專利名稱：擴(kuò)張性心肌病用吸收劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種經(jīng)過設(shè)計(jì)通過從體液(例如血液、血漿等)吸收選擇性地除去抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體并由此促進(jìn)治療擴(kuò)張性心肌病(DCM)以及抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體是一種加重因子的其它疾病的吸收劑，本發(fā)明還涉及一種利用所述吸收劑的吸收設(shè)備和一種吸收抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的方法。
背景技術(shù)：
擴(kuò)張性心肌病是一種心室肌的收縮力嚴(yán)重受損致使心臟增大的疾病，并且與肥大性心肌病相比，而且其預(yù)后特別差。在日本，診斷患有此病的人的5年存活率據(jù)報(bào)道僅約50％。就擴(kuò)張性心肌病的治療而言，心臟移植被優(yōu)選認(rèn)為是一種根治療法，但是由于等待的名單比捐贈(zèng)的要多，因此心力衰竭的對(duì)癥治療是當(dāng)今的主要療法。報(bào)道了在給予血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑或β-腎上腺素能阻斷劑之后提高心臟功能和預(yù)后的病例，但是對(duì)于有效的治療藥物和療法的需求仍然很突出。
同時(shí)，Matsui等人報(bào)道了向兔給藥由β1-腎上腺素受體通過將Cys加入到其二級(jí)環(huán)得到的肽(His Trp Trp Arg Ala Glu Ser Asp Glu Ala ArgArg Cys Tyr Asn Asp Pro Lys Cys Cys Asp Phe Val Thr Asn Arg Cys)或者由M2毒蕈堿受體通過將Cys加入到其二級(jí)環(huán)得到的肽(Val Arg ThrVal Glu Asp Gly Glu Cys Tyr Ile Gln Phe Phe Ser Asn Ala Ala ValThr Phe Gly Thr AlaIle Cys)導(dǎo)致出現(xiàn)了針對(duì)每個(gè)給予的肽的抗體，并且9個(gè)月之后死亡的兔的心臟發(fā)現(xiàn)了擴(kuò)張性心肌病(Matsui S，F(xiàn)u ML.Myocardial injury due to G-protein coupled receptor-autoimmunity.Jpn Heart J.1998；39(3)261-74)，因此暗示這些抗體在擴(kuò)張性心肌病中起病原學(xué)因子的作用。而且，Wallukat，G等人通過使用將β1-腎上腺素受體的二級(jí)環(huán)肽(His Trp Trp Arg Ala Glu Ser Asp Glu Ala Arg ArgCys Tyr Asn Asp Pro Lys Cys Cys Asp Phe Val Thr Asn Arg)固定到CNBr激活的Sepharose 4B上制備的吸收劑提純了抗β1-腎上腺素受體的抗體(Wallukat G，Wollenberger A，Morwinski R，Pitschner HF.Anti-beta 1-adrenoceptor autoantibodies with chronotropicactivity from the serum of patients with dilated cardiomyopathymapping of epitopes in the first and sencond extracellular loops.J Mol Cell Cardiol 1995 Jan；27(1)397-406)。然而，它們沒有使血清與所述吸收劑直接接觸。它們首先向血清中加入40％的硫酸銨飽和水溶液以將其免疫球蛋白部分沉淀(硫酸銨沉淀)，將所述沉淀物再溶解，將溶液透析，之后用所述吸收劑進(jìn)行分餾提純。這暗示如果在這種狀態(tài)下未經(jīng)過預(yù)處理(硫酸銨沉淀和透析)的血清或類似物與已經(jīng)合成的所述吸收劑接觸的話，不能獲得足夠的選擇性吸收。
發(fā)明簡(jiǎn)述鑒于上面的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑，它能夠有效且選擇性地吸收存在于體液(例如血液、血漿等)中的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體，并且不需要對(duì)所述體液進(jìn)行預(yù)處理(硫酸銨沉淀和透析)。另一目的是提供一種利用所述吸收劑的吸收設(shè)備和一種吸收抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的方法。
為了實(shí)現(xiàn)上面的目的，本發(fā)明的發(fā)明人試驗(yàn)性地將各種化合物與水不溶性的載體結(jié)合以便開發(fā)一種吸收劑，當(dāng)這種吸收劑與患者血液接觸時(shí)，吸收劑將對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體呈現(xiàn)高的吸收親和力，但是同時(shí)不吸收例如白蛋白的蛋白質(zhì)。結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)含有水不溶性載體和固定在所述載體上并對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的化合物的吸收劑對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體呈現(xiàn)非常大的吸收能力，這種發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明。
因此本發(fā)明提供了一種抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑，它含有水不溶性載體和對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的化合物，其中所述化合物固定在所述水不溶性載體上。
在本發(fā)明的上下文中“對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的化合物”是與抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的離解常數(shù)(KD)不大于10-4[M](用BIAcore(Pharmacia的產(chǎn)品)測(cè)定)或者是以不小于0.00001μmol但不大于100μmol/mL載體的比例固定在載體上以合成吸收劑時(shí)由此構(gòu)建的吸收劑與含所述抗體的流體接觸2小時(shí)(例如吸收劑∶液體＝1∶1(v/v))可以將所述抗體的濃度降低不小于30％的化合物。
在一優(yōu)選實(shí)施方式中，在吸收抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體時(shí)，對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的化合物是一種肽。
在一優(yōu)選實(shí)施方式中，在吸收抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體時(shí)，對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的化合物是至少一種選自以下的肽Trp Gly Arg Trp Glu Tyr Gly Ser Phe Phe Cys Glu Leu(SEQ IDNO1)、Glu Tyr Gly Ser Phe Phe(SEQ ID NO2)、Ser Phe Phe Cys Glu Leu(SEQ ID NO3)、Arg Ala Glu Ser Asp Glu Ala Arg Arg Cys Tyr Asn Asp Pro LysCys Cys Asp Phe Val Thr Asn Arg(SEQ ID NO4)、Val Lys Ala Phe His Arg Glu Leu Val Pro Asp(SEQ ID NO5)、Ala Arg Arg Cys Tyr Asp Asp(SEQ ID NO6)、Pro Lys Cys Cys Asp Phe(SEQ ID NO7)和Val Arg Thr Val Glu Asp Gly Glu Cys Tyr Ile Gln Phe Phe SerAsn Ala Ala Val Thr Phe Gly Thr Ala Ile(SEQ ID NO8)、選自SEQ IDNO1-SEQ ID NO8中至少一種肽的片段、或者含有選自SEQ ID NO1-SEQID NO8中至少一種肽和至少一種肽的片段的肽。
在一優(yōu)選實(shí)施方式中，在吸收抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體時(shí)，對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的化合物是至少一種選自以下的肽X Trp Gly Arg Trp Glu Tyr Gly Ser Phe Phe Cys Glu Leu Y(SEQID NO1a)、X Glu Tyr Gly Ser Phe Phe Y(SEQ ID NO2a)、X Ser Phe Phe Cys Glu Leu Y(SEQ ID NO3a)、X Hi s Trp Trp Arg Ala Glu Ser Asp Glu Ala Arg Arg Cys Tyr AsnAsp Pro Lys Cys Cys Asp Phe Val Thr Asn Arg Y(SEQ ID NO4a)、X Val Lys Ala Phe Hi s Arg Glu Leu Val Pro Asp Y(SEQ ID NO5a)、X Ala Arg Arg Cys Tyr Asn Asp Y(SEQ ID NO6a)、X Pro Lys Cys Cys Asp Phe Y(SEQ ID NO7a)和X Val Arg Thr Val Glu Asp Gly Glu Cys Tyr Ile Gln Phe Phe SerAsn Ala Ala Val Thr Phe Gly Thr Ala Ile Y(SEQ ID NO8a)，其中X代表在N-端具有(Cys)m或(Lys)n并由0-20個(gè)氨基酸殘基組成的肽，m和n各自代表0-10的整數(shù)，Y代表在C-端具有(Cys)p或(Lys)q并由0-20個(gè)氨基酸殘基組成的肽，p和q各自代表0-10的整數(shù)，并且X和Y的氨基酸殘基總數(shù)是1-40。
在一優(yōu)選實(shí)施方式中，在吸收抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體時(shí)，對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的化合物是含有以下肽的肽通過選自SEQ ID NO1-SEQ ID NO8中的兩個(gè)或多個(gè)肽與不超過10個(gè)氨基酸殘基的肽偶聯(lián)形成的線性肽，和在所述線性肽的N-端具有(Cys)m或(Lys)n并由0-20個(gè)氨基酸殘基組成的肽，m和n各自代表0-10的整數(shù)，和在所述線性肽的C-端具有(Cys)p或(Lys)q并由0-20個(gè)氨基酸殘基組成的肽，p和q各自代表0-10的整數(shù)。
在一優(yōu)選實(shí)施方式中，對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的化合物以0.00001μmol-100μmol/mL載體的比例固定在水不溶性載體上。
在一優(yōu)選實(shí)施方式中，水不溶性載體在吸收抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體時(shí)是多孔的。
在一優(yōu)選實(shí)施方式中，當(dāng)吸收抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體時(shí)所述水不溶性載體是多孔的情況下，所述載體的分子量排阻極限是150000-10000000。
在一優(yōu)選實(shí)施方式中，當(dāng)吸收抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體時(shí)所述水不溶性載體是親水載體。
在一優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明的吸收劑可用于吸收存在于體液中的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體。
在一優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明的吸收劑可用于吸收含有以一組分存在于體液中的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的免疫復(fù)合物。
本發(fā)明的吸收抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的設(shè)備包括一配備有液體入口和液體出口并填充有任意上面段中所述的吸收劑的腔室和一種防止所述吸收劑從所述腔室遷移的裝置。
本發(fā)明的吸收抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的方法包括任意上面段中所述的吸收劑與含有抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的液體接觸的步驟。
在一優(yōu)選實(shí)施方式中，上面含有抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的液體是體液。
正如本說明書中所用的，術(shù)語“體液”意思是血液、血漿、血清、腹水液、淋巴和關(guān)節(jié)內(nèi)液體、及其任意部分、和得自活體的任意其它液體組分。
發(fā)明詳述現(xiàn)在描述本發(fā)明的實(shí)施方式，然而應(yīng)理解的是，本發(fā)明決不局限在以下描述的范圍內(nèi)。本發(fā)明所用的對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的化合物是基本上能夠吸收抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的化合物，本身并不限于任何具體的化合物，但是優(yōu)選是與抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的表位(即Fab)特異性結(jié)合的物質(zhì)。以下是代表性實(shí)例。
Trp Gly Arg Trp Glu Tyr Gly Ser Phe Phe Cys Glu Leu(SEQ IDNO1)、Glu Tyr Gly Ser Phe Phe(SEQ ID NO2)、Ser Phe Phe Cys Glu Leu(SEQ ID NO3)、Arg Ala Glu Ser Asp Glu Ala Arg Arg Cys Tyr Asn Asp Pro LysCys Cys Asp Phe Val Thr Asn Arg(SEQ ID NO4)、Val Lys Ala Phe His Arg Glu Leu Val Pro Asp(SEQ ID NO5)、Ala Arg Arg Cys Tyr Asp Asp(SEQ ID NO6)、Pro Lys Cys Cys Asp Phe(SEQ ID NO7)、Val Arg Thr Val Glu Asp Gly Glu Cys Tyr Ile Gln Phe Phe SerAsn Ala Ala Val Thr Phe Gly Thr Ala Ile(SEQ ID NO8)、X Trp Gly Arg Trp Glu Tyr Gly Ser Phe Phe Cys Glu Leu Y(SEQID NO1a)、X Glu Tyr Gly Ser Phe Phe Y(SEQ ID NO2a)、X Ser Phe Phe Cys Glu Leu Y(SEQ ID NO3a)、X His Trp Trp Arg Ala Glu Ser Asp Glu Ala Arg Arg Cys Tyr AsnAsp Pro Lys Cys Cys Asp Phe Val Thr Asn Arg Y(SEQ ID NO4a)、X Val Lys Ala Phe His Arg Glu Leu Val Pro Asp Y(SEQ ID NO5a)、X Ala Arg Arg Cys Tyr Asp Asp Y(SEQ ID NO6a)、X Pro Lys Cys Cys Asp Phe Y(SEQ ID NO7a)和X Val Arg Thr Val Glu Asp Gly Glu Cys Tyr Ile Gln Phe Phe SerAsn Ala Ala Val Thr Phe Gly Thr Ala Ile Y(SEQ ID NO8a)，其中X代表在N-端具有(Cys)m或(Lys)n(m和n各自代表0-10的整數(shù))并由0-20個(gè)氨基酸殘基組成的肽，Y代表在C-端具有(Cys)p或(Lys)q(p和q各自代表0-10的整數(shù))并由0-20個(gè)氨基酸殘基組成的肽，并且X和Y的氨基酸殘基總數(shù)是1-40。
用于本發(fā)明的水不溶性載體包括無機(jī)載體如玻璃珠和硅膠、有機(jī)載體如合成聚合物，例如交聯(lián)聚(乙烯醇)、交聯(lián)聚丙烯酸酯類、交聯(lián)聚丙烯酰胺、交聯(lián)聚苯乙烯等，和多糖，例如結(jié)晶纖維素、交聯(lián)纖維素、交聯(lián)瓊脂糖、交聯(lián)葡聚糖等，復(fù)合載體如得自所述載體的各種組合的有機(jī)-有機(jī)和有機(jī)-無機(jī)載體。其中，由于親水載體對(duì)比較地具有較低非特異性吸收的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有高選擇性的吸收親和力，因此特別優(yōu)選。上面提到的親水載體意思是這樣的載體，當(dāng)構(gòu)成特定載體的化合物形成平片時(shí)，它相對(duì)水顯示不大于60度的接觸角。作為滿足這種條件的代表性載體，可以提到的有由多糖如纖維素、殼聚糖和葡聚糖；聚(乙烯醇)、皂化的乙烯-乙酸乙酯共聚物、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚丙烯酸接枝的聚乙烯、聚丙烯酰胺接枝的聚乙烯、玻璃等組成的載體。
作為工業(yè)產(chǎn)品，尤其可以提到的有GCL2000m(為多孔纖維素凝膠)和Eupergit C 250 L(是環(huán)氧活化的聚甲基丙烯酰胺)。然而，應(yīng)理解為用于本發(fā)明的載體當(dāng)然不限于這些特定的載體或者活化的載體。上面的載體各自可以單獨(dú)地使用或者可以兩種或多種的任選組合使用。而且，鑒于其目的和吸收劑的使用方法，用于本發(fā)明的水不溶性載體優(yōu)選是具有大的表面積的載體，即是具有適宜大小的重復(fù)孔的多孔載體。
當(dāng)用于本發(fā)明的水不溶性載體是多孔時(shí)，其分子量排阻極限優(yōu)選是150000-10000000?？功?-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的分子量是140000-1000000，因此為了可以使這些抗體分子高效地吸收到多孔載體上，載體的分子量排阻極限的大小優(yōu)選大于抗體分子的直徑。然而，如果它太大的話，載體的強(qiáng)度將降低并且其表面積也將降低。因此，優(yōu)選使用分子量排阻極限是250000-5000000的載體。
現(xiàn)在參照載體的多孔結(jié)構(gòu)，考慮到單位體積載體的吸收能力，總孔隙率優(yōu)于表面孔隙率并且可以優(yōu)選使用孔體積不低于20％并且比表面積不低于3m2/g的載體。
至于載體的形式，可以使用任何珠形式、纖維形式、膜形式(包括中空纖維)和其它形式并任選選擇，但是考慮到體液在體外循環(huán)期間的流體動(dòng)力學(xué)，特別優(yōu)選珠形式。平均粒徑為10-2500μm的珠易于使用并且優(yōu)選25μm-800μm的范圍。
而且，可用于將配體固定在載體表面上的官能團(tuán)的存在可以有益地固定配體。作為所述官能團(tuán)的代表性的實(shí)例，可以提到的有羥基、氨基、醛基、羧基、硫醇、硅醇、酰氨基、環(huán)氧基、琥珀酰亞氨基、酸酐基等。
而且，可用于本發(fā)明的載體包括硬載體和軟載體，但就用作體外循環(huán)療法的吸收劑的載體而言，重要的必要條件是例如當(dāng)柱用其填充并且流體通過其中時(shí)沒有堵塞。為此，載體需要足夠的機(jī)械強(qiáng)度。因此，用于本發(fā)明實(shí)踐的載體更優(yōu)選是硬載體。正如本說明書中所用的，術(shù)語“硬載體”意思是這樣一種載體，例如當(dāng)其為顆粒凝膠時(shí)，當(dāng)圓柱形玻璃柱(9mm內(nèi)徑，柱長(zhǎng)150mm)均勻地填充該凝膠并且含水流體在以下條件下通過所述填充柱時(shí)，在壓力損失ΔP和高達(dá)0.3kg/cm2的流速之間獲得一線性關(guān)系。
因此，例如圓柱形玻璃柱(9mm內(nèi)徑，柱長(zhǎng)150mm)，每個(gè)在任一端分別裝配15μm-孔過濾器，均勻地填充瓊脂糖凝膠(Biogel-A5m，粒徑為50-100目，Bio-Rad的產(chǎn)品)、乙烯基聚合物凝膠(Toyopearl HW-65，粒徑為50-100μm。Toyo Soda的產(chǎn)品)和纖維素凝膠(Cellulofine GC-700m，粒徑為45-105μm，Chisso公司的產(chǎn)品)，并使用蠕動(dòng)泵使水通過每種填充的柱以測(cè)定流速和壓力損失ΔP之間的關(guān)系(
圖1)。流速(cm/min)繪于縱坐標(biāo)上將壓力損失(kg/cm2)繪于橫坐標(biāo)上。在該圖中，o代表ToyopearlHW-65，Δ代表Cellulofine GC-700m，并且·代表Biogel-A5m?？梢钥闯觯赥oyopearl HW-65和Cellulofine GC-700m的情況下增加壓力使得流速幾乎成比例地增加，而在Biogel-A5m的情況下發(fā)生壓縮以致增加壓力不能使流速增加。
在將對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的化合物固定在所述載體上時(shí)，更優(yōu)選經(jīng)過使所述化合物上的立體位阻最小化的親水間隔區(qū)進(jìn)行所述固定從而提高其吸收效率并抑制非特異性吸收。作為親水間隔區(qū)，可以有益地使用例如在任一端具有羧基、氨基、醛基、環(huán)氧基等取代基的聚烯化氧衍生物。
固定對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的所述化合物和用作間隔區(qū)的有機(jī)化合物的方法沒有特別的限制，但是尤其包括常用于將蛋白質(zhì)或肽固定在載體上的技術(shù)，例如環(huán)氧反應(yīng)、切口堿基反應(yīng)、使用碳二亞胺試劑的縮合反應(yīng)、活性酯反應(yīng)、和使用戊二醛試劑的載體交聯(lián)反應(yīng)。然而，考慮到所述吸收劑可用于體外循環(huán)療法和清血法的事實(shí)，可以優(yōu)選使用固定法以便在所述吸收劑滅菌時(shí)或者在治療階段蛋白質(zhì)等不能容易地從載體分離下來。例如，可以提到的有(1)包括使載體的羧基與N-羥基琥珀酰亞胺反應(yīng)形成琥珀酰亞胺基氧基羰基，然后使其與蛋白質(zhì)或肽的氨基反應(yīng)的技術(shù)(活性酯法)、(2)包括在有縮合試劑如二環(huán)己基碳二亞胺的情況下使載體的氨基或羧基與蛋白質(zhì)或肽的羧基或氨基經(jīng)過縮合反應(yīng)的技術(shù)(縮合法)、和(3)包括使用具有兩個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)的化合物如戊二醛交聯(lián)蛋白質(zhì)或肽的技術(shù)(載體交聯(lián)法)。為了使蛋白質(zhì)等的分離和釋放最小化，偶聯(lián)方式優(yōu)選共價(jià)結(jié)合。
可以利用許多不同的方法將載有對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的化合物的載體與體液如血液、血漿或血清接觸以吸收存在于體液中的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體。其中代表性方法是方法(1)，包括抽出體液，將其匯集于袋或類似物中，將其與所述吸收劑混合以吸收抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體，并過濾掉吸收劑以得到失去抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的體液，和方法(2)，包括用吸收劑填充一容器并將體液通過該容器，所述容器配備有一入口和一出口，以及一過濾器，該過濾器能夠使體液通過但是在所述出口不能使吸收劑通過。這些方法中無論哪一個(gè)都可以使用，然而，后一方法不僅步驟簡(jiǎn)單，而且能夠高效地從患者的體液中除去抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體，此時(shí)容器整合成體外循環(huán)回路，由此適合本發(fā)明的吸收劑。
然后，現(xiàn)在用其橫截面圖描述本發(fā)明中使用抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑吸收抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收設(shè)備。
參照?qǐng)D2，容器7包括液體入口(或液體出口)1、液體出口(或液體入口)2、本發(fā)明的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑3、防止吸收劑遷移的裝置4和5，所述裝置使液體和液體中的組分通過但是不能使抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑通過，和柱6。容器的幾何學(xué)和材料沒有特別的限制，但是優(yōu)選容積為例如約20-400ml且直徑為例如約2-10cm的圓柱形容器。
附圖簡(jiǎn)述圖1是使用3個(gè)不同凝膠研究流速和壓力損失之間的關(guān)系的圖。
圖2是顯示本發(fā)明中吸收抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收設(shè)備的實(shí)例的橫截面圖。
數(shù)字解釋1體液入口2體液出口3抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑4，5體液和體液的組分能夠通過但是抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑不能通過的過濾器。
6柱7吸收設(shè)備實(shí)施本發(fā)明的最佳方式以下實(shí)施例更詳細(xì)地描述了本發(fā)明，但不限制本發(fā)明的范圍。還應(yīng)理解的是在本說明書中，各種氨基酸殘基通過以下縮寫表示AlaL-丙氨酸殘基，AspL-天冬氨酸殘基，AsnL-天冬酰胺殘基，CysL-半胱氨酸殘基，GlnL-谷氨酰胺殘基GluL-谷氨酸殘基，GlyL-甘氨酸殘基，IleL-異亮氨酸殘基，LeuL-亮氨酸殘基，LysL-賴氨酸殘基，PheL-苯丙氨酸殘基，ThrL-蘇氨酸殘基，TrpL-色氨酸殘基，TyrL-酪氨酸殘基，ValL-纈氨酸殘基。而且，在本說明書中，任何肽的氨基酸序列是以常規(guī)方式顯示的，即氨基端(本文后面稱作N-端)在左手邊，羧基端(本文后面稱C-端)在右手邊。[實(shí)施例1]1-1.肽(SEQ ID NO4)的合成使用4170型肽合成儀(由Pharmacia LKB生產(chǎn))通過固相法合成以下肽。
Arg Ala Glu Ser Asp Glu Ala Arg Arg Cys Tyr Asn Asp Pro LysCys Cys Asp Phe Val Thr Asn Arg(SEQ ID NO4)從日常使用的Fmoc-保護(hù)的氨基酸，即Fmoc-Ala、Fmoc-Arg、Fmoc-Asn(Trt)、Fmoc-Asp(0tBu)、Fmoc-Cys(Trt)、Fmoc-Gln(Trt)、Fmoc-Glu(OtBu)、Fmoc-Gly、Fmoc-His、Fmoc-Ile、Fmoc-Leu、Fmoc-Lys(Boc)、Fmoc-Met、Fmoc-Phe、Fmoc-Pro、Fmoc-Ser、Fmoc-Thr(tBu)、Fmoc-Trp、Fmoc-Tyr(tBu)和Fmoc-Val中，選擇構(gòu)建所述序列所必需的Fmoc氨基酸，并以底物為基礎(chǔ)，每種使用5等量。(在上面的表示中，Trt、OtBu、Boc和tBu分別代表三苯甲基、叔丁酯、叔丁氧基羰基和鄰叔丁基)。
在合成反應(yīng)結(jié)束之后，在玻璃過濾器上依次用叔戊醇、乙酸和二乙醚將產(chǎn)物洗滌并在真空下干燥。向1g所得載體中加入20mL三氟乙酸(簡(jiǎn)稱TFA)、260μL的1，2-乙二硫醇和780μL的茴香醚并在室溫下將混合物攪拌1.5小時(shí)，然后通過玻璃過濾器過濾。濾液于減壓下濃縮。然后從無水二乙醚中將濃縮物沉淀并將粗提純的肽回收。將這種粗提純的肽溶于0.1％TFA中并使用逆相柱(μBondasphere C18Nippon MilliporeWaters的產(chǎn)品)通過HPLC提純。1-2.吸收劑(GCL2000m-SEQ ID NO4)的合成1-2-1.GCL2000m的環(huán)氧活化向90ml纖維素多孔硬凝膠GCL2000M(Chisso公司的產(chǎn)品；球形蛋白質(zhì)分子量排阻極限是3000000)中加入足量水以制得180mL，接著加入60mL的2M氫氧化鈉，并將其溫度調(diào)整至40℃。向其中加入21mL的環(huán)氧氯丙烷，并在攪拌下于40℃將反應(yīng)進(jìn)行1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束之后，用水將產(chǎn)物充分沖洗以得到環(huán)氧活化的纖維素凝膠。1-2-2.肽(SEQ ID NO4)的固定在0.5mL的0.05M硼酸鹽緩沖液(pH 10.0)中溶解0.5mg在1-1.中合成的肽(SEQ ID NO4)，并通過加入0.01N氫氧化鈉水溶液將溶液再次調(diào)整至pH 10并補(bǔ)充至1.0mL(肽溶液)。將所述肽溶液加入到0.4mL上面的環(huán)氧活化的GCL2000m中并在37℃下將混合物搖蕩16小時(shí)。產(chǎn)物用足量的PBS(10mM含150mM氯化鈉的磷酸鹽緩沖液)洗滌從而得到GCL2000m-SEQ ID NO4。
在固定反應(yīng)之前即刻和反應(yīng)之后即刻通過HPLC測(cè)定反應(yīng)混合物的肽濃度并計(jì)算反應(yīng)速率從而獲得固定速率。結(jié)果，發(fā)現(xiàn)每mL的GCL2000m-SEQ ID NO4中已固定0.8mg(0.8mg/mL，0.25μmol/mL)的肽。1-3.吸收劑的評(píng)價(jià)向50μL的1-2.下合成的GCL2000m-SEQ ID NO4中加入300μL得自抗β1-腎上腺素受體的抗體陽性(簡(jiǎn)稱β1AR-Ab(+))的DCM患者的血清A中，并在37℃下?lián)u蕩2小時(shí)之后，通過ELISA測(cè)定上清液中抗β1-腎上腺素受體的抗體的值。將β1-腎上腺素受體二級(jí)環(huán)(β1AR2nd)肽(參見合成方法的對(duì)比實(shí)施例1(1)-1.)的溶液(50μg/mL)50μL加入到ELISA平皿中，然后將其在4℃下靜置過夜。將所述平皿洗滌之后，加入100μL的脫脂奶粉(Difco的產(chǎn)品)溶液并將平皿于室溫下靜置1小時(shí)。將平皿洗滌之后，加入50μL的樣品(所述上清液的10倍稀釋液)并將平皿于4℃下靜置過夜。將平皿洗滌之后，加入50μL的生物素標(biāo)記過的抗-人IgG抗體溶液(Southern Biotechnology的產(chǎn)品)并將平皿于室溫下靜置1小時(shí)。將平皿洗滌之后，加入50μL抗生蛋白鏈菌素-過氧化物酶聚合物(Sigma的產(chǎn)品)溶液并將平皿于室溫下靜置1小時(shí)。將平皿洗滌之后，加入100μL的底物溶液并將平皿于室溫下靜置30分鐘。然后在405nm下測(cè)定吸光度。由使用DCM患者血清A(相應(yīng)于0％吸收)代替上面的樣品測(cè)定的吸光度和使用健康人血清(β1AR-Ab(-))(相應(yīng)于100％吸收)測(cè)定的吸光度，計(jì)算GCL2000m-SEQ ID NO4的吸收能力(結(jié)果參見表1)。[比較實(shí)施例1](1)-1.肽(β1AR2nd)為了與Wallukat等人所用的吸收劑進(jìn)行比較，以與實(shí)施例1(1-1.)中所述完全相同的方式合成以下肽，β1-腎上腺素受體的二級(jí)環(huán)(β1AR2nd)。
His Trp Trp Arg Ala Glu Ser Asp Glu Ala Arg Arg Cys Tyr AsnAsp Pro Lys Cys Cys Asp Phe Val Thr Asn Arg(1)-2.吸收劑(Sepharose 4B-β1AR2nd)的合成將CNBr-活化的Sepharose 4B(Pharmacia LKB的產(chǎn)品；球形蛋白質(zhì)分子量排阻極限＞20000000)用少量的1mM HCl/H2O溶液溶脹15分鐘，用1mM HCl/H2O溶液洗滌，還用偶聯(lián)緩沖劑(pH 8.3，0.5M氯化鈉，0.1M NaHCO3)洗滌。在1mL的偶聯(lián)緩沖劑中溶解0.5mg在2-1.中合成的肽(β1AR2nd)，并將溶液與0.4mL的預(yù)處理過的CNBr-活化的Sepharose 4B混合以在4℃下將反應(yīng)進(jìn)行16小時(shí)。用偶聯(lián)緩沖劑洗滌之后，加入阻斷緩沖劑(pH8.3，0.2M甘氨酸，0.5M氯化鈉，0.1M NaHCO3)并在室溫下將反應(yīng)進(jìn)行2小時(shí)。反應(yīng)產(chǎn)物交替地用兩種后處理緩沖劑(pH 4.0，0.5M氯化鈉，0.1M乙酸-乙酸鈉緩沖劑；pH 8.0，0.5M氯化鈉，0.1M Tris-HCl緩沖劑)各自洗滌3次從而得到Sepharose 4B-β1AR2nd。
如1-2-2下測(cè)定Sepharose 4B-β1AR2nd的固定速率是1mg/mL(0.27μmol/ml)。(Wallukat G，Wollenberger A，Morwinski R，Pitschner HF.Anti-beta 1-adrenoceptor autoantibodies withchronotropic activity from the serum of patients with dilatedcardiomyopathymapping of epitopes in the first and sencondextracellular loops.J Mol Cell Cardiol 1995 Jan；27(1)397-406)。(1)-3.吸收劑的評(píng)價(jià)除了使用Sepharose 4B-β1AR2nd代替實(shí)施例1(1`-3.)中所用的GCL2000m-SEQ ID NO4之外，其它與實(shí)施例1(1-3.)中相同的方式進(jìn)行使用DCM患者血清A的吸收試驗(yàn)和ELISA，并進(jìn)行吸光度測(cè)定和吸收親和力計(jì)算(結(jié)果參見表1)。[實(shí)施例2]2-1.以與實(shí)施例1(1-1.)中所述完全相同的方式合成以下肽(SEQ IDNO9)。
His Trp Trp Arg Ala Glu Ser Asp Glu Ala Arg Arg Cys Tyr AsnAsp Pro Lys Cys Cys Asp Phe Val Thr Asn Arg Gly Ala Cys(SEQ IDNO9)2-2.吸收劑(Kac-SEQ ID NO9)的合成向90ml球形蛋白質(zhì)分子量排阻極限為5000000的我們的纖維素多孔硬凝膠Kac中加入足量水以制得180mL，接著加入60mL的2M氫氧化鈉，然后將其溫度調(diào)整至40℃。向其中加入21mL的表氯醇，并在攪拌下于40℃將反應(yīng)進(jìn)行1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束之后，用水將產(chǎn)物充分沖洗以得到環(huán)氧活化的纖維素凝膠。
在0.5mL的0.05M硼酸鹽緩沖液(pH 10.0)中溶解2mg在2-1.中合成的肽(SEQ ID NO9)，并用0.01N氫氧化鈉/水溶液將溶液再次調(diào)整至pH 10并補(bǔ)充至1.0mL(肽溶液)。將所述肽溶液加入到0.4mL上面的環(huán)氧活化的Kac中并在37℃下將混合物搖蕩16小時(shí)之后，產(chǎn)物用足量的PBS(10mM含150mM氯化鈉的磷酸鹽緩沖液)洗滌從而得到Kac-SEQ ID NO9。
以與1-2-2相同的方式測(cè)定Kac-SEQ ID NO9的固定速率是3.2mg/mL(0.8μmol/ml)。2-3.吸收劑的評(píng)價(jià)除了使用Kac-SEQ ID NO9代替實(shí)施例1(1`-3.)中所用的GCL2000m-SEQ ID NO4并用DCM患者血清B(β1AR-Ab(+))代替DCM患者血清A之外，其它與實(shí)施例1(1-3.)中相同的方式進(jìn)行吸收試驗(yàn)、ELISA、吸光度測(cè)定和吸收能力計(jì)算(結(jié)果參見表1)。[實(shí)施例3]3-1.以與實(shí)施例1(1-1.)中所述完全相同的方式合成以下肽(SEQ IDNO10)。
Val Arg Thr Val Glu Asp Gly Glu Cys Tyr Ile Gln Phe Phe SerAsn Ala Ala Val Thr Phe Gly Thr Ala Ile Pro Ala Lys Lys(SEQ IDNO10)此外，為了制備用于ELISA的肽溶液，還以與實(shí)施例1(1-1.)中所述完全相同的方式合成以下肽。
Val Arg Thr Val Glu Asp Gly Glu Cys Tyr Ile Gln Phe Phe SerAsn Ala Ala Val Thr Phe Gly Thr Ala Ile(M2R)3-2.吸收劑(Eu-SEQ ID NO10)的合成將環(huán)氧-活化的甲基丙烯酰胺聚合物Eupergit C 250 L(分子量排阻極限為1000000，Rohm Pharma的產(chǎn)品)用0.05M硼酸鹽緩沖液(pH 10.0)溶脹15分鐘并用0.05M硼酸鹽緩沖液(pH 10.0)洗滌。在0.5mL的0.05M硼酸鹽緩沖液(pH 10.0)中溶解10mg在3-1.中合成的肽(SEQ ID NO10)，并通過加入0.01N氫氧化鈉/水溶液將溶液再次調(diào)整至pH 10并補(bǔ)充至1.0mL(肽溶液)。將所述溶液與0.4mL預(yù)處理過的Eupergit C 250 L混合并在37℃下將混合物搖蕩16小時(shí)之后，用足量的PBS(10mM含150mM氯化鈉的磷酸鹽緩沖液)將其洗滌從而得到Eu-SEQ ID NO10。
以與1-2-2相同的方式測(cè)定Eu-SEQ ID NO10的固定速率是15mg/mL(4.09μmol/ml)。3-3.吸收劑的評(píng)價(jià)除了使用Eu-SEQ ID NO10代替實(shí)施例1(1`-3.)中所用的GCL2000m-SEQ ID NO4、使用抗M2毒蕈堿受體的抗體陽性(簡(jiǎn)稱M2R-Ab(+))的DCM患者血清C代替DCM患者血清A并用M2R代替β1AR2nd作為溶解用于制備首先加入到ELISA平皿中的肽溶液的肽之外，其它與實(shí)施例1(1-3.)中相同的方式進(jìn)行吸收試驗(yàn)、ELISA、吸光度測(cè)定和吸收能力計(jì)算(結(jié)果參見表1)。[實(shí)施例4]4-1.以與實(shí)施例1(1-1.)中所述完全相同的方式合成以下肽(SEQ IDNO11、12)。
His Trp Trp Arg Ala Glu Ser Asp Glu Ala Arg Arg Cys Tyr AsnAsp Pro Lys Cys Cys Asp Phe Val Thr Asn Arg Ala Cys(SEQ ID NO11)Val Arg Thr Val Glu Asp Gly Glu Cys Tyr Ile Gln Phe Phe SerAsn Ala Ala Val Thr Phe Gly Thr Ala Ile Cys(SEQ ID NO12)4-2.吸收劑(Kac-SEQ ID NOS11，12)的合成將4-1.中合成的肽(SEQ ID NO11，2.5mg；SEQ ID NO12，3mg)溶于0.5mL的0.05M硼酸鹽緩沖液(pH 10.0)，通過加入0.01N氫氧化鈉/水溶液將溶液再次調(diào)整至pH 10并補(bǔ)充至1.0mL(肽溶液)。將所述溶液加入到0.4mL實(shí)施例2(2-2.)中合成的環(huán)氧活化的Kac中并在37℃下將混合物搖蕩16小時(shí)之后，用足量的PBS(10mM含150mM氯化鈉的磷酸鹽緩沖液)將其洗滌從而得到Kac-SEQ ID NO11，12。
以與1-2-2相同的方式測(cè)定Kac-SEQ ID NO11的固定速率是2mg/mL(0.51μmol/ml)，Kac-SEQ ID NO12的固定速率是2mg/mL(0.61μmol/ml)。4-3.吸收劑的評(píng)價(jià)除了使用Kac-SEQ ID NO11，12代替實(shí)施例1(1`-3.)中所用的GCL2000m-SEQ ID NO4并使用DCM患者血清D(β1AR-Ab(+))代替DCM患者血清A之外，其它與實(shí)施例1(1-3.)中相同的方式進(jìn)行吸收試驗(yàn)、ELISA、吸光度測(cè)定和吸收能力計(jì)算(結(jié)果參見表1)。[實(shí)施例5]5-1.以與實(shí)施例1(1-1.)中所述完全相同的方式合成以下肽(SEQ IDNO13)。
Ser Phe Phe Cys Glu Leu Ala Asp Gly Tyr Pro Lys Cys Cys AspPhe Ala Cys(SEQ ID NO13)5-2.吸收劑(Kac-SEQ ID NO13)的合成在0.5mL的0.05M硼酸鹽緩沖液(pH 10.0)中溶解3mg在5-1.中合成的肽(SEQ ID NO13)，并通過加入足夠的0.01N氫氧化鈉/水將溶液再次調(diào)整至pH 10并補(bǔ)充至總共1.0mL(肽溶液)。將所述肽溶液加入到0.4mL實(shí)施例2(2-2.)中合成的環(huán)氧活化的Kac中并在37℃下將混合物搖蕩16小時(shí)之后，產(chǎn)物用足量的PBS(10mM含150mM氯化鈉的磷酸鹽緩沖液)洗滌從而得到Kac-SEQ ID NO13。
以與1-2-2相同的方式測(cè)定Kac-SEQ ID NO13的固定速率是3.4mg/mL(1.46μmol/ml)。5-3.吸收劑的評(píng)價(jià)除了使用Kac-SEQ ID NO13代替實(shí)施例1(1`-3.)中所用的GCL2000m-SEQ ID NO4并用DCM患者血清D(β1AR-Ab(+))代替DCM患者血清A之外，其它與實(shí)施例1(1-3.)中相同的方式進(jìn)行吸收試驗(yàn)、ELISA、吸光度測(cè)定和吸收能力計(jì)算(結(jié)果參見表1)。[實(shí)施例6]向1mL實(shí)施例5(5-2.)中合成的吸收劑Kac-SEQ ID NO13(或1mL用于空白試驗(yàn)的Kac)中加入6mL的健康人血清(β1AR-Ab(-)、M2R-Ab(-))，并在37℃下將混合物搖蕩2小時(shí)之后，測(cè)定上清液中的白蛋白濃度、IgG濃度和IgM濃度(要求Shionogi Biomedical實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行該試驗(yàn))。將空白試驗(yàn)認(rèn)為是0％吸收計(jì)算的每一濃度的吸收劑Kac-SEQ ID NO13的吸收速率顯示在表2。
表1
表2
工業(yè)實(shí)用性根據(jù)本發(fā)明，從上面的實(shí)施例可以理解到，提供了一種適用于選擇性地吸收存在于體液中的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的新型吸收劑。而且，通過填充有所述吸收劑的體液處理設(shè)備，可以選擇性地除去未處理的液體，如血液、血漿或血清中的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體。
序列表<110>KANEKA公司<120>擴(kuò)張性心肌病用吸收劑<130>T624/BLAP-3<150>JP 2000-106915<151>2000-04-07<160>13<210>1<211>13<212>PRT<213>人工序列<400>1Trp Gly Arg Trp Glu Tyr Gly Ser Phe Phe Cys Glu Leu1 5 10<210>2<211>6<212>PRT<213>人工序列<400>2Glu Tyr Gly Ser Phe Phe1 5<210>3<211>6<212>PRT<213>人工序列<400>3Ser Phe Phe Cys Glu Leu1 5<210>4<211>23<212>PRT<213>人工序列<400>4Arg Ala Glu Ser Asp Glu Ala Arg Arg Cys Tyr Asn Asp Pro Lys Cys1 5 10 15Cys Asp Phe Val Thr Asn Arg20<210>5<211>11<212>PRT<213>人工序列<400>5Val Lys Ala Phe His Arg Glu Leu Val Pro Asp1 5 10<210>6<211>7<212>PRT<213>人工序列<400>6Ala Arg Arg Cys Tyr Asn Asp1 5<210>7<211>6<212>PRT<213>人工序列<400>7Pro Lys Cys Cys Asp Phe1 5<210>8<211>25<212>PRT<213>人工序列<400>8Val Arg Thr Val Glu Asp Gly Glu Cys Tyr Ile Gln Phe Phe Ser Asn1 5 10 15Ala Ala Val Thr Phe Gly Thr Ala Ile20 25<210>9<211>29<212>PRT<213>人工序列<400>9His Trp Trp Arg Ala Glu Ser Asp Glu Ala Arg Arg Cys Tyr Asn Asp1 5 10 15Pro Lys Cys Cys Asp Phe Val Thr Asn Arg Gly Ala Cys20 25<210>10<211>29<212>PRT<213>人工序列<400>10Val Arg Thr Val Glu Asp Gly Glu Cys Tyr Ile Gln Phe Phe Ser Asn1 5 10 15Ala Ala Val Thr Phe Gly Thr Ala Ile Pro Ala Lys Lys20 25<210>11<211>28<212>PRT<213>人工序列<400>11His Trp Trp Arg Ala Glu Ser Asp Glu Ala Arg Arg Cys Tyr Asn Asp1 5 10 15Pro Lys Cys Cys Asp Phe Val Thr Asn Arg Ala Cys20 25<210>12<211>26<212>PRT<213>人工序列<400>12Val Arg Thr Val Glu Asp Gly Glu Cys Tyr Ile Gln Phe Phe Ser Asn1 5 10 15Ala Ala Val Thr Phe Gly Thr Ala Ile Cys20 25<210>13<211>18<212>PRT<213>人工序列<400>13Ser Phe Phe Cys Glu Leu Ala Asp Gly Tyr Pro Lys Cys Cys Asp Phe1 5 10 15Ala Cys
權(quán)利要求
1.一種抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑，它含有水不溶性載體和對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的化合物，其中所述化合物固定在所述水不溶性載體上。
2.如權(quán)利要求1的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑，其中所述對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的化合物是一種肽。
3.如權(quán)利要求1的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑，其中所述對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的化合物是至少一種選自以下的肽Trp Gly Arg Trp Glu Tyr Gly Ser Phe Phe Cys Glu Leu(SEQ IDNO1)、Glu Tyr Gly Ser Phe Phe(SEQ ID NO2)、Ser Phe Phe Cys Glu Leu(SEQ ID NO3)、Arg Ala Glu Ser Asp Glu Ala Arg Arg Cys Tyr Asn Asp Pro LysCys Cys Asp Phe Val Thr Asn Arg(SEQ ID NO4)、Val Lys Ala Phe His Arg Glu Leu Val Pro Asp(SEQ ID NO5)、Ala Arg Arg Cys Tyr Asn Asp(SEQ ID NO6)、Pro Lys Cys Cys Asp Phe(SEQ ID NO7)和Val Arg Thr Val Glu Asp Gly Glu Cys Tyr Ile Gln Phe Phe SerAsn Ala Ala Val Thr Phe Gly Thr Ala Ile(SEQ ID NO8)、選自SEQ IDNO1-SEQ ID NO8中至少一種肽的片段、或者含有選自SEQ ID NO1-SEQID NO8中至少一種肽和至少一種肽的片段的肽。
4.如權(quán)利要求1的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑，其中所述對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的化合物是至少一種選自以下的肽X Trp Gly Arg Trp Glu Tyr Gly Ser Phe Phe Cys Glu Leu Y(SEQID NO1a)、X Glu Tyr Gly Ser Phe Phe Y(SEQ ID NO2a)、X Ser Phe Phe Cys Glu Leu Y(SEQ ID NO3a)、X His Trp Trp Arg Ala Glu Ser Asp Glu Ala Arg Arg Cys Tyr AsnAsp Pro Lys Cys Cys Asp Phe Val Thr Asn Arg Y(SEQ ID NO4a)、X Val Lys Ala Phe Hi s Arg Glu Leu Val Pro Asp Y(SEQ ID NO5a)、X Ala Arg Arg Cys Tyr Asn Asp Y(SEQ ID NO6a)、X Pro Lys Cys Cys Asp Phe Y(SEQ ID NO7a)和X Val Arg Thr Val Glu Asp Gly Glu Cys Tyr Ile Gln Phe Phe SerAsn Ala Ala Val Thr Phe Gly Thr Ala Ile Y(SEQ ID NO8a)，其中X代表在N-端具有(Cys)m或(Lys)n并由0-20個(gè)氨基酸殘基組成的肽，m和n各自代表0-10的整數(shù)，Y代表在C-端具有(Cys)p或(Lys)q并由0-20個(gè)氨基酸殘基組成的肽，p和q各自代表0-10的整數(shù)，并且X和Y的氨基酸殘基總數(shù)是1-40。
5.如權(quán)利要求1的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑，其中所述對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的化合物是含有以下肽的肽通過選自SEQ ID NO1-SEQ ID NO8中的兩個(gè)或多個(gè)肽與不超過10個(gè)氨基酸殘基的肽偶聯(lián)形成的線性肽，和在所述線性肽的N-端具有(Cys)m或(Lys)n并由0-20個(gè)氨基酸殘基組成的肽，m和n各自代表0-10的整數(shù)，和在所述線性肽的C-端具有(Cys)p或(Lys)q并由0-20個(gè)氨基酸殘基組成的肽，p和q各自代表0-10的整數(shù)。
6.如權(quán)利要求1-5任意的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑，其中所述對(duì)抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體具有結(jié)合親和力的化合物以0.00001μmol-100μmol/mL載體的比例固定在水不溶性載體上。
7.如權(quán)利要求1-6任意的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑，其中所述水不溶性載體是多孔的。
8.如權(quán)利要求7的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑，其中在所述水不溶性載體是多孔的情況下，所述載體的分子量排阻極限是150000-10000000。
9.如權(quán)利要求1-8任意的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑，其中所述水不溶性載體是親水的。
10.如權(quán)利要求1-9任意的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑，將其用于吸收存在于體液中的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體。
11.如權(quán)利要求1-9任意的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的吸收劑，將其用于吸收含有以一組分存在于體液中的抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的免疫復(fù)合物。
12.一種吸收抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的設(shè)備，包括配備有液體入口和液體出口并填充有如權(quán)利要求1-11任意所述的吸收劑的腔室和防止所述吸收劑從所述腔室遷移的裝置。
13.一種吸收抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的方法，包括如權(quán)利要求1-11任意所述的吸收劑與含有抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的液體接觸的步驟。
14.如權(quán)利要求13的方法，其中所述含有抗β1-腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體的液體是體液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種吸收劑、吸收設(shè)備和吸收方法，從而能夠有效并選擇性吸收未處理的體液(如血液、血漿等)抗β1－腎上腺素受體的抗體和/或抗M2毒蕈堿受體的抗體，通過將能夠結(jié)合抗β1－腎上腺素受體和/或抗M2毒蕈受體的抗體的化合物固定到水不溶性載體上可獲得一種有非常高的吸收能力的吸收劑。
文檔編號(hào)C07K17/00GK1420793SQ01807502
公開日2003年5月28日 申請(qǐng)日期2001年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2000年4月7日
發(fā)明者荻野英司, 古吉重雄, 平井文康, 西本岳弘 申請(qǐng)人:鐘淵化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社