)明是應(yīng)用互不相溶的兩溶劑體系在色譜柱管中作高速行星運(yùn)動的方式下進(jìn)行分離純化，工藝步驟為a.將人工合成的愛啡肽粗品用溶劑溶解；b.將溶解好的愛啡肽粗品經(jīng)過高速離心分離色譜(FCPC)分離純化，紫外檢測器于230nm處監(jiān)測，分段收集目的峰；c.將收集的餾分用HPLC檢測，純度大于98％的餾分合并，待下一步處理，純度小于98％的餾分再次回收純化；d.將純度合格的餾分經(jīng)過離子交換，去除三氟乙酸(TFA)，轉(zhuǎn)換成醋酸愛啡肽。沒有不可逆吸附，具有樣品無損失、無污染、快速高效和適合大規(guī)模生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號C07K7/00GK101372506SQ20071007663
公開日2009年2月25日 申請日期2007年8月23日 優(yōu)先權(quán)日2007年8月23日
發(fā)明者平 何, 袁建成, 馬亞平 申請人:深圳市翰宇藥業(yè)有限公司